Luận văn tốt nghiệp Lời cảm ơn - Luận văn đợc hoàn thành phòng thí nghiệm Hoá hữu - Trờng Đại học Vinh, Viện Hoá học - TTKHTN CNQG Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc xin chân thành cảm ơn: ThS Nguyễn Thị Chung đà giao đề tài, hớng dẫn, bảo tận tình cho suốt trình làm luận văn GVC Lê Quý Bảo, PGS-TS-NGƯT Lê Văn Hạc, TS Hoàng Văn Lựu thầy cô tổ Hoá hữu đà có đóng góp quý báu cho luận văn TS Lê Kim Biên, Viện sinh thái tài nguyên sinh vật - TTKHTN CNQG đà xác định tên khoa học cho loài thực vật thuộc đối tợng nghiên cứu Nhân dịp này, xin chân thành cảm ơn tập thể thầy cô khoa Hoá, trờng Đại học Vinh, gia đình, bạn bè đà quan tâm động viên, giúp đỡ trình học tập hoàn thành luận văn Vinh, tháng năm 2004 Lê Thu Hằng Mục lục Trang Lời cảm ơn Phần I: Mở đầu Phần II: Tổng quan 2.1 Đặc điểm thực vật họ Cúc SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa Luận văn tốt nghiƯp 2.2.Thùc vËt chi Pluchea Cass 2.3 Ho¸ häc chi Pluchea Cass 2.3.1 Tinh dầu 2.3.2 Các hỵp chÊt secquitecpennoit 10 2.3.3 Hỵp chÊt ankylthiophen 12 2.3.4 Hỵp chÊt sterol 12 2.3.5 Hỵp chÊt tritecpenoit 13 2.4 Cây sài hồ nam Pluchea pteropoda Hemsl 14 2.4.1 Nghiên cứu thực vật học 14 2.4.1.1 Hình thái phân bố 14 2.4.1.2 Tác dụng sinh học 16 2.4.2 Nghiên cứu thành phần hoá học 2.5 Phơng pháp nghiên cøu 16 18 Thùc nghiƯm 19 3.1 LÊy mÉu vµ xác định tên khoa học 19 3.2 Hoá chất dụng cụ thiết bị nghiên cứu 19 Phần III: 3.2.1 Hoá chất 19 3.2.2 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu 20 3.3 Chiết xuất phân lập chất 20 3.3.1 Chiết xuất 20 3.3.2 Phân lập tinh chế hợp chất 23 3.4 Một số đặc trng vật lý chất phân lập 25 3.5 Xác định cấu trúc hoá học 25 Phần IV: Kết thảo luận 26 4.1 Nguyên liệu thực vật 26 4.2 Chiết xuất phân lập chất 26 4.3 Xác định cấu trúc hợp chất 27 Kết luận 30 Phần V: 31 Tài liệu tham khảo SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa 2 Luận văn tốt nghiƯp SVTH: Lª Thu H»ng - 40E Hãa Luận văn tốt nghiệp phần i: mở đầu Là ®Êt níc bíc tõ hai cuéc chiÕn tranh trêng kỳ Chúng ta phải đối mặt với khó khăn thử thách tự nhiên lẫn xà hội Một công khôi phục đợc tiến hành để làm thay đổi sống, bù đắp, hàn gắn mát mà lúc làm đợc Mặc dù đợc thiên nhiên ban tặng cho nguồn tài nguyên phong phú Rừng vàng, biển bạc song khai thác bừa bÃi không hợp lý đà làm cho nguồn tài nguyên có nguy cạn kiệt Đặc biệt nguồn tài nguyên rừng, bảo vệ, tái tạo, trồng loại quý đánh nguồn lợi kinh tế đáng kể Theo ớc tính nhà thực vật học, nớc ta có khoảng 10368 loại thuộc 2257 chi 305 họ, có 1850 loài thuốc phân bố 244 họ thực vật Số tinh dầu gồm khoảng 657 loài thuộc 357 chi 144 họ [1,7,8], nhng loài cha đợc điều