Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa CHƯƠNG NHỮNG KIẾN THỨC CƠ BẢN 1.1 CÁC QUI ĐỊNH CHUNG CỦA PHÒNG THÍ NGHIỆM Mỗi nhóm thực tập phải chịu trách nhiệm về: trật tự, an tồn, dụng cụ, hóa chất kết thí nghiệm cho thực tập Sinh viên phải có mặt phịng thí nghiệm qui định: Sáng giờ, chiều 13 phải có mặt phịng thí nghiệm suốt thời gian thực tập Sinh viên đến trễ 10 phút khơng vào phịng thí nghiệm Khi kết thúc thí nghiệm sinh viên phải báo cáo kết với giáo viên hướng dẫn trước lúc Sinh viên vắng mặt phải có giấy phép phải xin thực tập bù buổi khác Sinh viên phải xem kỹ thực tập trước vào phịng thí nghiệm Mỗi nhóm thực tập cử sinh viên đại diện ký nhận mượn dụng cụ: kiểm tra tình hình dụng cụ (thiếu, hỏng, bể) báo cáo cho giáo viên hướng dẫn Sinh viên phải rửa dụng cụ trước sau thực tập Kết thúc buổi thực tập nhóm phải lau dọn, làm chỗ nhóm làm thí nghiệm, dụng cụ bị mát, hư hỏng phải báo cho người phụ trách phòng thí nghiệm biết Mỗi buổi thực tập, nhóm trực nhật có nhiệm vụ: nhắc nhở nhóm dọn vệ sinh, kiểm tra điện, nước cửa trước Mỗi nhóm sinh viên làm tường trình kết theo yêu cầu thực tập, nộp kết cho giáo viên hướng dẫn vào buổi thực tập Kết thúc thực tập có thi kiểm tra 1.2 KỸ THUẬT PHỊNG THÍ NGHIỆM 1.2.1 Các điểm cần lưu ý để tránh tai nạn làm việc thực tập phịng thí nghiệm Cẩn thận tiến hành thí nghiệm, khơng sử dụng máy móc, dụng cụ chưa biết rõ cách sử dụng Phải hiểu biết rõ tính chất hóa chất để tránh tai nạn đáng tiếc Tất chai lọ đựng hóa chất có nhãn, dùng phải đọc kỹ tên nồng độ, dùng xong phải đậy nút để lại chỗ cũ Phần lớn hóa chất độc nên phải cẩn thận Đối với chất kiềm, acid đậm đặc phải lưu ý: - Không hút miệng - Phải dùng ống đong bình nhỏ giọt - Phải đổ acid kiềm vào nước cần pha loãng chúng - Phải đặt nghiêng miệng ống nghiệm cốc phía khơng có người - Khi acid bị đổ ngồi cho nhiều nước để làm loãng acid Khi theo dõi dung dịch sôi không đưa mặt gần hay để chất lỏng (chất kiềm) vào cốc phải đưa xa Khi đun chất lỏng ống nghiệm hay cho acid, kiềm vào phải đặt ống nghiệm nghiêng góc 45O Khi đun phải lắc hướng miệng ống nghiệm phía khơng có người Khi làm việc với chất dễ cháy tuyệt đối: Khi sử dụng chất dễ cháy ether, xăng, benzen, chloroform, natri, kali cần ý: http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa - Khơng dùng lửa tránh xa lửa - Không để chất dễ cháy bên cạnh nguồn sinh nhiệt (chất dễ cháy, dễ bốc làm nổ hay bật nút, bốc gặp lửa cháy, lửa xa) - Khi chữa cháy phải bình tĩnh dập tắt lửa khăn ướt hay bình chửa cháy Khi làm việc với dụng cụ thủy tinh: - Kiểm tra kỹ dụng cụ trước dùng - Tránh đổ vỡ - Dụng cụ dùng cho việc Khi đun, đun dụng cụ thủy tinh chịu nhiệt - Dụng cụ phải rửa trước sau sử dụng - Không dùng dụng cụ thủy tinh, chai lọ để chứa chất kiềm mạnh acid đậm đặc có tác dụng bề mặt ăn