Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

55 631 0
Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ------- LƢU THỊ CƢ PHÂN LẬP THIẾT KẾ VECTOR ỨC CHẾ BIỂU HIỆN GEN HÓA ENZYME INVERTASE (-FRUCTOFURANOSIDASE) NHẰM TĂNG TRỮ LƢỢNG SUCROSE CÂY MÍA LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Thái Nguyên – 2009 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ------- LƢU THỊ CƢ PHÂN LẬP THIẾT KẾ VECTOR ỨC CHẾ BIỂU HIỆN GEN HÓA ENZYME INVERTASE (-FRUCTOFURANOSIDASE) NHẰM TĂNG TRỮ LƢỢNG SUCROSE CÂY MÍA LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Chuyên ngành: Di truyền học số: 60.42.70 NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. LÊ QUỲNH LIÊN Thái Nguyên – 2009 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực chƣa từng có ai công bố trong bất kỳ một công trình nào khác. Tác giả Lưu Thị Cư Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên tôi xin đƣợc bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Lê Quỳnh Liên, Phòng Công nghệ Tế bào Thực vật, Viện Công nghệ Sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, là ngƣời thầy đã tận tình hƣớng dẫn, chỉ bảo, dìu dắt giúp đỡ tôi trong suốt thời gian tôi thực hiện hoàn thành luận văn này. Tôi xin đƣợc bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới GS.TS. Lê Trần Bình, TS. Chu Hoàng Hà, KS. Đỗ Tiến Phát Phòng Công nghệ Tế bào Thực vật, Viện Công nghệ Sinh học, là những ngƣời đã tận tình chỉ bảo, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực tập hoàn thành luận văn. Trong thời gian thực tập nghiên cứu tôi cũng đã nhận đƣợc sự hỗ trợ nhiệt tình những ý kiến đóng góp bổ ích của các cô chú, các anh chị, các bạn trong Phòng Công nghệ Tế bào Thực vật, Viện Công nghệ Sinh học. Tôi xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ quý báu đó. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô giáo trong khoa Sinh-KTNN khoa Sau đại học, trƣờng Đại học Sƣ phạm Thái Nguyên đã hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức cho tôi trong suốt quá trình học tập nghiên cứu. Tôi cũng vô cùng cảm ơn những tình cảm tốt đẹp của những ngƣời thân trong gia đình, đồng nghiệp bạn bè đã luôn dành cho tôi, động viên tạo mọi điều kiện tốt nhất cho tôi trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu. Thái Nguyên, ngày 25 tháng 09 năm 2009 Học viên Lưu Thị Cư Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU 1 Chƣơng 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 3 1.1. VAI TRÒ TẦM QUAN TRỌNG CỦA CÂY MÍA 3 1.1.1. Sơ lƣợc về cây mía . 3 1.1.2. Tình hình sản xuất mía Việt Nam 4 1.2. SINH TỔNG HỢP SUCROSE . 5 1.3. VẬN CHUYỂN SUCROSE TRONG TẾ BÀO 8 1.5. ỨC CHẾ BIỂU HIỆN GEN BẰNG PHƢƠNG PHÁP RNAi (RNA INTERFERENCE) 10 1.5.1. Nguồn gốc RNAi 10 1.5.2. Cơ chế gây bất hoạt gen 10 1.6. KỸ THUẬT GATEWAY ® . 12 1.7. NGHIÊN CỨU VỀ TÁI SINH CHUYỂN GEN CÂY MÍA . 14 Chƣơng 2. NGUYÊN LIỆU PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 16 2.1. NGUYÊN LIỆU . 16 2.1.1. Nguyên liệu thực vật 16 2.1.2. Các chủng plasmid enzyme . 16 2.1.3. Hóa chất khác 16 2.1.3. Các thiết bị máy móc . 17 2.2. PHƢƠNG PHÁP . 17 2.2.1. Thiết kế mồi . 17 2.2.2. Tách RNA tổng số 18 2.2.3. RT-PCR 18 2.2.4. Tách dòng xác định trình tự gen . 19 2.2.5. Thiết kế vector tái tổ hợp INV-RNAi . 