Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

31 798 2
Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

1. Mở đầu 2. Vật liệu và phương pháp 3. Kết quả nghiên cứu 4. Kết luận và đề nghị

HOÀNG THỊ THÚYNGHIÊN CỨU HỆ THỐNG TÁI SINH CÂY ĐẬU XANH (VIGNA RADIATA (L.) WILCZEK) PHỤC VỤ CHO CHUYỂN GENELuận văn Thạc sĩ sinh họcMã số: 60 42 30Người hướng dẫn khoa học: TS. Lê Xuân ĐắcHà Nội, 2010BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI 2 NỘI DUNG BÁO CÁO1. Mở đầu2. Vật liệu và phương pháp3. Kết quả nghiên cứu4. Kết luận và đề nghị 1. Më §ÇU * Cây đậu xanh Vigna radiata (L.) Wilczek là cây họ đậu ngắn ngày có giá trị kinh tế và dinh dưỡng cao. Tuy nhiên, năng suất đậu xanh của nước ta còn thấp, do bộ giống đậu xanh còn nghèo nàn. * Chính vì vậy những nghiên cứu chọn tạo giống đậu xanh có năng suất cao, kháng bệnh, chống chịu tốt với các điều kiện bất lợi, thời gian chín tập trung… là những vấn đề có ý nghĩa thực tiễn rất quan trọng. * Hiện nay, một trong các kỹ thuật được quan tâm ứng dụng vào chọn tạo giống đậu xanh là sử dụng các kĩ thuật sinh học hiện đại để tạo ra giống đậu xanh mới có nhiều ưu việt. * Trên cơ sở lý luận và thực tiễn của hướng nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành đề tài:“Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh (Vigna radiata (L.) Wilczek) phục vụ cho chuyển gene”. 2. Mục đích nghiên cứu - Xây dựng hệ thống tái sinh cây đậu xanh phục vụ cho chuyển gene.3. Nhiệm vụ nghiên cứu - Nghiên cứu điều kiện khử trùng hạt đậu xanh. - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh thông qua mô sẹo. - Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng (KTST) tới khả năng tạo đa chồi từ nốt lá mầm, chồi ngọn, đốt thân, khả năng kéo dài chồi. - Xác định ảnh hưởng của IBA và NAA tới khả năng ra rễ của chồi đậu xanh. - Xác định giá thể phù hợp cho sinh trưởng phát triển của đậu xanh nuôi cấy mô trong giai đoạn vườn ươm. 4. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: Hai giống đậu xanh ĐX11 và V123 - Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh (Vigna radiata (L.) Wilczek) phục vụ cho chuyển gene.5. Phương pháp nghiên cứu Phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật6. Giả thuyết khoa học Xây dựng được quy trình nuôi cấy in vitro cây đậu xanh phục vụ chuyển gene và những nghiên cứu khác. 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP2.1. Nguyên liệu - 2 giống đậu xanh ĐX11 và V123 do Trung tâm Tài nguyên di truyền thực vật thuộc Viện khoa học Nông nghiệp Việt Nam cung cấp. - Nghiên cứu này được tiến hành tại phòng Công nghệ tế bào thực vật và Trại Thực nghiệm sinh học, thuộc Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam. - Thời gian thực hiện: từ tháng 7/2009 - 9/2010. 2.2. Phương pháp.Hình 2.1. Sơ đồ thí nghiệm tổng quátTái sinh câyHạt đậu xanhKhử trùng hạt. Tạo cây con nuôi cây in vitroTạo mô sẹo Tạo đa chồiTạo cây hoàn chỉnhTrồng cây in vitro trong bầu 2.2.1. Môi trường tạo mô sẹo H1-H11: MS+2,4D (1-11mg/l).2.2.2 Môi trường tái sinh mô sẹo - BAP: MS +1- 4mg/l - Kinetin: MS + 0,5 - 4mg/l. - TDZ: MS + 0,5mg/l - 4mg/l. - BAP: MS + 1 - 2mg/l kết hợp TDZ 0,5 - 4mg/l. 2.2.3. Môi trường tạo đa chồi T1-T9: MS + (BAP (1-3mg/l) hoặc BAP (1-3mg/l và 10% nước dừa) hoặc Kin (1-3mg/l).2.2.4. Môi trường kéo dài chồi K1- K5: MS + GA3(0,5-3 mg/l)2.2.5. Môi trường tạo cây hoàn chỉnh R1- R6: MS + ( IBA (0,1-0,3 mg/l) hoặc NAA (0,1 – 0,3mg/l). + Nuôi cấy trong bình tam giác 250 ml.+ Áng sáng đèn neon có cường độ 2.500lux.+ Thời gian chiếu sáng 14 giờ/ngày.+ Nhiệt độ phòng nuôi cấy 27±20 C. Hoặc nuôi trong buồng tối.2.2.6. Điều kiện nuôi cấy in vitro [...]