mòn thủy tinh HF Khi làm việc với dụng cụ điện sử dụng điện tay phải khô, chỗ làm việc phải khô Kiểm tra kỹ nguồn điện dây dẫn điện sử dụng 1.2.2 Sơ cấp cứu phịng thí nghiệm Sơ cấp cứu biện pháp tạm thời trường hợp thương tích nhẹ trước đưa bệnh nhân đến bệnh viện như: 1.2.2.1 Phỏng a Phỏng nhiệt (hay vật nóng) - Phỏng nhẹ: Lấy vải mùng tẩm dung dịch acid picric bão hòa đắp lên mặt vết - Phỏng nặng: Đắp nhẹ vải mùng tẩm dung dịch acid picric lên vết phỏng, sau chuyển bệnh viện b Phỏng hóa chất Việc trước tiên ngâm vết thương vào chậu nước to để vết thương vịi nước chảy thật nhẹ Sau trung hịa hóa chất Chú ý trường hợp sau: - Phỏng acid: Đắp vải mùng tẩm dung dịch bicarbonat natri 8% - Phỏng kiềm: Đắp vải mùng tẩm dung dịch acid picric 3% 1.2.2.2 Tai nạn mắt - Acid hay brom vào mắt: Rửa mắt tức khắc nhiều lần nước sạch, sau tẩm mắt dung dịch bicarbonat natri 1% - Chất kiềm vào mắt: Xử lý tẩm mắt dung dịch acid boric 1% 1.2.2.3 Ngộ độc Khi bị chất độc vào miệng: - Acid: Xúc miệng nhiều lần dung dịch bicarbonat natri 1% - Kiềm: Xúc miệng nhiều lần dung dịch acid 1% - Các hóa chất khác: Xúc miệng nhiều lần nước lạnh http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa 1.2.2.4 Nhiễm độc Đưa nạn nhân nơi thống khí, nới rộng quần áo cho dễ thở Hô hấp nhân tạo lúc di chuyển đến bệnh viện 1.2.2.5 Điện giật Trước hết ngắt cầu dao điện có liên quan đến phịng thí nghiệm Nới rộng quần áo nạn nhân sau đem nơi thống Hơ hấp nhân tạo chờ chuyển đến bệnh viện trường hợp nặng 1.2.2.6 Hỏa hoạn - Ngọn lửa nhỏ: dập tắt khăn, vải bố ướt hay cát - Lửa bắt đầu cháy quần áo: lăn vài vòng đất để dập tắt lửa, bạn lấy vải ướt trùm lên chỗ cháy ép sát lửa tắt Tránh chạy hoảng - Dùng bình chửa cháy trước phịng thí nghiệm để dập lửa Lưu ý: Sinh viên phải báo cho nhân viên phịng thí nghiệm giáo viên hướng dẫn cố phịng thí nghiệm 1.3 KỸ THUẬT SINH HÓA 1.3.1 Các dụng cụ thường dùng thực tập sinh hóa 1.3.1.1 Cách rửa dụng cụ Độ dụng cụ ảnh hưởng lớn đến kết thí nghiệm, rửa dụng cụ hóa học phần kỹ thuật phịng thí nghiệm mà sinh viên cần phải biết Để chọn phương pháp rửa dụng cụ trường hợp riêng biệt thường phải biết tính chất chất làm bẩn dụng cụ Sau sử dụng tính chất hịa tan chất bẩn nước nóng hay nước lạnh, dung dịch kiềm, acid, muối hay dung môi hữu Thường dùng cọ rửa dùng bàn chải chà xát vào dụng cụ (dùng cọ rửa phải ý cọ làm thủng đáy dụng cụ) Các dụng cụ sau rửa chất bẩn ngâm vào dung dịch sulfo- cromic (hỗn hợp K2Cr2O7 10% H2SO4 đậm đặc tỉ lệ thể tích) ngày; sau đem rửa với nước máy tráng lần với nước cất, xong để vào tủ sấy khô Dụng cụ thủy tinh gọi nước thành không tạo thành giọt riêng mà dàn mỏng 1.3.1.2 Các loại dụng cụ cách sử dụng a Ống nghiệm Ống nghiệm thường hình trụ tích khác (Xem hình 1.1) T khơng đun nóng đáy ống nghiệm mà lửa phải để vào thành