Đang tải... (xem toàn văn)
KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA BAP, NAA VÀ BA DỊCH CHIẾT TỰ NHIÊN ĐẾN SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN GIỐNG LAN REN (Renanthera sp.) TRONG NUÔI CẤY IN-VITRO
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA BAP, NAA VÀ BA DỊCH CHIẾT TỰ NHIÊN ĐẾN SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN GIỐNG LAN REN (Renanthera sp.) TRONG NUÔI CẤY IN-VITRO Họ và tên sinh viên: PHẠM THANH HUYỀN Ngành: NÔNG HỌC Niên khóa: 2004 – 2008 Tháng 11 /2008 i KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA BAP, NAA VÀ BA DỊCH CHIẾT TỰ NHIÊN ĐẾN SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN GIỐNG LAN REN (Renanthera sp.) TRONG NUÔI CẤY IN-VITRO Tác giả PHẠM THANH HUYỀN (Khóa luận được đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp bằng kỹ sư ngành Nông Học) Giáo viên hướng dẫn: ThS. NGUYỄN CHÂU NIÊN KS. BÙI THÙY LINH Tháng 11/2008 ii LỜI CẢM TẠ Lời đầu tiên con xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Ba, Mẹ những người đã sinh thành và nuôi dưỡng cho con có được ngày hôm nay. Em xin chân thành cảm ơn thầy Nguyễn Châu Niên đã tận tình hướng dẫn em trong suốt thời gian hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này. Lời cảm ơn chân thành cũng xin được gửi đến cô Bùi Thuỳ Linh - người đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ em trong suốt quá trình thực tập tại phòng thí nghiệm bộ môn Di Truyền Giống của khoa Nông Học. Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô khoa Nông Học trường Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh đã tận tình giảng dạy và truyền đạt cho em những kiến thức quý báu trong suốt thời gian học tập tại trường. Xin cảm ơn tất cả bạn bè, thân hữu đã giúp đỡ và động viên tôi trong quá trình học tập tại trường. Sau cùng, xin chúc quý thầy cô Trường Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh lời chúc sức khoẻ và thành công trong công tác đào tạo. Tp. Hồ Chí Minh, ngày tháng 11 năm 2008 Sinh viên thực hiện: Phạm Thanh Huyền iii TÓM TẮT Đề tài nghiên cứu “Khảo sát ảnh hưởng của BAP, NAA và ba dịch chiết hữu cơ đến sinh trưởng, phát triển giống lan Ren (Renanthera sp.) trong nuôi cấy in-vitro” được tiến hành tại phòng nuôi cấy mô, bộ môn Di Truyền Giống, khoa Nông Học, trường ĐH Nông Lâm, thời gian thực hiện từ ngày 2/6 đến 2/10 năm 2008. Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên. Đề tài nhằm theo dõi sự sinh trưởng, phát triển của lan Ren đối với in-vitro, khi thay đổi nồng độ chất điều hoà sinh trưởng BAP và NAA, dịch chiết nước dừa, khoai tây và chuối xanh trong môi trường nuôi cấy. Kết quả đạt được: Sử dụng chất điều hoà sinh trưởng BAP và NAA trong nhân giống in-vitro: Hai công thức môi trường có sự kết hợp giữa BAP và NAA thích hợp cho sự sinh trưởng, phát triển của lan Ren nuôi cấy mô là: - Khoáng MS + 8,5agar + 30g/l sucrose + 0,5g/l than + 1,5mg/lít BAP + 0,2mg/lít NAA. - Khoáng MS + 8,5agar + 30g/l sucrose + 0,5g/l than + 0,4mg/lít NAA + 0,5mg/lít BAP Sử dụng các dịch chiết hữu cơ: Đối với các dịch chiết hữu cơ: đưa