... tôi chỉ trình bày phần tách dòng và xácđịnhtrìnhtự nucleotid của gene mã
hoá kháng thể tái tổ hợp kháng lại lympho bào tách từ bệnh nhân ung thư vú.
Để tách dòng và xácđịnhtrìnhtự gene mã ... để phát hiện dideoxynucleotid đánh dấu
- Xử lý kết quả bằng các chương trình phần mềm máy tính.( máy xác định
trìnhtự gene tự động ABI PRISM 3100 – Avant)
32
Website: http://www.docs.vn Email ... Tách dòng và xácđịnhtrìnhtự gene đoạn kháng thể đã chọn lọc.
2.2.VẬT LIỆU
2.2.1. Sinh phẩm
Mẫu dùng cho thí nghiệm: Là thư viện kháng thể phage có khoảng 10
10
dòng tế
bào mang các gene mã hoá...
... ứng PCR cho giải trìnhtự được trình bày ở
phần phương pháp nghiên cứu. Quá trình giải trìnhtự được thực hiện trên
máy giải trìnhtựtự động ABI 3100. Sau khi giải trìnhtựgen mã hóa kháng ... ĐỀ NGHỊ.
KẾT LUẬN
- Đã tạo dòng xácđịnhtrìnhtự đoạn gen mã hóa kháng nguyên HA của
virus cúm từ gà bị nhiễm bệnh ở Việt Nam.
- Đã phân tích trìnhtự đoạn gen mã hóa cho kháng nguyên HA cúm ... Kết quả xácđịnhtrình tự.
Sử dụng DNA plasmit cho phản ứng PCR giải trìnhtự với việc sử dụng
bộ sinh phẩm BigDye
R
Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit của Applied
Biosystems, quy trình của...
... DNA.
•
Sử dụng các phương pháp :
Maxam-Gilbert (1977)
Sanger (1977)
Xác địnhtrìnhtựtự động
Phương pháp xácđịnh
trình tự ADN
Bất lợi của phương pháp đánh dấu phóng xạ
•
Đánh dấu
32
P:chu ... Dựa vào đó để đọc được trìnhtự của ADN
ã
Nhõn t kt thỳc c hiu c s dng l cỏc dideoxynucleotit
(phng phỏp dideoxynucleotid)
•
Là các phương pháp dùng để xácđịnhtrìnhtự sắp
xếp các nucleotides ... nh trỡnh t bng
phng phỏp t ng
Nguyên tắc chung của giải trìnhtựgentự động là
dựa theo cơ sở của phương pháp Sanger. Nhưng :
Quá trình tổng hợp AND thực hiện nhờ kỳ thuật
PCR
Mỗi ddNTP...
... ddTTP) sẽ được 4 bản điện di khác nhau. Các băng ADN
xác định nhờ việc gắn đồng vị phóng xạ vào mồi, hoặc các ddNTP. Dựa vào đó để
đọc trìnhtự ADN.
2. Các bước tiến h ành:
- Cắt ADN bằng enzyme ... có kích thước khác nhau.
- Thu kết quả bằng phương pháp tự ghi, chụp ảnh, làm phim phóng xạ tự
ghi cho bản gel điện di và đọc trìnhtự của nucleotid trên điện di đồ lần lượt trên cả
4 mẫu ... dideoxy với ddNTP
***
Ví dụ : . Nếu ta thêm ddCTP vào hỗn hợp phản ứng đang tổng hợp ADN thì quá
trình tổng hợp chỗi polipeptid sẽ dừng lại ở vị trí C.
. Nếu thêm ddGTP vào hỗn hợp thì khi gặp...
... NGHỆ SINH HỌC
Đề bài: Trình bày phương pháp xácđịnhtrinhtự axitnucleic bằng phương
pháp hoá học của Maxam- Gilbert.
Trả lời:
Hiện nay có một số phương pháp giải trìnhtự AND khác nhau.Trong ... lời:
Hiện nay có một số phương pháp giải trìnhtự AND khác nhau.Trong đó có
phương pháp giải trìnhtự các nucleotit của A.Maxam và W.Gilbert ( còn được
gọi là phương pháp hoá học).
1. Nguyên ... các đoạn AND này và nhận biết vị trí của chúng nhờ đánh dấu phóng
xạ. Dựa vào đó để đọc được trìnhtự của AND.
2. Các bước tiến hành
- Chuỗi AND kép được đánh dấu phóng xạ với
32
P tại đầu cuối...
... phải đặc trưng cho trìnhtự DNA cần khuếch đại, không
trùng với các trìnhtự trên gen. Trìnhtự nằm giữa hai primer không quá lớn, phản ứng
PCR sẽ tối ưu trên những trìnhtự nhỏ hơn 1 kb (Hồ ... trìnhtự gene tef-1a mã hóa cho protein chỉ ra
rằng có 1,8 % trìnhtự có sự thay đổi và dựa trên trìnhtựgen này cũng có thể chia 10
nguồn trên thành 3 nhóm kiểu gen khác nhau, các nhóm kiểu gen ...