Hình nghiệm ống Hình1.1 Ống Điều kiện đun nóng dung dịch ống nghiệm: - Dung dịch không nhiều 1/3 ống nghiệm - Ống nghiệm giữ nghiêng khoảng 45O ln lắc khuấy http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa - Miệng ống nghiệm khơng hướng vào người gây b Ống hút (pipet) Có nhiều loại ống hút thơng dụng: - Loại có bầu an tồn: Dùng để hút dung dịch độc - Loại có hai vạch: Thể tích ghi ống thể tích hai vạch - Loại bình thường có phân độ Đối với loại chất lỏng độc, ta dùng bóp cao su đặc biệt gắn vào đầu ống hút, bóp hút để chất lỏng tự nhờ hế thống khóa (valve) * Cách sử dụng: + Tráng ống hút lượng nhỏ dung dịch hút + Hút dung dịch lên đến bên vạch ngang (xem hình 1.2) + Lấy ngón trỏ bịt đầu ống hút lại (ngón trỏ phải sạch, khơ), lau bên đầu ống hút giấy thấm + Nâng ống lên cao cho vạch chia độ ống hút ngang tầm mắt, đầu ống dựa vào thành bình cho dung dịch chảy từ từ theo thành bình đến lấy đủ thể tích cần dùng cho thí nghiệm ngưng (lúc cần quan sát mực nước cong tiếp xúc với vạch ống hút) + Giữ ống hút thẳng đứng chuyển qua bình hứng, Hình Hình 1.2 Pipet đặt đầu ống hút chạm vào thành bình bng ngón trỏ để dung dịch chảy tự (bình hứng phải để nghiêng) + Khi dung dịch ngưng không chảy nữa, ta xoay đầu ống hút 2-3 vòng trước lấy ống hút khỏi bình (khơng thổi vào ống hút để đuổi giọt thừa lại ống) + Khi đọc thể tích cần ý đọc theo mặt cầu lõm chất lỏng không màu suốt nước, đọc theo mặt cầu lồi chất lỏng có màu sậm dung dịch chứa iod c Micropipet - Chỉnh thể tích khoảng sử dụng pipet cách vặn nút phía đầu pipet ngược chiều kim đồng hồ chữ số rõ thể tích cần dùng - Gắn đầu tip lấy hóa chất vào đầu pipet cho khít với đầu pipet - Giữ pipet thẳng đứng dùng ngón tay nhấn nút đến mức vừa cứng tay Sau cho đầu tip ngập bề mặt dung dịch khoảng 2-3 mm nhẹ nhàng buông nút để hút dung dịch Cẩn thận nhấc pipet khỏi dung dịch, chạm nhẹ đầu tip vào thành dụng cụ đựng để gạt bỏ dung dịch thừa - Bơm dung dịch vào dụng cụ đựng cách nhấn nút tới mức cuối cho khơng cịn dung dịch bám thành tip * Lưu ý: Cần tráng tip vài lần dung dịch hút trước lấy hóa chất, đặc biệt dung dịch cần lấy có độ nhớt tỉ trọng khác với nước http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa d Ống chuẩn độ (Buret) Được gắn giá có khóa để điều chỉnh lượng dung dịch chảy ống có phân độ (Hình 1.3) * Cách sử dụng: + Kiểm tra xem khóa bơi vaselin để tránh chảy nước, xem có bị q xít, khó vặn khơng + Tráng lần với nước cất lần với dung dịch định dùng để chuẩn độ + Đổ đầy dung dịch vào ống lên đến mức số + Dùng tay trái mở khóa cho dung dịch chảy từ từ mực dung dịch tiếp xúc với vạch (nếu Hình Buret Hình 1.3 giọt dung dịch cịn dính lại đầu ống chuẩn độ phải lấy cách chạm vào thành bình chứa) e Ống đong (Cylinder) Có dung tích thay đổi từ mL đến L, có mặt đáy phân độ (hình 1.4), tùy