vào môi trường nuôi cấy hàm lượng dịch chiết hữu cơ thích hợp nhằm làm tăng sự sinh trưởng phát triển của hoa lan Ren. Các công thức môi trường cụ thể như sau: - Khoáng MS + 8,5agar + 30g/l sucrose + 0,5g/l than + 200ml/lít nước dừa - Khoáng MS + 8,5agar + 30g/l sucrose + 0,5g/l than + 100ml/lít dịch chiết khoai tây - Khoáng MS + 8,5agar + 30g/l sucrose + 0,5g/l than + 50ml/lít dịch chiết chuối xanh iv MỤC LỤC Lời cảm tạ . ii Tóm tắt iii Mục lục iv Danh sách các chữ viết tắt . vi Danh sách các hình . vii Danh sách các biểu đồ viii Danh sách các bảng . ix Chương 1 GIỚI THIỆU 1 1.1 Đặt vấn đề . 1 1.2 Mục đích – yêu cầu . 2 1.2.1 Mục đích . 2 1.2.2 Yêu cầu . 2 Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 2.1 Giới thiệu về nuôi cấy mô thực vật 3 2.1.1 Khái niệm . 3 2.1.2 Lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật . 3 2.2 Các phương pháp nhân giống in-vitro 6 2.2.1 Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng 6 2.2.2 Nuôi cấy mô sẹo . 7 2.2.3 Nuôi cấy tế bào đơn 7 2.2.4 Nuôi cấy protoplast- chuyển gen 8 2.2.5 Nuôi cấy hạt phấn đơn bội 8 2.3 Các bước vi nhân giống và những hiện tượng thường gặp . 8 2.3.1 Các bước vi nhân giống 8 2.3.2 Những trường hợp thường gặp trong nuôi cấy . 9 2.4 Tình hình sản xuất lan trên thế giới và Việt Nam . 9 2.4.1 Trên thế giới . 9 2.4.2 Tại Việt Nam 10 2.5 Vai trò các chất điều hoà sinh trưởng dịch chiết hữu cơ trong nuôi cấy in-vitro . 10 2.5.1 Auxin 10 2.5.2 Các cytokinine 11 2.5.3 Dịch chiết xuất hữu cơ từ trái cây, củ quả 12 2.6 Giới thiệu về lan Renanthera sp. . 12 2.6.1 Nguồn gốc . 12 2.6.2 Đặc điểm thực vật học 13 2.6.3 Đặc điểm sinh thái 14 2.6.4 Kỹ thuật trồng lan Ren 14 Chương 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 16 v 3.1 Thời gian và địa điểm thí nghiệm . 16 3.2 Phương tiện thí nghiệm 16 3.2.1 Đối tượng thí nghiệm 16 3.2.2 Trang thiết bị và dụng cụ 16 3.3 Phương pháp thí nghiệm . 18 3.3.1 Điều kiện nuôi cấy 18 3.3.2 Tiến hành thí nghiệm 18 3.3.3 Chỉ tiêu theo dõi . 19 3.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 20 Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 21 4.1 Thí nghiệm theo dõi ảnh hưởng của các chất điều hoà sinh trưởng đến sinh trưởng, phát triển của lan Ren . 21 4.1.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của 5 nồng độ BAP và 2 nồng độ NAA đến khả năng sinh trưởng, phát triển của lan Ren in-vitro . 21 4.1.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của 5 nồng độ NAA và 2 nồng độ BAP đến khả năng sinh trưởng, phát triển của lan Ren in-vitro . 29 4.2 Thí nghiệm theo dõi ảnh hưởng của dịch chiết hữu cơ đến sự sinh trưởng, phát triển của lan Ren . 36 4.2.1 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của hàm lượng nước dừa đến khả năng sinh trưởng, phát triển của lan Ren in-vitro . 36 4.2.2 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng của hàm lượng dịch chiết khoai tây đến khả năng sinh trưởng, phát triển của lan Ren in-vitro . 39 4.2.3 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng của hàm lượng dịch chiết Chuối Xanh đến khả năng sinh trưởng, phát triển của lan Ren in-vitro 41 Chương 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 44 5.1 Kết luận . 