tra nghiên cứu cách có hệ thống thành phần hoá học nh dợc lý Yêu cầu đặt cho phát triển kinh tế xà hội đất nớc khai thác hợp lý, bảo tồn tái tạo tài nguyên thiên nhiên phong phú Một nguồn lợi nguồn hợp chất thiên nhiên Điều đặt cho nhà hoá học phải không ngừng tìm chất cã øng dơng lín nhiỊu lÜnh vùc nh y học, nông nghiệp, công nghiệp, dợc liệu v.v Trong thảm thực vật Việt Nam họ Cúc (Compositae) phong phú đa dạng Họ Cúc có tới 336 loài, có 100 loài dùng làm thuốc chữa bệnh dới dạng chế phẩm thô sơ nh thuốc sắc, rợu thuốc, cao Ngoài có nhiều loại họ Cúc đà đợc dùng công nghiệp dợc liệu, hơng liệu, mỹ phẩm, công nghiệp Cây sµi hå nam (Pluchea pteropoda Hemsl.) thc hä Cóc (Compositae) mäc mét sè vïng ë Trung Quèc [13] ë ViÖt Nam sài hồ mọc hoang dại vùng nớc lợ, nớc mặn ven biển miền Bắc, duyên hải miền Trung Tại Nghệ An mọc phổ biến mép bờ đê chắn sóng, bờ ruộng muối, đầm nuôi tôm Nh©n d©n ë mét sè vïng vÉn thêng dïng sài hồ để ăn gỏi cá, điều trị vết loét có giòi trâu bò Trong Đông y ngời ta thờng dùng rễ phơi khô sài hồ (Pluchea pteropoda Hemsl.) rễ cúc tần (Pluchea indica (L ) Less.) SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa Luận văn tốt nghiệp loại giống sài hồ để làm vị sài hồ chữa cảm sốt, nhức đầu, đau tức ngực, huyết áp cao thay cho sài hồ bắc (Bupleurum Sience DC) Thêm vào thị trờng thuốc nam vị sài hồ sản xuất từ loại Pluchea pteropoda Hemsl vùng Nghệ An, Hà Tĩnh đợc đánh giá loại có chất lợng tốt [9] Tuy nhiên hiểu biết thành phần hoá học sài hồ nhiều hạn chế Xuất phát từ thực tế chọn đề tài Tách xác định cấu trúc số hợp chất từ dịch chiết rễ sài hồ nam (Pluchea pteropoda Hemsl.) ë DiƠn Ch©u - NghƯ An" Víi mơc đích bổ sung liệu sài hồ nam ë NghƯ An NhiƯm vơ cđa chóng t«i ln văn là: Phân lập xác định cấu trúc hoá học hợp chất tách từ rễ sài hồ nam, sở đề xuất khả ứng dụng chúng thực tế Phần ii: tổng quan 2.1 Đặc điểm thực vật họ Cúc Họ Cúc (Compositae hay Asteraceae) họ lớn ngành thực vật hạt kín Đây hä quan träng cđa hƯ thùc vËt thÕ giíi cịng nh hƯ thùc vËt ViƯt Nam Theo M E Kirpieznic¬v (1981), hä Cóc cã kho¶ng 1150 - 1300 chi víi 20.000 loài, phân bố rộng rÃi toàn giới vùng khí hậu nhiệt đới ôn đới [3] Việt Nam, họ Cúc có phân họ, 13 tông, 114 chi 336 loài phân bố khắp nơi đất nớc Trong 336 loài có 161 loài đà biết giá trị kinh tế chiếm gần 50% số loài: Cây thuốc gồm 96 loài, cảnh gồm 28 loài, SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa Luận văn tốt nghiệp làm rau 30 loài, cho tinh dầu dầu béo 12 loài, làm phân xanh loài, có tác dụng diệt trừ sâu, côn trùng loài Cây họ Cúc thờng thuộc loại thảo, to, đơn thờng mọc so le, mọc đối, có thành hình hoa thị, kèm phiến