phân độ gần thể tích tồn phần Vì khơng nên dùng ống ong chia nhng lng quỏ nh (Hỡnh 1.4) Hỗnh 1.5 Hình 1.4 Ống đong f Bình tam giác (Erlenmeyer) Được sử dụng rộng rãi thí nghiệm phân tích (chuẩn độ) Bình tam giác có nút mài gọi “Bình xác định số iod” g Bình chiết Dùng để tách riêng dung dịch lỏng không hịa tan với (ví dụ nước dầu) Khi lắc bình chiết, ngón tay phải giữ nút đầu khóa đầu bình (Hình 1.5) Hình Hỗnh 1.6 1.5 Bỡnhchit h Bỡnh hỳt m (Desiccator): L dụng cụ thủy tinh có thành dày có nắp, dùng để làm khô mẫu từ từ để bảo quản chất dễ hút ẩm từ khơng khí (Hình 1.6) Phần bình có đặt chất hút ẩm Muốn mở nắp bình phải đẩy nắp mt phớa, trỏnh nhc np lờn cao Hỡnh 1.6 Hỗnh hút ẩm Bình 1.7 i Bình hút chân khơng: Được sử dụng bơm chân khơng để lọc Bình có ống nhánh phần trên, ống nhánh nối với bơm chân khơng (Hình 1.7) j Ống sinh hàn: Là dụng cụ để làm lạnh ngưng (Hình 1.8) Tùy theo điều kiện mà chất lỏng tạo thành ống sinh hàn làm lạnh sang bình thu trở lại bình đun nóng Sự khác chức ống sinh hàn định hình dạng tên gọi Hình 1.7 Bình hút Hình1.8 chân khơng http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa chúng Khi nối ống sinh hàn cần tuân theo quy tắc: Nước vào từ đầu thấp phía từ đầu phía Hình sinh hàn Hình 1.8 Ống9 Hình 1.9 Bình định mức k Bình định mức: Là dụng cụ tối cần thiết thí nghiệm phân tích Chúng bình cầu đáy có nút thủy tinh mài nhám Bình định mức dùng để pha lỗng dung dịch đến thể tích xác định để hịa tan chất dung mơi với thể tích xác định (hình 1.9) Khi cho dung dịch vào bình định mức cổ hẹp, phải dùng phễu, xong đậy nắp chặt dốc ngược bình nhiều lần để trộn Khi cho nước gần tới vạch, cẩn thận dùng ống hút đưa thêm giọt đến vạch mức 1.3.2 Cách chuẩn bị dung dịch hóa chất 1.3.2.1 Nồng độ dung dịch Khi hòa tan muối vào nước ta nước muối + Muối: chất hòa tan hay dung chất + Nước: dung môi + Nước muối: dung dịch Nồng độ dung dịch diễn tả nhiều cách khác nhau: Nồng độ phần trăm khối lượng theo khối lượng (% w/w): Số gam chất hịa tan có 100 gam dung dịch Ví dụ: Dung dịch NH4Cl 5% theo khối lượng 100g dung dịch có 5g NH4Cl tinh khiết Nồng độ phần trăm khối lượng theo thể tích (% w/v): Số gam chất hịa tan có 100 mL dung dịch Ví dụ: Dung dịch CuSO4 10% theo thể tích 100 mL dung dịch có 10g CuSO4 tinh khiết Nồng độ phần trăm thể tích theo thể tích (% v/v): Là số mL dung chất có 100mL dung dịch Ví dụ: Dung dịch glycerin 10% theo thể tích 100 mL dung dịch có 10 mL glycerin nguyên chất Nồng độ phân tử - nồng độ mol (mol/L hay M): Là số phân tử gam (số mol) L dung dịch Nồng độ gam/L (g/l): Là số gam chất tan có L dung dịch http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa Dung dịch nguyên chuẩn (N): Một dung dịch gọi nguyên chuẩn L dung dịch chứa khối lượng chất hòa tan gọi đương lượng gam 1.3.2.2 Cách pha nồng độ a Nồng