Đang tải... (xem toàn văn)
luận văn
Bộ giáo dục đào tạo trờng đại học nông nghiÖp I vũ thị lan hơng Nghiên cứu tình hình phơi nhiễm virus: Transmissible Gastroenteritis Virus (TGEV), Porcine Epidermic Diarrhea Virus (PEDV) Rotavirus (RV) lợn phơng pháp Ab-ELISA Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ng nh: Thó y M· sè: 60.62.50 Ng−êi h−íng dÉn khoa học: ts nguyễn viết không Hà Nội - 2007 Lời cam đoan Tôi xin cam đoan l công trình nghiên cứu riêng Các kết v số liệu thể luận văn n y l trung thực v cha đợc sử dụng để bảo vệ học vị n o Tôi cam đoan thông tin trích dẫn luận văn đ đợc rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Vũ Thị Lan Hơng i Lời cảm ơn Để ho n th nh luận văn tốt nghiệp n y ngo i cố gắng v nỗ lực thân, đ nhận đợc nhiều giúp đỡ quý báu cá nhân v tập thể Nhân dịp n y cho phép đợc b y tỏ lòng biết ơn chân th nh tới: Ban giám hiệu, thầy cô giáo Khoa Sau đại học, Khoa Thú y Trờng Đại học Nông nghiệp I đ đ o tạo v truyền tải kiến thức khoa học cho suốt trình học tập trờng Ban l nh đạo Viện Thú y tập thể cán bộ, nhân viên - Bộ môn Hoá sinh - Miễn dịch - Bệnh lý, Viện Thú y, đ tạo điều kiện giúp đỡ thực đề t i tốt nghiệp Đặc biệt, xin b y tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo: TS Nguyễn Viết Không - thầy giáo đ trực tiếp hớng dẫn, tận tình giúp đỡ suốt trình thực v ho n th nh luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới bạn bè, đồng nghiệp v ngời thân đ quan tâm, ủng hộ v động viên suốt trình học tập v tiến h nh luận văn Xin chân th nh cảm ơn! Tác giả luận văn Vũ Thị Lan Hơng ii Danh mục chữ viÕt t¾t Ab-ELISA : Antibody - Enzyme Link Immuno Sorbent Assay (Phản ứng miễn dịch gắn enzyme phát kháng thĨ) CPE : Cytopathogenic Effect (BƯnh tÝch tÕ b o) cDNA : Complementary Deoxyribonucleic Acid DNA : Deoxyribonucleic Acid ELISA : Enzyme Link Immuno Sorbent Assay (Phản ứng miễn dịch g¾n enzyme) FAO : Food and Agriculture Organization (Tỉ chøc Nông - Lơng Liên hiệp quốc) HCTC : Hội chứng tiêu chảy KN : Kháng nguyên KT : Kháng thể OIE : Office Internationable des Epizooties (Tỉ chøc b¶o vƯ sức khoẻ động vật Thế giới) OD : Optical Density (MËt ®é quang häc) OPD : Ortho-phenylene diamine PBS : Phosphate Buffered Saline PCR : Polymerase Chain Reaction PEDV : Porcine Epidermic Diarrhea Virus RNA : Ribonucleic Acid RT - PCR : Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction RV : Rotavirus TGE : Bệnh viêm d y - ruột trun nhiƠm TGEV : Transmissible Gastro Enteritis Virus VRTC : Virus tiêu chảy iii mục lục Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng v Danh mục đồ thị, biểu đồ vi Đặt vÊn ®Ị 1 Tỉng quan t i liƯu v sở khoa học đề t i 1.1 Hội chứng tiêu chảy .3 1.1.1 Kh¸i niƯm .3 1.1.2 Những nguyên nhân hội chứng tiêu chảy .3 1.2 Tình hình nghiên cứu virus gây tiêu chảy phổ biến lợn 1.2.1 Tình hình nghiên cứu giíi .5 1.2.2 T×nh h×nh nghiªn cøu n−íc 1.3 Bệnh tiêu chảy số virus gây 1.3.1 BÖnh viêm d y - ruột truyền nhiễm lợn (TGE) .8 1.3.2 Bệnh dịch tiêu chảy truyền nhiƠm ë lỵn (PED) 14 1.3.3 Bệnh tiêu chảy Rotavirus lợn 17 1.4 MiƠn dÞch häc 22 1.4.1 Phân loại miễn dịch 22 1.4.2 Các giai đoạn đáp ứng miễn dịch đặc hiệu 23 1.4.3 Quy luật hình th nh kháng thể đặc hiệu 24 1.4.4 Các yếu tố ảnh hởng đến