... CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp đời sở thànhtựu ... sinh học phân tử, nhập môn côngnghệ sinh học, côngnghệ tế bào, côngnghệ chuyển gen… giáo trình côngnghệDNAtáitổhợp giúp sinh viên tiếp cận thêm lĩnh vực khác côngnghệ sinh học thông qua ... cân hợp dNTP Công ngh DNAtái t h.p đầu 3’ + Tổng hợp sợi thứ hai cDNA tạo dòng cDNA + Tổng hợpDNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro 1.3 DNA...
... CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp đời sở thànhtựu ... sinh học phân tử, nhập môn côngnghệ sinh học, côngnghệ tế bào, côngnghệ chuyển gen… giáo trình côngnghệDNAtáitổhợp giúp sinh viên tiếp cận thêm lĩnh vực khác côngnghệ sinh học thông qua ... Tách chiết DNA từ sinh vật khác nhau; 2) Cắt nối DNA điểm đặc hiệu để tạo DNAtáitổhợp (DNA mang gen có nguồn gốc khác nhau), ví dụ: DNA plasmid có mang gen người; 3) Đưa DNAtáitổhợp vào hoạt...
... thương mại phát triển côngnghệDNAtáitổhợpdược phẩm dùng điều trị bệnh rối loạn người Năm 1979, Tổhợp Eli Lilly bắt đầu sản xuất thương mại insulin người côngnghệDNAtáitổhợp Trước thời điểm ... thời gian dài trước dùng kết phát tín hiệu lai nhanh 32 VI Các ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp có nhiều ứng dụng đời sống Các ứng dụng bao gồm sản xuất dược phẩm loại ... phage Genome táitổhợp phage λ sau đóng gói vỏ protein bổ sung vào E coli Các phage λ gây xâm nhiễm DNAtáitổhợp chúng vào tế bào vật chủ, nơi tái Chỉ đoạn DNA có kích thước thích hợp mang gen...
... truyền 2.1 DNAtáitổhợp gì? DNAtáitổhợp (recombinant DNA) phân tử DNA tạo ống nghiệm cách kết hợpDNA từ nguồn (loài) khác nhau, theo quy trình kỹ thuật định, gọi kỹ thuật táitổhợpDNA Thông ... coli DNA ''ngoại lai'' plasmid khác Chính kiện đặt móng mở triển vọng to lớn cho kỹ thuật DNAtáitổhợp sau DNA xen vào DNA cắt với EcoRI Các đầu dính TáitổhợpDNA + DNA ligase Nối sai DNAtái ... phẩm đặc hiệu vào môi trường nuôi cấy Trong trường hợp đó, tế bào chuyên sản xuất insulin trì tái sử dụng với hiệu kinh tế cao IV Ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp với việc...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật táitổhợpDNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNAtáitổhợp thường...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th ... mang đoạn DNA ngoại lai (foreign DNA) dùng kỹ thuật táitổhợpDNA Các vector dùng để tạo dòng đoạn DNA in vitro 5’-PO4 Trong thực tế, đoạn DNA gắn với để tạo phân tử DNAtáitổhợp thường...
... truyền 2.1 DNAtáitổhợp gì? DNAtáitổhợp (recombinant DNA) phân tử DNA tạo ống nghiệm cách kết hợpDNA từ nguồn (loài) khác nhau, theo quy trình kỹ thuật định, gọi kỹ thuật táitổhợpDNA Thông ... coli DNA ''ngoại lai'' plasmid khác Chính kiện đặt móng mở triển vọng to lớn cho kỹ thuật DNAtáitổhợp sau DNA xen vào DNA cắt với EcoRI Các đầu dính TáitổhợpDNA + DNA ligase Nối sai DNAtái ... phẩm đặc hiệu vào môi trường nuôi cấy Trong trường hợp đó, tế bào chuyên sản xuất insulin trì tái sử dụng với hiệu kinh tế cao IV Ứng dụng côngnghệDNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợp với việc...
... bào chủ Và từ đây, côngnghệDNAtáitổhợp đời Hình 2.1 Quy trình tạo phân tử DNAtáitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợpthànhtựuđạt 2.2 Một số thànhtựuđạt được: - Vaccine DNA: loại nucleic ... DNAtáitổhợp dùng để thiết lập ngân hàng gen, cDNA tổng hợp protein, enzyme, hormone, Hình 1.1 Cấu tạo phân tử DNAtáitổhợp 1.3 Quy trình tạo DNAtáitổhợp Quy trình côngnghệ tạo DNAtái ... - Vào năm đầu thập kỷ 80 kỷ XX, người ta sản xuất interferol, sản xuất protein chống đông máu v.v… nhờ kỹ thuật ADN táitổhợpCôngnghệDNAtáitổhợpthànhtựuđạt 2.1 Khái niệm DNAtáitổ hợp...
