Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu của đề tài là phân lập, tuyển chọn một số chủng Lactobacillus có hoạt tính kháng Vibrio để bổ sung vào chế phẩm probiotic nuôi cá chim vây vàng nhằm mục đích tăng tốc độ tăng trưởng, khả
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA MỘT SỐ CHỦNG LACTOBACILLUS TRÊN CÁ CHIM VÂY VÀNG Giảng viên hướng dẫn : Th.s LÊ ĐÌNH ĐỨC Sinh viên thực hiện: LÊ THANH HUÂN Lớp : 49 CNSH Khoá : 49 Nha Trang, tháng năm 2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA MỘT SỐ CHỦNG LACTOBACILLUS TRÊN CÁ CHIM VÂY VÀNG Giảng viên hướng dẫn : Th.s LÊ ĐÌNH ĐỨC Sinh viên thực hiện: LÊ THANH HUÂN Lớp : 49 CNSH Khoá : 49 Nha Trang, tháng năm 2011 i LỜI CẢM ƠN Trước tiên, xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Viện Công nghệ sinh học Môi trường, trường Đại học Nha Trang quan tâm, bảo giảng dạy nhiệt tình, giúp cho tơi có kiến thức quý báu suốt thời gian học tập trường Tôi xin dành lời cảm ơn sâu sắc đến Thầy Lê Đình Đức, Bộ mơn Công nghệ sinh học, Viện Nghiên cứu Công nghệ sinh học môi trường, trường Đại học Nha Trang định hướng, dìu dắt tận tình hướng dẫn tơi suốt thời gian thực đồ án tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn đến chị Nguyễn Minh Nhật, cán quản lý phịng thí nghiệm Công nghệ sinh học, tạo điều kiện thời gian để tơi hồn thành đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn đến bạn sinh viên lớp 49SH, toàn thể bạn sinh viên thực tập phịng thí nghiệm nhiệt tình giúp đỡ tơi Cuối cùng, tơi bày tỏ lịng biết ơn chân thành đến gia đình, bạn bè, người ln quan tâm giúp đỡ, động viên, đồng thời chỗ dựa tinh thần lớn giúp tơi hồn thành tốt cơng việc giao suốt thời gian học tập thực đồ án vừa qua Nha Trang, tháng năm 2011 Sinh viên Lê Thanh Huân GVHD: Th.s Lê Đình Đức http://www.ebook.edu.vn SVTH: Lê Thanh Huân ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ vii KÍ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT viii LỜI MỞ ĐẦU 1.1.1 Giới thiệu vê Probiotics 1.1.2 Cơ chế tác động probiotic 1.1.2.1 Sản sinh chất ức chế 1.1.2.2 Cạnh tranh chất, lượng với vi khuẩn khác 1.1.2.3 Cạnh tranh vị trí bám dính với vi khuẩn gây bệnh 1.1.2.4 Tăng cường đáp ứng miễn dịch 1.1.2.5 Cải thiện chất lượng nước 1.1.3 Ứng dụng probiotic 1.1.3.1 Ứng dụng chế phẩm Probiotic y học, trồng trọt, bảo vệ môi trường 1.1.3.2 Ứng dụng chế phẩm Probiotic nuôi trồng thủy sản 1.1.4 Công nghệ sản xuất chế phẩm probiotics 11 1.1.4.1 Nguyên liệu 12 1.1.4.2 Nhân giống 12 1.1.4.3 Thu sinh khối 12 1.1.4.4 Tạo chế phẩm 12 1.1 Tổng quan cá chim vây vàng 14 1.2.1 Giới thiệu chung cá chim vây vàng 14 1.2.2 Tình hình nghiên cứu cá chim vây vàng giới nước 15 1.2.2.1 Tình hình nghiên cứu cá chim vây vàng