trình sản sinh kháng thể 25 1.5 MiƠn dÞch chèng virus 25 1.5.1 Cơ chế bảo vệ không đặc hiệu 26 1.5.2 Cơ chế bảo vệ đặc hiệu 26 1.5.3 MiÔn dịch bệnh tiêu chảy virus lợn 28 1.6 Chẩn đoán bệnh tiêu chảy virus 29 1.6.1 Dựa v o đặc điểm dịch tễ học 29 1.6.2 Dùa v o triệu chứng, bệnh tích điển hình 29 1.7 Chẩn đoán phòng thí nghiệm 32 1.7.1 Ph¶n øng ELISA 32 1.7.2 Ph¶n øng PCR 37 1.7.3 Ph¶n øng trung ho virus (Virus neutralization test) 38 1.8 C¸c phơng pháp phòng bệnh tiêu chảy virus 39 1.8.1 VƯ sinh phßng bƯnh 39 1.8.2 V¾c xin phßng bƯnh 39 1.8.3 Quản lý v chăm sóc đ n nhiễm bÖnh 40 iv Nội dung, nguyên liệu v phơng pháp nghiên cứu 41 2.1 Đối tợng nghiên cứu 41 2.2 Néi dung nghiªn cøu 41 2.3 Địa điểm, thời gian nghiªn cøu 41 2.4 Nguyªn liƯu 41 2.4.1 HuyÕt 41 2.4.2 Kháng nguyên chuẩn, kháng thể chuẩn 41 2.4.3 Ho¸ chÊt, sinh phÈm cho ELISA 42 2.4.4 Dông cô, máy móc, thiết bị 43 2.5 Phơng pháp nghiên cứu 44 2.5.1 Phơng pháp lÊy mÉu 44 2.5.2 Phơng pháp ELISA chuẩn độ hai chiều 44 2.5.3 Phơng pháp Ab-ELISA 46 KÕt qu¶ v th¶o luËn 50 3.1 Kết xác định ®iỊu kiƯn ELISA 50 3.2 Kết bớc đầu áp dụng Ab-ELISA 53 3.3 KÕt qu¶ thu thËp mÉu 55 3.4 Kết phát hịên kháng thể kháng TGEV, PEDV, RV lợn nái 56 3.5 Kết xác định tỷ lệ mang kháng thể kháng TGEV, PEDV v RV ë lỵn theo mĐ 59 3.6 Kết phát kháng thể kháng TGEV, PEDV v RV lợn thịt 60 3.7 Phơi nhiễm TGEV, PEDV v RV lợn nái, kháng thể lợn 62 3.8 Phơi nhiễm TGEV, PEDV v RV lợn nái v lợn thịt 65 Kết luận v đề nghị 67 4.1 KÕt luËn 67 4.2 Đề nghị 67 T i liƯu tham kh¶o 68 5.1 TiÕng ViÖt 68 5.2 TiÕng Anh 71 v Danh mục bảng TT Tên bảng Trang Bảng 01-01 Đặc điểm số bệnh tiêu chảy lợn 29 Bảng 01-02 Một số enzyme v chất tơng ứng phản ứng 36 ELISA Bảng 02-01 Sơ đồ ELISA chuẩn độ hai chiều 45 Bảng 02-02 Sơ đồ Ab-ELISA phát kháng thể 46 Bảng 03-01 Kết chuẩn độ kháng nguyên v huyết 51 Ab-ELISA phát kháng thể kháng PEDV Bảng 03-02 Kết thu thËp mÉu huyÕt 55 B¶ng 03-03 KÕt qu¶ Ab-ELISA mẫu huyết lợn nái 56 Bảng 03-04 Kết Ab-ELISA mẫu huyết lợn theo 59 mĐ B¶ng 03-05 KÕt qu¶ Ab-ELISA cđa mÉu hut lợn choai 61 Bảng 03-06 Tình trạng phơi nhiễm TGEV, PEDV v RV lợn nái 63 v lợn theo mẹ Bảng 03-07 Tình trạng phơi nhiễm TGEV, PEDV v RV nái v 65 lợn thịt Bảng 03-08 Tình trạng phơi nhiễm lúc loại virus trở lên vi 66 Danh mục biểu đồ, hình TT Tên biểu đồ, hình Trang Hình 01-01 Hình thái TGEV Hình 01-02 Mô hình cấu trúc TGEV Hình 01-03 Hình thái RV 17 Hình 01-04 Mô hình RV 17 Hình 01-05 Lông nhung ruột non thoái hoá RV 21 Hình 01-06 Sơ đồ nguyên lý phản ứng RT-PCR 38 Hình 03-01 Hình ảnh Ab-ELISA chuẩn độ chiều kháng 51 nguyên v kháng thể kháng PEDV Hình 03-02 Kết chuẩn độ chiều kháng nguyên v 52 kháng thể kháng PEDV Hình 03-03 Minh hoạ kết Ab-ELISA mẫu huyết lợn 54 Hình 03-04 Dơng tính huyết học với TGEV, PEDV, RV 57 Hình 03-05 Dơng tính hut häc víi TGEV, PEDV, RV ë 61 lỵn choai v lợn thịt Hình 03-06 Tỷ lệ % dơng tính huyết học lợn nái v lợn 63 Hình 03-07 Tỷ lệ % dơng tính huyết học lợn nái v lợn thịt vii 65 Đặt vấn đề Trong năm gần đây, với ph¸t triĨn nhanh chãng cđa nỊn kinh tÕ n−íc ta, ng nh chăn nuôi nói chung v chăn nuôi lợn nói riêng không ngừng phát triển, trở th nh ng nh sản xuất nông nghiệp H ng năm, tổng đ n lợn tăng 8,1% v sản lợng thịt lợn tăng 