độ phần trăm theo khối lượng Thí dụ: Pha 80 gam dung dịch NH4Cl 40% Dung dịch NH4Cl 40% nghĩa cần có 40g NH4Cl cho 100g dung dịch Vậy muốn có 80g dung dịch cần lượng NH4Cl là: 40 x 80 = 32 g 100 Lượng nước phải thêm cho đủ 80g: 80g - 32g = 48g hay 48 mL Vậy ta cần 32g NH4Cl đong 48 mL H2O ống đong Đổ nước vào hòa tan, dung dịch NH4Cl 40% * Trường hợp hóa chất có ngậm nước (CuSO4.5H2O, Na2S2O3.5H2O, NaCO3.10H2O ) cần pha chất ta phải tính tới lượng nước kết tinh chúng Ví dụ: Muốn pha 500g dung dịch CuSO4 20% từ tinh thể ngậm nước (CuSO4 5H2O): Phân tử khối CuSO4 khan nước 160g Phân tử khối CuSO4 5H2O 250g Muốn pha 500g dung dịch CuSO4 20% ta cần lượng CuSO4 khan nước 20 x 500 = 100 g 100 Muốn có 160g CuSO4 khan nước ta cần 250g CuSO4 5H2O Vậy muốn có 100g CuSO4 khan nước phải cần lượng CuSO4 5H2O là: 250 x 100 = 156 gam 160 Lượng nước cần đổ thêm: 500g - 156g = 344g Vậy ta cần 156 g CuSO4.5H2O thêm 344 mL nước để hòa tan, ta 500g dung dịch CuSO4 20% b Nồng độ phần trăm khối lượng theo thể tích Ta hịa tan lượng chất cân nước thêm nước tới thể thể tích Ví dụ: Cần chuẩn bị L dung dịch NaCl 30% ta cần lượng NaCl là: 30 x 1000 = 300 gam 100 Để hòa tan nước thêm nước cho đủ thể tích L * Trường hợp hóa chất có ngậm nước: Khi cần ta phải tính thêm lượng nước phân tử trường hợp * Trường hợp chất hòa tan dung dịch: Ta làm tương tự trên, nghĩa cân chất tan dung môi đem trộn lẫn với cho Nhưng việc cân http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa chất lỏng không thuận lợi cho nên cần phải đưa chất lỏng đơn vị thể tích cho tiện theo cơng thức: V: Thể tích chất lỏng P P: Trọng lượng chất lỏng V = d d: Tỷ trọng chất lỏng Mặt khác, chất lỏng thường dùng có giới hạn hịa tan tối đa tính theo % Ví dụ: H2SO4 hịa tan tối đa 96%, HCl 37%, H3PO4 65% Cho nên cân chất lỏng phải tính số gam có thực dung dịch để pha cho xác Nếu ta xem HCl 100% pha dung dịch 10% ta cân 10g HCl thêm vào 90 mL, trộn Nhưng thực HCl có 37% nên trọng lượng cần phải là: x= 100 x 10 = 27,02 g 37 Hay 27 ,02 = 22,7 ml 1,19 Và ta thêm lượng nước: 100g - 27,02g = 72,98g (hay 72,98 mL) c Nồng độ phân tử gam Mol phân tử gam khối lượng chất tính gam khối lượng phân tử Dung dịch phân tử gam dung dịch chứa phân tử gam chất hòa tan L Để chuẩn bị dung dịch 1M chất đó, người ta tính khối lượng phân tử (được gọi tổng khối lượng nguyên tố có chất) tìm trị số bảng tra cứu Lấy lượng cân xác đem hịa tan dung mơi cho thành L dung dịch (dùng bình định mức) Khi phải đun nóng dung dịch, hay phản ứng tỏa nhiệt hay thu nhiệt, phải nhiệt độ bình thường (20OC) rối thêm tới vạch Cũng tương tự thế, người ta pha dung dịch 2-3 M hay 0,1; 0,01M cách tính lượng tương ứng để hịa tan Ví dụ: Cần 0,5 L dung dịch K2C2O7 0,1M K2C2O7 = 294,2 g Để chuẩn bị L dung dịch K2C2O7 0,1M cần lấy 0,1 phân tử gam nghĩa 