... vàotếbào thuốc BY- 2thôngquaAgrobacterium với kết thí nghiệm bổ sung, đề quy trình chuyểngenvàotếbào thuốc BY2 sau: - Thiết lập tếbào thuốc BY- 2 cách chuyển ml tếbào BY- 2 sang 100 ml môi ... dòng tếbàochuyểngen có biểu màu xanh đặc trưng gus Hình Hình Biểu gen gus tếbào BY- 2 Các tếbàochuyểngen mang màu xanh đặc trưng gus Như vậy, với quy trình chuyểngen thu tếbàochuyểngen ... Chủng vikhuẩnAgrobacterium tumefaciens CV58Pgv 226 0 mang vector pCB301_GUS sử dụng để kiểm tra qui trình chuyểngenvào BY- 2 - Dòng tếbào BY- 2 cung cấp ……………… 2. 2.Hóa chất thiết bị 2. 2.1 Hóa...
... chung tếbào gốc phôi với phôi qua đêm Phương pháp chuyểngen cách sử dụng tếbào gốc phôi Chuyểntếbào gốc phôi vào túi phôi Chuyểngen tr ực ti ếp vào protoplast Ðể DNA dễ xâm nhập vàotếbào ... cứu chuyểngenvàotếbào soma nuôi cấy sử dụng nhiều để chuyển dòng genome vàotếbào đích Tỉ lệ tếbào biến nạp ổn định kỹ thuật tương đương với phương pháp vi tiêm khác với vi tiêm nhiều tếbào ... cho vi c đưa DNA tái tổ hợp vàotếbào có hiệu cao Ưu điểm: Có thể tối ưu lượng DNA tái tổ hợp đưa vàotếbào định đưa DNA vào loại tếbào Đưa xác chí vào tận nhân tếbào quan sát Các tế bào...
... 20 11 Xuất phát từ thực tế thời gian thực tập tốt nghiệp, tiến hành thực đề tài “Bước đầu xây dựng quy trình chuyểngen gus vào giống đậu tương ĐT26 thôngquavikhuẩnAgrobacterium tumefaciens” ... dựng quy trình công nghệ chuyểngen gus có hiệu để từ áp dụng chuyểngen khác gen kháng hạn, gen kháng sâu bệnh, gen kháng thuốc diệt cỏ,… nhằm cải tạo giống đậu tương Vi t Nam - Yêu cầu: Trong ... tương 23 00 nghìn (20 09) [11], đứng thứ hai toàn Châu Á sau Indonesia Bên cạnh đó, trồng biến đổi gen nói chung đậu tương biến đổi gen nói riêng phủ Vi t Nam cho phép trồng rộng rãi năm 20 11 Xuất...
... t [2] 2.2 .2 Phương pháp chuy n gen gián ti p Phương pháp chuy n gen gián ti p, ñây gen ñư c chuy n vào t bào th c v t qua m t sinh v t trung gian, thư ng vi khu n, virus Chuy n gen nh virus Virus ... a phương pháp chuy n gen b ng virus [2] Phương pháp chuy n genthôngquavi khu n Agrobacterium DNA ñư c chuy n vào t bào th c v t nh ch truy n ñ c trưng c a loài vi khu n Agrobacterium làm môi ... h p vào t bào ch c a tr ng nói riêng c a vi sinh v t nói chung (vi sinh v t, ñ ng v t .) làm cho gen l có th t n t i d ng plasmid tái t h p ho c g n vào h gen t bào ch Trong t bào ch , gen...
... CaCl2.2H2O 440mg/l MS II Na2EDTA 37,3mg/l+ FeSO4.7H2O 27 ,8mg/l MS III KI 0,83mg/l + CuSO4.5H2O 0, 025 mg/l + COCl2 6H2O 0, 025 mg/l + Na2MO4.2H2O 0 ,25 mg/l MS IV MnSO4.4H2O 22 ,3mg/l+ H3BO3 6,2mg/l+ ... định hiệu chuyểngen nhuộm hóa tếbào Do toàn tếbào mẫu chuyểngen mang genchuyển nên thiết phải tiến hành sàng lọc tếbàochuyểngen Dựa vàogen chọn lọc thiết kế vector chuyểngen mà người ta ... 17 2. 3 .2 Tạo vật liệu chuyểngen 17 2. 3.3 Các bước chuyểngen 19 2. 3.4 Phương pháp xác định hiệu chuyểngen nhuộm hóa tếbào 21 2. 4 Xây dựng công thức thí nghiệm 22 2. 5...
