... Mục đích nghiên cứu ny nhằm tiến hnh xây dựnghệ thống tái sinh cho số dòng khoai tây nhập nội, tạo sở cho kỹ thuật chuyển gen v dunghợptế bo trần tạo giống khoai với suất chất lợng cao VậT ... hng loạt phơng pháp đại đối tợng khoai tây, nh: kỹ thuật chọn lọc thị phân tử, nuôi đỉnh sinh trởng (meristerm), chuyển gen, dunghợptế bo trần (protoplast) nhằm tạo giống khoai tây với đặc ... khác có khả tái sinh khác Các nghiên cứu chọn giống khoai tây có khả chống chịu virus nhờ dunghợptế bo trần Nguyễn Quang Thạch, Frei, Wenzel (1993) cho thấy, protoplast hình thnh mô sẹo v sau...
... khoa học phƣơng pháp dunghợptếbàotrần 10 2.3.1 Tách tếbàotrần 10 2.3.2 Nuôi cấy tếbàotrần 11 2.3.3 Tái sinh tếbàotrần 12 2.3.4 Dunghợptếbàotrần 13 2.3.5 Chọn lọc lai soma 14 2.4 Bệnh ... tếbào trần; chọn lọc thểlai soma 2.3.1 Tách tếtrầnTếbàotrần (protoplast) phần tếbào nằm thành tế bào, có khả co nguyên sinh đƣợc tách rời khỏi thành tếbào phƣơng pháp học emzym Tếbàotrần ... tếbào thực vật cách dễ dàng, điều có ý nghĩa vô vùng to lớn di truyền học tếbào thực vật bậc cao Nuôi cấy tếbàotrần đƣợc áp dụng không cho dunghợptếbàotrần mà cho kỹ thuật ADN ngoại lai, ...
... HỌC CỦA PHƢƠNG PHÁP DUNGHỢPTẾBÀOTRẦN Những khâu quan trọng kỹ thuậtbao gồm: tách, nuôi cấy tái sinh tếbào trần; dunghợptếbào trần; chọn lọc thểlai soma Để tách tếbàotrần người ta sử ... độ tếbào đến hiệu suất dunghợp Tiến hành thí nghiệm dunghợp với thông số dunghợp tối ưu tìm thí nghiệm với mật độ khác nhau: 1x 105 tếbào trần/ ml ; 2x 105 tếbào trần/ ml, x 105 tếbào trần/ ml, ... 4.3) Dunghợp mật độ x 105 tế bào/ ml, tếbào cảm ứng nhanh phân chia sau ngày nuôi cấy Tỷ lệ lai 6x mật độ dunghợp 65,6% lailai 6x Như mật độ xung cho hiệu dunghợp tạo lai 6x cao x 105 tế bào/ ml...
... đợc phát triển xa cho kĩthuật vi tiêm, dunghợp điện, Flow cytometry, hấp thu tích hợp ADN, cô lập nhân nhiễm sắc thể từ tếbàotrần (Bajaj, 1989) Việc khám phá tếbàotrần bị nhiễm virus khảm ... 12 triệu tếbàotrần Nguyên tắc chung phơng pháp sửdụng hỗn hợp enzym: Xelluloza, hemixelluloza pectinaza để phân giải thành tếbào giải phóng tếbàotrần Một nguyên tắc sau thành tếbào đợc ... Giới thiệu chung protoplast 2.5.1Khái niệm tếbàotrần (protoplast ): Tếbàotrần (protoplast) têbào vi khuẩn tếbào thực vật bị tách bỏ thành tếbào nhờ phơng pháp vật lý enzym, phần nguyên...
... tính phản ứng tếbào kích thích Tác dụng khả thực bàotếbào thực bào ổ bụng chuột nhắt chuột trạng thái bị kích thích, tức khả đề kháng thể yếu, Cam thảo có tác dụng làm tăng khả thực bào; Còn chuột ... phối chế me Mục đích thí nghiệm: Tìm thể tích me phù hợp để phối trộn với thể tích đường cố định ban đầu Yếu tố cố định thể tích syrup (tính ml) Yếu tố thay đổi thể tích me (tính ml) Đánh giá cảm ... Sản phẩm hình thành thủy phân saccharose hỗn hợp đường nghịch đảo Sự nghịch đảo làm tăng chất khô, đồng thời tăng vị tính hòa tan đường dung dịch Sự tăng tính hòa tan gây nhờ trình nghịch đảo...
