Đang tải... (xem toàn văn)
Chẩn đoán có hai vai trò quan trọng trong quản lý và khống chế bệnh thủy sản. Trước hết, các kỹ thuật chẩn đoán bệnh thủy sản được ứng dụng rất hiệu quả để sàng lọc những cá thể mang nhữ
2008 THONG TIN VE TAC GIA PHAM VI VA DOI TUQNG SU DUNG CUA GIAO TRINH THONG TIN VE TAC GIA Họ tên: Đặng Thị Hoàng Oanh Sinh năm:1969 Cơ quan công tác: Bộ môn: Sinh học Bệnh Thuỷ sản Khoa: Thuỷ sản Trường: Đại học cần Thơ Địa Email để lién hé: dthoanh@ctu.edu.vn PHAM VI VA DOI TUONG SU DUNG Giáo trình có thé dùng tham khảo cho ngành: Nuôi trồng thuỷ sản bệnh học thuỷ sản Có thể dùng cho trường nào: trường Cao đẳng đại học Các từ khóa: vi khuẩn, vi-rút, vi nắm, nguyên sinh động vật, PCR., kỹ thuật miễn dịch, bệnh cá, bệnh tôm, chân đoán, thủy sản Yêu cầu kiến thức trước học mơn này: sinh học bản, sinh hố, sinh học phân tử đại cương Đã xuất ¡in chưa, có Nhà xuất nào: Giáo trình lưu hành nội Đại Học Cần Thơ Chưa xuât thức nhà xuât MỤC LỤC THONG TIN VE TAC GIA MUC LUC LOI CAM TA GIỚI THIỆU CHUONG I: NHUNG KIEN THUC TONG QUAT 10 L1 SỨC KHOE VA DONG VAT THUY SAN 10 1.2 NHUNG VAN DE CHUNG TRONG CHUAN DOAN BENH THUY SAN 10 1.2.1 Sự đồng thao tác thu, xử lý phân tích mẫu . - 10 1.2.2 So sánh kết phịng thí nghiệm - + + exse vs se: 10 1.2.2.1 Các dạng kết ý nghĩa chúng . ¿1 TT TH TH cưng 34 34 35 III.1.3 Mẫu phân tích s55 tt S311 BE 3T E11 g1 cưng ng tre krry 35 III.1.4 Các đạng khuếch tán miễn địch: 5x3 xvEvEEkrkerrsrkrrrsrkree 35 II.1.4.1 Kết tủa môi trường lỎng sẻ se EEEs *EEx xe xếsryckếc 35 II.1.4.2 Tủa mơi trường Ø€Ì - co 2s v9 nh ng ng re 37 III.1.4.3 Miễn địch khuếch tán điện -¿22t crvEExekxerxerrrrrrersrrrrre II.1.4.4 Miễn dịch khuếch tán: Điện với miễn dịch khuếch tán in situ III.1.5 Ưu nhược điểm phương pháp -. s5 + 3xx epzxeersrra 00BW0008.1 vờ ờớgg III.1.5.2 Nhược điỂm:, cà HE E1 T171 TH HH ràng cưng 38 38 39 39 39 IIL2 PHƯƠNG PHÁP NGƯNG KẾT MIỄN DỊCH jiUãN [on 39 39 HI.2.2 Xếp loại phản ứng ngưng kết .- -csconnnrertrtrrriiiirrirerrerrr 40 III.2.2.1 Ngưng kết trực tiếp: t1 1.1110 900 TH III.2.2.2 Ngưng kết gián tiẾp: - II.2.2.3 Ngưng kết nhân tạO: III.2.3 Ứng đỤng III.2.4 Mẫu phân tích - S6 T109 T009 1109.080 09.1800099 0119 09109.1800079.0809 0911 40 Go E1 E11 9211975137512 re rkee 40 + c5 t3} EESESEEESESEEESEkEExEEEEESLkrrkrkerrerkee 40 161 1111 ¿sư E1 BE T1 T11 TH Tnhh 41 E1 T7 cưng ngưng sư 41 III2.5 Ưu nhược điểm phương pháp -+ t5 xxx Ekeersrkrrrrsree 41 III.2.5.1 L u Êm):, ¿+ s tEEEEềEEEELEEEEEELEEEEESEEEEEEEEEkESEEESrEkerkerkrerrrrkcrrria 41 085.80: 1111777 ` 41 IIL3 KỸ THUẬT MIỄN DỊCH HUỲNH QUANG ii II 0N xu.) 11a 41 41 42 IH.3.2.1 Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trực tiếp KT ng TT 1n 099 01019 914 42 III.3.2.2 Kỹ thuật miễn địch huỳng quang gián tiẾp 5c 57s se crs sec 42 III.3.3 Ứng đụng - - 56c 5E Ex9 SE E1 St T1 HH cà HT HH ky grckt re 43 III.3.4 Mẫu phân