... di chuyển xuyên qua màng tếbàoThông số điện biến nạp dòng tếbào khác Thường gây chết tếbào !!! 25 Chuyểngen không sử dụng virus Phương pháp điện biến nạp 26 Chuyểngen không sử dụng virus ... di truyền Các enzym 12 Chuyểngen sử dụng virus Retrovirus 13 Chuyểngen sử dụng virus Retrovirus Ưu điểm Gắn chèn gen mục tiêu vào NST tếbào quan tâm biểu gen mục tiêu ổn định ... với tếbào Một số sản phẩm thương mại: Lipofectamine (Invitrogen), Fugene (Roche, Promega) 22 Chuyểngen không sử dụng virus Phương pháp Cationic lipid (Liposome) 23 Chuyểngen không sử dụng virus...
... trình chuyểngen từ vikhuẩnvào thực vật Tuy nhiên, khám phá hiểu biết chế gây khối u mở hướng chuyểngen mà người lợi dụng vikhuẩn để chuyểngen mong muốn vào thực vật Vikhuẩn xâm nhiễm vào ... vận chuyển T-DNA vàotếbào thực vật tiếp cận với gen chủ cách an toàn Như vậy, thực chất có hệ thốngchuyểngenvikhuẩn đất vào trồng tồn tự nhiên acetosyingone Bộ genvikhuẩn Ti Plasmid Vikhuẩn ... hoạt động theo chế chuyểngenvikhuẩn đất Agrobacterium cách hữu hiệu Cơ chế chuyểngenvàotếbào thực vật Kỹ thuật đĩa (Leaf disk technique) Để thực vi c chuyểngen nhờ vikhuẩn người ta sử...
... cà chua thực thôngquavi khuÈn Agrobacterium tumefaciens nhiễm vàotếbào bị thương phân chia mạnh môi trường giàu auxin Khi vi khuNn Agrobacterium tumefaciens tiếp xúc với tếbào bị thương ... thôngquavi khuNn Agrobacterium tumefaciens (theo quy trình Swapan K Datta cs., 1997) Cắt nhỏ mẫu cấy để tạo vết thương, nhiễm vi khuNn vào mẫu Quá trình chuyển nạp gen Chitinase vàotếbào cà ... lượng MS, vitamins MS, 20 g/l đường sucrose, 0,6% agar, pH: 5,8 có bổ sung mg/l BA + 0 ,2 mg/l IAA, đặt phòng tối 36, 48 60 Sau mẫu lấy dùng vào biến nạp gen - Chuyểngen gián tiếp qua Agrobacterium...
... nghi p iv 2.2 N i dung nghiên c u 29 2. 2.1 Nghiên c u nuôi c y tái sinh in vitro gi ng ñ u cove 29 2.2 .2 Nghiên c u xác ñ nh nh hư ng c a m t s thông s c a quy trình chuy n gen ñ u cove 2. 2.3 30 ... Tái sinh in vitro thôngqua tái sinh quan sinh dư ng 1 .2. 2 Tái sinh in vitro thôngqua phát sinh callus 1.3 Vi khu n A tumefaciens hi n tư ng bi n n p gen 1.3.1 Gi i thi u chung v vi khu n A tumefaciens ... (http://www.patentlens.net) 11 1 .2 C u trúc c a H+ V – ATPase (Kawasaki Nishi Forgac, 20 03) 21 2. 1 Các gi ng ñ u cove 27 2.2 Plasmid pBin 19 28 2. 3 Plasmid pPS1 28 2. 4 M u chuy n gen: ñ t m m (1) t ñ u...
... đường kính tếbào đê đưa DNA vàotếbào Các tếbào bị phá vờ DNA xâm nhập vàotếbào bị tổn thương, sau chuyếnvàotếbào bên cạnh Kỹ thuật đơn giản hiệu chuyểngen thấp [24 ] Chuyểngenvĩ tiêm ... pháp bắn genchuyếngenthôngquaAgrobacterium Trong phương pháp này, vector thiết kế có đoạn T-DNA mang gen quan tâm chuyến đồng thời với gen mă hoá protein 16 virDlvà virD2 vàotếbào thực ... ngô thu nhiệt độ 20 °c cao 23 °c sử dụng vector nhị thể [26 ], nhiệt độ thích hợp cho chuyểngenvào huyền phù lúa 23 - 25 °c ngô 23 °c [26 ], 1.3 .2 Hệ thong vector chuyểngen 1.3 .2. 1 Hệ vector nhị...
