Đang tải... (xem toàn văn)
Luận văn
BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI - - Là THỊ NGUYỆT NGHIÊN CỨU TẠO DỊNG BƯỞI DIỄN VÀ CAM Xà ðỒI ðA BỘI BẰNG XỬ LÝ COLCHICINE TRONG ðIỀU KIỆN IN VITRO LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP CHUYÊN NGÀNH: DI TRUYỀN VÀ CHỌN GIỐNG CÂY TRỒNG Mà SỐ: 60 62 05 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN THỊ LÝ ANH HÀ NỘI - 2008 LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị Tơi xin cam đoan, giúp ñỡ cho việc thực luận văn cám ơn thơng tin trích dẫn ñều ñã ñược rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Lã Thị Nguyệt Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………i LỜI CẢM ƠN ðể hồn thành luận văn tơi nhận nhiều chia sẻ giúp đỡ Qua tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: - PGS TS Nguyễn Thị Lý Anh, người tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện, giúp đỡ tơi suốt thời gian thực đề tài hồn chỉnh luận văn - Tập thể thầy cô giáo môn Công nghệ sinh họctrường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ tơi q trình thực tập - Tập thể cán bộ môn Công nghệ sinh học- Viện nghiên cứu Rau Quả ñã tạo ñiều kiện giúp đỡ tơi hồn thành tốt đề tài tốt nghiệp - Cảm ơn gia đình, bạn bè, đồng nghiệp người thân động viên, giúp đỡ tơi suốt trình học tập Tác giả luận văn Lã Thị Nguyệt Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………ii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH viii PHẦN 1: MỞ ðẦU 1.1 ðẶT VẤN ðỀ .1 1.2 MỤC ðÍCH YÊU CẦU CỦA ðỀ TÀI 1.2.1 MỤC ðÍCH CỦA ðỀ TÀI 1.2.2 YÊU CẦU CỦA ðỀ TÀI .3 1.3 Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ Ý NGHĨA THỰC TIỄN CỦA ðỀ TÀI PHẦN II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TÌNH HÌNH SẢN XUẤT VÀ TIÊU THỤ QUẢ CÓ MÚI 2.1.1 SẢN XUẤT VÀ TIÊU THỤ QUẢ CÓ MÚI TRÊN THẾ GIỚI 2.1.2 SẢN XUẤT VÀ TIÊU THỤ QUẢ CÓ MÚI TRONG NƯỚC 2.1.3 TẦM QUAN TRỌNG CỦA SẢN XUẤT CÂY ĂN QUẢ CÓ MÚI .7 2.2 GIỚI THIỆU CHUNG VỀ CÂY BƯỞI DIỄN VÀ CÂY CAM Xà ðOÀI 2.3 NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ SINH HỌC TRONG CHỌN TẠO GIỐNG CÂY ĂN QUẢ CÓ MÚI 11 2.3.1 ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ SINH HỌC TRONG CHỌN TẠO GIỐNG CÂY CÓ MÚI TRÊN THẾ GIỚI 11 2.3.2 ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ SINH HỌC TRONG CHỌN TẠO GIỐNG CÂY CÓ MÚI Ở VIỆT NAM 13 2.4 NGHIÊN CỨU XỬ LÝ ðA BỘI THỰC NGHIỆM TRONG CHỌN TẠO GIỐNG 14 2.4.1 CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA GÂY TẠO ðA BỘI THỰC NHIỆM 14 2.4.3 NGUYÊN TẮC VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ ðA BỘI THỂ 16 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………iii 2.4.4 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ ðA BỘI THỂ BẰNG COLCHICINE 17 PHẦN III:VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 VẬT LIỆU, ðỊA ðIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 22 3.1.1 VẬT LIỆU 22 3.1.2 ðỊA ðIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU 22 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 22 3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.3.1.BỐ TRÍ THÍ NGHIỆM 23 3.3.2 PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 26 3.3.3.CÁCH TÍNH CÁC CHỈ TIÊU 29 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 