... nạp DNA Plasmid vàotếbào E. coli DH5α Vector pCR 2.1 sau gắn đoạn gene kháng thể táitổhợp biến nạp vàotếbàovikhuẩn E. coli chủng DH5α có kít tách dòng “TA cloning kit” hãng Invitrogen Sau ... thể táitổhợp E. coli Do ưu điểm bật nó: tếbào phát triển nhanh rẻ Nhiều vector sử dụng để tách dòng biểu gene tách dòngDNAđưa trực tiếp vào E. coli (biến nạp) vi c nhiễm vào thực thể khuẩn ... ứng PCR vào vector tách dòng pCR ™ 2.1 (invitrogen) với mục đích tạo vector táitổhợp mang đoạn DNA cần tách dòng sau biến nạp vàotếbào E. coli chủng DH5α Nguyên tắc: Phản ứng dựavào đặc tính...
... đƣa DNAtáitổhợpvàotếbào Trong trƣờng hợptếbàoEcoli biến nạp có nghĩa đƣa DNA plasmid vàotếbào Biến nạp đƣợc sử dụng với nghĩa rộng hơn, cụ thể đƣa DNAvàotếbào Lần biến nạp vikhuẩn ... gen đặc tính thuận lợi cho thao tác gen Chủng chủ mang vector táitổhợp gọi dòngtáitổhợpDòngtáitổhợp đƣợc phân lập để lƣu trữ DNAtáitổhợp dùng cho thao tác gen Toàn trình gọi tạodòng ... xúc DNA lạ với tếbàonhận - Sự xâm nhập DNAvàotếbàonhận - Sự liên kết DNA lạ với đoạn tƣơng đồng nhiễm sắc thể tếbàonhận - Sự đồng hóa phân tử DNA lạ vàoDNAtếbàonhận nhờ táitổ hợp...
... trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNAvikhuẩn cho vàovikhuẩnnhận sau thực tái tổhợp để gắn DNAvàogenvikhuẩnnhậnTải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định Thí dụ: với Prophage tiếp hợpvào ... Bottin, 1998) Yeoung-Seuk Bae Guy R Knudsen, 1999 sử dụng Polyethylene-glycol đồng biến nạp gen tổng hợp β-Glucuronidase (GUS) gen tổng hợp GFP (Fluorescent Protein Genes ) vào nấm Trichoderma harzianum ... đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩnnhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn sinh tiếp hợp đƣợc...
... đƣa DNAtáitổhợpvàotếbào Trong trƣờng hợptếbàoEcoli biến nạp có nghĩa đƣa DNA plasmid vàotếbào Biến nạp đƣợc sử dụng với nghĩa rộng hơn, cụ thể đƣa DNAvàotếbào Lần biến nạp vikhuẩn ... gen đặc tính thuận lợi cho thao tác gen Chủng chủ mang vector táitổhợp gọi dòngtáitổhợpDòngtáitổhợp đƣợc phân lập để lƣu trữ DNAtáitổhợp dùng cho thao tác gen Toàn trình gọi tạodòng ... xúc DNA lạ với tếbàonhận - Sự xâm nhập DNAvàotếbàonhận - Sự liên kết DNA lạ với đoạn tƣơng đồng nhiễm sắc thể tếbàonhận - Sự đồng hóa phân tử DNA lạ vàoDNAtếbàonhận nhờ táitổ hợp...
... chúng tạo cấu trúc cho phép DNA tiếp cận với ComEA ComEA thể nhận để DNAvàotếbào ComEC tạo kênh vận chuyển dạng dịch qua DNAvàotếbào (Leendert W.Hamoen cộng sự, 1998) ComFA dạng helycase có ... gia vào phản ứng PCR Taq polymerase Taq polymerase enzym tham gia vào trình tổng hợp mạch DNA Enzym có khả phân hủy primer bắt cặp vào mạch DNAtạo điều kiện cho vi c bổ sung nucleotide vào mạch ... E. coly) chuỗi polypeptide với ba hoạt động enzym: DNA polymerase (tổng hợp) 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy giải) 3’ 5’ 3’ Enzym DNA fragment Klenow enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn...
... chúng tạo cấu trúc cho phép DNA tiếp cận với ComEA ComEA thể nhận để DNAvàotếbào ComEC tạo kênh vận chuyển dạng dịch qua DNAvàotếbào (Leendert W.Hamoen cộng sự, 1998) ComFA dạng helycase có ... gia vào phản ứng PCR Taq polymerase Taq polymerase enzym tham gia vào trình tổng hợp mạch DNA Enzym có khả phân hủy primer bắt cặp vào mạch DNAtạo điều kiện cho vi c bổ sung nucleotide vào mạch ... E. coly) chuỗi polypeptide với ba hoạt động enzym: DNA polymerase (tổng hợp) 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy giải) 3’ 5’ 3’ Enzym DNA fragment Klenow enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn...
... trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNAvikhuẩn cho vàovikhuẩnnhận sau thực tái tổhợp để gắn DNAvàogenvikhuẩnnhậnTải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định Thí dụ: với Prophage tiếp hợpvào ... Bottin, 1998) Yeoung-Seuk Bae Guy R Knudsen, 1999 sử dụng Polyethylene-glycol đồng biến nạp gen tổng hợp β-Glucuronidase (GUS) gen tổng hợp GFP (Fluorescent Protein Genes ) vào nấm Trichoderma harzianum ... đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩnnhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn sinh tiếp hợp đƣợc...
... Pseudomonas fluorescens through chromosomal integratio of 2,4-diacelphloroglucinol biosynthesis genes.Chinese Science Bulletin 50: 775 – 781 Các Website http://www.emunix.emich.edu/~rwinning/genetics/glossary.htm ... Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Tài liệu tiếng nƣớc 11 Christine Josenhans, Susanne Friedrich and Sebastian Suerbaum,1998 Green fluorecens protein as a novel marker and reporter system in Helicobacter ... (a) Dòngvikhuẩn E. coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pUT-gfp; (b) Dòngvikhuẩn E. coli DH5α (λ-pir) chứa plasmid pRK600; (c) Dòngvikhuẩn Pseudomonas fluorescens 50 4.1.2 Kết ly trích DNA tổng...
... Bottin, 1998) Yeoung-Seuk Bae Guy R Knudsen, 1999 sử dụng Polyethylene-glycol đồng biến nạp gen tổng hợp β-Glucuronidase (GUS) gen tổng hợp GFP (Fluorescent Protein Genes ) vào nấm Trichoderma harzianum ... Châu Phi Nos promoter “nopaline Synthase” Agrobacterium tumerfaciens hpr gen kháng hydromycine Streptomuces hygroscopius uidA gen “β-glucurnidase” Escherichia coli Reporter gen đƣợc sử dụng để ... (radiochemical) nhƣ CAT, chloramphenicol acetyltranferase, phƣơng pháp quang hóa học (chemiluminescence) nhƣ lux vikhuẩn luc, lucciferase đom đóm Hệ thống marker gen Marker gengen dùng để chọn lọc Các...
... trƣờng hợp virus tải đoạn nhỏ DNAvikhuẩn cho vàovikhuẩnnhận sau thực tái tổhợp để gắn DNAvàogenvikhuẩnnhậnTải nạp đặc hiệu: Vi c tải nạp thực gen định Thí dụ: với Prophage tiếp hợpvào ... Phƣơng pháp triparental mating tiếp hợp đoạn gen gfp vàovikhuẩn Pseudomonas fluorescens 39 3.3.2 Ly trích genomic DNA từ các dòngvikhuẩn Pseudomonas fluorescens tiếp hợp ... đặc tính vikhuẩn cho.Sự tiếp hợp hai vikhuẩn dẫn đến hình thành hợp tử chứa hệ genvikhuẩnnhận đoạn genvikhuẩn cho Hai phần kết hợp lại thành nhiễm sắc thể Những vikhuẩn sinh tiếp hợp đƣợc...
... 10µl dịch huyền phù tếbào competent cell đƣợc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, thêm 3µl DNA plasmid táitổhợp vào, đảo nhẹ, giữ lạnh đá 20 phút - Chuyển nhanh eppendorf vào bồn nhiệt 420C, ... plasmid chưa táitổhợp C 47 Kết biến nạp hoàn toàn plasmid táitổhợpvàovikhuẩnkhuẩn lạc màu trắng tếbàovikhuẩn bị đột biến kháng kháng sinh tạo thành Còn đĩa đối chứng xuất khuẩn lạc màu ... Schumann, 1995, Genetic Engineering Techniques Các website http://www.protocol-online.org/prot/Mmolecular_Biology/ http://brahms.chem.uic.edu/~cgpage/protocol/cloning.html A 51 http://core.eai.edu/biol/foruvellm/farwelebpage/Biotech3100/pvector.200.pfd...
... biến nạp plasmid vàotếbàovikhuẩnVikhuẩn Ecoli Xử lí CaCl2 Sốc nhiệt 420C 45 giây Cấy lên đĩa Sơ đồ 3.2 Quy trình biến nạp plasmid vàotếbàovikhuẩnEcoliVikhuẩnEcoli sau xử lí CaCl2 ... tếbào thực vật Sau trộn tếbào trần với DNAtáitổhợp với có mặt CaCl2 polyethylenglycol Tiếp theo ta lại nuôitếbào trần môi trƣờng thích hợp để táitạo lại thành tếbào nguyên thủy Khi tế ... 5’ exonuclease 5’ 3’, exonuclease (thủy giải), 3’ Enzym DNA fragment Klenow enzym DNA polymerase I bị cắt bỏ tiểu đơn vị nhỏ (nhờ protease), phần chịu trách nhiệm exonuclease 5’ 3’ Do đó, enzym...
