... PCR (Polymerase Chain Reaction) PCRphảnứng tổng hợp dây chuyền dùng để khuyếch đại trình tự DNA đích dựa bắt cặp đặc hiệu mồi với DNA mạch khn hoạt tính kéo dài cuả enzyme polymerasePhảnứng ... dùng cho phảnứngPCR + Đệm TE (10mM, Tris-HCl, 1mM EDTA): dùng cho trình tách chiết DNA khn cho phảnứngPCR + PCR mix cho tiêu: B cereus, C perfringens, E coli, Salmonella, S aureus Taq polymerase ... độ DNA môi trường, nhiệt độ thời gian phản ứng, kích thước trình tự lai lực ion môi trường 1.3.2.4 Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) Phương pháp PCR phương pháp in vitro để tổng hợp...
... týp gene tổ hợp BCR-ABL b2a2 b3a2 kỹ thuật RT -PCR (Reverse Transcription -Polymerase Chain Reaction) sau tiến hành xét nghiệm định lượng Real-Time PCR nhờ 03 nồng độ chuẩn gen β-glucuronidase (GUS) ... samples from 60 Chronic Myeloid Leukemia patients were tested by RT -PCR (Reverse Trancription -Polymerase Chain Reaction) and Real-Time PCR to detect Philadelphia chromosome containing BCR-ABL fusion ... thời có kế hoạch điều trị theo dõi đáp ứng điều trị bệnh CML cách hiệu Kết luận Từ kết thu trình bày nghĩ cần phải nhanh chóng phát triển ứng dụng kỹ thuật PCR lĩnh vực đời sống, đặc biệt ngành...
... Thành phầnphảnứngPCR gồm có: ADN mẫu, mồi xi mồi ngược, dNTPs (dATP, dCTP, dGTP,dTTP), dung dịch đệm cho phảnứng PCR, MgCl2 , Taq polymerase 24 2.10.3 Quy trình phảnứngPCRPhảnứngPCR chuỗi ... tơi ứng dụng quy trình phảnứngPCR để chẩn đốn lồi cầu trùng phổ biến gây nhiễm gà số địa phương khác Thừa Thiên Huế với cặp mồi đặc hiệu cho loài Kiến nghị Ứng dụng quy trình phảnứngPCR đề ... số địa phương Thừa Thiên Huế phương pháp PCR Sau nhiều lần tiến hành thử nghiệm phảnứngPCR vào 200 mẫu phân thu chúng tơi tối ưu hóa quy trình phảnứngPCR cho riêng loài cầu trùng gây bệnh phổ...
... multiplex PCR phát với biosensors E Nested PCR I Định nghĩa: Nested PCR dạng thay đổi PCR thường, hai cặp mồi PCR dùng để khuếch đại đoạn DNA Phảnứng nested PCR phải thực hai lần Lần đầu, phảnứngPCR ... Đây máy đun nóng làm nguội ống phảnứng nhiệt độ xác cho phảnứng Để ngăn ngừa bay hỗn hợp phản ứng, phần nắp đậy máy PCR đun nóng, trường hợp lượng dung dịch phảnứng ít, người ta cho lớp dầu ... quang tăng lên chu kỳ PCR, tỷ lệ với tốc độ mẫu dò bị cắt bỏ đo lường Kỷ thuật Real - time PCR D Multiplex PCR I Định nghĩa Phảnứng multiplex PCR dạng thay đổi phảnứngPCR thơng thường, hai...
... bị dụng cụ cho PCRPhảnứngPCR thực máy chu trình nhiệt Đây máy đun nóng làm nguội ống phảnứng nhiệt độ xác cho phảnứng Để ngăn ngừa bay hỗn hợp phản ứng, phần nắp đậy máy PCR đun nóng, trường ... ADN polymerase hoạt động chức phảnứngPCR cụ thể cần nồng độ ion magie khác Nếu nồng độ magie thấp, phảnứng khơng thành cơng polymerase khơng hoạt hóa thích hợp Nếu nồng độ magie cao, phảnứng ... gen đích Tất phảnứngPCR có chứa lượng không đáng kể phân tử ADN có đầu chưa thật Tuy nhiên, điều không ảnh hưởng đến kết phảnứng Các bước thực chu kỳ PCR Chu kỳ nhiệt phảnứngPCR điển hình...
... PCR (POLYMERASE CHAIN REACTION) NGUYÊN TẮC VÀ ỨNG DỤNG TS BS Đỗ Thị Thanh Thủy MỤC TIÊU BÀI GIẢNG Trình bày nguyên tắc PCR Trình bày cách chống ngoại nhiễm PCR Trình bày ứng dụng PCRPCRPOLYMERASE ... động UDG bị bất hoạt To cao PCR CÁC LOẠI PCR RT -PCR One-step RT -PCR Two-step RT -PCR Multiplex PCR Nested PCR, hemi-nested PCR Non-stop nested PCR Touch-down PCR RT -PCR RNA cDNA Reverse Transcription ... enzym polymerase, thực ống nghiệm, có độ nhạy cao PCR POLYMERASECHAINREACTIONPCR NGUYÊN TẮC PHẢNỨNG Amplicon 35-40 chu kì nhiệt Số copies = 2n.y n: Số cycle y: số copies ban đầu PCR POLYMERASE...