44 5.2 Đề nghị . 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 PHỤ LỤC . 48 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT ANOVA : Analysis of Variance BAP : 6 - Benzylaminopurine Ctv : Cộng tác viên ĐC : Đối chứng MS : Murashige và Skoog (1962) MTN : Môi trường nền NAA : α – napthylacetic acid NT : Nghiệm thức REN : Renanthera sp. NSC : Ngày sau cấy vii DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình 2.1: Đặc điểm thực vật học của lan Ren . 13 Hình 2.2: Một số giống hoa lan Ren 15 Hình 4.1: Ảnh hưởng của BAP và NAA đến sinh trưởng, phát triển của lan Ren . 28 Hình 4.2: Ảnh hưởng của NAA và BAP đến sinh trưởng và phát triển lan Ren . 30 Hình 4.3: Ảnh hưởng của dịch chiết nước dừa đến sinh trưởng của lan Ren in-vitro . 38 Hình 4.4: Ảnh hưởng của dịch chiết khoai tây đến sinh trưởng, phát triển lan Ren . 40 Hình 4.5: Ảnh hưởng của dịch chiết chuối xanh đến sinh trưởng, phát triển lan Ren 43 viii DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 1: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu số lá của lan Ren in-vitro . 48 Biểu đồ 2: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu số rễ của lan Ren in-vitro 48 Biểu đồ 3: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu chiều cao chồi của lan Ren in-vitro 48 Biểu đồ 4: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu chiều dài lá của lan Ren in-vitro . 48 Biểu đồ 5: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu chiều dài rễ của lan Ren in-vitro . 48 Biểu đồ 6: Ảnh hưởng BAP và NAA đến trọng lượng tươi của lan Ren in-vitro 48 Biểu đồ 7: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu số lá của lan Ren in-vitro 49 Biểu đồ 8: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu số rễ của lan Ren in-vitro 49 Biểu đồ 9: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu chiều cao chồi của lan Ren in-vitro 49 Biểu đồ 10: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu chiều dài lá của lan Ren in-vitro . 49 Biểu đồ 11: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu chiều dài rễ của lan Ren in-vitro . 49 Biểu đồ 12: Ảnh hưởng NAA và BAP đến trọng lượng tươi của lan Ren in-vitro 49 Biểu đồ 13: Ảnh hưởng của hàm lượng nước dừa đến chỉ tiêu số lá của lan Ren in-vitro . 50 Biểu đồ 14: Ảnh hưởng hàm lượng nước dừa đến chỉ tiêu chiều dài lá lan Ren in-vitro . 50 Biểu đồ 15: Ảnh hưởng hàm lượng nước dừa đến trọng lượng tươi lan Ren in-vitro 50 Biểu đồ 16: Ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến chỉ tiêu số lá lan Ren in-vitro . 50 Biểu đồ 17: Ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến chỉ tiêu chiều dài lá lan Ren in-vitro 50 Biểu đồ 18: Ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến trọng lượng tươi lan Ren in-vitro . 50 Biểu đồ 19: Ảnh hưởng dịch chiết chuối xanh đến chỉ tiêu số lá của lan Ren in-vitro 51 Biểu đồ 20: Ảnh hưởng dịch chiết chuối xanh đến chỉ tiêu chiều dài lá Ren in-vitro . 