... Bảng 4: Ảnh hưởng của giá thể tới sức sống của cây đậu xanh CTMT Tỷ lệ sống Cát đen 83,3% Trấu hun 80% Cát + trấu hun (1:1) 100% Hình 20: Cây tái sinh Hình 21: Cây tái sinh trồng trồng trên cát trên cát + trấu hun Hình 22: Cây tái sinh trồng trên trấu hun Hình 23: Cây đậu xanh tái sinh ra hoa và kết quả TÓM TẮT QUY TRÌNH TẠO ĐA CHỒI ĐẬU XANH Phôi hạt chín Cây mầm ( MS+20g/l sucrose+9g/l agar) 3 ngày... 15: Tạo cây hoàn chỉnh Hình 17: Tạo rễ trên môi trường R4 (17 ngày) 3.9 Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian ra rễ tới sức sống của cây 90 80 70 60 Tỷ lệ cây 50 sống (%) 40 30 ĐX11 20 V123 10 0 12 ngày 17 ngày 20 ngày Thời gian TN Hình 18: Ảnh hưởng của thời gian ra rễ tới sức sống của cây Hình 19: Cây đậu xanh tái sinh trồng trên trấu hun 3.10 Nghiên cứu ảnh hưởng của giá thể tới sức sống của cây Bảng... đậu xanh là MS cơ bản có bổ sung 1mg/l GA3 • Đã xác đinh được môi trường tạo cây hoàn chỉnh là MS cơ bản có bổ sung 0,1mg/l IBA trong thời gian nuôi cấy là 12 ngày • Đã xác định được giá thể phù hợp là cát + trấu hun tỷ lệ 1:1 để trồng cây in vitro, với tỷ lệ cây sống là 100% Cây đậu xanh nuôi cấy in vitro sinh trưởng và phát triển bình thường ở điều kiện tự nhiên 4.2 Đề nghị Tiếp tục ứng dụng hệ thống. .. trường tạo cây hoàn chỉnh MS+20g/l sucrose+9g/l agar+0,1mg/l IBA 12 ngày Huận luyện, chăm sóc cây 15 ngày Vườn ươm Giá thể cát + trấu hun (1:1) 4 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận • Bước đầu đã xây dựng được hệ thống nuôi cấy in vitro của cây đậu xanh phục vụ mục đích chuyển gene thông qua tạo đa chồi từ nốt lá mầm, đốt thân và chồi ngọn Môi trường tạo đa chồi là T2 (2mg/l BAP + 10% nước dừa) Hệ số tạo...3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Tạo mẫu đậu xanh sạch in vitro Bảng 1: Tạo mẫu đậu xanh sạch in vitro sau 4 ngày nuôi cấy CTKT CT1 Javen 50% Thời gian khử trùng (phút) Số mẫu cấy 10 Tổng số mẫu nhiễm Mẫu nhiễm Mẫu chết Tổng Mẫu sạch (%) Tổng số mẫu nảy mầm 100 50 0 50 50 50 50 15 100 45 0 45 55 55 55 20 100 30 0 30 70 70 70 25 100 20 2 22 80 78 78 Số mẫu Tỷ lệ (%) 3.1 Tạo mẫu đậu xanh sạch in vitro... 3: Ảnh hưởng của 2,4D đến khả năng tạo mô sẹo từ thân cây Hình 4: Mô sẹo từ mảnh lá trên môi trường tái sinh 4 tuần Hình 5: Mô sẹo từ thân cây trên môi trường tái sinh 4 tuần 3.4 Tạo đa chồi từ nốt lá mầm 4 3.5 3 2.5 Số chồi/ 1 2 lá mầm 1.5 ĐX11 1 V123 0.5 0 ĐC T2 T4 T6 T8 Công thức MT Hình 6: Tạo đa chồi từ nốt lá mầm trên môi trường T5 Hình 7: Hệ số tạo chồi từ nốt lá mầm Số chồi / 1 chồi ngọn 3.5... in vitro Bảng 1: Kết quả mẫu đậu xanh sạch in vitro sau 4 ngày nuôi cấy CTKT CT2 Javen 60% Thời gian khử trùng (phút) Số mẫu cấy 10 Tổng số mẫu nhiễm Mẫu nhiễm Mẫu chết Tổng Mẫu sạch (%) Tổng số mẫu nảy mầm 100 30 0 30 70 70 70 15 100 20 0 20 80 80 80 20 100 17 2 19 83 81 91 25 100 7 3 10 93 90 90 Số mẫu Tỷ lệ (%) 3.1 Tạo mẫu đậu xanh sạch in vitro Bảng 1: Kết quả mẫu đậu xanh sạch in vitro sau 4 ngày... thức MT Hình 10: Tạo đa chồi từ đốt thân trên môi trường T5 Hình 11: Hệ số tạo chồi từ đốt thân 3.7 Môi trường kéo dài chồi 7 6 5 Chiều dài 4 chồi ( cm) 3 ĐX11 2 1 V123 0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 Nồng độ GA3 ( mg/l) Hình 12: Ảnh hưởng của GA3 tới khả năng kéo dài chồi Hình 13: Kéo dài chồi đậu xanh từ nốt lá mầm trên môi trường K2 3.8 Nghiên cứu ảnh hưởng của IBA và NAA tới khả năng ra rễ Bảng 3: Ảnh hưởng... 100% Cây đậu xanh nuôi cấy in vitro sinh trưởng và phát triển bình thường ở điều kiện tự nhiên 4.2 Đề nghị Tiếp tục ứng dụng hệ thống nuôi cấy in vitro này để chuyển các gene có giá trị kinh tế vào cây đậu xanh XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN! ... trường K2 3.8 Nghiên cứu ảnh hưởng của IBA và NAA tới khả năng ra rễ Bảng 3: Ảnh hưởng của IBA và NAA tới khả năng hình thành rễ CTMT Chất KTSST Sau 12 ngày ĐX11 V123 số rễ /cây MS R1 R2 R3 R4 R5 R6 Chiều dài rễ Tỷ lệ ra rễ(%) số rễ /cây Chiều dài rễ Tỷ lệ ra rễ(%) - 19±0,81 1,9±0,33 66,6% 18±0,81 2±0,12 60% 0,1mg/l IBA 24±0,81 3,9±0,28 100% 24±0,81 4±0,12 96,6% 0,2mg/l IBA 35±0,81 4,4±0,28 90% 34±0,81 . nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: Hai giống đậu xanh ĐX11 và V123 - Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh (Vigna radiata. nghiên cứu - Xây dựng hệ thống tái sinh cây đậu xanh phục vụ cho chuyển gene.3. Nhiệm vụ nghiên cứu - Nghiên cứu điều kiện khử trùng hạt đậu xanh.

