... CM + IPTG Khuẩn lạc trắng-thể táitổhợp Khuẩn lạc xanh-thể không táitổhợp Bảo quản riêng rẽ dòng táitổhợp Hình 4. 16 Tạo dòng BAC vector CôngnghệDNAtáitổhợp 97 - BAC vector cắt enzyme ... Do DNA phage CôngnghệDNAtáitổhợp 85 78% c lắp gắn Trên vector phage in vitro (in vitro Bacteriophage tóm tắt sau (Hình 4. 9 4. 10): - in vitro - (E coli Ch CôngnghệDNAtáitổhợp ... (tái tổ hợp) : đoạn stuffer thay đoạn DNA ngoại lai Những phân tử đóng gói in vitro đầu phage , chúng gây nhiễm sau thêm phần đuôi CôngnghệDNAtáitổhợp 87 A B λ DNADNA Đuôi Đầu cos Hình 4. 10...
... Lời nói đầu CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp đời sở ... sinh học phân tử, nhập môn côngnghệ sinh học, côngnghệ tế bào, côngnghệ chuyển gen… giáo trình côngnghệDNAtáitổhợp giúp sinh viên tiếp cận thêm lĩnh vực khác côngnghệ sinh học thông qua ... cân hợp dNTP Công ngh DNAtái t h.p đầu 3’ + Tổng hợp sợi thứ hai cDNA tạo dòng cDNA + Tổng hợpDNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro 1.3 DNA...
... Lời nói đầu CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp đời sở ... sinh học phân tử, nhập môn côngnghệ sinh học, côngnghệ tế bào, côngnghệ chuyển gen… giáo trình côngnghệDNAtáitổhợp giúp sinh viên tiếp cận thêm lĩnh vực khác côngnghệ sinh học thông qua ... bacteriophage λ CôngnghệDNAtáitổhợp (DNA recombinant technology) Hệ thống phương pháp phòng thí nghiệm cho phép cắt đoạn DNA từ sinh vật để ghép nối vào DNA sinh vật khác tạo phân tử DNAtáitổ hợp...
... thương mại phát triển côngnghệDNAtáitổhợp dược phẩm dùng điều trị bệnh rối loạn người Năm 1979, Tổhợp Eli Lilly bắt đầu sản xuất thương mại insulin người côngnghệDNAtáitổhợp Trước thời điểm ... thời gian dài trước dùng kết phát tín hiệu lai nhanh 32 VI Các ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp có nhiều ứng dụng đời sống Các ứng dụng bao gồm sản xuất dược phẩm loại ... sinh thái học CôngnghệDNAtáitổhợp ứng dụng để tạo nhiều sản phẩm thương mại, chẳng hạn: thuốc, hormone, enzyme giống trồng-vật nuôi Một công nghiệp hoàn toàn mới, công nghiệp côngnghệ sinh...
... trường hợp đó, tế bào chuyên sản xuất insulin trì tái sử dụng với hiệu kinh tế cao IV Ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp với việc nghiên cứu gene Việc tách dòng táitổhợp ... truyền 2.1 DNAtáitổhợp gì? DNAtáitổhợp (recombinant DNA) phân tử DNA tạo ống nghiệm cách kết hợpDNA từ nguồn (loài) khác nhau, theo quy trình kỹ thuật định, gọi kỹ thuật táitổhợpDNA Thông ... coli DNA ''ngoại lai'' plasmid khác Chính kiện đặt móng mở triển vọng to lớn cho kỹ thuật DNAtáitổhợp sau DNA xen vào DNA cắt với EcoRI Các đầu dính TáitổhợpDNA + DNA ligase Nối sai DNA tái...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật táitổhợpDNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNAtáitổhợp thường ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật táitổhợpDNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNAtáitổhợp thường ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th...
... trường hợp đó, tế bào chuyên sản xuất insulin trì tái sử dụng với hiệu kinh tế cao IV Ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp với việc nghiên cứu gene Việc tách dòng táitổhợp ... truyền 2.1 DNAtáitổhợp gì? DNAtáitổhợp (recombinant DNA) phân tử DNA tạo ống nghiệm cách kết hợpDNA từ nguồn (loài) khác nhau, theo quy trình kỹ thuật định, gọi kỹ thuật táitổhợpDNA Thông ... coli DNA ''ngoại lai'' plasmid khác Chính kiện đặt móng mở triển vọng to lớn cho kỹ thuật DNAtáitổhợp sau DNA xen vào DNA cắt với EcoRI Các đầu dính TáitổhợpDNA + DNA ligase Nối sai DNA tái...
