Đang tải... (xem toàn văn)
Tái sinh soma cây mít
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC LÝ THỊ LẸ TÁI SINH PHÔI SOMA CÂY MÍT (Artocarpus heterophyllus Lam) Luận Văn Kỹ Sư Chuyên Ngành: Cơng Nghệ Sinh Học Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CÔNG NGHỆ SINH HỌC TÁI SINH PHÔI SOMA CÂY MÍT (Artocarpus heterophyllus Lam) Luận Văn Kỹ Sƣ Chuyên Ngành: Công Nghệ Sinh Học Giáo viên hƣớng dẫn PGS TS TRẦN VĂN MINH Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 Sinh viên thực LÝ THỊ LẸ KHÓA: 2002 - 2006 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC FACULTY OF BIOTECHNOLOGY REGENERATING THE SOMATIC EMBRYO OF ARTOCARPUS HETEROPHYLLUS LAM GRADUATION THESIS MAJOR: BIOTECHNOLOGY Professor PhD TRAN VAN MINH HCMC, 09/2006 Student LY THI LE TERM: 2002 - 2006 Lời cảm ơn Em xin gửi lời cảm ơn đến quý thầy cô môn Công nghệ sinh học trường đại học Nông Lâm, người truyền đạt cho em kiến thức quý báu suốt bốn năm ngồi giảng đường Đại Học tạo nhiều điều kiện học tập cho em Em xin chân thành cảm ơn TS Trần Văn Minh hướng dẫn tạo điều kiện cho em thực tập hoàn thành tốt đề tài tốt nghiệp em biết ơn cô Bùi Thị Tường Thu, Th.s Trần Văn Định, chị Nguyễn Thị Kim Uyên, chị Trương Thị Hảo, toàn thể nhân viên viện bạn thực tập viện Em xin chân thành cảm ơn PGS.TS Trần Thị Dung, trưởng môn Công Nghệ Sinh Học, Đại Học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh giới thiệu em với thầy Trần Văn Minh, để tạo điều kiện cho em hoàn thành năm học đại học Em chân thành cám ơn tất bạn lớp Cơng Nghệ Sinh Học khố 28 giúp đỡ em nhiều qua trình học tập thời gian làm đề tài tốt nghiệp Sinh viên thực Lý Thị Lẹ iii TÓM TẮT LÝ THỊ LẸ, Đại Học Nơng Lâm TP.Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 “TÁI SINH PHƠI SOMA CÂY MÍT” Hội đồng hướng dẫn: PGS.TS TRẦN VĂN MINH Đề tài thực phịng thí nghiệm trọng điểm Quốc gia Cơng nghệ tế bào thực vật phía Nam Viện Sinh học Nhiệt đới Tp Hồ Chí Minh Từ tháng đến tháng 8/2006 Cây mít có nhiều cơng dụng, có giá trị dinh dưỡng giá trị kinh tế cao, chưa sử dụng tiềm năng, nguồn cung ứng cho xuất hạn chế Với đề tài này, tơi mong muốn tạo nguồn giống mít với số lượng lớn, chất lượng đồng đều, để phục vụ cho nhu cầu sản xuất người Mẫu thí nghiệm:chồi mít PTN Gồm thí nghiệm: - Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng mơi trường ni cấy đến phát sinh tế bào soma Mục đích: tìm mơi trường thích hợp để ni cấy phát sinh tế bào soma - Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng loại mẫu nuôi cấy đến phát sinh tế bào soma Mục đích: nhằm xác định loại mẫu cấy cho tỉ lệ phát sinh tế bào soma tốt - Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến tăng sinh khối tế bào soma Mục đích: tìm mơi trường thích hợp làm tăng sinh khối tế bào soma - Thí nghiệm 4: Ni cấy tế bào soma mơi trường lỏng Mục đích: tìm mơi trường lỏng thích hợp cho tăng sinh khối tế bào soma - Thí nghiệm 5: Tái sinh tế bào soma Mục đích: tìm mơi trường tốt cho phát sinh chồi - Thí nghiệm 6: Nhân chồi mít Mục đích: tìm mơi trường tốt cho nhân chồi mít - Thí nghiệm 7: Ni cấy phát sinh rễ Mục đích: xác định mơi trường tốt cho phát sinh rễ mít Kết qủa thảo luận:Sử dụng phần mềm MSTATC để tính tốn phân tích số liệu iv Mục lục Lời cảm ơn iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh mục hình ix Danh mục bảng x Danh mục chữ viết tắt xi Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích mục tiêu 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Mục tiêu 1.3 Giới hạn đề tài 1.4 Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN 2.1 Giới thiệu chung mít 2.1.1 Phân loại nguồn gốc phân bố 2.1.1.1 Phân loại 2.1.1.2 Nguồn gốc phân bố 2.1.2 Đặc điểm sinh học mít 2.1.2.1 Đặc tính hình thái 2.1.2.2 Khí hậu 2.1.2.3 Đất trồng 2.1.2.4 Đặc điểm sinh trưởng phát triển mít 2.1.2.5 Loài gây hại bệnh tật v 2.1.3 Đặc điểm lâm học mít 2.1.3.1 Sự trồng trọt 