nguyên thờng khía hay chia thuỳ Rễ thờng phồng lên thành củ Cụm hoa đầu gồm nhiều hoa mọc kẽ vảy bao bọc tổng bao bắc Hoa hình ống hay không Năm cánh hoa liền thành tràng hình ống hay hình lỡi nhỏ, năm nhị dính liền bao phấn thành ống Hai noÃn, bầu hạ ô đựng noÃn, vòi dài, đầu nhị xẻ đôi có lông thu Quả bé có có mao lông hay móc hạt Một số khác có ống nhựa mủ, số khác có ống tiết Chất dự trữ củ insulin [6,7] Các họ Cúc mọc phổ biến nhiều nơi, chi nh Eupatorium, Erigeon, Artesia phát triển mạnh vùng đất hoang, đất bạc màu Việt Nam chi thờng gặp là: Blumea, Vevnonia, Latuca, Eupatorium, Ginura, Senecio Gần số chi đợc nghiên cứu nhiều nh: Artemisia,Agretum, Eupatorium, Pluchea, Blumea F Bohlman cộng nghiên cứu thực vật họ Cúc Châu Âu, Trung Nam Mü mét sè vïng ë Nam Phi KÕt qđa ®· phân lập từ họ Cúc 2500 hợp chất xác định cấu trúc chúng [14] Đặc trng họ Cúc hợp chất secquitecpen, cumarin, ancaloit, secquitecpenlacton 2.2 Thùc vËt chi Plucheas Cass C¸c thùc vËt chi Pluchea Cass thuộc họ Cúc (Asteraceae) bụi cỏ, có khoảng 80 loài mọc phổ biến vùng nhiệt đới cận nhiệt đới thuộc châu á, Bắc Nam Mỹ, Châu Phi Châu úc [6] giới có nhiều loài chi Pluchea Cass, đợc dùng y học dân gian để chữa số bệnh Ngời da đỏ Mêhicô dùng nớc sắc P.symphytipholia (Miller) Gillis để chữa đau bụng, ỉa chảy, ký sinh trùng đờng ruột Cây Pluchea quitoc Brazin dùng làm thuốc long đờm, trung tiện, tiêu hoá tê thấp Pluchea lanceolata có ấn Độ, Thái Lan, Việt Nam dùng làm thuốc lợi tiểu, giảm đau, chữa loét hành tá tràng, kháng nấm, trị rắn cắn [6] Việt Nam ghi nhận đợc loài thuộc chi Pluchea Cass là: Pluchea indica (L ) Less, (cây cúc tần), Pluchea pteropoda Hemsl (cây SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa Luận văn tốt nghiệp sài hồ nam), Pluchea eupatoroides Kurz (c©y løc), Pluchea poligonata Gagnep (c©y cúc bông) [4] Tuy phần lớn chúng đợc sử dụng y häc d©n gian nhng sù hiĨu biÕt vỊ dợc lý thành phần hoá học nhiều hạn chế Pluchea indica (L ) Less mọc hoang dại đợc trồng hầu hết tỉnh nớc ta từ ®ång b»ng, miỊn nói cịng nh vïng biĨn Pluchea pteropoda Hemsl mọc hoang dại miền biển miền Bắc duyên Hải miền Trung đồng mọc nhiều, đợc trồng làm hàng rào Pluchea eupatoroides Kurz tìm thấy số nơi miền Nam Pluchea poligonata Gagnep cịng míi chØ thÊy ë Phan Rang [13] Dới dây số thuộc chi Pluchea Cass đà đợc nghiên cứu thành phần hoá học gồm: Pluchea arguta Boiss Pluchea chingoyo Pluchea carolonesis (Jacp.) G.Donl Pluchea dioscoridis (L ) DC Pluchea fastiginata Guiseb Pluchea foetda DC (P.camphorata DC) Pluchea inldica (L ) Less Pluchea lanceolaca (DC) CB Clark Pluchea odorata Cass Pluchea purpurescens Pluchea quitoc (DC) (P.sagittaliss) Pluchea rosea Pluchea salicifolia Pluchea sericia (Nutt) Caville Pluchea suaveolens Pluchea symphytifolia (Miler) Gilli Pluchea pteropoda Hemsl SVTH: Lª Thu Hằng - 40E Hóa Luận văn tốt nghiệp 2.3 Hoá học chi Pluchea Cass Trong số loài thuộc chi Pluchea Cass đà đợc nghiên cứu thành phần hoá học đà phát đợc nhiều lớp hợp chất khác Một số loài có chứa tinh dầu, ankylthiophen, flavonoit, lignan gần hợp chất tritecpenoit Tuy hợp chất tritecpenoit khung eudesman đợc coi đặc trng cho thực vật chi 2.3.1 Tinh dầu Trong số 17 loài nêu đà phát đợc loài có tinh dầu ®ã lµ: Pluchea quitoc (DC) (P.sagittalis) cã chøa 0,47% tinh dầu với thành phần monotecpen: p - cymol, d - canphor, d - camphen [11] Theo kết nghiên cứu Gildemester E, Hopman, Fr (1961) Pluchea foetida chứa 0,25% tinh dầu với thành phần chđ u lµ cineol, eudesman, ankynylthiphen [16] Pluchea fastiginata Guiseb, tinh dầu có thành phần phức tạp, phơng pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS) đà nhận dạng đợc 22 số 39 cấu tử với thành phần gồm monotecpen: - pinen (15 - 19%), sabiben (7 - 10%); secquitecpen:  - caryophylen (15 - 19%)  - cadinen (3 7%),  - maurolen (2 - 2,3%) [15] Pluchea purpurescens, Plucheaa calicifolia thành phần tinh dÇu cã chøa caryophylen, caryophylenoxit,  - humulen, selina - (15), (11) dien [9] Tõ tinh dầu Plucheaa dioscoridis đà xác định đợc 36 hợp chất khác Trong secquitecpen chiếm tới 65,86% Thành phần dẫn xuất rợu secquitecpen fanesol chiếm 16,5% [4] Pluchea indica (L.) Less gần đợc nghiên cứu Việt Nam kết cho thấy hàm lợng tinh dầu phận khác giao động khoảng 0,04 - 0,08% với thành phần - selinen, - - H – silphiperfol - - en,  - copaen phần mặt đất đặc trng - silinen, phần rễ - copaen [6] Lê Văn Hạc, Nguyễn Thị Chung nghiên cứu thành phần hoá học cúc tần Nghệ An phơng pháp GC GC / MS đà xác định thành phần rễ cúc tần gồm : -  - H - silphiperfol - - en (27,9 - 34%),  copaen (13,8 - 15,5%) cßn tinh dầu cành non thời điểm selinen (35,6 - 44,7%) vµ 7-  - H – silphiperfol - - en (28,9- 29,5%) [14, 15] SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thị Chung, Nguyễn Trọng Tài nghiên cứu thành phần hoá học sài hồ nam Quỳnh Lu - Nghệ An phơng pháp GC GC / MS đà xác định thành phần rễ sµi hå nam gåm 1,4 - dimetoxy - - metyl - iso propyl benzen (45,12%); 6S - 2,3,8,8 - tetrameyl tricyclo [5,2,2,0 (1,6)] undec - - en (11,29%); 1,2 - dietyl - 3,4 - dimetyl benzen (7,66%) Còn sài hồ nam phần trăm chất tơng ứng 25,61%; 15,15%; 12,58% Ngoài cã -  - H - silphiperfol - - en (8,85%) [12] 2.3.2 Các hợp chất secquitecpennoit Các hợp chất secquitecpenoit phổ biến thực vật chi Pluchea Cass., chđ u thc lo¹i