... phân tử DNAtáitổhợp từ loài khác nhau, có nhiều ưu điểm biến nạp tế bào chủ Và từ đây, côngnghệDNAtáitổhợp đời Hình 2.1 Quy trình tạo phân tử DNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp thành ... DNAtáitổhợp dùng để thiết lập ngân hàng gen, cDNA tổng hợp protein, enzyme, hormone, Hình 1.1 Cấu tạo phân tử DNAtáitổhợp 1.3 Quy trình tạo DNAtáitổhợp Quy trình côngnghệ tạo DNAtái ... protein chống đông máu v.v… nhờ kỹ thuật ADN táitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp thành tựu đạt 2.1 Khái niệm DNAtáitổhợp phân tử DNA nhỏ, lắp ráp từ đoạn DNA lấy từ thể truyền gen cần chuyển Năm...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật táitổhợpDNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNAtáitổhợp thường ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th...
... vật (công nghệ sinh học ) Theo nghĩa phổ biến trình sản xuất sử dụng giống sinh vật mới, tạo côngnghệDNAtáitổhợp (công nghệ sinh học ) Trong côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp ( ... Tách chiết DNA từ sinh vật khác nhau; 2) Cắt nối DNA điểm đặc hiệu để tạo DNAtáitổhợp (DNA mang gen có nguồn gốc khác nhau), ví dụ: DNA plasmid có mang gen người; 3) Đưa DNAtáitổhợp vào hoạt ... polymerase để tổng hợp mRNA từ khuôn mẫu DNA Phiên mã ngược (reverse transcription) Quá trình tổng hợpDNA từ khuôn mẫu mRNA nhờ enzyme phiên mã ngược (reverse transcriptase) CôngnghệDNAtáitổhợp 193...
... Exonuclease 5’ pNOH dsDNA lai RNA :DNA + 5’pN(pN)npNOH + ssDNA Mg2+ làm mẫu dò E coli 3’ 5’ CôngnghệDNAtáitổhợp ) C 5’ 3’ DNA polymerase DNA enzyme DNAOH + ndNTP DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg ... cân hợp dNTP đầu 3’ + Tổng hợpDNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro (T4-infected E coli) E coli nh polymerase CôngnghệDNAtáitổhợp 10 5’ 3’ exonuclease 3’ 5’ phải DNA ... transferase ssDNAOH + ndNTP - DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg 2+ Mn : DNA 3’-OH - Ứng dụng CôngnghệDNAtáitổhợp 14 + Thêm đuôi đồng trùng hợp (homopolymer) để tạo đầu so le cho phân tử DNA dùng tạo...
... vòng đứt Dạng vòng đóng DNA mạch vòng DNA mạch thẳng Hình 2 .4 Điện di plasmid có cấu hình khác CôngnghệDNAtáitổhợp 28 4oC đến 30o Tr - - - thường dùng - - Các đoạn DNA dịch chuyển với tốc ... thích hợp với gel 2% CôngnghệDNAtáitổhợp 27 A B C 2 Hình 2.3 Điện di mẫu DNA giống nồng độ agarose khác A: 1%, B: 1,5% C: 2% - - Nhìn chung, DNA plasmid mạch vòng dịch chuyển nhanh DNA plasmid ... 1 ,4% 2 2.2 ( ( : log log o K r Trong CôngnghệDNAtáitổhợp 26 o Kr 2.1) Nồng độ agarose cao có khả phân tách đoạn DNA nhỏ, nồng độ agarose thấp lại cho phép phân tách đoạn DNA...
... mẫu RNA thành sợi DNA thứ nhất, sau dùng sợi làm khuôn mẫu để tổng hợp sợi DNA thứ hai (tương tự giai đoạn thứ thứ hai trình tổng hợp cDNA-xem chương 6) Giai đoạn thứ hai Dùng DNA sợi đôi làm khuôn ... đoạn bị dừng lại (ví dụ: phản ứng tổng hợpDNA từ chu kỳ trước đó) - Gắn mồi (annealing) 40 -65oC Trong giai đoạn primer gắn vào vị trí có trình tự tương đồng DNA khuôn mẫu Các primer bị lắc nhẹ ... thư đ , tạo thành sợi đôi ổn định tổng hợpDNA Thông thư 28-35 mer cần cho việc khuếch đại trình tự có mức độ dị hợp cao Đối với primer ngắn 20 mer, sử dụng công thức tính Tm liên hệ với base:...
