Đang tải... (xem toàn văn)
Ứng dụng kỹ thuật ELISA xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa giúp chẩn đoán sớm mang thai trên bò không động dục hoặc phối nhiều lần không đậu được điều trị bằng kích thích tố tại Công ty cổ
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHBỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌCKHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA XÉT NGHIỆM HÀM LƯỢNG PROGESTERONE SỮA GIÚP CHẨN ĐOÁN SỚM MANG THAI TRÊN BÒ KHÔNG ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHÔNG ĐẬU ĐƯỢC ĐIỀU TRỊ BẰNG KÍCH THÍCH TỐ TẠI CÔNG TY CỔ PHẦN BÒ SỮA ĐỒNG NAINgành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌCNiên khóa: 2003 – 2007Sinh viên thực hiện: TRẦN CAO THÁIThành phố Hồ Chí MinhTháng 9/2007 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINHBỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC***********************KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG KỸ THUẬT ELISA XÉT NGHIỆM HÀM LƯỢNG PROGESTERONE SỮA GIÚP CHẨN ĐOÁN SỚM MANG THAI TRÊN BÒ KHÔNG ĐỘNG DỤC HOẶC PHỐI NHIỀU LẦN KHÔNG ĐẬU ĐƯỢC ĐIỀU TRỊ BẰNG KÍCH THÍCH TỐ TẠI CÔNG TY CỔ PHẦN BÒ SỮA ĐỒNG NAIGiáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiện:TS. DƯƠNG NGUYÊN KHANG TRẦN CAO THÁIBSTY. LÊ THỊ THU HÀThành phố Hồ Chí MinhTháng 9/2007 LỜI CẢM TẠTôi xin chân thành cảm tạ: Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh, Ban chủ nhiệm Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học, cùng tất cả quý thầy cô đã truyền đạt kiến thức cho tôi trong suốt quá trình học tại trường. TS.Dương Nguyên Khang đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi hoàn thành khoá luận này. Bác sỹ thú y Lê Thị Thu Hà đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực tập. Ban giám đốc Công ty cổ phần bò sữa Đồng Nai đã tạo điều kiện thuận lợi và giúp đỡ tôi trong suốt quá trình thực tập. Các bạn bè thân yêu của lớp công nghệ sinh học khóa 28 đã chia xẻ cùng tôi những vui buồn trong thời gian học cũng như hết lòng hỗ trợ, giúp đỡ tôi trong thời gian thực tập. Xin dâng tặng thành quả học tập của con lên ba mẹ, các anh chị luôn động viên và hy sinh nhiều nhất để con có được ngày hôm nay. TPHCM ngày 05 tháng 09 năm 2007 Trần Cao Thái. TĨM TẮTĐề tài: “Ứng dụng kỹ thuật ELISA xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa giúp chẩn đốn sớm mang thai trên bò khơng động dục hoặc phối nhiều lần khơng đậu được điều trị bằng kích thích tố tại Cơng ty cổ phần bò sữa Đồng Nai” được tiến hành tại cơng ty cổ phần bò sữa Đồng Nai. Thời gian từ tháng 3 đến tháng 7 năm 2007.Số liệu ghi nhận trên 40 sữa sinh sản bình thường, bò sau khi sinh 90 ngày trở lên mà khơng có biểu hiện động dục hoặc phối nhiều lần khơng đậu. 30 bò sữa sau khi sinh khơng có biểu hiện động dục hoặc phối nhiều lần khơng đậu được điều trị PGF2α đối với bò tồn hồng thể, tiêm Gonestrone đối với bò u nang nỗn và tiêm huyết thanh ngựa chửa đối với bò teo buồng trứng. Tiến hành