Xác định chất bảo quản natri benzoat phương pháp HPLC NỘI DUNG BÁO CÁO I ĐẶT VẤN ĐỀ II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Đối tượng  Phương pháp III TÍNH TỐN KẾT QUẢ  Lập đường chuẩn  Khảo sát độ  Hiệu suất thu hồi VI KẾT LUẬN V TÀI LIỆU THAM KHẢO I- ĐẶT VẤN ĐỀ I- ĐẶT VẤN ĐỀ Việc phân tích hàm lượng chất phụ gia bảo quản nói chung Natri benzoate nói riêng đóng vai trị quan trọng II- ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Đối tượng * Natri benzoat * Mẫu nước TP.HCM Natri benzoate Natri benzoate Danh pháp IUPAC Natri benzoate Tên khác E211, benzoat natri Thuộc tính Cơng thức phân tử NaC6H 5CO2 Phân tử gam 144.11 g/mol Tỷ trọng 1.497 g/cm Điểm nóng chảy 300 °C Độ hịa tan nước tan Độ hịa tan dung mơi hữu tan trong etanol Độ axít (pKa) 8.0 Nguồn: vi.wikipedia.org Natri benzoat  Tính chất: Natri benzoat (E211) có cơng thức hố học là NaC 6H5CO2  Là chất bảo quản thực phẩm, có tác dụng kìm hãm phát triển vi khuẩn nấm  Được sử dụng nhiều loại đồ uống có gas, nước trái cây, gia vị,…  Hàm lượng natri benzoate cho phép thực phẩm 0,2 g/l Ảnh hưởng Natri benzoat tới sức khoẻ  Thúc đẩy ung thư tiêu diệt tế bào khoẻ mạnh  Ngăn cản phân tử ADN, gây bệnh Parkinson xơ gan  Gây thiệt hại cho ti thể  Có thể làm gia tăng hành vi hiếu động trẻ em Phương pháp nghiên cứu Dụng cụ: • Cân phân tích AUW220D (±0,01 mg), Shimadzu, Nhật Bản • Máy sắc kí lỏng hiệu cao Series 20A, Shimadzu, Nhật Bản • Cột sắc kí lỏng pha đảo C18 mng lc 0,45àm ã Mỏy sy, mỏy lc, mỏy cất nước hai lần, thiết bị lọc nước siêu • Bình định mức, loại pipet vạch, pipet bầu, cốc mỏ,… • Micropipet loại • Syranh lọc mẫu Hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) Ghi chú: 1.Bình chứa pha động 2.Bộ phận khử khí 3.Bơm cao áp 4.Bộ phận tiêm mẫu 5.Cột sắc ký (pha tinh) 6.Đầu dị 7.Hệ thống máy tinh có phần mềm ghi nhận tín hiệu, xử lý liệu điều 8.In liệu khiển hệ thống Hoá chất Tất hóa chất loại tinh khiết phân tích • Chất chuẩn natribenzoat, Acid phosphoric đậm đặc, dung dịch NaOH 0,1N pha từ ống chuẩn, dung dịch H 2SO4 10%, dung dịch Phenolphtalein 1% pha ethanol 60 • Dung dịch kalifericyanid K3Fe(CN)6: Hoà tan 10,6g K3Fe(CN)6 50ml nước, lắc cho tan hoàn toàn, thêm nước vừa đủ 100ml • Dung dịch Dikali hydrophosphat K2HPO4 0,02M: Hịa tan 3,484g K2HPO4 100ml nước Dung dịch chuẩn  Dung dịch chuẩn gốc 1000ppm: Cân 0,1000g chuẩn loại, thêm 2-3ml methanol, lắc cho tan hoàn toàn, thêm nước cất vừa đủ 100 ml  Từ dung dịch chuẩn gốc, pha chuẩn làm việc có nồng độ ppm ;5 ppm; 10 ppm; 20 ppm ; 50 ppm ; 100 ppm ; 200 ppm ĐIỀU KIỆN QUY TRÌNH & QUÁ TRÌNH THỰC HIỆN Pha động: hỗn hợp dikali hydrophosphat : methanol [70:30]; chỉnh pH = 5,0 axit H3PO4 Lọc qua màng 0,45 µm, lắc siêu âm đuổi bọt khớ.Ct pha o RP18 (150 ì 4,6 mm; 3àm) Th tích bơm mẫu 20µl Tốc độ dịng 1,5 ml/phút Nhiệt độ cột : nhiệt độ phịng Detector : DAD bước sóng λ = 230 nm CÁCH XỬ LÝ MẪU Cách thủy t0 = 70 c 30 phút HPLC III TÍNH TỐN VÀ KẾT QUẢ Khảo sát độ tuyến tính Sắc ký đồ Hình: Sắc ký đồ mẫu chuẩn Natri benzoat mẫu nước có chứa Natri benzoat Khảo sát độ lặp lại + Nhận xét: Phương pháp định lượng xây dựng có độ lặp lại tốt có RSD < 2% Khảo sát độ  Tiến hành thêm xác lượng dung dịch chuẩn Natri Benzoat vào mẫu thử với tỷ lệ thêm 50(µg/ml); 100(µg/ml); 150(µg/ml) Sau định lượng chất chuẩn tìm lại so với lượng thêm vào (với phép thử song song) Kết khảo sát độ mẫu nước giải khát (n= 5) + Nhận xét: Phương pháp định lượng xây dựng có độ chấp nhận việc định lượng Natri benzoat Kết khảo sát giới hạn phát (LOD) & giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp Giới hạn phát giới hạn định lượng xác định theo “qui tắc 3σ” Từ khoảng tuyến tính xây dựng với phương trình đường chuẩn tương ứng hoạt chất Natri Benzoat ta xác định LOD LOQ phương pháp Kết xác định LOD LOQ phương pháp phân tích HPLC KẾT LUẬN Phương pháp có giới hạn định lượng rộng, độ tương quan tuyến tính chặt chẽ nồng độ diện tích peak, độ lặp lại độ thu hồi tốt  So sánh với nồng độ Natri Benzoat cho phép thực phẩm với liều lượng 647– 825 mg/kg khối lượng thể ngày Hàm lượng Natri benzoat mẫu nằm mức cho phép Tài liệu tham khảo • • AOAC (2005), Official methods of analysis of AOAC international Bộ Y tế, Cục an toàn vệ sinh thực phẩm (2005), “Các văn quy phạm pháp luật vệ sinh an toàn thực phẩm”, Nhà xuất Hà nội, tập II, tr 186-192 • Bộ Y tế, QCVN 4-2010/BYT “Qui chuẩn kỹ thuật quốc gia phụ gia thực phẩm – Chất bảo quản”, Nhà xuất Hà nội, phụ lục 2,5 • Bộ Y tế (1998), “Danh mục tiêu chuẩn vệ sinh lương thực thực phẩm” QĐ số 867/1998/QĐ-BYT Bộ trưởng Bộ Y tế ngày 04 tháng 04 năm 1998, Cảm ơn cô bạn ý lắng nghe ... dựng với phương trình đường chuẩn tương ứng hoạt chất Natri Benzoat ta xác định LOD LOQ phương pháp Kết xác định LOD LOQ phương pháp phân tích HPLC KẾT LUẬN ? ?Phương pháp có giới hạn định lượng... Phương pháp định lượng xây dựng có độ chấp nhận việc định lượng Natri benzoat Kết khảo sát giới hạn phát (LOD) & giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp Giới hạn phát giới hạn định lượng xác định. .. phân tích hàm lượng chất phụ gia bảo quản nói chung Natri benzoate nói riêng đóng vai trị quan trọng II- ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Đối tượng * Natri benzoat * Mẫu nước TP.HCM Natri benzoate