khung eudesman (1), gặp số kiểu khung khác nhng không nhiều guaian (2), eremophilan (3), [3,3,3]-propellan (4) (1) Eudesman (2) Guaian (3) Eremophilan SVTH: (4) [3,3,3] - propellan Lª Thu H»ng - 40E Hãa Luận văn tốt nghiệp O (5) Eudesman - on Các hợp chất eudesman tìm thấy thực vËt chi nµy thêng cã nhãm chøc olefin, hidroxyl, cacbonyl, cacboxylic dẫn xuất chúng thờng dạng - epi - eudesman, eudesmanoit glucozit, eudesman - - on, eudesmanoic axit, eudesmanolit HÇu hÕt chóng tån dạng lỏng gôm, hoạt tính kháng khuẩn lớp chất đợc phát sơ [6] Trong dẫn xuất eudesman dẫn xuất eudesman - - on (5) phổ biến cả, chúng chiếm tới 64% hợp chất có khung eudesman ®· biÕt, cã ë sè 17 loµi thùc vật chi Pluchea Cass đà đợc nghiên cứu Từ Pluchea arguta ngời ta đà xác định đợc 17 hợp chÊt lµ dÉn xt cđa eudesman - - on với Pluchea quitoc 18 hợp chất [6] 2.3.3 Hợp chÊt ankinyl thiophen Trong sè c¸c thùc vËt chi Pluchea Cass đợc nghiên cứu thành phần hoá học đà phát đợc 14 hợp chất ankylthiophen dạng (6) có loài cây: Pluchea odorata, Pluchea symphytifo, Pluchea dioscoridis, Pluchea foetida, Pluchea suaveolence, Pluchea indica R1 C C S C C C C R2 (5) (6) Từ Pluchea indica(L ) Less, Chakravaty cộng đà tách xác định đợc cấu trúc hai dÉn xt ankinylthiophen míi lµ: - (pro - 1’- inyl) - (5”,6” - dihydroxyhex - 1”,3”- diinyl) - thiophen (7); vµ - (pro - 1’ inyl) - 5(6” - axetoxy - 5” - hydroxyhex - 1”,3” - diinyl) - thiophen (8) SVTH: Lª ThuC H»ng - 40E Hãa C HC C S C C C CH OH CH2 OH (6) 10 Luận văn tốt nghiệp Hình 1: ảnh sài hồ nam Trên giới mọc Trung Quốc [4] Tại Việt Nam mọc hoang dại vùng nớc lợ ven biển miền Bắc duyên hải miền Trung, vùng đồng đợc trồng làm bờ rào 2.4.1.2 Tác dụng sinh học Sài hồ Việt Nam thuốc dùng y học dân gian Bộ phận dùng để chữa bệnh thân rễ dùng dạng tơi dạng khô (từ 2,5 kg rễ tơi cho kg rễ khô) Cây đợc thu hái quanh năm nhng tốt vào cuối mùa thu,đầu mùa đông [5] Trong Đông y thân rễ sài hồ nam đợc dùng phối hợp với vị thuốc khác để chữa cảm sốt, nhức đầu, đau tức ngực, hạ huyết áp thay cho sài hồ bắc (Bupleurum sience DC.) Nhân dân địa phơng dùng để ăn gỏi cá, trị vết loét có trâu bò Theo kết nghiên cứu Đoàn Thanh Tờng phần dịch chiết n - hexan sài hồ có tính kháng khuẩn yếu, tính kháng nấm SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa 13 Luận văn tốt nghiệp 2.4.2 Nghiên cứu thành phần hoá học Theo Đỗ Tất Lợi, rễ sài hồ Việt Nam có tinh dầu số chất khác cha rõ [16] Đoàn Thanh Tờng lần đà phân lập đợc hợp chất từ dịch chiết n-hexan sài hồ Hải Hậu - Nam Định Dựa vào đặc trng vật lý (điểm nóng chảy, góc quay cực ) đà nhận dạng đợc hợp chất là: - sitosterol (11); stigmast - 5,2,2 - dien - 