lấy mẫu sữa xét nghiệm hàm lượng progesterone bằng kỹ thuật ELISA vào các ngày 0, 7, 14, 21 và 24 sau khi phối. Kết quả xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa chẩn đốn tình trạng mang thai sớm của bò và có kết quả như sau:+ Hàm lượng progesterone trong sữa trung bình theo nhóm cao của bò sinh sản bình thường dao động từ 0,52 đến 2,86 ng/ml. Đối với nhóm bò có hàm lượng progesterone trong sữa thấp, hàm lượng progesterone trong sữa trung bình dao động từ 0,25 đến 0,60 ng/ml. Tỷ lệ đậu thai là 40%.+ Hàm lượng progesterone trong sữa trung bình theo nhóm cao của bò tồn hồng thể dao động từ 0,74 đến 2,77 ng/ml. Đối với nhóm có hàm lượng progesterone trong sữa thấp, hàm lượng progesterone trong sữa trung bình dao động từ 0,11 đến 0,95 ng/ml. Tỷ lệ đậu thai là 30%.+ Hàm lượng progestereone trong sữa trung bình theo nhóm cao của bò u nang nỗn dao động từ 0,59 đến 2,48 ng/ml. Đối với nhóm có hàm lượng progesterone trong sữa thấp, có hàm lượng progesterone trong sữa trung bình dao động từ 0,04 đến 0,29 ng/ml. Tỷ lệ đậu thai là 40%. + Hàm lượng progesterone trong sữa trung bình theo nhóm cao của bò teo buồng trứng dao động từ 0,24 đến 2,22 ng/ml. Đối với nhóm có hàm lượng progesterone trong sữa thấp, có hàm lượng progesterone trong sữa trung bình dao động từ 0,06 đến 0,30 ng/ml. Tỷ lệ đậu thai là 30% MỤC LỤCTRANGLời cảm tạ iTóm tắt .iiMục lục ivDanh sách các hình .viiDanh sách các biểu đồ…………………………………………………………….viiDanh sách các bảng ixDanh sách các chữ viết tắt xPhần 1 ĐẶT VẤN ĐỀ . 1 1.1 Đặt vấn đề 1 1.2 Mục tiêu 2 1.3 Yêu cầu . 2 Phần 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1 Chu kỳ sinh sản . 3 2.1.1 Sự thành thục tính dục 3 2.1.2 Chu kỳ động dục của bò 3 2.1.3 Các nhân tố ảnh hưởng đến chu kỳ động dục 5 2.2 Quá trình mang thai và sinh đẻ . 5 2.3 Các hormone điều hòa quá trình sinh sản . 7 2.3.1 Các hormone sinh sản 7 2.3.2 Chức năng vùng dưới đồi – tuyến yên – buồng trứng trong điều tiết chu kỳ động dục 9 2.4 Một số bệnh sinh sản gây chậm sinh ở bò sữa . 10 2.4.1 Buồng trứng không hoạt động 10 2.4.2 U nang buồng trứng 11 2.4.3 Viêm buồng trứng . 13 2.4.4 Viêm tử cung . 13 2.5 Động thái progesterone trong chu kỳ động dục bình thường, mang thai và một số trường hợp rối loạn sinh sản . 14 2.5.1 Động thái progesterone trong chu kỳ động dục bình thường . 14 2.5.2 Động thái progesterone lúc mang thai . 15 2.5.3 Động thái progesterone u nang nỗn và tồn hồng thể ở bò sữa . 16 2.6 Các chỉ định và ứng dụng của xét nghiệm progesterone trong sữa . 16 2.6.1 Xác nhận động dục . 16 2.6.2 Chẩn đốn bò mang thai và khơng mang thai . 17 2.6.3 Bò có các vấn đề về sinh sản . 17 2.6.4 Các chương trình cấy truyền phơi 18 2.7 Ngun tắc xét nghiệm hàm lượng progesterone bằng kỹ thuật ELISA 18 2.8 Các cơng trình nghiên cứu liên quan 19 2.8.1 Các nghiên cứu trong nước . 19 2.8.2 Các nghiên cứu nước ngồi . 19 2.9 Vài nét về điểm thực tập 20 2.9.1 Sơ lược về Cơng ty cổ phần bò sữa Đồng Nai . 