... Sau dunghợptếbàotrần hai dòng khoai tây nhị bội thu hỗn hợptếbàotrần gồm: Tếbàolai dị nhân (hetefusion) đồng nhân (homofusion), hỗn hợptếbào đa nhân tượng đa dung hợp, tếbàotrần ... giống bệnh - Tạo giống virus công nghệ tách meristerm - Tạo giống kháng virus công nghệ chuyển gen; công nghệ dunghợptếbàotrần Ngày kỹ thuậtdunghợptếbàotrần phương pháp tối ưu để Vũ Thị ... hợptếbàotrần đối tượng khoai tây Việt Nam Cùng với tiến thành tựu đạt giới nghiên cứu cải tạo giống trồng dunghợptếbào trần, Việt Nam dần kế thừa bắt đầu nghiên cứu kỹ thuậtdunghợptế bào...
... màng tếbào bị vỡ, hai tếbàotrần hoà nhập vào - qua trình dunghợp xảy Xung điện Hình ảnh dunghợptếbàotrần nhờ xung điện yến mạch d Ứng dụng protoplast * Dunghợp protoplast - Khi tếbàotrần ... Khi tếbàotrầndunghợp với tạo thành tếbàolai mang vật chất di truyền tất bố mẹ Các tếbàotrần có nguồn gốc từ tếbào soma nên gọi lai soma - Chọn lọc thểlai soma + Do lai ngẫu nhiên nên ... trường dunghợptếbàotrần gồm 50mM Ca2+, 0,4M manitol, pH 10,5 tỏ thích hợp cho dunghợptếbàotrần nhiều loài trồng khác + Năm 1974, Kao phát PEG (polyethylenglycol) có tác dụng làm tăng hiệu dung...
... bo nờn c gi l lai t bo v thụng qua t bo soma nờn cũn gi l lai soma hay lai vụ tớnh t bo T phng phỏp ny phỏt sinh phng phỏp lai xa gia cỏc loi iu khụng th thc hin c bng phng phỏp lai hu tớnh thụng ... auxin v xytokinin tỏi sinh c cõy t callus K thut dung hp t bo trn S nguyờn tc dung hp t bo trn Cú hai loi dung hp: Dung hp i xng (sysmetric): dung hp t bo trn cựng cú nhõn mc bi th nh Vớ d: ... tiu th bng 10ml dung dch tỏch (Pl + 20% sucrose), them 1ml dung dch lờn trờn b mt dung dch tỏch v protoplast cho khụng lm hũa ln hai dung dch, tt nht l to thnh hai pha (nh t t dung dch lờn thnh...
... PVY phục vụ chương trình tạo giống khoai tây kỹ thuậtdunghợptếbàotrần Thuộc đề tài TẠO GỐNG KHOAI TÂY KHÁNG BỆNH VIRUS BẰNGDUNGHỢPTẾBÀOTRẦN Hà Nội, 2007 PHẦN I MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề ... tạo giống khoai tây kỹ thuậtdunghợptếbàotrần với mục đích tạo lai có khả kháng bệnh virus Từ kết thu bước đầu đề xuất tổ hợplai triển vọng mồi chọn lọc lai sau dunghợp (bảng 8) TÀI LIỆU ... tổ hợplaisửdụng mồi có để phát lai có tổ hợplai kết hợp với để tạo lai có đặc tính kháng tăng cường khả kháng virus PVX, PVY phát lai với mồi Do cần phải tìm mồi đặc hiệu để phát lai tổ hợp...
... Cơ sở khoa học phương pháp lai soma (dung hợptếbào trần) 1.5.1 Khái niệm tếbàotrần (protoplast) lai soma (somatic hybrid) Tếbàotrầntếbào bị tách bỏ thành tếbào phương pháp học hay enzym, ... việc dunghợp hai hay nhiều tếbàotrần nhằm tạo lai soma hoàn toàn phát triển thành lai hoàn chỉnh Con lai soma sản phẩm dunghợp nguồn tếbàotrần khác Nhân bào quan lai hai bố mẹ dung hợp, ... định lai soma Sản phẩm sau dunghợp hỗn hợp gồm: Các dạng bố mẹ dùng để lai partners), thểlai đồng hợp (do tếbào loài kết hợplại với - homozygous) thểlai dị nhân (các tếbào khác loài kết hợp...