... broth LuriaBertani broth CôngnghệDNAtáitổhợp 108 nucleic acid quan tâm (mẫu dò) , thường 32 5.2) (smear) gel (Hình 5.3) (2-10 Hind - Southern blot CôngnghệDNAtáitổhợp 109 A B E E C E E ... dùng kỹ DNase I (tụy bò): enzyme xúc tác phản ứng thủy phân liên kết nằm sau pyrimidine chuỗi DNA Trong trưởng hợpDNA sợi đôi, chỗ cắt xảy hay hay sợi (xem chương 1) CôngnghệDNAtáitổhợp 119 ... sinh học phân tử CôngnghệDNAtáitổhợp 110 SM PC Hình 5.3 Hình ảnh điện di genomic DNA sau phân cắt enzyme hạn chế SM: Chỉ thị kích thước chuẩn DNA PC: đối chứng dương tính (đoạn DNA dùng để đánh...
... (complementary DNA) tổng hợp cDNA Q cDNA qua ba reverse transcriptase (2) Biến tính c CôngnghệDNAtáitổhợp enzyme -cDNA 132 nhiệt enzyme RNase H E coli khuôn mẫu cDNA thứ nhờ DNA polymerase ... -cDNA E coli - plasmid vector mRNA- gen P CôngnghệDNAtáitổhợp có số thuận lợi sau: 140 - Không cần - - E coli đ 6.8) promoter vector phát triển -adapter - 6.9) CôngnghệDNAtáitổhợp ... nguyên CôngnghệDNAtáitổhợp 150 trình tự vector : thân mRNA (pre-mRNA) hoàn phiên mã ngược hóa hoàn - mRNA Các bước trình xây dựng thư viện cDNA sau: bỏ 27 CôngnghệDNAtáitổhợp 151...
... Kiểm tra khuẩn lạc đơn mang đoạn DNA ngoại lai mong muốn cách tách chiết DNA (DNA miniprep) plasmid vector, CôngnghệDNAtáitổhợp 159 sau cắt enzyme hạn chế thích hợp điện di kiểm tra agarose ... 7 .4) Các mức độ biểu khác từ 1% 30% protein hòa tan tổng số (total soluble protein) tế bào CôngnghệDNAtáitổhợp 160 Promoter Gen A ATG DNA SD ATG mRNA SD Met Protein nguyên thể N C Hình 7 .4 ... Shine-Dalgarno Sự dung hợp gen thực cách gắn phần mã hóa gen tạo dòng gần đầu cuối 3’ gen vi khuẩn (ví dụ: gen lacZ) Protein dung hợp có ưu điểm sau: CôngnghệDNAtáitổhợp 156 - Protein dung hợp thường...
... phân tử DNAtáitổhợp từ loài khác nhau, có nhiều ưu điểm biến nạp tế bào chủ Và từ đây, côngnghệDNAtáitổhợp đời Hình 2.1 Quy trình tạo phân tử DNAtáitổhợpCôngTài liệuDNA táitổhợp thành ... 1.1 CôngnghệDNAtáitổhợp gì? CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học Côngnghệ ... 1.2 Quy trình tạo DNAtáitổhợp mong muốn 1 .4 MộtTài liệu chiatrình nghiên cứu côngnghệ vài công sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn DNAtáitổhợp - Năm 1972, phân tử DNAtáitổhợp tạo trường Đại...
... Exonuclease 5’ pNOH dsDNA lai RNA :DNA + 5’pN(pN)npNOH + ssDNA Mg2+ làm mẫu dò E coli 3’ 5’ CôngnghệDNAtáitổhợp ) C 5’ 3’ DNA polymerase DNA enzyme DNAOH + ndNTP DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg ... cân hợp dNTP đầu 3’ + Tổng hợpDNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro (T4-infected E coli) E coli nh polymerase CôngnghệDNAtáitổhợp 10 5’ 3’ exonuclease 3’ 5’ phải DNA ... transferase ssDNAOH + ndNTP - DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg 2+ Mn : DNA 3’-OH - Ứng dụng CôngnghệDNAtáitổhợp 14 + Thêm đuôi đồng trùng hợp (homopolymer) để tạo đầu so le cho phân tử DNA dùng tạo...