20 2.9.2 Tổ chức sản xuất . 21 Phần 3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP 26 3.1 Thời gian, địa điểm và đối tượng khảo sát . 26 3.2 Nội dung nghiên cứu 26 3.3 Vật liệu hóa chất . 26 3.4 Phương pháp tiến hành . 27 3.4.1 Bố trí điều trị bò khơng lên giống hoặc phối nhiều lần khơng đậu . 27 3.4.2 Bố trí số mẫu sữa khảo sát . 28 3.5 Kỹ thuật ELISA . 30 3.6 Tính tốn kết quả và hiệu quả kinh tế 32 3.7 Phương pháp xử lý số liệu . 32 Phần 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 33 4.1 Hàm lượng progesterone sữa trung bình ở bò sinh sản bình thường, bò tồn hồng thể, u nang nỗn hoặc teo buồng trứng 33 4.1.1 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò sinh sản bình thường 34 4.1.2 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò tồn hồng thể . 35 4.1.3 Hàm lượng progesterone sữa ở bò u nang nỗn theo nhóm . 37 4.1.4 Hàm lượng progesterone sữa ở bò teo buồng trứng theo nhóm 38 4.2 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm máu ở bò sinh sản bình thường, bò chẩn đốn tồn hồng thể, u nang nỗn hoặc teo buồng trứng 39 4.2.1 Hàm lượng progesterone sữa ở bò sinh sản bình thường theo nhóm máu 39 4.2.2 Hàm lượng progesterone ở bò tồn hồng thể theo nhóm máu . 41 4.2.3 Hàm lượng progesterone ở bò u nang nỗn theo nhóm máu 43 4.2.4 Hàm lượng progesterone ở bò teo buồng trứng theo nhóm máu . 44 4.3 Hàm lượng progesterone theo lứa đẻ ở bò sinh sản bình thường, bò chẩn đốn tồn hồng thể, u nang nỗn và teo buồng trứng . 46 4.3.1 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò lứa 1 47 4.3.2 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò lứa 2 48 4.3.3 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò lứa 3 49 4.3.4 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò lứa 4 50 Phần 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 52 5.1 Kết luận 52 5.2 Đề nghị . 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC . 55 DANH SÁCH CÁC HÌNHHÌNH TRANGSơ đồ 2.1 Mối quan hệ giữa các nội tiết tố trong q trình sinh đẻ .6Hình 2.1 Hình thái u nang nỗn trên buồng trứng .11Hình 2.2 Diễn biến hình thành u nang nỗn .12Hình 2.3 Hình thái u hồng thể ở bò .12Hình 2.4 Sơ đồ phản ứng ELISA .18Hình 2.4 Sơ đồ phản ứng ELISA .18Biểu đồ 2.1 Động thái progesterone trong chu kỳ động dục bình thường ở bò 14Biểu đồ 2.2 Động thái progesterone giúp chẩn đốn sớm có thai 15Biểu đồ 2.3 Động thái progesterone u nang nỗn và u hồng thể ở bò sữa 16 DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒBiểu đồ 4.1 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò sinh sản bình thường 34Biểu đồ 4.2 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò tồn hồng thể .35Biểu đồ 4.3 Hàm lượng progesterone sữa ở bò u nang nỗn theo nhóm 37Biểu đồ 4.4 Hàm lượng progesterone ở bò teo buồng trứng theo nhóm máu .38Biểu đồ 4.5 Hàm lượng progesterone sữa ở bò sinh sản bình thường theo nhóm máu .40Biểu đồ 4.6 Hàm lượng progesterone ở bò tồn hồng thể theo nhóm máu 42Biểu đồ 4.7 Hàm lượng