20 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn 2.2.6. Tái sinh mía thông qua mô sẹo 21 2.2.7. Thử nghiệm chuyển gen gus-intron vào cây mía . 22 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU: 2 Chƣơng 3. KẾT QUẢ THẢO LUẬN . 24 3.1. THIẾT KẾ MỒI . 24 3.2. TÁCH RNA TỔNG SỐ 25 3.3. NHÂN DÒNG ĐOẠN GEN HÓA ENZYME INVERTASE 27 3.4. TÁCH DÒNG GEN XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ GEN . 28 3.4.1. Tạo plasmid tái tổ hợp INV-pENTR 28 3.4.2. Biến nạp plasmid tái tổ hợp INV_pENTR vào tế bào khả biến E.coli TOP 10 28 3.4.3. Chọn lọc plasmide tái tổ hợp INV_pENTR bằng PCR . 29 3.4.4. Kết quả xác định trình tự nucleotit 31 3.5. THIẾT KẾ VECTOR TÁI TỔ HỢP INV-RNAi . 31 3.5.1. Tạo vector tái tổ hợp INV_RNAi bằng kỹ thuật Gateway . 31 3.5.2. Biến nạp vector INV_RNAi vào tế bào khả biến E.coli . 32 3.6. BIẾN NẠP VECTOR CHUYỂN GEN INV_RNAi VÀO CHỦNG VI KHUẨN A.TUMEFACIENS CV58C1. 34 3.7. TÁI SINH BƢỚC ĐẦU BIỂU HIỆN GEN GUS MÍA . 35 3.7.1. Quy trình tái sinh mía thông qua mô sẹo . 35 3.7.3. Chọn lọc mô sẹo tái sinh cây chuyển gen . 37 KẾT LUẬN ĐỀ NGHỊ . 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 42 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT AS Acetosyringone A.tumefaciens Agrobacterium tumefaciens BAP 6-Benzyl Amino Purine (Benzyladeninpurin) bp Cặp base cDNA Complementary DNA = DNA bổ sung đƣợc tổng hợp bằng khuôn mRNA cs Cộng sự DEPC Diethyl pyrocarbonat DNA Deoxyribonucleic Acid dNTP deoxynucleosit triphotphat (deoxynucleoside triphosphate) EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid EtBr đEtBrEthiium bromide E.coli Escherichia coli gus β-glucuronidase IBA Indole-3-Butyric Acid kb kilo base LB Luria and Bertani MS Môi trƣờng nuôi cấy theo Murashige Skoog NAA Naphthalene Acetic Acid OD Giá trị mật độ quang (optical density) PCR Polymerase Chaine Reaction = Phản ứng chuỗi Polymerase RNA Ribonucleic Acid RNase Ribonuclease RT-PCR Reverse Transcriptase-PCR SDS Sodium dodecylsulfat TAE Tris-acetate-EDTA Taq Thermus aquaticus DNA (polymerase) 2,4D 2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 2.1. Các plasmid sử dụng trong thí nghiệm . 16 Bảng 2.2. Chu kỳ nhiệt cho phản ứng RT-PCR một bƣớc . 18 Bảng 2.3. Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR 19 Bảng 2.4. Các môi trƣờng tái sinh cây mía . 21 Bảng 3.1. Trình tự các thông số cần thiết của cặp mồi 3’INV 5’INV 25 Bảng 3.2. số các trình tự đoạn gen Invertase mía trên ngân hàng gen NCBI . 25 Bảng 3.3. Khả năng tạo mô sẹo tái sinh giống mía ROC10 in vitro trên các môi trƣờng thử nghiệm M1 - M4. 36 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình Trang Hình 1.1: Chu trình sinh tổng hợp sucrose với sự tham gia của các enzyme chính . 6 Hình 1.2. Cơ chế gây bất hoạt gen RNAi 11 Hình 1.3. Sơ đồ mô tả kỹ thuật Gateway 13 Hình 3.1. Kết quả điện di RNA tổng số tách từ lá bẹ thân non của 2 giống mía ROC1 ROC10 trên gel agarose 1% . 26 Hình 3.2. Kết quả điện di sản phẩm RT-PCR trên gel agarose 0,8% 27 Hình 3.3. Kết quả điện di sản phẩm PCR plasmid với cặp mồi M13 (For/Rev) nhằm kiểm tra sự có mặt của đoạn Invertase trong vector pENTR/D . 30 Hình 3.4. Kết quả so sánh trình tự đoạn gen Invertase phân lập đƣợc với trình tự Invertase trong ngân hàng gen số AY302083 31 Hình 3.5. Mô hình cấu trúc chuyển gen INV_RNAi . 