... cho phảnứngPCR Nếu phảnứngPCR cho kết (+) tiếp tục lấy 0,5ml dịch pha loãng bậc để trích khn DNA cho phảnứngPCR Lặp lại tương tự phảnứngPCR cho kết âm tính Mật độ tế bào tối thiểu cho phản ... 2.2.17.Kiểm chứng điều kiện tối ưu phảnứng Một phảnứngPCR thường chịu nhiều ảnh hưởng thành phần điều kiện phảnứng Trong khóa luận chúng tơi chọn kiểm chứng số điều kiện tối ưu phảnứngPCR như: ... kỳ, phảnứngPCR tạo khoảng lo6 Sau phản ứng, sản phẩm phảnứngPCR điện di gel agarose nhuộm với ethidium bromide thấy tia UY (bước sóng 312 nm) [10] 1.3.4.2.Các yếu tố ảnh hưởng đến phảnứng PCR...
... khuôn cho phảnứngPCR - Thực phảnứng PCR: PhảnứngPCR thực với thể tích 25µl eppendorf 0,5ml 0,2ml gồm thành phần Bảng 49 Bảng Thành phần sử dụng phảnứngPCR phát C Perfringens PhảnứngPCR thực ... sát điều kiện tối ưu phảnứngPCRPhảnứngPCR thường chịu nhiều ảnh hưởng thành phần điều kiện phảnứng Trong phần thực nghiệm này, kiểm chứng số điều kiện tối ưu 39 phảnứngPCR như: nhiệt độ ... 3.1.4.Khảo sát độ nhạy phảnứngPCR phát C perfringens Độ nhạy phảnứngPCR phát C perfringens số tế bào C perfringens nhỏ phảnứng mà phương pháp phát Thí nghiệm thực với phảnứngPCR độ pha loãng...
... monocytogenes phảnứngPCRPhảnứngPCR DNA khuôn từ L monocytogenes 0704 thu nhận cho phảnứngPCR cách tách làm DNA với chloroform [4] xử lý nhiệt tế bào 1000C 10 phút Tối ưu hoá điều kiện PCR nồng ... ưu cho PCR Nồng độ Mg2+ PhảnứngPCR thực nồng độ cuối Mg2+ từ 1,5 mM đến 4,0 mM Kết thể hình cho thấy phảnứngPCR với nồng độ Mg2+ từ 1,5 mM cho kết dương tính Nồng độ dNTPs PhảnứngPCR thực ... trường hòa tan 100 µl TE, xử lý nhiệt thu DNA cho phảnứngPCR µl dịch tế bào qua xử lý nhiệt sử dụng làm khuôn cho phảnứngPCR Đánh giá kết phảnứngPCR nhờ phân tích sản phẩm điện di agarose 1%...
... cho phảnứngPCR Nếu phảnứngPCR cho kết (+) tiếp tục lấy 0,5ml dịch pha loãng bậc để trích khn DNA cho phảnứngPCR Lặp lại tương tự phảnứngPCR cho kết âm tính Mật độ tế bào tối thiểu cho phản ... 2.2.17.Kiểm chứng điều kiện tối ưu phảnứng Một phảnứngPCR thường chịu nhiều ảnh hưởng thành phần điều kiện phảnứng Trong khóa luận chúng tơi chọn kiểm chứng số điều kiện tối ưu phảnứngPCR như: ... kỳ, phảnứngPCR tạo khoảng lo6 Sau phản ứng, sản phẩm phảnứngPCR điện di gel agarose nhuộm với ethidium bromide thấy tia UY (bước sóng 312 nm) [10] 1.3.4.2.Các yếu tố ảnh hưởng đến phảnứng PCR...
... hành phảnứng 1.3.2 Quá trình khuyếch đại gen: PhảnứngPCR thực sau cho tất thành phầnphảnứng vào, bao gồm: mẫu tách chiết ADN, Taq ADN polymerase, dNTP thành phần khác (Ví dụ: PhảnứngPCR ... tương ứng với kích thước ADN 6, 7, 8, (Haemophilus influenzae typ b) Một số ứng dụng phảnứngPCR vi sinh vật Dựa nguyên tắc khuyếch đại đoạn gen đặc hiệu, tất vi sinh vật gây bệnh tìm nhờ PCR ... MgCl[sub]2[/sub] 25mM, KCl 50mM 1.2.2 Dàn máy PCR Máy điều nhiệt (Thermal cycler): - Bộ điện di: - Máy chụp gen: 1.3 Các bước tiến hành phảnứngPCR 1.3.1 Tách chiết ADN Đây giai đoạn tách chiết...