8,6% Theo kế hoạch phủ, đến năm 2010 Việt Nam có 25 triệu lợn, ng nh chăn nuôi lợn cung cấp triệu thịt v sản phẩm chế biến từ thịt lợn, chiếm 30% tổng thu nhập nông nghiệp Theo thống kê Tổ chức Nông Lơng Thế giới (FAO), Việt Nam l nớc có số đầu lợn đứng thứ giới, đứng thứ châu v đứng đầu khu vực Đông Nam [14] Theo Niên giám thống kê năm 2006 [29], nay, tổng đ n lợn Việt Nam đ đạt mức 27 triệu con, đáp ứng khoảng 80% sản phẩm thịt thị trờng nội địa v đóng góp phần cho xuÊt khÈu [2] Tuy nhiªn, xu thÕ héi nhËp, với nhu cầu không ngừng tăng to n x hội v đa dạng hoá thị trờng v ngo i nớc, ng nh chăn nuôi lợn Việt Nam đứng trớc thử thách sản lợng v chất lợng thịt Để phát triển bền vững ng nh chăn nuôi lợn, ngo i công tác giống, thức ăn v phơng thức chăn nuôi, công tác thú y ng y c ng trở nên quan trọng để đáp ứng yêu cầu vệ sinh an to n thùc phÈm cho ng−êi v hiƯn t×nh h×nh dịch bệnh lợn diễn biến phức tạp Các bệnh gây thiệt hại cho ng nh chăn nuôi lợn Việt Nam đợc biết đến bao gồm bệnh dịch tả lợn, phó thơng h n lợn, ®ãng dÊu lỵn, tơ hut trïng lỵn [16], bƯnh lë måm long mãng, v mét sè bƯnh th−êng xuyªn nan giải khác nh dịch bệnh tai xanh gần đây, bệnh suyễn lợn, hội chứng tiêu chảy lợn Ng nh thú y Việt Nam đ đạt đợc th nh tựu phòng chống dịch bệnh chủ yếu [16], không ngừng áp dụng tiến khoa học công tác phòng v khống chế bệnh nguy hiểm nh dịch tả lợn [10], v bớc đầu quan tâm đến bệnh nan giải, tìm giải pháp có khả khống chế bệnh suyễn lợn [18], đ thử nghiệm nhiều giải pháp phòng chống hội chứng tiêu chảy vi khuẩn lợn [8,19,23],[12,17,24] Tuy nhiên, tiêu chảy lợn l vấn đề đáng lo ngại, phổ biÕn, th−êng trùc ë mäi n¬i, mäi mïa, mäi hình thức chăn nuôi, gây nên thiệt hại kinh tế đầu v o, l m giảm đầu lợn, giảm tăng trọng Tiêu chảy lợn l hội chứng nhiều nguyên nhân [15] Trong số nguyên nhân truyền nhiễm, nghiên cứu trớc đ tập trung xác định đợc vai trò loại vi khuẩn chủ yếu (E.coli, Salmonella, Cl perfringens) gây tiêu chảy lợn con, nhng cha có thông tin có mặt v vai trò virus tiêu chảy phổ biến lợn Thông tin có mặt virus gây tiêu chảy phổ biến lợn l cần thiết v quan trọng trớc nghiên cứu vai trò chúng nh tìm hiểu sở dịch tễ học, đề xuất biện pháp phòng trị hội chứng tiêu chảy Trên giới, nghiên cứu hội chứng tiêu chảy lợn đ hai nhóm virus gây tiêu chảy phổ biến, l nhóm Coronavirus v Rotavirus Đại diện cđa nhãm n y cã c¸c virus: Transmissible Gastroenteritis Virus (TGEV), Porcine Epidermic Diarrhea Virus (PEDV) v Rotavirus (RV) Ab-ELISA l phơng pháp đặc hiệu, tiêu chuẩn, phổ biến v nhanh để xác định tỷ lệ phơi nhiễm (ám có mặt virus) virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV [34],[35] Để xác định khả có mặt virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV hội chứng tiêu chảy lợn, đợc chấp thuận khoa Thú Y trờng Đại Học Nông Nghiệp I v Bộ môn Hóa Sinh, Miễn Dịch v Bệnh Lý, Viện Thú Y, tiến h nh đề t i: "Nghiên cứu tình hình phơi nhiễm virus: Transmissible Gastroenteritis Virus (TGEV), Porcine Epidermic Diarrhea Virus (PEDV) v Rotavirus (RV) lợn phơng pháp Ab-ELISA" Mục tiêu đề t i: Biết đợc khả có mặt virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV lợn v trạng phơi nhiễm ý nghĩa đề t i: Đề t i trả lời câu hỏi có hay virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV lợn Việt Nam v tình trạng phơi nhiễm (loại phổ biến nhất), cung cấp thông tin vai trò virus gây tiêu chảy phổ biến Việt Nam B¶ng 03-05 KÕt qu¶ Ab-ELISA cđa mÉu hut lợn choai Tỉnh Số Dơng tính huyết học mẫu xÐt nghiÖm TGEV PEDV RV Sè mÉu Tû lÖ Sè mÉu Tû lÖ Sè mÉu Tû lÖ (+) % (+) % (+) % Hải Dơng 40 14 35 13 32,5 12 30 H−ng Yªn 40 20 15 Thái Bình 40 10 25 12,5 20 VÜnh Phóc 40 20 15 (+): dơng tính huyết học 40 Hải Dơng 35 Hng Yên Tỷ lệ (%) 30 Thái Bình 25 Vĩnh Phúc 20 15 10 TGEV PEDV RV H×nh 03-05 D−¬ng tÝnh hut häc víi TGEV, PEDV, RV ë lợn choai v lợn thịt 61 Nhận xét: Kết Ab-ELISA bảng 03-05, v hình 03-05 phát kháng thể kháng TGEV, PEDV v RV lợn choai v lợn thịt cho thấy: (1) Lợn phát triển ® cã tiÕp xóc víi virus, chøng tá c¸c virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV lu h nh địa phơng đề t i đ lấy mẫu nghiên cứu (2) Dao động cđa tû lƯ d−¬ng tÝnh hut häc phơ thc v o địa điểm lấy mẫu v tuỳ thuộc v o loại virus; thí dụ TGEV biến động từ 20% ®Õn 35%; PEDV kho¶ng 5% ®Õn 32,5% v RV từ 15% đến 30% Kiểu biến động tơng đối tơng ®ång víi kiĨu biÕn ®éng vỊ tû lƯ ph¬i nhiƠm lợn nái nhng mức thấp Trong trờng hợp TGEV, tỷ lệ phơi nhiễm dao động tuỳ địa điểm thu thập mẫu, từ 35% (Hải Dơng) đến 25 % (Thái Bình) v 20% (Vĩnh Phúc v Hng Yên) Tình hình phơi nhiễm lợn thịt virus gây tiêu chảy phổ biến nh TGEV l phù hợp với kết nghiên cứu Morin M v cộng [46] Nhóm tác giả đ nghiên cứu bệnh TGE nhóm lợn thịt từ đến tháng tuổi; tổn thơng hệ thống tiêu hoá (đặc biệt ruột non) không nghiêm trọng v tr n lan nh lợn giai đoạn mẫn cảm (dới 14 ng y tuổi) [42] Các tác giả đ đa chứng chứng tỏ lợn thịt sau virus xâm nhập biểu lâm s ng chØ cã biĨu hiƯn l©m s ng ë thĨ nhĐ, nhng thải thải virus môi trờng qua phân v dịch tiết khác 3.7 Phơi nhiễm TGEV, PEDV v RV lợn nái, kháng thể lợn Tình trạng phơi nhiễm lợn nái v tỷ lệ lợn theo mẹ mang kháng thể đợc tổng hợp bảng 03-06, minh hoạ biểu đồ hình 03-06 62 Bảng 03-06 Tình trạng phơi nhiễm TGEV, PEDV v RV lợn nái v lợn theo mẹ Dơng tính huyết học (%) Lợn nái Lợn theo mẹ Sè Sè mÉu Tû lÖ Sè Sè mÉu Tû lÖ xÐt nghiÖm (+) % xÐt nghiÖm (+) % TGEV 160 63 39,38 160 13 8,13 PEDV 160 67 41,88 160 15 9,38 RV 160 65 40,63 160 16 10 45 Tû lÖ (%) 40 35 TGEV PEDV 30 RV 25 20 15 10 Lợn nái Lợn theo mẹ Hình 03-06 Tỷ lệ % dơng tính huyết học lợn nái v lợn Nhận xét: Tỷ lệ phơi nhiễm lợn nái virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV l gần tơng đơng, khoảng 40%, tỷ lệ lợn theo mẹ mang kháng thể dao động phạm vi 8-10%, sai khác không đáng kể loại virus 63 Dơng tính huyết học lợn nái phản ánh tích luỹ số lần tiếp xúc với mầm bệnh Nghĩa l , lợn c ng sống lâu khả tiếp xúc với mầm bệnh c ng lớn, khả mang kháng thể kháng virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV c ng cao Tuy nhiên, không loại trừ khả lợn nái đ tiếp xúc với mầm bệnh lâu, mức kháng thể giảm xuống dới ngỡng phát Nghiên cứu Curtis v cộng [36] đáp ứng miễn dịch lợn cho biết có lớp kháng thể chủ yếu đợc sản sinh trớc kích thích kháng nguyên bao gồm IgA (chủ u tiÕt qua s÷a, tun n−íc bät v thĨ hiƯn niêm mạc ruột non), IgM v IgG ELISA phát kháng thể lớp IgG lợn theo mẹ phản ánh tình trạng miễn dịch thụ động lợn con, tỷ lệ dơng tính