... trình dunghợptếbàotrần (Kao et al, 1974; Burgess; Fleming, 1974) Phương pháp ñang ñược ứng dụng rộng rãi Bên cạnh phương pháp dunghợp hóa học tếbào trần, gần ñây ñã xuất phương pháp dunghợp ... giống khoai tây sửdụng tổng hợp kỹ thuật: Lai tạo, nuôi cấy bao phấn (nuôi cấy hạt phấn), nhị bội hóa dunghợptếbàotrần (Wenzzel cộng 1976) Sự ñời sơ ñồ tạo giống tổng hợp phân tích cảu Wenzel ... giống khoai tây dunghợptếbàotrần giới Hầu hết khoai tây trồng thuộc nhóm tứ bội (2n=4x=48), ñó muốn dunghợp mức nhị bội cần giảm ñộ bội xuống trước tiến hành lai soma kỹ thuật nuôi bao phấn...
... cấy tếbào trần, số tếbào phân chia từ tổng số tếbào nuôi cấy ban đầu, mẫu có 100-200 tếbàotrần nuôi cấy Có dấu hiệu nhiễm bẩn không Các bước nuôi cấy tếbàotrần III Dunghợptếbàotrầnlai ... phẩm dunghợp Mở đầu Tếbàotrầntếbào thực vật bị loại bỏ vách xử lý enzyme Đó tếbào tự do, cô lập, không định hướng (vì không chịu tương quan hệ thống thực vật) Dunghợptếbàotrầnhợptếbào ... thành tếbào cá thể loài khác sau tái sinh lai từ tếbàodunghợp Vì lại chọn laitếbào trần? Lai hữu tính phương pháp lai cỏ để tạo biến dị tổ hợp thông qua dunghợp giao tử -Tuy nhiên lai hữu...
... pháp Dunghợp protoplast 14 15 3.Phương pháp Dunghợp protoplast 3.3 khả xảy dunghợp 16 4.Ứng dụng tồn kỹ thuật protoplast 4.1 ứng dụng : Dunghợp protoplast (lai soma) Chọn dòng tếbào ... pectinlaza để phân giải thành tếbào giải phóng tếbàotrần Tạo môi trường có áp suất thẩm thấu thích hợp tránh nước vào làm vỡ tếbào Phương pháp tách tếbàotrần 1.2 bước tiến hành Chọn ... LÂN Nội Dung Phương pháp tách protoplast Nuôi cấy protoplast Phương pháp Dunghợp protoplast 4.Ứng dụng tồn kỹ thuật protoplast 1.Phương pháp tách tếbàotrần 1.1 nguyên tắc Sửdụng hỗn hợp enzym:...
... (bệnh tích tế bào- CPE) PRV nuôi cấy phổ rộng loại tếbàotếbào phổi thỏ (rabbit lung-ZP), tếbào thận thỏ (rabbit kidneyRK13), tếbào thận chuột Hamster (Hamster kidney-BHK21), tếbào thận heo ... heo (porcine kidney-PK15), tếbào thận khỉ xanh (green monkey kidney-GMK), tếbào phổi chồn Vizon (mink lung-MK), tếbào thận chồn furo (ferret kidney-FK), tếbào phôi bào thai cừu (ovine fetal ... lọc qua màng lọc 0.2 um đưa vào môi trường tếbào • Mẫu huyết cho qua lọc 0.2 um đưa vào môi trường tếbào b) Chuẩn bị môi trường tếbào Cả hai loại tếbào PK-15 BT phát triển môi trường tối thiểu...
... (hỡnh 2) 10 II.3 Lai ti ch (In situ hybridization) 3.1 Nguyờn tc: Lai ti ch l kiu lai phõn t ú trỡnh t ớch cn tỡm nm t bo, mụ Quỏ trỡnh lai vi mu dũ ỏnh du v phỏt hin phõn t lai c thc hin trờn ... 37C.) 50 àl hn hp lai c a vo v t di lamen DNA mc tiờu mụ v mu dũ PCV2 hn hp lai s b bin tớnh 90C, 10 phỳt sau lm lnh tỳi ỏ S lai c th hin khong 18-22h, 37C mụi trng m Sau lai, slide kớnh c ... cú sn trờn th trng Probe c a vo cựng vi 20-30 ml hn hp lai gm 50% formamide, 10% dextran sulphate, x dung dch m mui natri citrate ( ssc), x dung dch Denhardt, 200 mg/ml DNA tinh trựng v 0.05% probe...
... cấy 15 Trong nuôi cấy tếbào động vật, người ta phân biệt hai trường hợp: tếbào bậc hay tếbào sơ cấp tếbào bậc hai hay tếbào thứ cấp - Tếbào bậc (Primary cells) tếbào thu trực tiếp từ quan ... móng 2.4.1 Chẩn đoán kỹ thuật nuôi cấy tếbào a Giới thiệu kỹ thuật nuôi cấy tếbào Nuôi cấy tếbào là đơn vị nuôi cấy nhỏ nhất, kỹ thuật trì phát triển tếbàothể sống, tếbào điều kiện phòng thí ... Những tếbào giữ lại làm dòng tếbào giống phục vụ cho nghiên cứu tếbào Các loại tếbào nuôi cấy - Tếbào biểu mô (Epithelial cells) - Nguyên sợi bào (Firoblast cells) - Tếbào (Muscle cells) - Tế...
... tiếp nối dunghợp màng virus với màng tếbào dẫn đến dunghợp hai hay nhiều tế bào, hình thành tếbào khổng lồ tiểu thể virus mọc chồi từ màng tếbào Màng rắn hồng cầu thường bị vỡ dunghợp virus ... mặt tếbào hạt virus giải phóng ngưng tụ virus b Sựdunghợptếbào tan huyết Virus Newcastle APMV khác làm tan vỡ hồng cầu hay dunghợp với tếbào khác chế Hiện tượng bám vào vị trí thụ thể ... nuôi cấy tếbào 2.1 Khái niệm Nuôi cấy tếbào kỷ thuật trì phát triển tếbàothể sống, tếbào điều kiện phòng thí nghiệm tự phân chia, thực đầy đủ chức biến dưỡng chức chuyên biệt tếbào 2.2 Các...
... Nadu State Dòng tế bào: Tếbào thận lợn (PS-Porcine Kidney) lấy từ trung tâm quốc tế khoa học tếbàosửdụng nghiên cứu Tếbào phát triển bình nuôi cấy mô plastic bình Roux 37oC Dung môi: Eagle’s ... sởi) virus hợpbàohệ hô hấp Trong tất nghiên cứu, kỹ thuật SVC biểu gia tăng tốc độ phân lập virus mà không làm giảm độ nhạy Kỹ thuật SVC làm giảm thời gian so với kỹ thuật nuôi cấy tếbào thông ... tổn thương giống sốt bại liệt Về mặt vi thể, tượng tếbào thần kinh đệm thực bào thần kinh chết tạo nốt điển hình sản tếbào thần kinh đệm, bệnh kéo dài tếbào viêm bao quanh huyết quản tạo thành...
... nuôi cấy tếbào Nuôi cấy tếbào kỹ thuật trì phát triển tếbàothể sống thực đầy đủ chức biến dưỡng chức chuyên biệt tếbào Quá trình nuôi cấy tếbào cho phép tếbào đóng vai trò tếbào độc lập, ... pháp nuôi cấy tếbào MARC- 145 2.3.3.1.Hồi phục tếbào : Tếbào trữ dạng đông lạnh nitơ lỏng, muốn sửdụng phải hồi phục lạitếbào Các bước hồi phục tế bào: • • • • • • Lấy lọ đựngtếbào từ bình ... trường tếbào 2.3.4.2 Phương pháp gây nhiễm tếbào lần thứ với mẫu xử lý 16 Khi tếbào phát triển đầy bề mặt lọ nuôi cấy tạo thành tếbào lớp tiến hành gây nhiễm tếbào • Lấy lọ tếbào ra,...
... dịch huyền phù: Nghiệm thức chọn có >60% hệ số tăng sinh >10 (thể tích lắng tế bào) Động thái sinh trưởng dịch huyền phù tếbào Mơi trường ni cấy tếbào dịch huyền phù LV + BA (0,5mg/l) + NAA ... phản ứng Mẫu vàng, héo, khơng tạo tếbào mơ sẹo Tạo nhiều rễ Mẫu vàng, Mẫu vàng, Mẫu vàng, héo, khơng héo, khơng héo, khơng tạo tếbào tạo tếbào mơ tạo tếbào mơ sẹo sẹo mơ sẹo Tạo nhiều rễ ... mơ sẹo, có rễ 0,5 Mẫu khơ lại, khơng phản ứng Tạo tếbào mơ sẹo, khơng rễ Tạo tếbào mơ sẹo, có rễ Mẫu héo, chết Chồi tạo tếbào mơ sẹo Tạo tếbào mơ sẹo, có rễ BA Thí nghiệm 3.3: Khảo sát khả...