... ADN polymerase hoạt động chức phảnứngPCR cụ thể cần nồng độ ion magie khác Nếu nồng độ magie thấp, phảnứng không thành cơng polymerase khơng hoạt hóa thích hợp Nếu nồng độ magie cao, phảnứng ... Đây máy đun nóng làm nguội ống phảnứng nhiệt độ xác cho phảnứng Để ngăn ngừa bay hỗn hợp phản ứng, phần nắp đậy máy PCR đun nóng, trường hợp lượng dung dịch phảnứng ít, người ta cho lớp dầu ... gen đích Tất phảnứngPCR có chứa lượng khơng đáng kể phân tử ADN có đầu chưa thật Tuy nhiên, điều khơng ảnh hưởng đến kết phảnứng Các bước thực chu kỳ PCR Chu kỳ nhiệt phảnứngPCR điển hình...
... nghi m thành cơng, ph m vi báo cáo này, chúng tơi ch đ c p t i k thu t Polymerasechainreaction (PCR) S ñ i c a k thu t PCR ñã ñưa l i m t cu c cách m ng vi c nghiên c u, phân tích gen h gen ... “Xây d ng quy trình xác đ nh vi khu n Verotoxigenic Escherichia coli th t b ng k thu t PCR (Polymerase chain reaction) ” Nghiên c u cho phép xác ñ nh nhanh xác tiêu chu n vi sinh đ i v i vi khu n ... LB Luria Bertani MR Methyl Red m-TSB modified Trypticase Soy Broth NB Nutrient Broth PCRPolymerasechainreaction (Ph n ng chu i trùng h p) TTP Thrombotic thrombocytopenic purpure (Ban xu t...
... cắt enzyme giới hạn Hindlll V- Phảnứng RT -PCR (PCR ngợc) * Nguyên lý: Phảnứng RT -PCR thực chất phảnứng nhân đoạn giới hạn khuôn ARN theo nguyên lý phảnứng PCR, bao gồm hai giai đoạn: Giai ... DNA polymerase từ Thermus aquaticus chí thay cho Taq DNA polymerasephảnứngPCR (McClean 1997) • Dung dịch đệm phảnứng (có chứa Mangesium) PhảnứngPCR cần phải tiến hành dung dịch đệm phảnứng ... đầu, phảnứngPCR nh giới thiệu đợc thực theo bớc thay đổi nhiệt độ cho phù hợp chu kỳ Toàn phảnứng nhân đoạn ADN từ khuôn ARN qua hai giai đoạn nói đợc gọi phảnứng RT -PCR hay phảnứngPCR ngợc...
... 2 Phảnứng PCR: Thành phầnphản ứng: - DNA mẫu - Mồi xuôi mồi ngược - dNTP (gồm loại: dATP, dGTP, dTTP, dCTP) - MgCl2 - Enzyme polymerase (Taq polymerase, Pfu…) - Dung ... PCR - Ngoại nhiễm: Xử lí: Khử trùng khu vực thao tác Việc thiết lập phảnứngPCRphân tích sản phẩm tiến hành khu vực khác - Nhân không đặc hiệu: - Các sai sót Taq polymerase Các dạng khác PCR: ... polymerase Các dạng khác PCR: - RT PCR (reverse transcriptase PCR) : RNA cDNA DNA - RT – PCR (Realtime PCR – PCR định lượng): xác định hàm lượng sản phẩm PCR tạo thời điểm Nguyên tắc: xác...
... KỸ THUẬT PCR (Polymerase Chain Reaction) I MỞ ĐẦU: Kỹ thuật PCR (viết tắt từ chữ PolymeraseChain Reaction) , hay gọi phảnứng tổng hợp dây chuyền nhờ polymerasephảnứng chuỗi tổng hợp ... khác PCR tổ (Nested -PCR) , ADN nhánh (Branch-DNA), PCR đa thành phần (multiplex -PCR) , PCR ngược (Reverse -PCR) , RAPD -PCR vv… tất dựa nguyên tắc phảnứngPCRPCR “tổ”: Để đạt mức độ nhạy cảm cao PCR, ... mạc miệng CÂU HỎI Hãy giải thích chế phảnứng PCR? Tại thành phần đoạn mồi không chứa nhiều cặp GC? Nêu ứng dụng phảnứng chuỗi PCR? Tóm tắt kỹ thuật cải tiến PCR? Tài liệu tham khảo Hồ Huỳnh Thùy...
... Taq polymerase Làm để phân lập gen Các bước PCR Nguyên tắc máy PCRphảnứngPCR I Giới thiệu Kary Mullis 1985 Nobel 1993 Giới thiệu PCR: phảnứng chuỗi trùng hợp Là ... HƯỞNG ĐẾN PHẢNỨNGPCR DNA mẫu: (100ng-1µg) Enzyme Mồi nhiệt độ gắn mồi (nhiệt độ lai) dNTP: 20-200µM/ lọai nu Nồng độ Mg++ Số lượng chu kỳ phảnứng Thiết bị dụng cụ cho phảnứng Một ... diện tế bào PhảnứngPCR cho phép khuyếch đại đoạn DNA nằm mồi chuyên biệt, nhờ men DNA polymerase Ngun tắc • Dựa hoạt động emzyme • Sự diện mồi chuyên biệt • Khả nối dài mồi taq polymerase •...