huyết học lợn theo mẹ phản ánh khả chống bệnh thụ động v gián tiếp phản ảnh tình trạng phơi nhiễm lợn mẹ Tỷ lệ dơng tính huyết học ë lỵn theo mĐ chØ 10% cã thĨ (1) lợng kháng thể đặc hiệu đ giảm nhiều phần lớn lợn đợc thu thập mẫu lứa tuổi đ gần cai sữa; (2) số lớn số 40% lợn nái dơng tính có h m lợng IgG đặc hiệu virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV thấp sữa đầu; v (3) số lợn đủ sữa đầu Tuy nhiên, số 10% lợn theo mẹ cho dơng tính huyết học, nghĩa l chúng đ nhận đợc kháng thể IgG đặc hiệu qua sữa đầu, gián tiếp chứng tỏ tỷ lệ định lợn nái đ phơi nhiễm mầm bệnh Theo nghiên cứu dịch tễ học giới, bệnh virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV xảy lần đầu vùng n o đó, bệnh nổ dới dạng dịch bùng phát gây chết gần nh 100% lợn lứa tuổi mẫn cảm Dạng dịch tiêu chảy h ng loạt virus gây tiêu chảy phổ biến không xảy địa phơng đ điều tra Phải chăng, tỷ lệ dơng tính huyết học tơng đối cao đ n nái cho mức 64 miễn dịch [55] đảm bảo bảo hộ cho lợn qua khỏi giai đoạn mẫn cảm (1-14 ng y tuổi) v không xảy dịch tiêu chảy bùng phát 3.8 Phơi nhiễm TGEV, PEDV v RV lợn nái v lợn thịt Tình trạng phơi nhiễm lợn nái v lợn thịt đợc tổng hợp bảng 03-07, mô tả dạng biểu đồ hình 03-07, v tình trạng phơi nhiễm cïng lóc víi v sè c¸c virus l TGEV, PEDV v RV đợc trình b y bảng 03-08 Bảng 03-07 Tình trạng phơi nhiễm TGEV, PEDV v RV nái v lợn thịt Dơng tính huyết học (%) Lợn nái Lợn thịt Số Số mẫu Tû lÖ Sè Sè mÉu Tû lÖ xÐt nghiÖm (+) % xÐt nghiÖm (+) % TGEV 160 63 39,38 160 40 25 PEDV 160 67 41,88 160 22 13,75 RV 160 65 40,63 160 32 20 Tû lÖ (%) 45 40 35 TGEV PEDV RV 30 25 20 15 10 Lợn nái Lợn thịt Hình 03-07 Tỷ lệ % dơng tính huyết học lợn nái v lợn thịt 65 Bảng 03-08 Tình trạng phơi nhiễm lúc loại virus trở lên Dơng tính huyết học (%) Lợn nái Số xét Lợn thịt Số mẫu Tû lÖ Sè xÐt Sè mÉu Tû lÖ nghiÖm (+) % nghiÖm (+) % TGEV+PEDV 160 39 24,38 160 4,38 TGEV+ RV 160 29 18,13 160 12 7,50 PEDV+RV 160 39 24,38 160 4,38 TGEV+PEDV+RV 160 23 14,38 160 1,88 NhËn xÐt: (1) Tû lƯ ph¬i nhiƠm lợn nái cao hẳn lợn thịt (bảng 0307 v hình 03-07) Sự khác biệt n y đợc hiểu nh l kiện tất yếu tích luỹ số lần phơi nhiễm lợn nái cao nhiều tuổi (2) Điều quan trọng l phơi nhiễm lợn thịt phản ảnh rõ r ng virus lu h nh (3) Tỷ lệ phơi nhiễm lợn thịt cao đối víi TGEV (25%) tiÕp ®ã ®Õn RV (20%) v thÊp nhÊt l (13,75%) Sù kh¸c biƯt n y cã thĨ (i) hầu hết lợn mắc PEDV đ chết, số mắc RV v TGEV chết hơn; (ii) TGEV lu h nh phổ biến RV v lần lợt đến PEDV Khả thứ cao báo cáo dịch tiêu chảy h ng lo¹t virus v qua sè liƯu thu thập đợc tỷ lệ phơi nhiễm PEDV Vĩnh Phúc l thấp mức gần nh tỉnh Hải Dơng, Hng Yên v Thái Bình (4) Trong mức phơi nhiễm lúc từ hai loại virus trở lên lợn nái l cao (18,13 đến 24,38% phơi nhiễm loại virus v 14,38% phơi nhiễm loại virus), nhng thấp lợn thịt (4,38 đến 7,05% phơi nhiễm loại virus v 1,88% phơi nhiễm loại virus, bảng 03-08) Kết n y chứng tỏ loại virus tồn nhng lu h nh mức thấp, không ¹t v Ýt giao thoa 66 KÕt luËn vµ đề nghị 4.