... plasmid vàotếbàovikhuẩn 26 3.3.2 Quy trình biến nạp đoạn DNAvàovikhuẩn E. coly DH5α kiểm tra .27 3.3.3 Xác định mật số vikhuẩn cách đo OD600nm kết hợp với phƣơng pháp đếm khuẩn lạc ... Cơ sở sinh hóa tếbào học hiên tƣợng biến nạp 2.3 Sự biến nạp nhântạovàotếbào E. coly 2.3.1 Khái niệm biến nạp nhântạo 2.3.2 Sự điều hoà gen operon Lac E. coly .5 ... Cách tiếnhành 28 3.3.4 Chuẩn bị tếbào khả nạp .29 3.3.5 Biến nạp plasmid pBluescript vàotếbàovikhuẩn E. coly DH5α phƣơng pháp sốc nhiệt 30 3.3.6 Chọn lọc khuẩn...
... 100mM lạnh vào hòa tan phần kết tủa Thêm 20μl glycerol 98% vào trữ -700C Biến nạp plasmid vào khả nạp Bƣớc 1: Hút 3µl dịch huyền phù tếbào competen cell đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, ... đảo nhe eppendorf Bƣớc 5: Ly tâm 12000 vòng/phút 10 phút 200C Thu hết dịch cho vào eppendorf tƣơng ứng Bƣớc 6: Cho vào eppendorf chứa dịch vừa thu đƣợc 1µl RNAse, ủ 370C Bƣớc 7: Cho vào eppendorf ... Wolgang Schumann, 1995, Genetic Enginereering Techniques Các website http://faculty.plattsbuggh.edu/donald-slysh/transformation.html 12.http://www.mun.ca/Biochem/course/4103/topic/transrormation.html...
... đƣợc plasmid táitổhợp Biến nạp plasmid táitổhợpvàovikhuẩn E. coly DH5α khả nạp, thu đƣợc kết nhƣ sau 52 a b Hình 4.16 Kết cấyvikhuẩn biến nạp plasmid táitổhợp với đoạn DNA 629 bp môi ... Hình 4.17 Kết cấyvikhuẩn biến nạp plasmid táitổhợp với đoạn DNA 580bp môi trƣờng LB/amp/ X-gal/IPTG (a)Biến nạp với tỉ lệ tếbào khả nạp plasmid táitổ hợpvới đoạn DNA 580bp theo thể tích (μl) ... đƣợc cắt với hai enzym BamHI HindIII Hai enzym có trình tự nhận biết nằm trình tự nhận biết enzym EcoRV, cắt mẫu plasmid táitổhợptạo dạng thẳng mang đoạn DNA đƣợc chèn vào theo sơ đồ cắt vùng...
... Chiết tách DNA plasmid lẫn DNAgen thêm dung dịch III vào để lâu nên DNA plasmid DNAgen hoàn tính Qua kết tách chiết tính đƣợc tỉ lệ tếbào tiếp nhận plasmid 11/15 Với nhận định tiếnhành chiết ... dịch vikhuẩnnuôicấy để đo OD nhiều lần nên dịch nuôicấy dễ bị nhiễm vi sinh vật từ bên ngoài, phải cẩn thận thao tác Mật độ tếbàovikhuẩn phụ thuộc vào yếu tố sau Thể tích môi trƣờng nuôicấy ... nạp plasmid vàotếbàovikhuẩn 4.2.1 Chọn lọc vikhuẩn biến nạp với nồng độ kháng sinh 60µg/ ml a b c DC Hình 4.3 Kết cấyvikhuẩn biến nạp sốc nhiệt 90 giây (a) biến nạp với tỉ lệ tếbào khả nạp...
... 10µl dịch huyền phù tếbào competen cell đƣơc chuẩn bị cho vào eppendorf 1.5 ml, thêm 3µl DNA plasmid táitổhợp vào, đảo nhẹ, giữ lạnh đá 20 phút Chuyển nhanh eppendorf vào bồn nhiệt 420C, giữ ... thêm vào cột lƣợng wash buffer với lƣợng capture buffer cho vào trên, ly tâm 10000 vòng /phút 30 giây 40C Bƣớc 6: Lấy cột đặt vào eppendoft 1.5ml Bƣớc 7: Hút elution buffer nhỏ vào cột GFX, tùy vào ... Từ lượng vector DNA tính lượng DNA chèn Vector (ng) x DNA chèn (kb) X Tỉ lệ DNA chèn (bp) (ng )DNA chèn = Vector (kb) Vector Căn vào tỉ lệ số mol vector DNA chèn dựavào để tính lƣợng DNA cần sử...