... 23 3 .2 Phng phỏp nghiờn cu 24 3 .2. 1 Xõy dng h thng chuyn gen vo bốo tm S polyrrhiza 24 3 .2. 2 Quan sỏt v xỏc nh t l biu hin tm thi gen gus 27 3 .2. 3 Phng php tch chit DNA bốo tm .27 ... khụng phi thc hin c vi tt c cỏc loi cõy õy chớnh l mt nhc im ln ca phng phỏp chuyn gen bng virus 2. 3 .2. 2 Phng phỏp chuyn gen thụng quavi khun Agrobacterium Da vo c ch chuyn gen ca vi khun A tumefaciens, ... SP (%) 8,65 6,11 12, 71 18,76 10 19, 42 15 ,23 15 22 ,27 12, 54 20 20 ,96 8, 32 Thi gian ly tõm chõn khụng cng nh hng ti t l biu hin tm thi ca gen gus callus SP T l biu hin tm thi ca gen gus nhng cụng...
... loại tếbào khác Tuy nhiên tếbào bắt nguồn từ tếbào hợp tử ban đầu Tebào hợp tử lúc đầu phân chia thành khối tếbào chưa chun hố Các tếbào chưa chun hố tiếp tục phân chia biến đổi thành tếbào ... có 2- 3 mầm ngủ thường tập trung nhiều đỉnh củ [7] 4 1 .2 Nhân giống ni cấy mơ tếbào 1 .2. 1 1 .2. 1.1 Cơ sở khoa học kỹ thuật ni cấy mơ, tếbào thực vật Tỉnh tồn tếbào Cơ sở tảng ni cấy mơ, tếbào ... 3, 12 1,61 1,35 Ngành Ngọc lan Magnoliophyta 28 87,5 58 93,55 69 93 ,24 Lớp Mộc lan Magnoliopsida Lớp Hành Liliopsida Tổng 22 68,75 48 77, 42 57 77,03 ì 8,7 100 10 16,13 12 16 ,22 62 100 74 100 32 Qua...
... đường kính tếbào để đưa DNA vàotếbào Các tếbào bị phá vỡ DNA xâm nhập vàotếbào bị tổn thương, sau chuyểnvàotếbào bên cạnh Kỹ thuật đơn giản hiệu chuyểngen thấp [24 ] Chuyểngenvĩ tiêm ... pháp bắn genchuyểngenthôngquaAgrobacterium Trong phương pháp này, vector thiết kế có đoạn T-DNA mang gen quan tâm chuyển đồng thời với gen mã hoá protein 16 virD1và virD2 vàotếbào thực ... bàotếbào chủ Protein VirB tạo cầu nối tếbàovikhuẩntếbào chủ giúp cho sợi T vận chuyển sang tếbào chủ [50] Protein VirD2 gắn đầu 5’ sợi T đóng vai trò tín hiệu nhận biết hệ thống vận chuyển...
... đậu tương Vi t Nam từ 20 07 - 20 13 20 07 20 08 20 09 20 10 20 11 20 12 * 20 13 * Crop area (thousand ha) 190,1 197, 0 02 173, 1,46 23 0 1,45 146, 1,46 20 0 Crop yield (MT/ha) 1 92, 1,39 1,5 1, 52 Total production ... bắn gen, dùng xung điện tếbào mô thực vật, dùng vi tiêm, chuyểngenthôngqua đƣờng ống phấn,…Phƣơng pháp chuyểngenthôngquaAgrobacterium tumefaciens, nay, đƣợc sử dụng kỹ thuật chuyểngen ... màng tếbào [57] Protein Vir E2 chứa đựng hai tín hiệu định vị nhân tếbào thực vật protein Vir D2 [21 ] Thực tế cho thấy hai protein có vai trò quan trọng vi c dàn xếp hấp thụ phức vào nhân tế bào...