progesterone ở bò u nang nỗn theo nhóm máu 43Biểu đồ 4.8 Hàm lượng progesterone theo nhóm ở bò teo buồng trứng 45Biểu đồ 4.9 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò lứa 1 47Biểu đồ 4.10 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò lứa 2 48Biểu đồ 4.11 Hàm lượng progesterone theo nhóm ở bò lứa 3 49Biểu đồ 4.12 Hàm lượng progesterone sữa theo nhóm ở bò lứa 4 50 DANH SÁCH CÁC BẢNGB ẢNG TRANGBảng 2.1 Phân biệt u nang nỗn và u hồng thể .13Bảng 2.2 Cơ cấu đàn bò của Cơng ty cổ phần bò sữa Đồng Nai 21Bảng 2.3 Định mức các loại thực liệu trong khẩu phần ăn cho các nhóm bò 24Bảng 3.1 Bố trí điều trị bò chậm động dục hoặc phối nhiều lần khơng đậu 28Bảng 3.2 Bố trí chung 28Bảng 3.3 Số mẫu sữa khảo sát trên bò không lên giống hoặc phối nhiều lần không đậu 28Bảng 3.4 Số mẫu sữa khảo sát theo lứa đẻ ở bò sinh sản bình thường 29Bảng 4.1 Hàm lượng progesterone sữa ở bò sinh sản bình thường và bò được chẩn đốn chậm động dục do tổn hồng thể, u nang nỗn hoặc teo bng trứng 33Bảng 4.2 Hàm lượng progesterone sữa ở bò sinh sản bình thường theo nhóm máu 39Bảng 4.3 Hàm lượng progesterone ở bò tồn hồng thể theo nhóm máu 41Bảng 4.4 Hàm lượng progesterone sữa ở bò u nang nỗn theo nhóm máu .43Bảng 4.5 Bảng 4.5 Hàm lượng progesterone sữa ở bỏ teo buồng trứng theo nhóm máu 45 Bảng 4.6 Hàm lượng progesterone sữa theo lứa đẻ ở bò sinh sản bình thường, bò chẩn đốn tồn hồng thể, u nang nỗn hoặc teo buồng trứng 46 [...]... rất ít đề tài nghiên cứu hàm lượng progesterone ứng dụng trong cơng tác quản lý sinh sản của đàn bò sữa, hiện nay đã được thực hiện với phương pháp RIA (Chung Anh Dũng, 2002) và phương pháp ELISA (Phan Văn Kiểm, 2005) Để tiếp tục chứng minh hiệu quả của việc ứng dụng kỹ thuật ELISA trong việc xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa để chẩn đốn sớm mang thai trong chăn ni bò sữa theo hướng cơng nghiêp,... bò sữa theo hướng cơng nghiêp, chúng tơi thực hiện đề tài Ứng dụng kỹ thuật ELISA xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa giúp chẩn đốn sớm mang thai trên bò khơng 2 động dục hoặc phối nhiều lần khơng đậu được điều trị bằng kích thích tố tại Cơng ty cổ phần bò sữa Đồng Nai” 1.2Mục tiêu Khảo sát hàm lượng progesterone bằng kỹ thuật ELISA trên sữa bò khơng động dục hoặc phối nhiều lần khơng đậu đã được... vậy, việc sử dụng các test chẩn đốn progesterone một 17 cách có chọn lọc ở những bò cho kết quả khám thể vàng khơng rõ ràng sẽ cải thiện hiệu quả cấy truyền phơi rất nhiều do tình trạng sinh sản của bò chuẩn bị cho cấy truyền phơi được xác định đúng 11.4Ngun tắc xét nghiệm hàm lượng progesterone bằng kỹ thuật ELISA Ngun lý cơ bản của kỹ thuật EIA là phản ứng ELISA Hình 2.4 Sơ đồ phản ứng ELISA Phương... trứng kém hoạt động; 9,52% bò động dục nhưng khơng rụng trứng; 19,04% viêm nội mạc tử cung; 4,67% do tử cung tích mủ và 6,34% u nang buồng trứng Chung Anh Dũng (2002) đã nghiên cứu việc ứng dụng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ (RIA – Radio