giới 15 1.2.2.2 Tình hình nghiên cứu cá chim vây vàng Việt Nam 16 GVHD: Th.s Lê Đình Đức http://www.ebook.edu.vn SVTH: Lê Thanh Huân iii 1.2.3 Tình hình bệnh dịch cá ni nước mặn nói chung cá chim vây vàng nói riêng 17 1.2.3.1 Bệnh nấm, ký sinh trùng 17 1.2.3.2 Bệnh virus 18 1.2.3.3 Bệnh vi khuẩn 18 1.2 Tổng quan vi khuẩn lactic 20 1.3.1 Giới thiệu vi khuẩn lactic 20 1.3.1.1 Giới thiệu chung 20 1.3.1.2 Phân loại vi khuẩn lactic 22 1.3.1.2.1 Lên men đồng hình 22 1.3.1.2.1 Lên men dị hình 23 1.3.2 Giới thiệu giống Lactobacillus 23 1.3.2.1 Giống Lactobacillus – đặc tính vi khuẩn probiotic 24 1.3.2.2.1 Khả sinh chất kháng khuẩn đối kháng với vi khuẩn gây bệnh 24 1.3.2.2.3 Khả chịu mặn 25 1.3.2.2.4 Khả tồn đường tiêu hóa 25 1.3.2.2 Các yếu tố ảnh hưởng tới phát triển vi khuẩn lactic nói chung Lactobacillus nói riêng 26 1.3.2.1.1 Ảnh hưởng chất dinh dưỡng 26 13.2.2.2 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy 29 1.3.3 Tình hình nghiên cứu sử dụng Lactobacillus bổ sung vào chế phẩm probiotic nuôi trồng thủy sản 30 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.1.1 Mẫu cá 33 2.1.2 Môi trường nghiên cứu 33 2 Nội dung nghiên cứu 35 Hình 2.1:Sơ đồ cách tiếp cận nội dung nghiên cứu đề tài 35 GVHD: Th.s Lê Đình Đức http://www.ebook.edu.vn SVTH: Lê Thanh Huân iv Phương pháp nghiên cứu 36 2.3.1 Phương pháp phân lập, tuyển chọn 36 2.3.1.1 Phân lập Lactobacillus 36 2.3.1.2 Nuôi cấy bảo quản chủng Lactobacillus 36 2.3.1.3 Tuyển chọn chủng Lactobacillus kháng Vibrio 37 2.3.2 Quan sát đặc điểm hình thái đặc tính sinh hóa 38 2.3.2.1 Quan sát đặc điểm hình thái 38 2.3.2.1.1 Quan sát tế bào vi khuẩn kính hiển vi 38 2.3.2.1.2 Nhuộm Gram 38 2.3.2.2 Quan sát đặc tính sinh hóa 39 2.3.2.2.1 Khả sinh acid lactic 39 2.3.2.2.2 Phản ứng catalase 40 2.3.2.2.3 Khả di động 40 2.3.2.2.4 Khả sử dụng loại đường: 41 2.3.3 Xác định điều kiện nuôi cấy 41 2.3.3.1 Xác định khả sinh trưởng 41 2.3.3.2 Xác định nhiệt độ thích hợp 42 2.3.3.3 Xác định thời gian nuôi cấy 42 2.3.3.4 Xác định pH thích hợp 42 2.3.4 Xác định đặc tính probiotic 42 2.3.4.1 Xác định khả sinh enzyme tiêu hóa 42 2.3.4.2 Xác định khả chịu mặn 43 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 3.1 Kết phân lập tuyển chọn 44 3.1.1 Phân lập Lactobacillus từ nội tạng cá chim vây vàng 44 3.1.2 Kết tuyển chọn chủng Lactobacillus có hoạt tính kháng Vibrio 44 3.2 Đặc điểm hình thái đặc điểm sinh hóa 46 3.2.1 Đặc điểm hình thái 46 3.2.1.1 Đặc điểm hình thái chủng L1.2 46 GVHD: Th.s Lê Đình Đức http://www.ebook.edu.vn SVTH: Lê Thanh Huân v 3.2.1.2 Đặc điểm hình thái chủng L1.3 48 3.2.2 Đặc điểm sinh hóa 51 3.3 Đặc tính ni cấy đặc tính probiotic 52 3.3.1 Đường cong sinh trưởng chủng L1.2 L1.3 52 