3 - ol (12); taraxast - 20 (30) - en - 3 - yl - axetat (13); 26, 27, 28 - neohop - 13 - (18) - en -3 - yl axetat (14);  - sitosterol glucopyranosio (15); hop – 17 (21) - en - 3 - yl axetat (16) vµ hop - 17 (21) - en - 20 - ol - 3 - yl - axetat (17) Trong thành phần dịch chiết từ thân, sài hồ : Taraxast - 20 (30) - en - 3 - yl - axetat, cđa rƠ lµ: Hop - 17 (21) - en - 3 - yl - axetat Theo tác giả, hoạt tính chống viêm nhiễm quan sát thấy Pluchea pteropoda Hemsl (trị vết loét có giòi trâu bò) có liên quan trực tiếp đến hợp chất tritecpen pentacyclic có dịch chiết n - hexan hợp chÊt (13), (14), (16), (17) (13) AC-O AC-O (13) (14) (14) OH AC-O AC-O (17) (16) Các hợp chất tritecpen pentaxyclic cịng thêng ph¸t hiƯn thÊy ë mét sè (16) (17) loại thuốc quý y học phơng Đông nh nhân sâm (panaxgingsen) họ SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa 14 Luận văn tốt nghiệp Araliaceae, cam thảo (alycryrhigy) họ Papilionaceae; làm nguyên liệu để pha chế nhiều loại nớc giải khát nh rau má (centella) họ Apiceae Theo Nguyễn Thị Chung - Lê Văn Hạc nghiên cứu hoá thực vật sài hồ hai vùng Diễn Châu - Nghệ An cho thấy: Mẫu thân sài hồ nam vùng đồng có tinh dầu với hàm lợng 0,08%, tinh dầu chất lỏng có mầu vàng nhạt, nhẹ nớc, có mùi thơm đặc trng Phân tích phơng pháp GC / MS đà xác định đợc 13 hợp chất, chủ yếu secquitecpen với thành phần longifolen (61,0%) alloaromadren axit (10,1%) Từ dịch chiết n - hexan mẫu sài hồ vùng đồng tác giả đà xác định đợc 34 hợp chất phơng pháp GC - MS có 10 chất đà đợc nhận diện chiếm hàm lợng 83,85%, với thành phần là: 6S - 2,3,8,8 tetrametyltricyclo [5, 2, 2, (1,6)] undec - - en (34,47%) 1, 2, - dietyl -3, đimetyl benzen (18,34%) Ngoài tác giả đà tách xác định cấu trúc số hợp chất từ rễ sài hồ nam vùng đồng nh - sitosterol; porifera sterol;  - sitosterol glucozit; boehmeryl axetat; (2 - pro - - inyl) - - (5,6 dihydroxyhexa - 1, -diinyl) - thiophen Trong sài hồ vùng biển Diễn Châu cất nớc không thu đợc tinh dầu Khảo sát dịch chiết tác giả đà phân lập nhận dạng đợc hai hợp chất stigmasterol hop - 17 (21) - en - 3 - yl - axetat 2.5 Phơng pháp nghiên cứu Mẫu thực vật đợc làm sạch, băm nhỏ, sấy khô chiết chọn lọc với dung môi thích hợp thu đợc hỗn hợp chất có độ phân cực khác dùng cho trình nghiên cứu nêu phần thực nghiệm Việc phân lập hợp chất đợc sử dụng phơng pháp s¾c ký cét, s¾c ký líp máng, kü tht kÕt tinh lại Khảo sát cấu trúc chất phân lập đợc cách kết hợp số hoá lý đặc trng nh: nhiệt độ nóng chảy, độ quay cực, Rf với phơng pháp phổ đại nh phổ khối phân giải cao (EI-MS), phổ cộng hởng từ PHầN III: THựC NGHIệM SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa 15 Luận văn tốt nghiệp 3.1 Lấy mẫu xác định tên khoa học Cây sài hồ nam đợc lấy vào tháng năm 2003 Diễn Hùng, Diễn Châu, Nghệ An Đặc điểm lấy mẫu là: Cây mọc hoang vùng ven biển Bộ phận nghiên cứu phần rễ sài hồ nam, sau lấy đợc rửa sạch, băm nhỏ, phơi nơi thoáng mát, sau đem sấy khô 40 0C thu đợc 2kg mẫu Mẫu đợc TS Lê Kim Biên, Viện sinh thái tài nguyên sinh vËt TTKHTN vµ CNQG lµ Pluchea pteropoda Hemsl thuéc hä Cúc (Compositae) 3.2 Hoá chất - dụng cụ thiết bị nghiên cứu 3.2.1 Hoá chất Các dung môi để ngâm chiết mẫu thực vật dùng loại tinh khiết (P) Khi dùng cho loại sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng phải sử dụng loại tinh khiết phân tích (PA) loại (P) đợc xử lý đạt đến loại PA Dung môi đợc dùng là: - Etanol (C2H5OH) - Etylaxetat (CH3COOC2H5) - Clorofom (CHCl3) - n - hexan (C6H14) - Níc cÊt (H2O) - Silicagen ch¹y cột cỡ hạt 100-160m Kiểm tra độ chất đợc sử dụng phơng pháp sắc ký lớp mỏng với mỏng silicagen tráng sẵn đế nhôm độ dày 0,2 mm cđa h·ng Merek 60 F254 HiƯn vÕt b»ng iot 3.2.2 Dụng cụ thiết bị nghiên cứu -Bé dông cô chiÕt håi lu mÉu thùc vËt gåm: Bình cầu đáy tròn 2l ống sinh hàn bầu bóng -Bộ thu hồi dung môi gồm: Bình cầu đáy tròn 2l Bình cầu đáy tròn 1l( 0,5l) ống sinh hàn thẳng Bơm tia níc SVTH: Lª Thu H»ng - 40E Hãa 16 Luận văn tốt nghiệp -Cột thuỷ tinh có khoá cỡ cột 50cm, đờng kính 2,5cm để tiến hành sắc ký cột -Bình triển khai dùng cho sắc ký lớp mỏng -Bình vết iod - Phễu chiết -Bình tam giác -Lọ thuỷ tinh -Kính hiển vi Boetius đo điểm nóng chảy -Phổ khối lợng đo m¸y MS - Engine - 5989 - HP ë ViƯn Hoá học TTKHTN CNQG 3.3 Chiết xuất phân lập chất 3.3.1 Chiết xuất Nguyên liệu sau đà đợc làm sạch, băm nhỏ, sấy khô nhiệt ®é 40 0C, ®em chiÕt håi lu lÇn víi cån tut ®èi / níc cÊt tû lƯ 95 : Cất loại dung môi dới áp suất giảm sau thêm 100ml nớc cất phân bố lần lợt với n hexan, clorofom, etylaxetat thu đợc dịch chiết tơng ứng: Nguyên liệu khô nghiền nhỏ Dịch chiết n - hexan cđa rƠ sµi hå nam ký hiƯu RSH1 Nguyên khôhồ1.Chiết nghiền Dịch chiết clorofom củaliệu rễ sài nam ký víihiƯu C2H5RSH2 OH / H2O=95 : (ba lÇn) nhỏ Dịch chiết etylaxetat rễ sài hồ nam ký hiệu RSH3 Cất loại dung môi Quy trình chiết xuất đợc biểu thị sơ đồ sau: Pha lỏng lại Pha nớc lại Chiết lần lợt với dung môi có độ phân cực tăng dần, làm khan Na2SO4 khan Cất loại dung môi đợc dịch chiết tơng ứng n - hexan clorofom etylaxetat n-Hexan Clorofom Etylaxetat CỈn chiÕt n - hexan SVTH: (RSH1) CỈn chiÕt CHCl3 - 40E2 Hóa (RSH2) Lê Thu Hằng Cặn chiết etylaxetat (RSH3) Dịch nớc lại 17 (RSH2) Luận văn tốt nghiệp Sơ đồ 3.1: Quy trình chiết xuất phân lập nhóm chất từ rễ sài hồ nam (Pluchea pteropoda Hemsl.) H×nh 2: Bé dơng chiÕt håi lu dùng để chiết dợc liệu 1-nớc ra; 2-ống sinh hàn; 3-nớc ra; 4-bình cầu 2lít; 5- giá đỡ ; 6-nồi gang; 7- bếp điện SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa 18 Luận văn tốt nghiệp Hình 3: Bộ dụng cụ dùng để cất loại dung môi 1-nớc ra; 2- nớc vào ; 3-ống sinh hàn thẳng; 4- bình cầu đáy tròn; 5-bộ phận nối với bơm tia nớc; 6- bình tam giác 3.3.2 Phân lập tinh chế hợp chất Quá trình phân lập tinh chế hợp chất đợc sử dụng phơng pháp sắc ký cột thờng, kỹ thuật kết tinh lại Phơng pháp sắc ký líp máng ®Ĩ kiĨm tra ®é tinh khiÕt cđa chÊt vừa phân lập Dịch chiết n - hexan đợc phân tách sắc ký cột silicagen, dung môi giải hấp n - hexan / etylaxetat với lợng etylaxetat tăng từ 5% thu đợc nhiều phân đoạn khác Cất thu hồi dung môi, để yên tự nhiên không khí thấy có phân đoạn tạo đợc tinh thể Dùng kỹ thuật kết tinh lại nhiều lần dung môi thích hợp đà thu đợc chất Độ chất phân lập đợc kiểm tra sắc ký lớp mỏng ứng với hệ dung môi triển khai đà đợc lựa chọn cho vết tròn vết iot Quy trình phân lập tinh chế hợp chất từ dịch n - hexan rễ sài hồ nam đợc mô tả sơ đồ sau: SVTH: Lê Thu Hằng - 40E Hóa 19 Luận văn tốt nghiệp Cặn chiết n - Hexan Cặn chiết n-Hexan SK cột với dung môi giải hÊp lµ : n – hexan : etylaxetat SK cét với Dung môi giải hấp : n-Hecxan: etylaxetat 5% etylaxetat 0% etylaxetat 0% Etylaxetat Phân đoạn A 5% Etylaxetat Phân đoạn B Kết tinh lại Phân đoạn C Kết tinh lại Kết tinh lại Phân đoạn A n - hexan Phân đoạn B n - hexanPhân đoạnn-hexan: C trong etyl axetat= (95 : 5) T1 T2 T3 T1 T2 T3 Sơ đồ 3.2: Quy trình phân lập tinh chế số hợp chất từ RSH1 3.4 Một số đặc trng vật lý chất phân lập Hợp chất T1: Là tinh thể, hình kim, không màu, tan tèt CHCl 3, axeton, etylaxetat nhiƯt ®é nóng chảy 259 2600C, Rf = 0,72, hệ sắc ký lớp mỏng n - hexan : etylaxetat = : Hợp chất T2: Là tinh thể hình kim, không màu, tan tốt CHCl 3, axeton, etylaxetat Nhiệt độ nóng chảy 168 1690C, Rf = 0,37,trong hƯ s¾c ký líp máng n - hexan : etylaxetat = : Hỵp chÊt T1 T2 đợc kết tinh lại n - hexan SVTH: Lª Thu H»ng - 40E Hãa 20 ... thành phần hoá học sài hồ nhiều hạn chế Xuất phát từ thực tế chọn đề tài Tách xác định cấu trúc số hợp chất từ dịch chiết rễ sài hå nam (Pluchea pteropoda Hemsl.) ë DiƠn Ch©u - NghƯ An" Với mục đích... Lấy mẫu xác định tên khoa học Cây sài hồ nam đợc lấy vào tháng năm 2003 Diễn Hùng, Diễn Châu, Nghệ An Đặc điểm lấy mẫu là: Cây mọc hoang vùng ven biển Bộ phận nghiên cứu phần rễ sài hồ nam, sau... liệu sµi hå nam ë NghƯ An NhiƯm vơ cđa chóng luận văn là: Phân lập xác định cấu trúc hoá học hợp chất tách từ rễ sài hồ nam, sở đề xuất khả ứng dụng chúng thực tế Phần ii: tổng quan 2.1 Đặc điểm