4.1.HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN NHANH IN VITRO Ở BƯỞI DIỄN VÀ CAM Xà ðOÀI 31 4.1.1 NGHIÊN CỨU ẢNH HUỞNG CỦA MÔI TRƯỜNG TỚI KHẢ NĂNG TẠO CHỒI Ở HAI GIỐNG BƯỞI DIỄN VÀ CAM Xà ðOÀI 31 4.1.2 NGHIÊN CỨU ẢNH HUỞNG CỦA VẬT LIỆU NUÔI CẤY BAN ðẦU TỚI KHẢ NĂNG TẠO CHỒI CỦA HAI GIỐNG BƯỞI DIỄN VÀ CAM Xà ðOÀI 35 4.1.3 ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ðIỀU TIẾT SINH TRƯỞNG ðẾN KHẢ NĂNG TẠO CỤM CHỒI IN VITRO CỦA GIỐNG BƯỞI DIỄN VÀ CAM Xà ðOÀI 38 4.1.4 ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ðIỀU TIẾT SINH TRƯỞNG ðẾN KHẢ NĂNG TẠO CÂY IN VITRO CỦA GIỐNG BƯỞI DIỄN VÀ CAM Xà ðOÀI 47 4.2 NGHIÊN CỨU TẠO CÂY ðA BỘI BẰNG XỬ LÝ COLCHICINE IN VITRO 54 4.2.1 ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ðỘ VÀ THỜI GIAN XỬ LÝ COLCHICINE ðẾN TỶ LỆ SỐNG VÀ TỶ LỆ BIẾN DỊ CỦA CHỒI BƯỞI DIỄN, CAM Xà ðOÀI 55 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………iv 4.2.2 KHẢ NĂNG PHỤC HỒI CỦA CÁC CHỒI IN VITRO SAU XỬ LÝ COLCHICINE 62 4.2.3 PHÂN LOẠI CÁC CHỒI THU ðƯỢC SAU XỬ LÝ COLCHICINE 67 4.2.4 PHÂN TÍCH ðỘ BỘI CỦA CÁC DẠNG CHỒI SAU XỬ LÝ COLCHICINE BẰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ðỊNH GIÁN TIẾP HÀM LƯỢNG ADN 72 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 78 5.1 KẾT LUẬN 78 5.2 ðỀ NGHỊ 80 TÀI LIỆU THAM KHẢO 81 PHỤ LỤC 85 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………v DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT α-NAA 1-Naphthaleneacetic acid BAP Benzyl adenin tetrahydropyranyl BD Bởi Diễn CXĐ Cam X Đoài CT Công thức CTTD Chỉ tiêu theo dõi CTTN Công thøc thÝ nghiƯm §/C §èi chøng IBA β-indol butyric acid MS Murashige & Skoog, 1962 MT Murashige & Tooker CNSH Công nghệ sinh học NST Nhiễm sắc thể NXB Nhà xuất ppm Nồng độ mg/l TB Trung bình Trng ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………vi DANH MỤC CÁC BẢNG S bng Tờn bng Trang 2.1 Diện tích, suất sản lợng số có múi 2.2 Diện tích, suất sản lợng số ăn chủ lực 4.1 ảnh hởng môi trờng nuôi cấy tới khả tạo chồi từ chồi đỉnh hai giống Diễn cam X Đoài 32 4.2 ảnh hởng vật liệu nuôi cấy ban đầu đến khả tạo chồi in vitro hai giống Diễn cam X Đoài môi trờng MT 37 4.3 ảnh hởng BAP đến hình thành cụm chồi in vitro hai giống Diễn cam X Đoài 40 4.4 ảnh hởng Adenin đến khả hình thành cụm chồi in vitro hai giống Diễn cam X Đoài 42 4.5a ảnh hởng tổ hợp BAP Adenin đến khả hình thành cụm chồi in vitro cđa gièng b−ëi DiƠn 44 4.5b ảnh hởng tổ hợp BAP Adenin đến khả hình thành cụm chồi in vitro giống cam X Đoài 44 4.6 ảnh hởng - NAA đến khả rƠ in vitro cđa chåi b−ëi DiƠn vµ cam X Đoài 49 4.7 ảnh hởng IBA đến khả rƠ in vitro cđa chåi b−ëi DiƠn vµ cam X Đoài 51 4.8a ảnh hởng tổ hợp -NAA IBA đến hình thành rễ in vitro cđa chåi b−ëi DiƠn 52 4.8b ¶nh h−ëng cđa tỉ hợp -NAA IBA đến hình thành rễ in vitro chồi cam X Đoài 54 4.9a ¶nh h−ëng cđa xư lý Colchicine in vitro b−ëi DiƠn 57 4.9b ¶nh h−ëng cđa xư lý Colchicine in vitro cam X Đoài 59 4.10a Sự phơc håi cđa chåi b−ëi DiƠn sau xư lý Colchicne in vitro 62 4.10b Sù phơc håi cđa chồi cam X Đoài sau xử lý Colchicine in vitro 63 4.11 Đặc điểm hình thái dạng chåi sau xö lý Colchicine 67 4.12a Tû lệ dạng chồi Diễn sau xử lý Colchicine 69 4.12b