3.3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển chủng L1.2 L1.3 54 3.3.3 Thời gian nuôi cấy 55 3.3.4 pH nuôi cấy 56 3.3.5 Khả chịu mặn hai chủng L1.2 L1.3 57 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 59 Kết luận 59 Kiến nghị 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 GVHD: Th.s Lê Đình Đức http://www.ebook.edu.vn SVTH: Lê Thanh Huân vi DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Hoạt tính kháng chủng Vibrio chủng Lactobacillus môi trường MRS, nhiệt độ 37oC 45 Bảng 3.2: Kết thử đặc tính hai chủng L1.2 L1.3 52 GVHD: Th.s Lê Đình Đức http://www.ebook.edu.vn SVTH: Lê Thanh Hn vii DANH MỤC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình 1.1 : Cá chim vây vàng 14 Hình 3.1: Khả đối kháng chủng Vibrio (V 2.1, V 2.2, V 2.3, V 2.4, C1, C7 C23) chủng Lactobacillus môi trường MRS, xác định đường kính vịng kháng khuẩn (D-d) sau 1-2 ngày ni 37oC 45 Hình 3.2: Vòng kháng Vibrio chủng Lactobacillus lựa chọn sau 24h nuôi cấy môi trường MRS, lắc 180 vòng/phút, nhiệt độ 28 - 30oC 46 Hình 3.3: Hình thái khuẩn lạc chủng L1.2 sau 24h môi trường MRS nuôi 340C 47 Hình 3.4: Hình thái tế bào chủng L1.2 soi tươi vật kính 100X 47 Hình 3.5: Hình ảnh nhuộm gram chủng L1.2 48 Hình 3.6: Hình thái khuẩn lạc chủng L1.3 sau 24h môi trường MRS nuôi 340C 49 Hình 3.7: Hình thái tế bào chủng L1.3 soi tươi vật kính 100X 49 Hình 3.8: Hình ảnh nhuộm gram chủng L1.3 50 Hình 3.9: Khả di động chủng L1.2 L1.3 51 Hình 3.10: Khả lên men loại đường chủng L1.2 L1.3 51 Hình 3.11: Mối tương quan thời gian OD600 nm chủng L1.2 53 Hình 3.12: Mối tương quan thời gian OD600 chủng L1.3 53 Hình 3.13 : Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy lên sinh trưởng phát triển chủng L1.2 L1.3 55 Hình 3.14: Mối tương quan thời gian ni cấy mật độ tế bào sống hai chủng L1.2 L1.3 OD600 nm 56 Hình 3.15: Ảnh hưởng pH lên sinh trưởng phát triển chủng L1.2 L1.3 57 Hình 3.16: Ảnh hưởng nồng độ muối NaCl đến phát triển chủng L1.2 L1.3 58 GVHD: Th.s Lê Đình Đức http://www.ebook.edu.vn SVTH: Lê Thanh Hn viii KÍ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT GVHD: Th.s Lê Đình Đức http://www.ebook.edu.vn SVTH: Lê Thanh Huân ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƯỜNG ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ ĐÁNH GIÁ MỘT SỐ ĐẶC TÍNH CỦA MỘT SỐ CHỦNG LACTOBACILLUS TRÊN CÁ CHIM. .. Tổng quan cá chim vây vàng 14 1.2.1 Giới thiệu chung cá chim vây vàng 14 1.2.2 Tình hình nghiên cứu cá chim vây vàng giới nước 15 1.2.2.1 Tình hình nghiên cứu cá chim vây vàng giới... nuôi cá chim vây vàng Các nội dung nghiên cứu đề tài: - Phân lập chủng Lactobacillus Vibrio ruột cá chim vây vàng - Tuyển chọn chủng Lactobacillus có hoạt tính khảng Vibrio - Nghiên cứu đặc điểm