32 Hình 3.6. Kết quả điện di sản phẩm cắt plasmid INV_RNAi tổ hợp với HindIII XbaI . 34 Hình 3.7. Điện di sản phẩm PCR plasmid INV-RNAi trong A.tumefaciens với cặp mồi đặc hiệu 5’INV 3’INV . 35 Hình 3.8. Quy trình tái sinh mía ROC10 in vitro từ mô sẹo 37 Hình 3.9. Biến nạp gen gus-intron vào cây mía ROC10 in vitro thông qua trung gian A.tumefaciens . 39 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn 1 MỞ ĐẦU Đƣờng là một nhu cầu cần thiết trong đời sống con ngƣời. Theo thống kê, nhu cầu tiêu thụ đƣờng trên thế giới trung bình tính theo đầu ngƣời là 35 kg/1 ngƣời/1 năm. Tại Việt Nam, năm 1994 là 8 kg/1 ngƣời/1 năm, hiện nay là 15 kg/1 ngƣời/1 năm dự kiến nhu cầu về đƣờng còn tiếp tục tăng nữa. Tại các nƣớc nhiệt đới cận nhiệt đới nhƣ Việt Nam, 75% sản lƣợng đƣờng đƣợc sản xuất từ cây mía. Mía là một trong số ít loài thực vật tích trữ chủ yếu đƣờng sucrose (α-D-glucopyranosyl-1, 2-D-fructofuranose), nguồn nguyên liệu ban đầu để sản xuất đƣờng. Do đó, Việt Nam mía trở thành một cây công nghiệp trọng yếu cây xóa đói giảm nghèo của chính phủ. Tuy nhiên, các giống mía của Việt Nam có năng suất đƣờng chỉ đạt mức trung bình của thế giới. Việc nhập các giống mía cao sản của thế giới kết hợp với phƣơng pháp lai tạo truyền thống chƣa thực sự có hiệu quả trong việc tạo giống mía có hàm lƣợng đƣờng cao lại phù hợp với điều kiện thổ nhƣỡng khí hậu của nƣớc ta. Chọn tạo giống mía có hàm lƣợng đƣờng cao bằng công nghệ sinh học có tiềm năng giảm giá thành đƣờng không cần tăng diện tích trồng mía thúc đẩy sự phát triển nền công nghiệp mía đƣờng tại Việt Nam. Sinh tổng hợp sucrose là một quá trình phức hợp, trong đó enzyme Invertase đƣợc xem nhƣ là một chiếc chìa khóa điều chỉnh sự tích lũy lƣợng sucrose trong cây mía. Nó có vai trò phân hủy sucrose trong tế bào. Vì vậy, muốn tăng trữ lƣợng sucrose trong cây mía thì phải ức chế đƣợc sự biểu hiện của gen hóa Invertase. Cơ chế gây bất hoạt gen RNAi (RNA-interference) hiện nay đã trở thành một biện pháp công nghệ hữu hiệu có thể ức chế hoàn toàn biểu hiện của gen động vật, thực vật cả vi sinh vật [31]. thực vật, [...]... MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU: Ức chế biểu hiện của Invertase dạng hòa tan nhằm tăng trữ lƣợng sucrose cây mía NỘI DUNG NGHIÊN CỨU: 1 Phân lập đoạn gen hóa cho enzyme Invertase cây mía in vitro ROC1 2 Thiết kế đƣợc vector ức chế biểu hiện gen hóa Invertase (βfructofuranosidase) cây mía 3 Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây mía phục vụ cho mục đích chuyển gen tiếp theo Số hóa bởi Trung tâm Học liệu... đƣợc thực hiện bằng cách chuyển gen có cấu trúc biểu hiện sự phiên cao RNA sense, anti-sense hoặc RNA kẹp tóc bổ sung chính nó chứa trình tự tƣơng đồng với gen đích Với mục tiêu nghiên cứu chọn tạo giống mía có hàm lƣợng đƣờng cao, chúng tôi chọn đề tài Phân lập thiết kế vector ức chế biểu hiện gen hóa enzyme Invertase (β-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose cây mía MỤC TIÊU... từ khóa Invertase Sugarcane” để tìm kiếm trong ngân hàng dữ liệu gen NCBI các trình tự gen Invertase đã đƣợc công bố (www.ncbi.nlm.nih.gov) Kết quả đã thu đƣợc sáu trình tự của gen hóa cho enzyme Invertase cây mía, trong đó có 5 trình tự hóa cho enzyme Invertase hòa tan (soluble