... dòng mang DNAtáitổhợp Trong thí nghiệm tạo vector táitổ hợp, hỗn hợp vector lượng lớn phân tử DNA cắt enzyme hạn chế gắn lại với enzyme DNA ligase Kết quả, hỗn hợp có plasmid táitổhợp lẫn ... Nhập môn Côngnghệ sinh học 32 (physical mapping) Sinh tổng hợp cDNA từ mRNA Đoạn DNA tổng hợp dựa khuôn mẫu mRNA gọi cDNA (complementary DNA) ba sau: - (Mg2+ - mRNA-cDNA (khi tổng hợp sợi th ... Chương CôngnghệDNAtáitổhợp I Mở đầu CôngnghệDNAtáitổhợp hình thành từ năm 1970 nhờ phát triển phương pháp kỹ thuật dùng nghiên...
... vật (công nghệ sinh học ) Theo nghĩa phổ biến trình sản xuất sử dụng giống sinh vật mới, tạo côngnghệDNAtáitổhợp (công nghệ sinh học ) Trong côngnghệ sinh học CôngnghệDNAtáitổhợp ( ... nghệDNAtáitổhợp (DNA recombinant technology) Hệ thống phương pháp phòng thí nghiệm cho phép cắt đoạn DNA từ sinh vật để ghép nối vào DNA sinh vật khác tạo phân tử DNAtáitổhợp Phân tử đưa vào ... Tách chiết DNA từ sinh vật khác nhau; 2) Cắt nối DNA điểm đặc hiệu để tạo DNAtáitổhợp (DNA mang gen có nguồn gốc khác nhau), ví dụ: DNA plasmid có mang gen người; 3) Đưa DNAtáitổhợp vào hoạt...
... Exonuclease 5’ pNOH dsDNA lai RNA :DNA + 5’pN(pN)npNOH + ssDNA Mg2+ làm mẫu dò E coli 3’ 5’ CôngnghệDNAtáitổhợp ) C 5’ 3’ DNA polymerase DNA enzyme DNAOH + ndNTP DNA- (pdN)n + nPPi 2+ Mg ... cân hợp dNTP đầu 3’ + Tổng hợpDNA sợi đôi từ khuôn mẫu sợi đơn phát sinh đột biến in vitro (T4-infected E coli) E coli nh polymerase CôngnghệDNAtáitổhợp 10 5’ 3’ exonuclease 3’ 5’ phải DNA ... DNA polymerase I E coli có khả chịu nhiệt cao phù hợp với điều kiện phản ứng PCR, tổng hợp sợi DNA dài kb vòng 30 giây 72oC CôngnghệDNAtáitổhợp 11 - Một hạn chế Taq pol xác không cao trình...
... vòng đứt Dạng vòng đóng DNA mạch vòng DNA mạch thẳng Hình 2.4 Điện di plasmid có cấu hình khác CôngnghệDNAtáitổhợp 28 4oC đến 30o Tr - - - thường dùng - - Các đoạn DNA dịch chuyển với tốc ... hồi đoạn DNA nhỏ (500-800 bp) không hiệu đoạn lớn (>15 kb) liên kết với hạt thủy tinh khác sợi DNA bị phá vỡ suốt chu kỳ rửa CôngnghệDNAtáitổhợp 32 Cho 1% type- - 100 mL 0,5 60o : DNA (1 ... hóa đặt cột lọc nhỏ loại CôngnghệDNAtáitổhợp 31 0,5 mL (còn gọi spin column) Cột cho vào tube vi ly tâm loại 1,5 mL ly tâm tốc độ cao 10.000-15.000 rpm 10-15 phút DNA liên kết với màng dung...
... khuôn mẫu RNA thành sợi DNA thứ nhất, sau dùng sợi làm khuôn mẫu để tổng hợp sợi DNA thứ hai (tương tự giai đoạn thứ thứ hai trình tổng hợp cDNA-xem chương 6) Giai đoạn thứ hai Dùng DNA sợi đôi ... đoạn bị dừng lại (ví dụ: phản ứng tổng hợpDNA từ chu kỳ trước đó) - Gắn mồi (annealing) 40-65oC Trong giai đoạn primer gắn vào vị trí có trình tự tương đồng DNA khuôn mẫu Các primer bị lắc nhẹ ... hiệu suất phản 60 ứng cao Những oligonucleotide ngắn (15 base ngắn hơn) đư Chiều dài primer tối thiểu cho hầu hết ười ta thư đ , tạo thành sợi đôi ổn định tổng hợpDNA Thông thư 28-35 mer cần...
... vector táitổhợp vào vi khuẩn/tế bào vật chủ Sau tạo vector táitổhợp mang gen ngoại lai, việc biến nạp vào tế bào vật chủ Trong trường hợp tế bào vật chủ thường CôngnghệDNAtáitổhợp 82 ... CM + IPTG Khuẩn lạc trắng-thể táitổhợp Khuẩn lạc xanh-thể không táitổhợp Bảo quản riêng rẽ dòng táitổhợp Hình 4.16 Tạo dòng BAC vector CôngnghệDNAtáitổhợp 97 - BAC vector cắt enzyme ... đoạn DNA ngoại lai Những phân tử đóng gói in vitro đầu phage , chúng gây nhiễm sau thêm phần đuôi CôngnghệDNAtáitổhợp 87 A B λ DNADNA Đuôi Đầu cos Hình 4.10 Phân tử DNA phage A: Tự tái DNA...
... broth LuriaBertani broth CôngnghệDNAtáitổhợp 108 nucleic acid quan tâm (mẫu dò) , thường 32 5.2) (smear) gel (Hình 5.3) (2-10 Hind - Southern blot CôngnghệDNAtáitổhợp 109 A B E E C E E ... tái nhiễm sắc thể tế bào nấm men: telomere, sau đầu nhiễm sắc thể có khả bị rời gắn vào nhiễm sắc thể khác Nếu centromere, sau nhiễm sắc thể tạo CôngnghệDNAtáitổhợp 106 thành không đẩy vào ... dùng kỹ DNase I (tụy bò): enzyme xúc tác phản ứng thủy phân liên kết nằm sau pyrimidine chuỗi DNA Trong trưởng hợpDNA sợi đôi, chỗ cắt xảy hay hay sợi (xem chương 1) CôngnghệDNAtáitổhợp 119...
... (complementary DNA) tổng hợp cDNA Q cDNA qua ba reverse transcriptase (2) Biến tính c CôngnghệDNAtáitổhợp enzyme -cDNA 132 nhiệt enzyme RNase H E coli khuôn mẫu cDNA thứ nhờ DNA polymerase ... 10-50 hoàn CôngnghệDNAtáitổhợp 75 133 bốn loại 200-250 + + + - hóa 2+ Mg2+ hoàn 6-10 mM 1.5 cDNA hoàn HCl H E coli (hairpin loop)1 (primer) E coli 6.4) M CôngnghệDNAtáitổhợp 134 , ... -cDNA E coli - plasmid vector mRNA- gen P CôngnghệDNAtáitổhợp có số thuận lợi sau: 140 - Không cần - - E coli đ 6.8) promoter vector phát triển -adapter - 6.9) CôngnghệDNAtáitổ hợp...
... Kiểm tra khuẩn lạc đơn mang đoạn DNA ngoại lai mong muốn cách tách chiết DNA (DNA miniprep) plasmid vector, CôngnghệDNAtáitổhợp 159 sau cắt enzyme hạn chế thích hợp điện di kiểm tra agarose ... Shine-Dalgarno Sự dung hợp gen thực cách gắn phần mã hóa gen tạo dòng gần đầu cuối 3’ gen vi khuẩn (ví dụ: gen lacZ) Protein dung hợp có ưu điểm sau: CôngnghệDNAtáitổhợp 156 - Protein dung hợp thường ... độ khoảng 4% protein hòa tan tổng số tế bào CôngnghệDNAtáitổhợp 162 Promoter trp-lac E coli tac (một dạng promoter lai promoter trp promoter lac) sử dụng thànhcông để sản xuất lượng lớn protein...
... tử DNAtáitổhợp từ loài khác nhau, có nhiều ưu điểm biến nạp tế bào chủ Và từ đây, côngnghệDNAtáitổhợp đời Hình 2.1 Quy trình tạo phân tử DNAtáitổhợpCôngTài liệuDNA táitổhợpthành ... 1.1 CôngnghệDNAtáitổhợp gì? CôngnghệDNAtáitổhợp (còn gọi kỹ thuật di truyền hay kỹ thuật gen) phận quan trọng côngnghệ chìa khóa (key technology) lĩnh vực côngnghệ sinh học Côngnghệ ... 1.2 Quy trình tạo DNAtáitổhợp mong muốn 1.4 MộtTài liệu chiatrình nghiên cứu côngnghệ vài công sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn DNAtáitổhợp - Năm 1972, phân tử DNAtáitổhợp tạo trường Đại...
... Câc tiëu câu dmh vào nhau, két q hïnh thành nüt tiëu câu mà bât dâu tù su két dmh tiëu câu vào lơp di nơi mac Nüt tiëu câu nhanh chơng lơn lên vê mât thë tỵch sau vài phüt hồn thành nüt chơ mach ... hành mâu khơng dỵnh vào khơng dỵnh vào nơi mac mach mâu Trong nhüng dièu kiên gây nên mơt su tơn thng nơi mac, tiëu câu dmh vào thành mach bi ton thuofng (hiên tmg dỵnh) dỵnh vào (hiên tmg ngung ... hop soi DNA bé sung (complementary DNA, cDNA ) nhà q trỵnh phiên mâ ngfc Sau dơ tao vector tâi té hop chun vector tâi té hop vào tê' bào chü Sàng loc dơng tê' bào mang 41 vector tâitohopVà ci...