51 ix DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 4.1: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu số lá (lá/chồi) của lan Ren in-vitro . 22 Bảng 4.2: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu chiều dài lá (mm) của lan Ren . 23 Bảng 4.3: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu số rễ (rễ/chồi) của lan Ren in-vitro . 24 Bảng 4.4: Ảnh hưởng của BAP và NAA đến chiều dài rễ (mm) lan Ren sau 90NSC . 25 Bảng 4.5: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu chiều cao chồi (mm) lan Ren in-vitro 26 Bảng 4.6: Ảnh hưởng BAP và NAA đến trọng lượng tươi (g) lan Ren in-vitro 27 Bảng 4.7: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu số lá (lá/chồi) của lan Ren in-vitro . 29 Bảng 4.8: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu chiều dài lá (mm) lan Ren in-vitro . 31 Bảng 4.9: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu số rễ (rễ/chồi) của lan Ren in-vitro 32 Bảng 4.10: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu chiều dài rễ (mm) lan Ren in-vitro . 33 Bảng 4.11: Ảnh hưởng NAA và BAP đến chỉ tiêu chiều cao chồi của lan Ren in-vitro 34 Bảng 4.12: Ảnh hưởng NAA và BAP đến trọng lượng tươi (g) của lan Ren in-vitro 36 Bảng 4.13: Ảnh hưởng của nước dừa đến chỉ tiêu số lá và chiều dài lá của lan Ren . 37 Bảng 4.14: Ảnh hưởng nước dừa đến trọng lượng tươi (g) lan Ren in-vitro . 38 Bảng 4.15: Ảnh hưởng của dịch chiết khoai tây đến số lá và chiều dài lá lan Ren 39 Bảng 4.16: Ảnh hưởng dịch chiết khoai tây đến trọng lượng tươi (g) lan Ren in-vitro . 41 Bảng 4.17: Ảnh hưởng dịch chiết chuối xanh đến chỉ tiêu số lá của lan Ren in-vitro . 42 Bảng 4.18: Ảnh hưởng dịch chiết chuối xanh đến trọng lượng tươi (g) Ren in-vitro 43 [...]... nghiệm 4: Theo dõi ảnh hưởng của dịch chiết khoa tây đến sự sinh trưởng, phát triển của cây lan Ren NT1: MTN (ĐC) NT2: MTN + 25ml/lít dịch chiết khoai tây NT3: MTN + 50ml/lít dịch chiết khoai tây NT4: MTN + 100ml/lít dịch chiết khoai tây NT5: MTN + 150ml/lít dịch chiết khoai tây Thí nghiệm 5: Theo dõi ảnh hưởng của dịch chiết chuối xanh đến sự sinh trưởng, phát triển của cây lan Ren NT1: MTN (ĐC) NT2:... nghiệm 1: Ảnh hưởng của 5 nồng độ BAP và 2 nồng độ NAA đến khả năng sinh trưởng, phát triển của lan Ren in-vitro Ren là giống lan có tốc độ sinh trưởng chậm vì vậy trong in-vitro cần phải chọn một số chất điều hòa sinh trưởng ở nồng độ thích hợp để rút ngắn quá trình sinh trưởng của cây BAP và NAA là hai chất điều hòa sinh trưởng thường được sử dụng trong nuôi cấy mô nhằm tăng sinh khối và kích thích... cây.Đối với lan Ren việc phối hợp 2 chất này trong cùng môi trường nuôi cấy hay tách riêng chúng là thích hợp và nồng độ là bao nhiêu để Ren sinh trưởng, phát triển tốt nhất Những thí nghiệm dưới đây được tiến hành nhằm tìm ra nồng độ thích hợp của các chất điều hòa sinh trưởng cho sinh trưởng và phát triển của lan Ren 4.1.1.1 Ảnh hưởng của BAP và NAA đến số lá và chiều dài lá lan Ren in-vitro Xét... hưởng đến sự phát triển của cây Kết quả thí nghiệm giúp xác định được ngưỡng chất điều hoà sinh trưởng để bổ sung vào môi trường nuôi cấy cho phù hợp, tránh lãng phí 4.1.1.2 Ảnh hưởng của