acid Invertase) với số AF062734, AF 062735, AF083855, AF083856, AY302083; một trình tự hóa cho enzyme Invertase. .. chứng tỏ rằng Invertase có liên quan chặt chẽ tới hàm lƣợng vận chuyển của sucrose thực vật Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn 10 Nhƣ vậy, Invertase đƣợc xem nhƣ là một chiếc chìa khoá điều chỉnh sự tích lũy sucrose dự trữ trong thực vật Do đó, ức chế biểu hiện của Invertase có thể tăng tích lũy sucrose trong cây mía 1.5 ỨC CHẾ BIỂU HIỆN GEN BẰNG PHƢƠNG... Tách dòng xác định trình tự gen Chọn lọc mô sẹo Tái sinh cây Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Thiết kế vector tái tổ hợp INV_RNAi http://www.Lrc-tnu.edu.vn 24 Chƣơng 3 KẾT QUẢ THẢO LUẬN 3.1 THIẾT KẾ MỒI Để nhân đƣợc đoạn gen hóa cho enzyme Invertase bằng kỹ thuật RT-PCR điều quan trọng nhất là phải có đƣợc cặp mồi đặc hiệu cho trình tự của đoạn gen hóa cho enzyme Invertase. .. cơ quan này [6] Bất hoạt Invertase làm tăng tỉ lệ tích trữ sucrose trong cây cà chua chuyển gen quả, đồng thời cũng làm thay đổi tỉ lệ đƣờng đơn (hexose) trong các dòng cây này [18, 24] Lá của các dòng khoai tây biểu hiện gen hóa Invertase phân lập từ nấm men tích trữ chủ yếu glucose fructose hơn là sucrose Hơn nữa, những dòng này hình thành ít củ nhỏ hơn các dòng đối chứng, nhƣng chứa... thời tái tạo các cơ chất khác 1.4 ENZYME INVERTASE (β-FRUCTOFURANOSIDASE) Invertase (β-fructofuranosidase) đƣợc hóa bởi 5 - 10 đồng phân tùy thuộc từng loài thực vật khác nhau Cây mô hình Arabidopsis thaliana có 5 đồng phân Invertase, trong khi cà chua hiện nay đã phân lập đƣợc 8 đồng phân Hiện nay, trên ngân hàng gen đã có trình tự EST (Expressed Sequenced Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học... http://www.Lrc-tnu.edu.vn 9 Tags) của enzyme Invertase phân lập từ một số giống mía [35] Invertase trung tính (có trong tế bào chất) đã đƣợc tinh sạch từ thân mía trƣởng thành Tuy nhiên trình tự gen hóa cho dạng enzyme này vẫn chƣa đƣợc công bố trên GenBank Invertase có mặt hầu hết các mô thực vật tích trữ đƣờng tồn tại nhiều dạng khác nhau: dạng hoà tan (soluble acid Invertase) có nhiều trong không... tổng hợp vận chuyển sucrose [16] Cây cà chua chuyển gen tăng cƣờng biểu hiện SPS thì lƣợng sucrose tăng còn lƣợng tinh bột giảm trong quá trình quang hợp [33] Tƣơng tự, cây bông mang gen SPS của rau bi-na (spinacia oleracea) cũng có tốc độ tổng hợp sucrose cao hơn so với đối chứng [13] Ngƣợc lại, khi làm bất hoạt SPS, các dòng cây khoai tây chuyển gen sẽ giảm trữ lƣợng sucrose [10] Gen hóa cho... thể sinh vật gây nên ức chế sự biểu hiện gen của một loại trình tự đặc hiệu Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn 11 Hình 1.2 Cơ chế gây bất hoạt gen RNAi Hình 1.2 cho thấy, Cơ chế RNAi đƣợc bắt đầu bằng việc phân cắt phân tử RNA chuỗi kép (dsRNA) bởi enzyme Dicer - một trong những enzyme thuộc họ RNase III, tạo thành các phân tử RNA ức chế nhỏ (siRNA) có kích . THỊ CƢ PHÂN LẬP VÀ THIẾT KẾ VECTOR ỨC CHẾ BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ENZYME INVERTASE (-FRUCTOFURANOSIDASE) NHẰM TĂNG TRỮ LƢỢNG SUCROSE Ở CÂY MÍA LUẬN. THỊ CƢ PHÂN LẬP VÀ THIẾT KẾ VECTOR ỨC CHẾ BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ENZYME INVERTASE (-FRUCTOFURANOSIDASE) NHẰM TĂNG TRỮ LƢỢNG SUCROSE Ở CÂY MÍA LUẬN