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu trên, rút số kết luận sau: (1) Đ thiết lập đợc phản ứng Ab-ELISA phát kháng thể kháng virus gây tiêu chảy phỉ biÕn TGEV, PEDV, RV v øng dơng th nh công phòng thí nghiệm (2) Đ đánh giá đợc trạng phơi nhiễm virus gây tiêu chảy phỉ biÕn TGEV, PEDV v RV, tû lƯ ph¬i nhiƠm lợn nái cao trung bình mức 40% với loại virus; v có khoảng 10% lợn theo mĐ - 22 ng y ti mang kháng thể đặc hiệu kháng virus n y (3) Mức phơi nhiễm lợn thịt cao TGEV (25%) tiÕp ®ã ®Õn RV (20%) v thÊp nhÊt l PEDV (13,75%), chøng tá cã sù l−u h nh virus gây tiêu chảy phổ biến TGEV, PEDV v RV 04 tỉnh nghiên cứu (4) Tình trạng đa nhiễm chứng tỏ loại virus tồn tại địa b n nghiên cứu; mức đa nhiễm thấp lợn thịt chứng tỏ ba lo¹i cïng l−u h nh Ýt giao thoa 4.2 Đề nghị Đề nghị tiếp tục nghiên cứu phân lập virus v xác định đặc tính virus học v miễn dịch học l m sở khoa học cho công tác chẩn đoán v phòng chống bệnh 67 Tài liệu tham khảo 5.1 Tiếng Việt Vũ Triệu An (2001), Miễn dịch học, Nh xuất Y học, Tr.259-262 Trần Kim Anh (2004), Ng nh chăn nuôi với vấn đề xuất thịt lợn, Tạp chí chăn nuôi, Nh xuất Nông nghiệp Đặng Xuân Bình (2005), Vi khuÈn Escherichia coli v Clostridium perfrigens bÖnh tiêu chảy lợn theo mẹ, chế tạo sinh phẩm phòng trị, Luận văn Tiến sĩ Nông nghiệp Đái Duy Ban v cộng (1980), Những vấn đề hoá sinh dinh dỡng động vật, Nh xuất Nông nghiƯp; TËp Lª Minh ChÝ (1995), BƯnh tiªu chảy gia súc, Báo cáo hội thảo khoa học kỹ thuật, Tr.16-18 Cù Xuân Dần (1996), Sinh lý học gia súc, Nh xuất Nông nghiệp Nguyễn Tiến Dũng (1984), Xác định đặc tính Coronavirus gây bệnh viêm d y - ruột truyền nhiễm v khả gây miễn dịch biến chủng nhợc độc (188 - SG), Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp Đo n Thị Kim Dung (2004), Biến động số vi khuẩn hiếu khí đờng ruột, vai trò E.coli hội chứng tiêu chảy lợn con, phác đồ điều trị, Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp Hồ Huỳnh Thuỳ Dơng (2005), Sinh học phân tử, Nh xuất Giáo dục; Tr.190-199 10 Đ o Trọng Đạt, Đặng Việt Tiến, Quách Thị Chi (1968), Vắc xin dịch tả lợn thỏ hóa chủng C v tợng mang v thải virút dịch tả lợn cờng 68 độc sau công thử thách, Kết nghiên cứu khoa häc v kü tht Thó Y, 1968-1978: Tr.7-9 11 § o Trọng Đạt, Phan Thanh Phợng (1986), Bệnh gia súc non, Nh xuất Nông nghiệp; Tập 1, Tr.142-150 12 Nguyễn Thị Huyền (2002), Nghiên cứu số đặc tính sinh vật hóa học, định týp vi khuẩn E.coli gây tiêu chảy lợn theo mẹ v biện pháp phòng trị, Luận văn Thạc sĩ Khoa học Nông nghiệp 13 Phạm Văn Khuê, Phan Lục (1996), Ký sinh trùng thú y, Nh xuất Nông Nghiệp 14 Lê Hồng Mận (1999), Phát triển chăn nuôi th nh ng nh sản xuất góp phần đảm bảo yêu cầu thực phẩm cho tiêu dùng v xuất khẩu, Tạp chí chăn nuôi, Nh xuất H Nội 15 Nguyễn Hữu Nam (2005), B i giảng môn bệnh lý học, T i liệu dùng giảng dạy cho học viên Cao học Thú Y 16 Nguyễn Ng , Phan Thanh Phuợng, Nguyễn Thị Phơng Duyên, Lê Lập, Nguyễn Thiên Thu (1999), Nghiên cứu chế tạo vắc xin đa giá phòng bốn bệnh đỏ lợn khu vực Miền Trung, Tạp chí Khoa Häc Kü Tht Thó Y; 4(2): Tr 41-46 17 Ph¹m Thị Ngọc (2000), Vai trò vi khuẩn E.coli, Salmonella v Clostridium perfringens hội chứng tiêu chảy lợn giai đoạn 160 ng y tuổi Bớc đầu xác định kháng nguyên bám dính v xâm nhập chủng Salmonella môi truờng tế b o, Luận án Thạc sĩ Nông nghiệp 69 18 Nguyễn Thị Nội (1993), Một số kết nghiên cứu vắc xin phòng bệnh đờng hô hấp lợn, Tuyển tập công trình nghiên cứu Khoa học kỹ thuật Nông nghiệp 1994, Nh xuất