Đang tải... (xem toàn văn)
Đánh giá khả năng bắt aflatoxin G1 của cột ái lực miễn dịch do Viện Pasteur Tp.HCM sản xuất
Phụ lục 1: Các đặc tính lí hóa của AFT.Phụ lục 2: Bảng xếp loại các độc chất dựa vào liều LD50 trên động vật (Lu, 1996)AflatoxinCông thức nguyênTrọng lượng phân tửĐiểm nóng chảyHuỳnh quang dưới tia UVBước sóng huỳnh quang khi kích thích bằng tia 365 nm λEx’ (nm) trongMetanol ACN Chloroform AcetonNhóm difurocoumacyclopentenoneAFL B1 C17H12O6312 267 Xanh lam430 416 415 422AFL B2 C17H14O6314 303-306Xanh lam430 419 415 420AFL B2a C17H14O7320 240 Xanh lamAFL M1 C17H12O7328 299 Xanh lam428AFL M2 C17H14O7330 293 Xanh lam430AFLM2a C17H14O8346 248 LụcNhóm difurocoumarolactoneAFL G1 C17H12O7328 257-259Xanh lục450 440 435 448AFL G2 C17H14O7330 237-240Xanh lục450 437 435 448AFL G2a C17H14O8346 190 Xanh lục c tớnh LD50Cc c (Super toxic) 5 mg/kgRt c (Extremely toxic) 5 -50 mg/kgc tớnh cao (Highly toxic) 50 500 mg/kgc tớnh khỏ cao (Moderately toxic) 0.5 5 g/kgc tớnh nh (Slightly toxic) 5 15 g/kgKhụng c (Practically nontoxic) > 15 g/kgPh lc 3: S lc cỏch ch to ct IAC (Vin Pasteur Tp. HCM, 2002)1. Gõy min dchTh gõy min dch phi hon ton khe mnh, 2-3 thỏng tui, trng lng trờn 2 kg. Ly 1 ml mỏu tai trc khi tiờm mi mn cm lm chng. Khỏng nguyờn dựng tiờm l cng hp AFB1 BSA ca hóng Sigma Chemical. Khỏng nguyờn c trn vi NaCl 0,9% v tỏ cht (lc 30 phỳt) thu c huyn dch AFB1 BSA. Mi mn cm: tiờm 2 ml huyn dch/th, liu tiờm c chia thnh nhiu mi trờn lng, 100 àl huyn dch cũn li tiờm mt bờn ựi. ựi cũn li tiờm 100 àl vaccine ho g. Mi nhc li 1, 2, 3, 4, 5 tiờm trong 5 thỏng (mi thỏng 1 ln), quy trỡnh tiờm tng t nh trờn nhng lng khỏng nguyờn AFB1 BSA gim dn v khụng cú vaccine ho g.2. Tinh ch IgG14 ngy sau ln tiờm th 5, ly ton b mỏu t ng mch ựi. Ly tõm thu huyt thanh v tỏch b hng cu, sau pha loóng huyt thanh gp ụi bng nc mui sinh lớ. Ta IgG bng (NH4)2SO4 45% bóo hũa. Tip theo cho huyt thanh phn ng vi BSA loi cỏc thnh phn IgG khỏng BSA.3. To cng hp sepharose IgG khỏng AFB1 IgG thu c sau khi tinh ch c gn ng tr lờn sepharose ó c hot húa bi CNBr theo quy trỡnh ca nh sn xut Amersham Biotech. Quỏ trỡnh gn c thc hin mt trong hai ch : (1) 22oC 25oC trong 2 gi hoc (2) 4oC trong 24 gi. Trong thi gian to cng hp, hn hp c trn liờn tc bng mỏy lc nh. Khi cng hp kt thỳc, cn kim tra li IgG cũn d trong hn dch ỏnh giỏ hiu sut gn. Hiu sut gn cng cao thỡ cht lng ct cng cao. Cng hp sepharose IgG l gel cú thm cao khi cho cht lng chy qua. Sau khi x lớ loi b cỏc IgG cũn bỏm c hc trong gel, gel c úng vo ct nha kích thước 0.4 cm x 10 cm với lượng 0.1 ml – 0.15 ml/cột. Cột được bảo quản ở nhiệt độ 4oC – 8oC. Giá ái lực miễn dịch giữ hoạt tính ổn định ít nhất 1 năm (Nguyễn Lê Trang, 2003) Phụ lục 4: Máy quang phổ (U – 3310 Spectrophotometer – Hitachi) Máy đo huỳnh quang (Vicam – Series – 4 Fluorometer, USA). . – 0.15 ml /cột. Cột được bảo quản ở nhiệt độ 4oC – 8oC. Giá ái lực miễn dịch giữ hoạt tính ổn định ít nhất 1 năm (Nguyễn Lê Trang, 2003) Phụ lục 4: Máy. difurocoumarolactoneAFL G1 C17H12O7328 25 7-2 59Xanh lục4 50 440 435 448AFL G2 C17H14O7330 23 7-2 40Xanh lục4 50 437 435 448AFL G2a C17H14O8346 190 Xanh lục c tớnh LD50Cc