BAP và NAA đến số rễ và chiều dài rễ lan Ren in-vitro Xét về chỉ tiêu số rễ: Bảng 4.3: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu số rễ (rễ/chồi) của lan Ren in-vitro NAA (mg/lít) BAP Trung bình NSC (mg/lít) BAP 0 0,2 0,5... hợp NAA (0,2mg/lít) sau 90 ngày nuôi cấy cho chiều dài rễ dài nhất Số liệu bảng 4.4 chỉ ra rằng nồng độ BAP khi cho vào môi trường vượt quá ngưỡng sẽ không giúp cây phát triển tốt mà còn gây ảnh hưởng đến sự phát triển 4.1.1.3 Ảnh hưởng của BAP và NAA đến chiều cao chồi và trọng lượng tươi lan Ren Xét về chỉ tiêu chiều cao chồi: Bảng 4.5: Ảnh hưởng BAP và NAA đến chỉ tiêu chiều cao chồi (mm) lan Ren in-vitro. .. NT3 NT8 0,4 NT4 NT9 0,5 NT5 NT10 18 3.3.2.3 Thí nghiệm theo dõi ảnh hưởng của các dịch chiết hữu cơ đến khả năng sinh trưởng, phát triển của giống lan Ren in-vitro Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên 1 yết tố, 3 lần lặp lại, Thí nghiệm 3: Theo dõi ảnh hưởng của dịch chiết nước dừa đến sự sinh trưởng, phát triển của cây lan Ren Các nghiệm thức: NT1: MTN (ĐC) NT2: MTN + 50ml/lít nước dừa... một phát hoa, kích cỡ khổng lồ của phát hoa đến vẻ cứng cáp bên ngoài của cây Ren thực sự khiến người ta phải ngưỡng mộ và trầm trồ trước vẻ đẹp của chính mình Qua đó và được sự đồng ý của bộ môn Di Truyền - Giống, ban chủ nhiệm khoa Nông Học, trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, tôi thực hiện đề tài “ khảo sát ảnh hưởng của một số yếu tố môi trường nuôi cấy in-vitro trong nhân giống lan Ren ... điều hoà sinh trưởng BAP và NAA và dịch chiết hữu cơ thích hợp, áp dụng vào việc nhân nhanh giống lan Ren 1.2.2 Yêu cầu Bố trí thí nghiệm theo dõi ảnh hưởng của chất điều hoà sinh trưởng BAP và NAA, dịch chiết hữu cơ với các nồng độ khác nhau Theo dõi các chỉ tiêu về số lá, số rễ, chiều cao cây, chiều dài lá, chiều dài rễ từ đó xác định môi trường thích hợp áp dụng cho nhân giống lan Ren in-vitro 2... lá của những NT chỉ có BAP dài hơn so với các nghiệm thức còn lại Nguyên nhân là do BAP kích thích việc phát triển lá của cây lan Ren mạnh hơn khi có sự kết hợp BAP với NAA với nồng độ BAP (1,5mg/lít) không kết hợp NAA sau 90 ngày nuôi cấy cho chiều dài lá dài nhất Thực nghiệm cũng cho thấy rằng nồng độ BAP khi cho vào môi trường vượt quá ngưỡng sẽ không giúp cây phát triển tốt mà còn gây ảnh hưởng đến. .. cứu các phương pháp nghiên cứu cơ bản trong điều kiện Việt Nam, như nuôi cấy bao phấn, nuôi cấy mô sẹo và Protoplast Và đã thành công khi nuôi cấy bao phấn lúa và thuốc lá được công bố vào năm 1978 (Lê Thị Muội và ctv., 1978; Lê Thị Xuân và ctv., 1978) Tiếp đó là thành công nuôi cấy Protoplast khoai tây (Lê Thị Muội và Nguyễn Đức Thành, 1978; Nguyễn Đức Thành và Lê Thị Muội, 1980, 1981) Tiếp theo là . /2008 i KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA BAP, NAA VÀ BA DỊCH CHIẾT TỰ NHIÊN ĐẾN SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN GIỐNG LAN REN (Renanthera sp. ) TRONG NUÔI CẤY IN-VITRO. nghiên cứu Khảo sát ảnh hưởng của BAP, NAA và ba dịch chiết hữu cơ đến sinh trưởng, phát triển giống lan Ren (Renanthera sp. ) trong nuôi cấy in-vitro