29,42g K2C2O7 Để chuẩn bị 0,5 L ta cần 29,42g x 0,5 = 14,71g pha bình định mức 500 mL + Trong trường hợp chất rắn có ngậm nước, phân tử gam chất phải tính khối lượng phân tử nước chất + Đối với chất tan dung dịch tinh khiết (100%) ta tiến hành cân pha chất rắn không ngậm nước http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa + Đối với chất tan chất lỏng có phần trăm thấp (chưa 100%) ta phải ý tới nồng độ phần trăm tối đa chúng để tính tốn cho Thí dụ: Pha HCl 1M từ HCl 37% (MHCl = 36,5) ta phải cân: Hay 365 x100 = 98,65 gamHCl 37 98,65 = 82,9 ≈ 83mlHCl 1,19 Vậy ta phải lấy 83 mL HCl 37% để pha thành L dung dịch HCl có nồng độ 1M d Nồng độ đương lượng gam (N) Dung dịch nguyên chuẩn 1N chứa đương lượng gam chất tan L Đương lượng gam định nghĩa theo trường hợp riêng từ phương trình phản ứng dùng lúc định phân + Trong định phân acid hay base: Đương lượng gam acid khối lượng chất cho phản ứng ion gam H+ Đương lượng gam base khối lượng chất cho phản ứng ion gam OHVí dụ: a H+ + Cl- + Na+ + OH- Na+ + Cl- + H2O phân tử gam HCl cho ion gam H+ Vậy đương lượng gam HCl = phân tử gam HCl b 2H+ + SO42- + 2Na+ + 2OH- → 2Na+ + SO42- + 2H2O phân tử gam H2SO4 cho ion gam H+ Vậy đương lượng gam H2SO4 = 1/2 phân tử gam H2SO4 c Một phân tử gam NaOH cho ion gam OHVậy đương lượng gam NaOH = phân tử gam NaOH - Một dung dịch nguyên chuẩn HCl chứa 36,5g HCl L - Một dung dịch nguyên chuẩn H2SO4 chứa 98g/2 = 49 gam H2SO4 lít Con số hay dùng để chia phân tử gam thí dụ gọi hệ số nguyên chuẩn độ Trong trường hợp tổng quát số gọi γ M/γ gọi đương lượng gam phản ứng + Trong trường hợp phản ứng oxy hóa khử: Muốn tìm đương lượng chất hệ thống oxy hóa khử, người ta đem chia phân tử gam cho số điện tử trao đổi phản ứng mà chất tham gia Thí dụ: 2Na2S2O3 + I2 Na2S4O6 + 2NaI I2 + 2e 2I 2S O32− − 2e − → 2S O62− Số điện tử trao đổi phản ứng Do N=M/1 http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa Cách pha: việc pha dung dịch nồng độ đương lượng gam (N) tương tự pha nồng độ phản ứng gam (M) thay đổi phân tử gam (M) đương lượng gam (N) 1.3.2.3 Cách xác định lại nồng độ dung dịch a Dung dịch chuẩn Trong q trình pha hóa chất, có nhiều yều tố làm sai nồng độ như: + Việc cân đo khơng xác + Các chất chưa tinh khiết hay hút nước + Để lâu bị thăng hoa hay oxy hóa Do người ta phải kiểm tra nồng độ thực dung pha dựa vào chất ổn định hay nồng độ xác gọi coi dung dịch chuẩn Các chất dùng dung dịch chuẩn phải bền vững để nồng độ chất phản ứng khơng thay đổi nhanh chóng với thời gian Thơng thường thuốc thử chuẩn lượng cân xác thuốc thử dung dịch thuốc thử kín ống thủy tinh, có ghi 0,1 hay 0,01 đương lượng gam chất đong ống Khi chuyển hết lượng chất có ống thủy tinh vào bình định mức dung tích L pha nước cất tới vạch mức, ta dung dịch xác 0,1 hay 0,01 M Trong vài trường hợp, dung dịch chuẩn làm trực tiếp cách cân chất rắn pha lỗng dung dịch tới thể tích Điều áp dụng với vài hợp chất bền vững có thành phần khơng thay đổi NaCl, AgNO3, acid oxalic Các chất gọi chất gốc Tuy nhiên, chất khác NaOH, HCl Na2S2O3 cách không thực dụng chất khơng có hiệu lực độ tinh khiết dạng cố định để cân trực tiếp Ví dụ: NaOH thường bị nhiễm với lượng Na2CO3 thay đổi dễ bị chảy nước, HCl bốc nhiệt độ phịng thí nghiệm Na2S2O3.5H2O rã thành bột bị nước tinh thể để ngồi khơng khí có thành phần khơng cố định trường hợp này, điều cần thiết pha dung dịch gần nồng độ mong muốn sau định nồng độ xác với dung dịch chuẩn b Cách xác định nồng độ Trở lại ví dụ phản ứng acid base, phản ứng tóm tắt: H+ + OH- H2O hóa trị gam acid phản ứng với hóa trị gam base L dung dịch nguyên chuẩn acid phản ứng L dung dịch nguyên chuẩn base, hai dung dịch nguyên chuẩn trung hoà với thể tích Một cách tổng quát, dung dịch phản ứng với thể tích có chuẩn độ Khi thể tích V1 dung dịch có chuẩn độ C1 (C1, N) tác dụng lên thể tích V2 dung dịch có chuẩn độ C2 (C2, N) viết số hóa trị gam tác dụng lẫn nhau trường hợp : C1 x V1 = C2 x V2 Ta dùng hệ thức để hiệu chỉnh lại nồng độ số dung dịch xác Thí dụ: Ta có dung dịch chuẩn H2SO4 0,1N xác Một dung dịch NaOH ta pha lấy có nồng độ định pha 0,1N Đem chuẩn độ ta thấy 10 mL H2SO4 0,1N tác dụng với 11 mL NaOH ta pha Vậy nồng độ dung dịch NaOH ta pha là: C1 = V2 xC 10 x0,1 = = 0,091N V1 11 10 http://www.ebook.edu.vn Giáo Trình Thực Tập Sinh Hóa Hệ số (10/11 = 0,91) gọi hệ số hiệu chỉnh Ta áp dụng công thức để thay đổi nồng độ dung dịch từ đậm đặc sang pha lỗng Ví dụ: a Pha 250mL dung dịch HCl N/5 từ dung dịch HCl 1N C1 x V1 = C2 x V2 => N x V1 = N/5 x 250 => V1 = 50 mL Vậy lấy 50 mL dung dịch HCl thêm nước cho đủ 250 mL ta dung dịch HCl N/5 b Pha 50 mL ethanol 70% từ ethanol 95% 50 x 70 = V2 x 95 => V2 = 36,9 mL Vì thêm 13,1 mL nước vào 36,9 mL etanol 96% ta 50 mL ethanol 70% c Được thể tích làm loãng 25 mL HCl 0,08N sang HCl 0,05N C1 x V1 = C2 x V2 0,08 x 25 = 0,05 x V2 V2 = 40 mL 1.3.2.4 Cách pha định chuẩn số dung dịch thường dùng Với điều kiện phịng thực tập sinh hóa nay, pha dung dịch chuẩn gốc sau đây: a Dung dịch acid oxalic (COOH)2 N(γ=2) Cân thật xác M/2 lượng (COOH)2 để hòa tan với nước cất thành L, ta dung dịch chuẩn acid oxalic 1N bảo quản chai thủy tinh nút mài để chỗ không ánh sáng b Dung dịch KIO3 N/10 (γ=6) Cân thật xác M/6x10 lượng KIO3 hịa tan với nước cất thành lít, ta dung dịch chuẩn KIO3 N/10 Hai dung dịch dùng để chuẩn độ lại dung dịch pha sau: + Dung dịch NaOH 1N Cân 40g NaOH hòa tan thành lít dung dịch với nước cất Định lại chuẩn độ NaOH với dung dịch (COOH)2 N pha trên: lấy 10mL dung dịch NaOH pha chuẩn độ với dung dịch (COOH)2 N với diện thuốc thử màu phenolphtalein Nếu dung dịch NaOH có nồng độ >1N hay