Nông nghiệp 19 Nguyễn Thị Nội, Nguyễn Ngọc Nhiên (1993), Điều trị bệnh ho thở lợn, Tuyển tập công trình nghiên cứu khoa học kỹ thuật nông nghiệp 1994, Nh xuất Nông nghiệp 20 Lê Văn Phớc (1997), ảnh hởng nhiệt độ v độ ẩm không khí đến tỷ lệ lợn mắc bệnh tiêu chảy phân trắng, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y; 4(4): Tr 34-37 21 Phạm Hồng Sơn (2002), Giáo trình vi sinh vật học thú y, Trờng Đại học Nông Lâm Huế, Nh xuất Nông nghiệp; Tr.179-206 22 Nguyễn Quang Thạch (2005), Giáo trình công nghệ sinh học nông nghiệp, Nh xuất Nông nghiệp 23 Phạm Ngọc Thạch, Phạm Th nh Nhơng (2004), Một số đặc điểm bệnh lý lợn mắc bệnh phù đầu E.coli v biện pháp phòng trị, Tạp chí Khoa Học Kỹ Thuật Thó Y; 4(11): Tr.42-48 24 Ngun Nh− Thanh, Phïng Qc Chơng (1995), Kết phân lập Salmonella lợn tỉnh ĐăcLăc v thử nghiệm thuốc phòng trị, Tạp chí Khoa Häc Kü Tht Thó Y; 2(2): Tr.71-75 25 Ngun Nh− Thanh (2000), Miễn dịch học thú y, Nh Xuất Bản Nông Nghiệp;(131), Tr.139 26 Nguyễn Nh Thanh (2001), Cơ sở phơng pháp nghiên cứu dịch tễ học thú y, Nh xuất Nông nghiệp 70 27 Tô Long Th nh (1994), Thử nghiệm dùng phản ứng ELISA nghiên cứu kháng thể chống virus gây bệnh viêm d y - ruột truyền nhiễm lợn, Tạp chí Khoa häc kü tht Thó y; 5(1): Tr.30-43 28 Tỉ chøc hợp tác quốc tế Nhật Bản - Dự án tăng c−êng nghiªn cøu ViƯn Thó y Qc gia (JICA-SNIR) (2003), Cẩm nang chẩn đoán tiêu chuẩn bệnh gia súc Việt Nam, Dự án tăng cờng nghiên cứu Viện Thó y Qc gia (JICA-SNIR); Tr.106-107 29 Tỉng cơc Thèng kê (2006), Niên giám thống kê 2006, Nh xuất Thống kê; 134: Tr.286 30 Phạm Văn Ty (2004), Virus học, Nh xuất giáo dục; Tr.193-198, 224-225 5.2 Tiếng Anh 31 Barman N.N, Sarma D.K, Penseart M.B (2005), Prevalence of rotavirus, transmissible gastroenteritis virus and porcine epidemic diarrhoea virus antibodies in pigs of Assam, India, Indian Journal of Animal Sciences; 52(3): p.105-111 32 Beate Schultze, Christine Krempl, Luisa Ballesteros M., Lee Shaw (1996), Transmissible Gastroenteritis Coronavirus, but Not the Related Porcine Respiratory Coronavirus, Has a Sialic Acid (N- Glycolylneuraminic Acid) Binding Activity, J Virol; 70(8): p.5634-5637 33 Brenner J., Yadin H., Lavi J et al (2004), Investigation of the first transmissible gastro-enteritis (TGE) epidermic in pigs in Israel, Israel veterinary medical association; 59(3) 34 Bridger J.C, Brown J.F (1985), Prevalence of antibody to typical and atypical rotaviruses in pigs, Vet Rec; 116(2): p.50 71 35 Chae C, Kim O, Choi C et al (2000), Prevalence of porcine epidemic diarrhoea virus and transmissible gastroenteritis virus infection in Korean pigs, Vet Rec; 147(21): p.606-608 36 Curtis J., Borne F J (1976), Immunoglobulin quantitation in sow serum, colostrum and milk and the serum of young pigs, Biochim Biophys Acta; 236: p.319-332 37 Edward H Bohl and Linda J Saif (1975), Passive immunity in transmissible gastroenteritis of swine: immunoglobulin characteristics of antibodies in milk after inoculating virus by different routes, Infection and Immunity; 11: p.23-32 38 Hou X.L, Yu L.Y, Liu J (2007), Development and evaluation of enzymelinked immunosorbent assay based on recombinant nucleocapsid protein for detection of porcine epidemic diarrhea (PEDV) antibodies, Vet Microbiol; 123(1-3): p.86-92 39 http://www.oie.int/adr/dbd/2000/30.html 40 James G Lecce, Margaret W King (1978), Role of Rotavirus (Reo- Like) in Weanling Diarrhea of Pigs; 8(4), p.454-458 41 John R Crowther (2001), The ELISA guidebook, Humana Press, Totowa, New Jersey 42 Kim B, Kim B.F, Chae C, Chae C (2001), In situ hybridization for the detection of transmissible gastroenteritis virus in pigs and comparison with other methods, Can J Vet Res; 65(1): p.33-37 43 Kemeny L.J (1976), Antibody response in pigs inoculated with transmissible gastroenteritis virus and cross reactions among ten isolates, Can J Comp Med; 40: p.209-214 72 44 Linda J Saif and R.D Wesley (1999), Transmissible gastroenteritis and porcine respiratory coronavirus; Diseases of swine, 8th Edition, Iowa state University Press, Ames, Iowa, USA;24: p.295-325 45 Laude H., VanReeth K and Penseart M.B (1993), Porcine respiratory coronavirus: molecular features and virus-host interactions, Vet Res; 24: p.125-150 46 Morin M (1973), Transmissible gastroenteirits in feeder swine: clinical, imunofluorescence and histopathological orservation, Can J Comp Med 173; 37: p.125-150 47 Mary K, Estes J.C (1989), Rotavirus Gene Structure and Function, Microbiological review; p.410-449 48 McAdaragh J.P, Bergeland M.E, Meyer R.C et al (1980), Pathogenesis of rotaviral enteritis in gnotobiotic pigs: a microscopic study, Am J Vet Res; 41(10): p.1572-1581 49 Mitsugu Shimizu, Shirai J.M, Narita and Yamane T (1990), Cytopathic Astrovirus Isolated from Porcine Acute Gastroenteritis in an Established Cell Line Derived from Porcine Embryonic Kidney, Journal of clinical microbiology 28: p.201-206 50 Paul P.S., Stevenson G.W (1999), Rotavirus and Reovirus; Diseases of swine, 8th Edition, Iowa state University Press, Ames, Iowa, USA; 21: p.225274 51 Pensaert M B (1999), Porcine Epidermic Diarrhea; Diseases of swine, 8th Edition, Iowa state University Press, Ames, Iowa, USA; 16: p.179-184 52 Porter P, Porter P.F, Allen W.D (1972), Classes of immunoglobulins related to immunity in the pig, J Am Vet Med Assoc; 160(4): p.511-518 73 53 Shirai J.M (1985), Coronavirus, calicivirus and astrovirus-like particles associated with acute porcine gastroenteritis, Jpn J Vet Sci; 47: p.10231026 54 So Y Kim, Dae S Song, Bong K Park (2001), Differential detection of transmissible gastro-enteritis virus and porcine epidemic diarrhea virus by duplex RT - PCR, Vet Diagn Invest; 13: p.516-520 55 Tien Dung Nguyen (1986), Neutralizing secretory IgA and IgG not inhibit attachment of transmissble gastroenteritis virus, J Gen Virol; 67, p.939-943 74 ... tiến h nh đề t i: "Nghiên cứu tình hình phơi nhiễm virus: Transmissible Gastroenteritis Virus (TGEV), Porcine Epidermic Diarrhea Virus (PEDV) v Rotavirus (RV) lợn phơng pháp Ab- ELISA" Mục tiêu đề... nhóm virus gây tiêu chảy phổ biến, l nhóm Coronavirus v Rotavirus Đại diƯn cđa nhãm n y cã c¸c virus: Transmissible Gastroenteritis Virus (TGEV), Porcine Epidermic Diarrhea Virus (PEDV) v Rotavirus. .. sù, 1981) [51] 16 1.3.3 Bệnh tiêu chảy Rotavirus lợn 1.3.3.1 MÇm bƯnh Rotavirus (RV) l virus thc hä Reoviridae, chi Reovirus Virus hä Reoviridae l nhãm virus RNA kÐp, gây nhiễm đờng hô hấp v