Tỷ lệ dạng chồi cam X Đoài sau xử lý Colchicine 71 4.13 Hiệu xử lý Colchicine in vitro đến tạo chồi đa bội 76 Trng i học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ………………………vii DANH MỤC CÁC HÌNH ẢNH Số hình 4.1 Tên hình Trang ảnh hưởng mơi trường nuôi cấy tới chiều cao chồi số chồi TB giống Bưởi Diễn 33 4.2 ảnh hưởng môi trường nuôi cấy tới chiều cao chồi số chồi TB giống cam Xã ðoài 33 4.3 ảnh hưởng môi trường tới khả tạo chồi từ chồi ñỉnh hai giống bưởi Diễn cam Xã ðoài 34 4.4 ảnh hưởng vật liệu ni cấy tới động thái chồi giống Bưởi Diễn 36 4.5 ảnh hưởng vật liệu ni cấy tới động thái chồi giống cam Xã ðoài 36 4.6 ảnh hưởng tổ hợp BAP Adenin tới khả hình thành chồi in vitro giống cam Xã ðoài 47 4.7 ảnh hưởng xử lý Colchicine ñến tỷ lệ mẫu sống tỷ lệ chồi biến dị giống bưởi Diễn 58 4.8 ảnh hưởng xử lý Colchicine ñến tỷ lệ chồi sống tỷ lệ biến dị giống cam Xã ðoài 58 4.9 ảnh hưởng xử lý Colchicine in vitro ñối với hai giống bưởi Diễn cam Xã ðoài61 4.10 Khả phục hồi chồi Bưởi Diễn cam Xã ðoài sau xử lý Colchicine in vitro 64 4.11 Khả phục hồi chồi Bưởi Diễn cam Xã ðoài sau xử lý Colchicine in vitro 66 4.12 Các dạng chồi bưởi Diễn cam Xã ðồi thu sau xử lý Colchicine in vitro 69 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………viii PHẦN 1: MỞ ðẦU 1.1 ðặt vấn ñề Phát triển trồng ăn Việt Nam ñang ñược xem hướng quan trọng ñể phát triển nơng nghiệp hàng hố, vấn ñề an ninh lương thực ñã ñược giải Nhiều lồi ăn có giá trị kinh tế cao chuối, dứa, có múi ñã ñược trồng với diện tích lớn trở thành chủ đạo nhiều vùng Tuy có phong phú chủng loại giống có suất cao, chất lượng tốt ñáp ứng ñược yêu cầu thị trường, ñặc biệt yêu cầu ăn tươi xuất Tính trạng khơng hạt có vai trị quan trọng sản xuất có múi chất lượng cao Nhiều hạt làm giảm giá trị thương phẩm công nghiệp chế biến nước gây nên ngon ăn tươi Vì thế, việc tạo giống ăn có múi không hạt mục tiêu quan trọng hàng đầu cơng tác chọn tạo giống ðồng thời hướng đầy triển vọng khơng hạt tiêu chuẩn thị trường có múi ðể có tam bội khơng hạt người ta thực theo ba hướng chính: thu thể tam bội tự nhiên hình thành từ phơi hợp tử hạt nhỏ, hạt phát triển giống Hai dung hợp tế bào trần thể ñơn bội thể nhị bội Ba tạo thể tứ bội sau ñó lai với thể nhị bội ñể tạo tam bội thể Một ñường hướng tạo tam bội khơng hạt nhà khoa học Việt nam giới ñã ñang quan tâm tạo thể tứ bội sau lai với thể nhị bội Nhiều nghiên cứu trước ñây ñã khẳng ñịnh q trình tiến hố, lồi chi Citrus xuất số dạng đa bội hố tự nhiên [15] Vì ta chọn tạo tứ bội tự nhiên Bên cạnh đó, dạng tứ bội (allotetraploid) tạo hàng loạt Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………1 ... thành rễ in vitro chồi cam X Đoài 54 4.9a ¶nh h−ëng cđa xư lý Colchicine in vitro b−ëi DiƠn 57 4.9b ¶nh hởng xử lý Colchicine in vitro cam X Đoài 59 4.10a Sù phơc håi cđa chåi... lý Colchicine in vitro 64 4.11 Khả phục hồi chồi Bưởi Diễn cam Xã ðoài sau xử lý Colchicine in vitro 66 4.12 Các dạng chồi bưởi Diễn cam Xã ðồi thu sau xử lý Colchicine in vitro. .. Colchicne in vitro 62 4.10b Sự phục hồi chồi cam X Đoài sau xử lý Colchicine in vitro 63 4.11 Đặc điểm hình thái dạng chồi sau xử lý Colchicine 67 4.12a Tỷ lệ dạng chồi b−ëi DiƠn sau xư lý Colchicine