Ngày đăng: 19/11/2012, 12:39

Hình ảnh liên quan

Hình 1.1: Chu trình sinh tổng hợp sucrose với sự tham gia của các enzyme chính SUCROSE 6’-P FRUCTOSEGLUCOSE6-P ATP FRUCTOSE1.6-P2 GLUCOSE1-P UDP-GLUCOSE UTP SUCROSE  - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 1.1.

Chu trình sinh tổng hợp sucrose với sự tham gia của các enzyme chính SUCROSE 6’-P FRUCTOSEGLUCOSE6-P ATP FRUCTOSE1.6-P2 GLUCOSE1-P UDP-GLUCOSE UTP SUCROSE Xem tại trang 15 của tài liệu.
Hình 1.2. Cơ chế gây bất hoạt gen RNAi - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 1.2..

Cơ chế gây bất hoạt gen RNAi Xem tại trang 20 của tài liệu.
Hình 1.3. Sơ đồ mô tả kỹ thuật Gateway - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 1.3..

Sơ đồ mô tả kỹ thuật Gateway Xem tại trang 22 của tài liệu.
Bảng 2.1. Các plasmid sử dụng trong thí nghiệm - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Bảng 2.1..

Các plasmid sử dụng trong thí nghiệm Xem tại trang 25 của tài liệu.
2.2.2. Tách RNA tổng số - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

2.2.2..

Tách RNA tổng số Xem tại trang 27 của tài liệu.
Bảng 2.2. Chu kỳ nhiệt cho phản ứng RT-PCR một bƣớc - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Bảng 2.2..

Chu kỳ nhiệt cho phản ứng RT-PCR một bƣớc Xem tại trang 27 của tài liệu.
Bảng 2.3. Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Bảng 2.3..

Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR Xem tại trang 28 của tài liệu.
Bảng 2.4. Các môi trƣờng tái sinh cây mía - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Bảng 2.4..

Các môi trƣờng tái sinh cây mía Xem tại trang 30 của tài liệu.
Hình 3.1. Kết quả điện di RNA tổng số tách từ lá và bẹ thân non củ a2 giống mía ROC1 và ROC10 trên gel agarose 1% - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 3.1..

Kết quả điện di RNA tổng số tách từ lá và bẹ thân non củ a2 giống mía ROC1 và ROC10 trên gel agarose 1% Xem tại trang 35 của tài liệu.
Hình 3.2. Kết quả điện di sản phẩm RT-PCR trên gel agarose 0,8% - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 3.2..

Kết quả điện di sản phẩm RT-PCR trên gel agarose 0,8% Xem tại trang 36 của tài liệu.
Hình 3.3. Kết quả điện di sản phẩm PCR plasmid với cặp mồi M13(For/Rev) nhằm kiểm tra sự có mặt của đoạn Invertase  - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 3.3..

Kết quả điện di sản phẩm PCR plasmid với cặp mồi M13(For/Rev) nhằm kiểm tra sự có mặt của đoạn Invertase Xem tại trang 39 của tài liệu.
Hình 3.4. Kết quả so sánh trình tự đoạn gen Invertase phân lập đƣợc với trình tự Invertase trong ngân hàng gen có mã số AY302083  - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 3.4..

Kết quả so sánh trình tự đoạn gen Invertase phân lập đƣợc với trình tự Invertase trong ngân hàng gen có mã số AY302083 Xem tại trang 40 của tài liệu.
Hình 3.5. Mô hình cấu trúc chuyển gen INV_RNAi 3.5.2. Biến nạp vector INV_RNAi vào tế bào khả biến  E  - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 3.5..

Mô hình cấu trúc chuyển gen INV_RNAi 3.5.2. Biến nạp vector INV_RNAi vào tế bào khả biến E Xem tại trang 41 của tài liệu.
Hình 3.6. Kết quả điện di sản phẩm cắt plasmid INV_RNAi tổ hợp với - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 3.6..

Kết quả điện di sản phẩm cắt plasmid INV_RNAi tổ hợp với Xem tại trang 43 của tài liệu.
Hình 3.7. Điện di sản phẩm PCR plasmid INV-RNAi trong - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 3.7..

Điện di sản phẩm PCR plasmid INV-RNAi trong Xem tại trang 44 của tài liệu.
Bảng 3.3. Khả năng tạo mô sẹo và tái sinh ở giống mía ROC10 in vitro - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Bảng 3.3..

Khả năng tạo mô sẹo và tái sinh ở giống mía ROC10 in vitro Xem tại trang 45 của tài liệu.
Hình 3.8. Quy trình tái sinh mía ROC10 in vitro từ mô sẹo 3.7.3. Chọn lọc mô sẹo và tái sinh cây chuyển gen  - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 3.8..

Quy trình tái sinh mía ROC10 in vitro từ mô sẹo 3.7.3. Chọn lọc mô sẹo và tái sinh cây chuyển gen Xem tại trang 46 của tài liệu.
Bảng 3.4. Kết quả biến nạp gen gus-intron vào cây mía - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Bảng 3.4..

Kết quả biến nạp gen gus-intron vào cây mía Xem tại trang 47 của tài liệu.
Hình 3.9. Biến nạp gen gus-intron vào cây mía ROC10 in vitro - Phân lập và thiết kế vector ức chế biểu hiện gen mã hóa enzyme invertase (-fructofuranosidase) nhằm tăng trữ lượng sucrose ở cây mía

Hình 3.9..

Biến nạp gen gus-intron vào cây mía ROC10 in vitro Xem tại trang 48 của tài liệu.

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan