TRNG I HC VINH KHOA NễNG - LM - NG -------------------------- HONG TH THU TRANG Nghiên cứu tác dụng của BOKASHI trầu lên sự phát triển của vi khuẩn AEROMONAS HYDROPHYLA gây bệnh đốm đỏ trên cá trắm cỏ (CTENOPHARYNGODON IDELLUS) KHO LUN TT NGHIP K S NUễI TRNG THU SN 1 VINH – 1/2009 LêI C¶M ¥N Trong thời gian thực tập và tiến hành thực hiện đề tài tốt nghiệp tôi đã nhận được sự hướng dẫn nhiệt tình, chu đáo của thầy giáo PGS.TS Nguyễn Kim Đường - giảng viên khoa Nông Lâm Ngư, trường Đại học Vinh và thầy giáo Thạc sĩ Nguyễn Ngọc Phước - giảng viên khoa Thủy sản, trường Đại học Nông Lâm Huế cùng các thầy cô giáo trong khoa Thủy sản, Đại học Nông Lâm Huế. Qua đây, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc nhất đến các thầy cô đã giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhất cho tôi hoàn thành tốt khoá luận này. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban giám hiệu Trường Đại học Vinh và Ban chủ nhiệm khoa Nông Lâm Ngư trường Đại học Vinh đã dạy dỗ và nâng đỡ cho tôi trong những năm học tập ở nhà trường và trong quá trình thực tập. Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc nhất đến với gia đình, những người thân, bạn bè đã quan tâm và động viên tôi trong suốt chặng đường dài đã qua. Tôi xin chân thành cảm ơn! Vinh, 1/2009 Sinh viên Hoàng Thị Thùy Trang 2 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT A.hydrophyla Aeromonas hydrophyla BA Blood Agar CFU Colony Forming Unit EM Effective microorganisms EUS Epizootic Ulcerative Syndrome of físh KIA Kligler Iron Agar MC Macconkey Agar MR - VP Methyl Red - Voges Proskauer NA Nutrien Agar DANH MỤC CÁC BẢNG Trang 3 3.1. Kết quả phân lập các loài vi khuẩn gây bệnh trên cá trắm cỏ 28 3.2. Kết quả sự biến động pH của các công thức tỷ lệ dấm 31 3.3. Kết quả sự biến động Brix của các công thức tỷ lệ dấm 32 3.4. Kết quả sự biến động pH của các công thức tỷ lệ rỉ đường 33 3.5. Kết quả sự biến động Brix của các công thức tỷ lệ rỉ đường 33 3.6. Kết quả thử nghiệm khả năng kháng khuẩn của các công thức ở thí nghiệm với các lượng dấm khác nhau. 34 3.7. Kết quả thử nghiệm khả năng kháng khuẩn của các công thức ở thí nghiệm với các lượng rỉ đường khác nhau. 35 3.8. Kết quả sàng lọc khả năng kháng khuẩn của bokashi trầu 36 3.9. Kết quả sàng lọc nồng độ ức chế vi khuẩn của bokashi trầu 37 3.10. Khả năng ức chế vi khuẩn của bokashi trầu 38 3.11. Khả năng tiêu diệt vi khuẩn của bokashi trầu 39 3.12. Kết quả so sánh độ nhạy của các loại kháng sinh và bokashi trầu trên vi khuẩn A. hydrophyla. 40 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1. Cá trắm cỏ Ctenopharyngodon idellus 3 Hình 2. Vi khuẩn A. hydrophyla có một tiêm mao 4 Hình 3. Cá trắm cỏ bị bệnh đốm đỏ do vi khuẩn A.hydrophyla 5 Hình 4. Thử nghiệm khả năng kháng khuẩn bằng phương pháp đục lỗ thạch 23 Hình 5. Vi khuẩn A.hydrophyla sau khi nhuộm Gram 29 4 Hình 6. Khuẩn lạc vi khuẩn A.hydrophyla trên môi trường BA 30 Hình 7. Khuẩn lạc vi khuẩn A.hydrophyla trên môi trường NA 30 Hình 8. Khuẩn lạc vi khuẩn A.hydrophyla trên môi trường MC 30 Hình 9. Kết quả tạo vòng kháng khuẩn cuả các công thức thí nghiệm 37 DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Trang Sơ đô 1. Sơ đồ sản xuất Bokashi trầu 21 Sơ đồ 2. Sơ đồ nghiên cứu tổng thể 25 Sơ đồ 3. Sơ đồ phân lập định danh vi khuẩn 26 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC Trang PHỤ LỤC I. TÌNH HÌNH CƠ BẢN CỦA CƠ SỞ NGHIÊN CỨU i 1. Điều kiện tự nhiên i 2. Tình hình kinh tế, xã hội i 3. Tình hình đào tạo, nghiên cứu và hợp tác quốc tế iii PHỤ LỤC II. HÌNH ẢNH VÀ BẢNG SỐ LIỆU CÁC THÍ NGHIỆM vi PHỤ LỤC HÌNH ẢNH vi Hình A. Thử các phản ứng sinh hóa vi Hình B. Nuôi cấy tăng sinh vi khuẩn vi Hình C. Thử khả năng diệt vi khuẩn của bokashi trầu vi PHỤ LỤC CÁC BẢNG vii Bảng 1. Ảnh hưởng tỷ lệ dấm lên pH của bokashi trầu trong quá trình lên men vii 5 Bảng 2: Ảnh hưởng tỷ lệ dấm lên Brix của bokashi trầu trong quá trình lên men viii Bảng 3. Ảnh hưởng tỷ lệ rỉ đường lên pH của bokashi trầu trong quá trình lên men ix Bảng 4. Ảnh hưởng tỷ lệ rỉ đường lên Brix của bokashi trầu trong quá trình lên men x Bảng 5. Đường kính vòng kháng khuẩn của bokashi trầu với các lượng dấm khác nhau xi Bảng 6.Đường kính vòng kháng khuẩn của bokashi trầu với các lượng rỉ đường khác nhau xii Bảng 7. Đường kính vòng diệt khuẩn các công thức bokashi trầu với lượng EM khác nhau xiii MỤC LỤC Lời cảm ơn Danh mục các từ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình . Danh mục các sơ đồ . Danh mục các phụ lục PHẦN I. NGHIÊN CỨU KHOA HỌC 1 MỞ ĐẦU . 1 CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 3 1.1. Đặc điểm của đối tượng nghiên cứu 3 6 1.1.1. Cá trắm cỏ 3 1.1.2. Vi khuẩn Aeromonas hydrophyla . 4 1.1.3. Chế phẩm EM và Bokashi trầu 6 1.2. Tình hình dịch bệnh đốm đỏ cá trắm cỏ . 7 1.2.1. Trên thế giới . 7 1.2.2. Tại Việt Nam 8 1.3. Tình hình sử dụng hợp chất chiết xuất từ thảo dược trong điều trị bệnh động vật thuỷ sản 10 1.3.1. Trên thế giới . 10 1.3.2. Tại Việt Nam 11 1.4. Tình hình sử dụng chế phẩm EM và Bokashi trầu 13 1.4.1. Trên thế giới . 13 1.4.2. Tại Việt Nam 14 7 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 17 2.1. Đối tượng nghiên cứu . 17 2.2. Vật liệu nghiên cứu . 17 2.2.1. Dụng cụ thí nghiệm 17 2.2.2. Môi trường và hoá chất 17 2.3. Nôị dung nghiên cứu . 18 2.4. Phương pháp nghiên cứu . 18 2.4.1. Phương pháp thu mẫu 18 2.4.2. Phương pháp nuôi cấy phân lập vi khuẩn 18 2.4.3. Nuôi cấy vi khuẩn 19 2.4.4. Phương pháp xác định mật độ vi khuẩn . 19 2.4.5. Phương pháp nhuộm vi khuẩn . 20 2.4.6. Phương pháp thử nghiệm kháng sinh đồ 21 8 2.4.7. Thiết kế thí nghiệm hoàn thiện quy trình sản xuất bokashi trầu 21 2.5. Phương pháp xử lý số liệu 27 2.6. Thời gian và địa điểm nghiên cứu . 27 CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN . 28 3.1. Kết quả phân lập, định danh vi khuẩn . 28 3.2. Kết quả hoàn thiện quy trình sản xuất bokashi trầu 31 3.2.1. Kết quả ảnh hưởng của tỷ lệ dấm đến quá trình lên men của bokashi trầu . 31 3.2.2. Kết quả ảnh hưởng của tỷ lệ rỉ đường đến quá trình lên men của bokashi trầu 32 3.2.3. Kết quả thử nghiệm khả năng kháng khuẩn của các công thức bokashi trầu . 34 3.3. Kết quả sàng lọc nồng độ kháng khuẩn của bokashi trầu 36 3.4. Kết quả sàng lọc nồng độ ức chế vi khuẩn của bokashi trầu 37 3.5. Kết quả thử nghiệm khả năng ức chế vi khuẩn của bokashi trầu 38 9 3.6. Kết quả thử nghiệm nồng độ tiêu diệt vi khuẩn của bokashi trầu . 39 3.7. Kết quả so sánh độ nhạy các loại kháng sinh và bokashi trầu trên chủng vi khuẩn phân lập được 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 1. Kết luận 42 2. Kiến Nghị . 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 44 PHẦN II. PHỤ LỤC i PHỤ LỤC I. TÌNH HÌNH CƠ BẢN CỦA CƠ SỞ NGHIÊN CỨU . i PHỤ LỤC II. HÌNH ẢNH VÀ BẢNG SỐ LIỆU CÁC THÍ NGHIỆM vi PHẦN I. NGHIÊN CỨU KHOA HỌC MỞ ĐẦU Nuôi trồng thủy sản có một tiềm năng mạnh mẽ nhằm đáp ứng các nhu cầu về sản phẩm thủy sản trên hầu hết các vùng của thế giới. Dân số thế giới ngày càng tăng và nhu cầu về các sản phẩm thủy sản cũng tăng theo trong khi sản lượng khai thác ngày một giảm đi. Điều này thúc đẩy việc mở rộng thêm 10