2.1.3.2 Mùa màng 2.1.3.3 Sản lượng 10 2.1.3.4 Thu hoạch dự trữ 10 2.1.4 Ý nghĩa kinh tế giá trị dinh dưỡng 10 2.1.5 Tình hình sản xuất mít Việt Nam giới 13 2.2 Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật 14 2.2.1 Khái niệm 14 2.2.2 Ứng dụng kỹ thuật ni cấy mơ 15 2.2.3 Vai trị chất điều hòa sinh trưởng 14 2.2.3.1 Auxin 16 2.2.3.2 Cytokinin 17 2.2.3.3 Gibberellin 18 2.2.4 Nuôi cấy phát sinh phôi soma 19 2.2.4.1 Phơi vơ tính 19 2.2.4.2 Ý nghĩa ni cấy mơ phơi vơ tính 19 2.2.4.3 Sự hình thành phơi vơ tính 20 2.2.4.4 Cơ chế phát sinh phơi vơ tính 20 2.2.4.5 Các loại phơi 21 2.2.4.6 Các kiểu phát sinh phôi soma 16 2.2.5 Những nhân tố ảnh hưởng đến hình thành phơi vơ tính 22 2.2.5.1 Mẫu cấy 22 2.2.5.2 Môi trường nuôi cấy 23 2.2.5.3 Nguồn cacbohydrate 23 2.2.5.4 Chất điều hòa tăng trưởng 23 2.2.5.5 Sự tương quan độ tuổi mẫu cấy sucrose 25 2.2.5.6 Nồng độ môi trường 25 2.2.5.7 Trạng thái vật lý môi trường 25 2.2.5.8 Kiểu gene 25 vi 2.2.5.9 Cường độ ánh sáng 26 2.2.6 Những vấn đề thường gặp trình phát sinh phơi 26 2.3 Ni cấy mơ mít 27 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 29 3.1 Vật liệu 29 3.1.1 Mẫu nuôi cấy 29 3.1.2 Thiết bị 29 3.1.3 Hoá chất 29 3.1.4 Điều kiện ni cấy 31 3.2 Bố trí thí nghiệm 31 3.2.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng mơi trường ni cấy đến phát sinh tế bào soma 31 3.2.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng loại mẫu nuôi cấy đến phát sinh tế bào soma 32 3.2.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến tăng sinh khối tế bào soma 32 3.2.4 Thí nghiệm 4: Ni cấy tế bào soma môi trường lỏng 33 3.2.5 Thí nghiệm 5: Tái sinh tế bào soma 34 3.2.6 Thí nghiệm 6: Nhân chồi mít 35 3.2.7 Thí nghiệm 7: Nuôi cấy phát sinh rễ 35 3.3 Phương pháp xử lý số liệu 36 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 4.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến phát sinh tế bào soma (sau 15 ngày ni cấy) 37 4.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng mẫu nuôi cấy đến phát sinh tế bào soma 40 4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy đến vii cấy chuyền tế bào (trên agar) 41 4.4 Thí nghiệm 4: Nhân sinh khối tế bào soma môi trường lỏng 43 4.4.1 Thí nghiệm 4-1: Ảnh hưởng mơi trường ni cấy lỏng đến tăng sinh khối tế bào soma 43 4.4.2 Thí nghiệm 4-2: Ảnh hưởng mật độ ni cấy ban đầu đến khả tăng sinh khối tế bào soma 44 4.5 Thí nghiệm 5: Tái sinh tế bào soma 46 4.6 Thí nghiệm 6: Nhân chồi mít 49 4.7 Nuôi cấy phát sinh rễ 51 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 5.1 Kết luận 55 5.2 Đề nghị 55 Tài liệu tham khảo 56 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Lá mít 1,5 tuổi Hình 2.2: Cây mít trưởng thành mang Hình 2.3: Quả mít chín bổ đơi 11 Hình 2.4: Các loại phơi soma 21 Hình 4.1 Tế bào soma mít phát sinh mơi trường ni cấy (MS+BA(1mg/l)+NAA(5mg/l)+CW(10%)+Đường(30g)) 39 Hình 4.2 Tế bào soma mít tăng sinh khối mơi trường ni cấy 42 Hình 4.3 Dịch huyền phù tế bào soma môi trường mật độ tế bào ni cấy ban đầu khác 45 Hình 4.4: Tái sinh phơi soma mít (sau 15 ngày ni cấy) 48 Hình 4.5: Nhân chồi mít ni cấy sau 30 ngày mơi trường 50 Hình 4.6: Cây mít in vitro rễ tốt mơi trường kích thích rễ 53 Hình 4.7: Cây mít rễ in vitro hóa bầu đất 54 ix ... tăng sinh khối tế bào soma 43 Bảng 4-2.4: Ảnh hưởng mật độ nuôi cấy ban đầu đến khả tăng sinh khối tế bào soma 44 Bảng 4.5: Tái sinh tế bào soma 47 Bảng 4.6: Nhân chồi mít 49 Bảng 4.7: Khả rễ mít. .. cứu khả tái sinh phơi soma mít 1.2.2 Mục tiêu Xác định môi trường phát sinh cấy chuyền tế bào soma Xác định môi trường lỏng để nuôi cấy dịch huyền phù tế bào soma Xác định môi trường tái sinh phơi... MỤC CÁC HÌNH Hình 2.1: Lá mít 1,5 tuổi Hình 2.2: Cây mít trưởng thành mang Hình 2.3: Quả mít chín bổ đơi 11 Hình 2.4: Các loại phơi soma 21 Hình 4.1 Tế bào soma mít phát sinh mơi trường ni cấy (MS+BA(1mg/l)+NAA(5mg/l)+CW(10%)+Đường(30g))