Ngày đăng: 30/10/2012, 15:38

Hình ảnh liên quan

Hình 2.1. Sơ đồ thí nghiệm tổng quát - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 2.1..

Sơ đồ thí nghiệm tổng quát Xem tại trang 8 của tài liệu.
Bảng 1: Tạo mẫu đậu xanh sạch in vitro sau 4 ngày nuôi cấy - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Bảng 1.

Tạo mẫu đậu xanh sạch in vitro sau 4 ngày nuôi cấy Xem tại trang 11 của tài liệu.
Bảng 1: Kết quả mẫu đậu xanh sạch in vitro sau 4 ngày nuôi cấy           909093103710025918183192171002080808020020100157070703003010010CT2Javen 60% Tỷ lệ (%)Số mẫuTổngMẫu chếtMẫu nhiễm - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Bảng 1.

Kết quả mẫu đậu xanh sạch in vitro sau 4 ngày nuôi cấy 909093103710025918183192171002080808020020100157070703003010010CT2Javen 60% Tỷ lệ (%)Số mẫuTổngMẫu chếtMẫu nhiễm Xem tại trang 12 của tài liệu.
Bảng 1: Kết quả mẫu đậu xanh sạch in vitro sau 4 ngày nuôi cấy           858510055010025979710032010020 1001001000001001594949460610010CT3Javen 70% Tỷ lệ (%)Số mẫuTổngMẫu chếtMẫu nhiễm - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Bảng 1.

Kết quả mẫu đậu xanh sạch in vitro sau 4 ngày nuôi cấy 858510055010025979710032010020 1001001000001001594949460610010CT3Javen 70% Tỷ lệ (%)Số mẫuTổngMẫu chếtMẫu nhiễm Xem tại trang 13 của tài liệu.
Bảng 2: Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến khả năng tạo mô sẹo từ mảnh lá sau 4 tuần nuôi cấy - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Bảng 2.

Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến khả năng tạo mô sẹo từ mảnh lá sau 4 tuần nuôi cấy Xem tại trang 14 của tài liệu.
Bảng 2: Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến khả năng tạo mô sẹo từ mảnh lá sau 4 tuần nuôi cấy - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Bảng 2.

Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến khả năng tạo mô sẹo từ mảnh lá sau 4 tuần nuôi cấy Xem tại trang 15 của tài liệu.
Hình 1: Tạo mô sẹo từ mảnh lá trên môi trường H3 - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 1.

Tạo mô sẹo từ mảnh lá trên môi trường H3 Xem tại trang 16 của tài liệu.
Hình 3: Ảnh hưởng của 2,4D đến khả năng tạo mô sẹo từ thân cây - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 3.

Ảnh hưởng của 2,4D đến khả năng tạo mô sẹo từ thân cây Xem tại trang 17 của tài liệu.
Hình 2: Mô sẹo từ thân mầm trên môi trường H3 - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 2.

Mô sẹo từ thân mầm trên môi trường H3 Xem tại trang 17 của tài liệu.
Hình 4: Mô sẹo từ mảnh lá trên môi trường tái sinh 4 tuần - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 4.

Mô sẹo từ mảnh lá trên môi trường tái sinh 4 tuần Xem tại trang 18 của tài liệu.
Hình 5: Mô sẹo từ thân cây trên môi trường tái sinh 4 tuần - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 5.

Mô sẹo từ thân cây trên môi trường tái sinh 4 tuần Xem tại trang 18 của tài liệu.
Hình 6: Tạo đa chồi từ nốt lá mầm - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 6.

Tạo đa chồi từ nốt lá mầm Xem tại trang 19 của tài liệu.
trên môi trường T5 Hình 7: Hệ số tạo chồi từ nốt lá mầm - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

tr.

ên môi trường T5 Hình 7: Hệ số tạo chồi từ nốt lá mầm Xem tại trang 19 của tài liệu.
Hình 8: Ảnh hưởng của chất KTST  đến khả năng tạo đa chồi từ chồi ngọn - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 8.

Ảnh hưởng của chất KTST đến khả năng tạo đa chồi từ chồi ngọn Xem tại trang 20 của tài liệu.
Hình 9: Tạo đa chồi trên môi trường T5  - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 9.

Tạo đa chồi trên môi trường T5 Xem tại trang 20 của tài liệu.
Hình 11: Hệ số tạo chồi từ đốt thân  - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 11.

Hệ số tạo chồi từ đốt thân Xem tại trang 21 của tài liệu.
Hình 10: Tạo đa chồi từ đốt thân trên môi trường T5  - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 10.

Tạo đa chồi từ đốt thân trên môi trường T5 Xem tại trang 21 của tài liệu.
Hình 12: Ảnh hưởng của GA3  tới khả năng kéo dài chồi  - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 12.

Ảnh hưởng của GA3 tới khả năng kéo dài chồi Xem tại trang 22 của tài liệu.
Hình 13: Kéo dài chồi đậu xanh từ nốt lá mầm trên môi trường K2  - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 13.

Kéo dài chồi đậu xanh từ nốt lá mầm trên môi trường K2 Xem tại trang 22 của tài liệu.
Bảng 3: Ảnh hưởng của IBA và NAA tới khả năng hình thành rễ - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Bảng 3.

Ảnh hưởng của IBA và NAA tới khả năng hình thành rễ Xem tại trang 23 của tài liệu.
Hình 14: Tạo rễ trên môi trường R1  - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 14.

Tạo rễ trên môi trường R1 Xem tại trang 24 của tài liệu.
Hình 15: Tạo cây hoàn chỉnh - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 15.

Tạo cây hoàn chỉnh Xem tại trang 24 của tài liệu.
Hình 16: Tạo rễ trên môi trường R4 (17 ngày) - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 16.

Tạo rễ trên môi trường R4 (17 ngày) Xem tại trang 24 của tài liệu.
Hình 18: Ảnh hưởng của thời gian ra - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 18.

Ảnh hưởng của thời gian ra Xem tại trang 25 của tài liệu.
Bảng 4: Ảnh hưởng của giá thể tới sức sống của cây đậu xanh - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Bảng 4.

Ảnh hưởng của giá thể tới sức sống của cây đậu xanh Xem tại trang 26 của tài liệu.
Hình 20: Cây tái sinh - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 20.

Cây tái sinh Xem tại trang 27 của tài liệu.
Hình 23: Cây đậu xanh tái sinh ra hoa và kết quả - Nghiên cứu hệ thống tái sinh cây đậu xanh

Hình 23.

Cây đậu xanh tái sinh ra hoa và kết quả Xem tại trang 28 của tài liệu.

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan