... Lời nói đầu CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp đời sở ... giáo trình như: sinh học phân tử, nhập môn côngnghệ sinh học, côngnghệ tế bào, côngnghệ chuyển gen… giáo trìnhcôngnghệDNAtáitổhợp giúp sinh viên tiếp cận thêm lĩnh vực khác côngnghệ ... thực vật (công nghệ sinh học truyền thống) Theo nghĩa phổ biến trình sản xuất sử dụng giống sinh vật mới, tạo côngnghệDNAtáitổhợp (công nghệ sinh học hiện đại) Trong côngnghệ sinh...
... trường hợp đó, tế bào chuyên sản xuất insulin trì tái sử dụng với hiệu kinh tế cao IV Ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp với việc nghiêncứu gene Việc tách dòng táitổhợp ... coli DNA ''ngoại lai'' plasmid khác Chính kiện đặt móng mở triển vọng to lớn cho kỹ thuật DNAtáitổhợp sau DNA xen vào DNA cắt với EcoRI Các đầu dính TáitổhợpDNA + DNA ligase Nối sai DNAtái ... hợpDNA thực lần DNA virus SV40 với DNA phage λ L.Lobban 263 D.Kaiser (1972), D.Jackson P.Berg (1972) II Tạo dòng gene hay DNAtáitổhợp Nguyên tắc chung Về nguyên tắc, kỹ thuật DNAtáitổ hợp...
... trường hợp đó, tế bào chuyên sản xuất insulin trì tái sử dụng với hiệu kinh tế cao IV Ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp với việc nghiêncứu gene Việc tách dòng táitổhợp ... coli DNA ''ngoại lai'' plasmid khác Chính kiện đặt móng mở triển vọng to lớn cho kỹ thuật DNAtáitổhợp sau DNA xen vào DNA cắt với EcoRI Các đầu dính TáitổhợpDNA + DNA ligase Nối sai DNAtái ... hợpDNA thực lần DNA virus SV40 với DNA phage λ L.Lobban 263 D.Kaiser (1972), D.Jackson P.Berg (1972) II Tạo dòng gene hay DNAtáitổhợp Nguyên tắc chung Về nguyên tắc, kỹ thuật DNAtáitổ hợp...
... vật (công nghệ sinh học ) Theo nghĩa phổ biến trình sản xuất sử dụng giống sinh vật mới, tạo côngnghệDNAtáitổhợp (công nghệ sinh học ) Trong côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp ( ... đầu trình tổng hợp polypeptide, trình tự dẫn đầu không dịch mã thành trình tự amino acid CôngnghệDNAtáitổhợp 199 Trình tự điều hòa (regulatory sequence) Mộttrình tự DNA tham gia vào trình ... protein táitổhợp mã hóa gen ngoại lai (foreign gene) vi sinh vật chủ Khác với protein dung hợp, protein nguyên thể tổng hợp từ đầu N từ đầu N vector CôngnghệDNAtáitổhợp 195 Purine Một hợp...
... Exonuclease 5’ pNOH dsDNA lai RNA :DNA + 5’pN(pN)npNOH + ssDNA Mg2+ làm mẫu dò E coli 3’ 5’ CôngnghệDNAtáitổhợp ) C 5’ 3’ DNA polymerase DNA enzyme DNAOH + ndNTP DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg ... có khả chịu nhiệt cao phù hợp với điều kiện phản ứng PCR, tổng hợp sợi DNA dài kb vòng 30 giây 72oC CôngnghệDNAtáitổhợp 11 - Một hạn chế Taq pol xác không cao trình chép bị chế đọc sửa (hoạt ... cân hợp dNTP đầu 3’ + Tổng hợpDNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro (T4-infected E coli) E coli nh polymerase CôngnghệDNAtáitổhợp 10 5’ 3’ exonuclease 3’ 5’ phải DNA...
... vòng đứt Dạng vòng đóng DNA mạch vòng DNA mạch thẳng Hình 2.4 Điện di plasmid có cấu hình khác CôngnghệDNAtáitổhợp 28 4oC đến 30o Tr - - - thường dùng - - Các đoạn DNA dịch chuyển với tốc ... với hạt thủy tinh khác sợi DNA bị phá vỡ suốt chu kỳ rửa CôngnghệDNAtáitổhợp 32 Cho 1% type- - 100 mL 0,5 60o : DNA (1 g/1 µL) L L (10 loading dye) Nước L Tổng số 11 L 11 L m Lưu ... áp trình điện di, đoạn DNA lớn thường dịch chuyển nhanh so với đoạn nhỏ Tuy nhiên, để có độ phân giải (resolution) tốt đoạn DNA có kích thước lớn kb đ áp (Hình 2.5) 0,5 CôngnghệDNAtáitổ hợp...
... thuật RTPCR Một số nghiêncứu khác mRNA cần đến RT-PCR để biến đổi sợi RNA thành DNA cho trình tạo dòng để phân tích trình tự gen (gene sequencing) hay táitổhợp (recombination) nghiêncứu biểu ... mẫu RNA thành sợi DNA thứ nhất, sau dùng sợi làm khuôn mẫu để tổng hợp sợi DNA thứ hai (tương tự giai đoạn thứ thứ hai trình tổng hợp cDNA-xem chương 6) Giai đoạn thứ hai Dùng DNA sợi đôi làm khuôn ... tắc PCR trình bày hình 3.2 3.3 T DNA polymerase (gọi tắt Taq pol) bắt đ tổng hợp (synthetic oligonucleotide) có khoảng 10-20 nucleotide Nếu biết trình tự đoạn gen cần khuếch đại tổng hợp nhân...
... CM + IPTG Khuẩn lạc trắng-thể táitổhợp Khuẩn lạc xanh-thể không táitổhợp Bảo quản riêng rẽ dòng táitổhợp Hình 4.16 Tạo dòng BAC vector CôngnghệDNAtáitổhợp 97 - BAC vector cắt enzyme ... Do DNA phage CôngnghệDNAtáitổhợp 85 78% c lắp gắn Trên vector phage in vitro (in vitro Bacteriophage tóm tắt sau (Hình 4.9 4.10): - in vitro - (E coli Ch CôngnghệDNAtáitổhợp ... vector táitổhợp vào vi khuẩn/tế bào vật chủ Sau tạo vector táitổhợp mang gen ngoại lai, việc biến nạp vào tế bào vật chủ Trong trường hợp tế bào vật chủ thường CôngnghệDNAtáitổhợp 82...
... broth LuriaBertani broth CôngnghệDNAtáitổhợp 108 nucleic acid quan tâm (mẫu dò) , thường 32 5.2) (smear) gel (Hình 5.3) (2-10 Hind - Southern blot CôngnghệDNAtáitổhợp 109 A B E E C E E ... dùng kỹ DNase I (tụy bò): enzyme xúc tác phản ứng thủy phân liên kết nằm sau pyrimidine chuỗi DNA Trong trưởng hợpDNA sợi đôi, chỗ cắt xảy hay hay sợi (xem chương 1) CôngnghệDNAtáitổhợp 119 ... screening…) CôngnghệDNAtáitổhợp 120 (a) 5’ 3’ (b) 5’ 3’ 5’ HO DNA polymerase I Đoạn mồi (c) Đoạn mồi Hình 5.11 Đánh dấu DNA cách kéo dài đoạn mồi (a) DNA biến tính để tạo phân tử sợi đơn (b) Một...
... nguyên CôngnghệDNAtáitổhợp 150 trình tự vector : thân mRNA (pre-mRNA) hoàn phiên mã ngược hóa hoàn - mRNA Các bước trình xây dựng thư viện cDNA sau: bỏ 27 CôngnghệDNAtáitổhợp 151 ... (complementary DNA) tổng hợp cDNA Q cDNA qua ba reverse transcriptase (2) Biến tính c CôngnghệDNAtáitổhợp enzyme -cDNA 132 nhiệt enzyme RNase H E coli khuôn mẫu cDNA thứ nhờ DNA polymerase ... -cDNA E coli - plasmid vector mRNA- gen P CôngnghệDNAtáitổhợp có số thuận lợi sau: 140 - Không cần - - E coli đ 6.8) promoter vector phát triển -adapter - 6.9) CôngnghệDNAtáitổ hợp...
... Protein dung hợp có ưu điểm sau: CôngnghệDNAtáitổhợp 156 - Protein dung hợp thường sản xuất với hàm lượng lớn khởi đầu phiên mã dịch mã điều khiển trình tự tiêu chuẩn E coli - Dung hợptrình tự ... Kiểm tra khuẩn lạc đơn mang đoạn DNA ngoại lai mong muốn cách tách chiết DNA (DNA miniprep) plasmid vector, CôngnghệDNAtáitổhợp 159 sau cắt enzyme hạn chế thích hợp điện di kiểm tra agarose ... loại kháng thể MộtCôngnghệDNAtáitổhợp 168 kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên protein (kháng thể thứ nhất) Một kháng thể khác, phản ứng với phức hợp kháng thể-kháng nguyên, kết hợp với enzyme...
... cơngnghê di trun, câc thuc nghiêm dêu cân phâi sü dung DNAtâito hofp (recombinant DNA) Do dơ, cơngnghêDNAtâito hçfp (recombinant DNA technology)(hïnh 1.6) cơngnghê nên tâng, ca bân nhât ... cosmid thu viên gen chüa doan DNA gen tPA(ducmg bơi dâm doan DNA chèn vào, ducfng trâng vector, câc diëm giơi han dfc chỵ hïnh B:BamHI; Bg: Bgl; E:EcoRI; ) iii) Vùng DNA gen tPA duac mơ rơng ( ... Do dơ cân nghiên cüu xa hon vê su 6n dinh, hoat tmh chât vi két tüa nhüng dung dich 37 1.3 Tao chê phâm Alteplase bàng cơngnghêDNAtâito hofp 1.3.1 Gioi thiéu khâi qt vêcơngnghêDNAtâi to...
... Exonuclease 5’ pNOH dsDNA lai RNA :DNA + 5’pN(pN)npNOH + ssDNA Mg2+ làm mẫu dò E coli 3’ 5’ CôngnghệDNAtáitổhợp ) C 5’ 3’ DNA polymerase DNA enzyme DNAOH + ndNTP DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg ... có khả chịu nhiệt cao phù hợp với điều kiện phản ứng PCR, tổng hợp sợi DNA dài kb vòng 30 giây 72oC CôngnghệDNAtáitổhợp 11 - Một hạn chế Taq pol xác không cao trình chép bị chế đọc sửa (hoạt ... cân hợp dNTP đầu 3’ + Tổng hợpDNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro (T4-infected E coli) E coli nh polymerase CôngnghệDNAtáitổhợp 10 5’ 3’ exonuclease 3’ 5’ phải DNA...
... Lời nói đầu CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp đời sở ... giáo trình như: sinh học phân tử, nhập môn côngnghệ sinh học, côngnghệ tế bào, côngnghệ chuyển gen… giáo trìnhcôngnghệDNAtáitổhợp giúp sinh viên tiếp cận thêm lĩnh vực khác côngnghệ ... cân hợp dNTP Công ngh DNAtái t h.p đầu 3’ + Tổng hợp sợi thứ hai cDNA tạo dòng cDNA + Tổng hợpDNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro 1.3 DNA...
... phóng xạ an toàn cho nghiêncứu viên, tạo probe bảo quản thời gian dài trước dùng kết phát tín hiệu lai nhanh 32 VI Các ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp có nhiều ứng dụng ... thương mại phát triển côngnghệDNAtáitổhợp dược phẩm dùng điều trị bệnh rối loạn người Năm 1979, Tổhợp Eli Lilly bắt đầu sản xuất thương mại insulin người côngnghệDNAtáitổhợp Trước thời điểm ... sinh thái học CôngnghệDNAtáitổhợp ứng dụng để tạo nhiều sản phẩm thương mại, chẳng hạn: thuốc, hormone, enzyme giống trồng-vật nuôi Mộtcông nghiệp hoàn toàn mới, công nghiệp côngnghệ sinh...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật táitổhợpDNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNAtáitổhợp thường...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật táitổhợpDNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNAtáitổhợp thường...
... DNAtáitổhợp dùng để thiết lập ngân hàng gen, cDNA tổng hợp protein, enzyme, hormone, Hình 1.1 Cấu tạo phân tử DNAtáitổhợp 1.3 Quy trình tạo DNAtáitổhợp Quy trìnhcôngnghệ tạo DNAtái ... phân tử DNAtáitổhợp từ loài khác nhau, có nhiều ưu điểm biến nạp tế bào chủ Và từ đây, côngnghệDNAtáitổhợp đời Hình 2.1 Quy trình tạo phân tử DNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp thành ... protein chống đông máu v.v… nhờ kỹ thuật ADN táitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp thành tựu đạt 2.1 Khái niệm DNAtáitổhợp phân tử DNA nhỏ, lắp ráp từ đoạn DNA lấy từ thể truyền gen cần chuyển Năm...
... Chương CôngnghệDNAtáitổhợp I Mở đầu CôngnghệDNAtáitổhợp hình thành từ năm 1970 nhờ phát triển phương pháp kỹ thuật dùng nghiêncứutrình sinh học mức độ phân tử ... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th...
... 1.2 Quy trình tạo DNAtáitổhợp mong muốn 1.4 MộtTài liệu chiatrình nghiêncứucôngnghệvàicông sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn DNAtáitổhợp - Năm 1972, phân tử DNAtáitổhợp tạo trường Đại ... phân tử DNAtáitổhợp từ loài khác nhau, có nhiều ưu điểm biến nạp tế bào chủ Và từ đây, côngnghệDNAtáitổhợp đời Hình 2.1 Quy trình tạo phân tử DNAtáitổhợpCôngTài liệuDNA táitổhợp thành ... 1.1 CôngnghệDNAtáitổhợp gì? CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học Công nghệ...