Immuno Assay) để xác định hàm lượng progesterone trong sữa nhằm nâng cao hiệu quả gieo tinh nhân tạo cho bò lai hướng sữa Phan Văn Kiểm và ctv (2006) đã xác định hàm lượng. .. sữa Phan Văn Kiểm và ctv (2006) đã xác định hàm lượng progesterone trong sữa ở bò lai hướng sữa bằng kỹ thuật miễn dịch enzyme (ELISA) nhằm xác lập diễn biến của progesterone trong chu kỳ động dục, chẩn đốn mang thai và các ngun nhân gây chậm động dục ở bò cái 11.5.2Các nghiên cứu nước ngồi Dùng kỹ thuật RIA để đo hàm lượng progesterone trong máu, sữa hoặc lơng vào ngày thứ 21 – 24 sau khi gieo tinh... (1992) đã sử dụng kỹ thuật RIA để xác lập động thái progesterone ở 4 bò sữa có khối u trên buồng trứng, từ 19 đó tác giả đã có thể phân biệt dễ dàng hơn giữa hai trường hợp u nang nỗn và u hồng thể Nghiên cứu của Roeloft và ctv (2005) về mối tương quan giữa hàm lượng progesterone trong sữa và trong huyết tương vào thời điểm rụng trứng ở bò sữa cho thấy có sự dao động lớn trong thời gianprogesterone... ứng ELISA Phương pháp kiểm tra hàm lượng progesterone dựa trên xét nghiệm miễn dịch enzyme pha lỗng nhờ vào phương pháp cạnh tranh bắt buộc Mẫu chứa một lượng progesterone khơng biết sẽ được cạnh tranh với một lượng progesterone đã được gắn enzyme có độ gắn kết cao với một số lượng kháng thể nhất định được gắn ở mặt trong của đĩa Sau khi bỏ đi lượng kháng ngun tự do và lượng kháng ngun được đánh dấu... định thời điểm động dục ở bò sữa bằng việc định lượng progesterone trong sữa bò hay nghiên cứu về động thái của progesterone trong chu kỳ động dục bình thường và bất bình thường được thực hiện bởi rất nhiều tác giả (Thatcher và ctv, 1986; Tan và ctv, 1986; Gombe và ctv, 1986…) Sử dụng kỹ thuật EIA và RIA để định lượng progesterone nhằm giám sát chức năng sinh sản của bò sữa là các nghiên cứu của Kalis... thái progesterone u nang nỗn và u hồng thể ở bò sữa (nguồn : Blowey, 1992) Các chỉ định và ứng dụng của xét nghiệm progesterone trong sữa Xác nhận động dục Bò cái thường có dấu hiệu động dục khơng rõ ràng dẫn đến việc quyết định phối giống sai Vào thời điểm phối tinh có tới 15 – 20% bò sữa khơng động dục Ở một số trang trại, tỷ lệ phát hiện động dục sai có thể cao tới 50% hoặc hơn (Shearer, 2006) Progesterone. .. gianprogesterone giảm xuống đến rụng trứng, làm cho việc theo dõi hàm lượng progesterone khơng phù hợp để dự đốn thời điểm rụng trứng Tuy nhiên, theo dõi sự giảm của progesterone có tác dụng làm tăng độ nhạy cảm của các dự đốn khác về thời điểm rụng trứng 11.6Vài nét về điểm thực tập 11.6.1Sơ lược về Cơng ty cổ phần bò sữa Đồng Nai 3.1Vị trí địa lý Cơng ty cổ phần bò sữa Đồng Nai nằm trên địa bàn xã Tam . trứng. Tiến hành lấy mẫu sữa xét nghiệm hàm lượng progesterone bằng kỹ thuật ELISA vào các ngày 0, 7, 14, 21 và 24 sau khi phối. Kết quả xét nghiệm hàm lượng. phương pháp ELISA (Phan Văn Kiểm, 2005). Để tiếp tục chứng minh hiệu quả của việc ứng dụng kỹ thuật ELISA trong việc xét nghiệm hàm lượng progesterone sữa để