3.4.5. Quy trình tóm tắt các bƣớc đọc trìnhtự
Hình 3.2 Sơ đồ tóm tắt quy trình đọc trìnhtự sản phẩm PCR.
3.4.6. Bố trí thí nghiệm tinh sạch, đọc trìnhtự và phân...
... gồm các trìnhtựgen CP-RGSV của thế giới và nhánh gồm các trìnhtự
gen CP-RGSV của Việt Nam. Nhánh gồm các trìnhtự của Việt Nam lại đƣợc chia
thành hai nhánh nhỏ, trong đó hai trìnhtựgen phân ...
đoạn gen quan tâm.
i) Thu thập các trìnhtựgen quan tâm từ GenBank:
Trƣớc khi thiết kế đoạn mồi đặc hiệu cho gen và các trìnhtự cần phân lập
của các chủng virut nghiên cứu (Ví dụ: trìnhtựgen ...
1> Tách dòng, xácđịnhtrìnhtự một số đoạn trong genome của chủng
RGSV.
2> So sánh các trìnhtự nucleotit của gen CP- RGSV thu đƣợc với các trình
tự tƣơng ứng trên GenBank để đánh giá...
... ADN
Xác địnhtrìnhtự đoạn gen vùng siêu biến I
ADN plasmit sau khi được kiểm tra và khẳng định đã được gắn sản phẩm PCR được gửi cho
“BIOSERVICE UNIT”, Bangkok, Thailand để xácđịnhtrình tự. ... địnhtrình tự. Kết quả xácđịnhtrìnhtự
nucleotid sản phẩm PCR từ mẫu máu người Việt nam (sản phẩm PCR từ mẫu tóc chưa gửi xác
định trình tự) như sau:
So sánh trìnhtự nucleotid của sản phẩm ... hàng gen Quốc tế.
VN1: Trìnhtự nucleotid vùng siêu biến I mà chúng tôi đã tách dòng từ mẫu máu người Việt Nam.
Qua kết quả so sánh, ta thấy trìnhtự nucleotid của sản phẩm tách dòng và trình tự...
... xácđịnhtrìnhtự nucleotide của acid
có thể rút ra được từ việc xácđịnhtrìnhtự nucleotide của acid
nucleic.
nucleic.
Hai phương pháp xácđịnhtrìnhtự chính là phương
Hai phương pháp xác ... đánh phóng xạ. Kết quả được đọc trên bảng phóng
xạ tự ghi
CÁC PHƯƠNG PHÁP
CÁC PHƯƠNG PHÁP
XÁC
XÁC
ĐỊNHTRÌNHTỰĐỊNHTRÌNHTỰ
CỦA acid nucleic
CỦA acid nucleic
Các phương pháp ... cả các phương pháp vừa kể đều dùng để
xác địnhtrìnhtự của một DNA đã được tạo dòng.
Sự ra đời của phương pháp PCR cho phép xác
định trực tiếp trìnhtự của một DNA khuyếch đại
bằng PCR không...
... to analysis of phylogeny of
Cunninghamia
lanceolata by MP method, together with another species of the same genus, Cunninghamia
konishii Hayata, and 7 species of another genera of the same ... 1% (Hinh 1) thi dupc
tinh sach blng QIAquick Gel exfraction JCit
(QIAGEN).
Xac dinhtrinh ty gen 18S-rDNA
Trinh ty gen
18S-rDNA
dupc xacdinh theo
phuomg phap tdng hop cua Sanger va dong ... pi
dung dich TE va kilm
fra bang dien di
fren
gel agarose 1%.
Nhan ban gen 18S-rDNA
b5ng
ky thuat PCR
Mpt doan gen 18S-rDNA cd chilu dai khoang
86
600 bp dupc nhan ban blng ky thuat PCR...
... plasmit trên gel agarose 1%.
2.2.8. Phơng pháp xácđịnhtrìnhtự nucleotit
Gen NIb đợc xácđịnhtrìnhtự trên máy đọc tự động ABI PRIM
3100 Avant
Genetic Analyzer bằng cách sử dụng bộ hoá chất ... dòng gen. Chúng
tôi sơ bộ kết luận đà nhân bản thành công gen NIb bằng kỹ thuật RT-PCR. Tuy
nhiên, cha thể kết luận chính xác đó là gen NIb, muốn vậy phải tiến hành tách dòng
gen và xácđịnhtrình ... tế để tìm ra tất cả các trìnhtựgen NIb
của PRSV. Sử dụng chơng trình phần mềm DNAstar, BioEdit để so sánh các trìnhtự
của các gen NIb với nhau. Để nhân đợc toàn bộ gen NIb thì cần phải thiết...