tích : Set S1 E11 1T TH T11 311101 11 111g gà re 43 II.3.5 Ưu nhược điểm phương pháp cc-cc©cccccrrrrrrrrrrirririe 43 III.3.5.1 Ưu điỂm: .III.3.5.2 Nhược điểm: II.4 KỸ THUẬT ii 5N Can MIỄN tt 2k E*Ek E3 Ek 3H HH TT g7 Tà ng kế chờ re 43 : sctchn TL EE101111 0115 711x711 rrrrrerrkerrrri 43 DỊCH LIEN KET ENZYM 44 44 TIT.4.4 3a ¡ 0011071587 45 III.4.2 Ứng đụng, - 26% 1t E11 1g HC TT ch r 45 III.4.3 Mẫu phân tích -: 2t s2 St cv xe eEgkxckEExerkgrkerkbrkrkkbrerkerrerkerrerkrre 45 III.4.4.1 Kỹ thuật ELISA gián tiẾp - sư sEkctEkEEkkkErxkrerxkrererkee 45 II.4.4.2 Kỹ thuật ELISA trực tiẾp . - ¿5 2s 2k ErEkEEEkkEExrrkerxrkeererkee 46 II.4.5 Ưu nhược điểm phương pháp .-.¿- ¿text EkEecke sex se rreg 47 III.4.5.1 Ưu điỂH): 56 2S SE BE EEEE111215E71EEEEEXECkEEESCEkErrerkrrrerrkrrrrri 47 08.8.⁄8/ /.1011777 ` 47 1.5 TAI LIEU THAM KHAO CHUONG III 47 CHUONG 4: CAC KY THUAT PHAN TU IV.1 KY THUAT PHAN UNG CHUOI TRUNG HOP IV.1.1 NguyÊn tẮC ch th HH 48 48 TH 1T TH Cà TT Thi cha 48 IV.1.1.1 Giai đoạn biến tính (đenafuratiOT\): -s- se Ss EEks k*SEx kg xegryckếc 48 IV.1.1.2 Giai đoạn lai (hybridization): -scsecenheheeieiiiiiiiriiriiiiii 48 IV.1.1.3 Giai đoạn tổng hợp (hay kéo đài) (extension): -ccccsccccee 48 IV.1.2 Ứng ụng - Ngoc nh tư H1 111111 TH TT TH TH ngưng 49 50 IV.1.3.1 Ly trích DNA hay RNA từ vật để sử đụng làm mạch khuôn 50 là) on 0n IV.1.3.3 Đối cÏhỨng nh nh 14< TH T1 TH g1 TH ch 50 Tà ngư chư pvc 51 IV.1.4 Cac han ché cia phirong phap PCR.vvcscccssscsssssssssscsssssssssssesssssessesessessssesssenes 52 IV.1.5 Các dạng PCR co TH TH HH TT TH 0908 01908 960 52 TV.1.5.1 PCR na 52 IS v0.0 0o 0n 33 IV.1.5.3 PCR thoi gian thậT - 2G 5c 159101930 19581931 830 10118 58011 ng 8110 xe 54 IV.2 KY THUAT PHAN TICH TINH DA DANG VE CHIEU DAI DOAN GIOI HAN 54 IV.2.1 Nguyên Ïý , - ch HH TH ng TT n1 011160 109.1819 10095 34 TV.2.2, Phirong pha 54 IV.2.3 Hệ thống phi phóng xạ IDIG ¿6 x52 £EEE£EktEEEEkEEEEExEExrkrrrrkrrrerkrre 55 IV.2.4 Ứng dụng kỹ thuật lai Southern - + + >Ekk ke cv seei 56 IV.2.5 Mẫu phân tícHh - tt 16B E17 1gp se 57 TV.2.6 Uti va nhuroc didin .csesccssssscsesscscscsssesscssscscscssssscsvssesssssssvaveusnsacsvasaesvsasasasessees 57 TV.2.6.1 Ut GiGi: woscecssessccsseesssssscsssessssssssscsssssssssessscsussssessscssecsssessessscsssssssesesssessseaes 57 '@X.VСn HN NT 34 IV.3 KY THUAT LAI IN SITU I6 n0 89.7 1177 7.7 57 57 57 57 IV.3.3 Mẫu phân tíCHh hs hư Tư HE Tư pH cư tưng cưng rke 57 IV.3.4 Ưu nhược điểm phương pháp se c2 xxx ckpsxeersrri 58 IS S0 0a 58 IV.3.4.2 Nhược điỂm:, cu v9 919 190999171 99g71 g7 g9 g1 re px 58 IV.4 TÀI LIỆU THAM KHẢO CHƯƠNG IV 58 CHUONG V: MOT SO QUI TRINH PHAT HIEN BỆNH Ở THỦY SÁẮN 59 V.1 PHAT HIEN VI-RUT BOM TRANG O TOM BANG KY THUAT PCR 59 V.1.1 D6i tuong va pham Vi 4p dung c.ceccsccssesssssssssssessssssssssssssssssssesssssessssesssveesesseesens 59 V.1.2 Tài liệu tham khảo xây dựng tiêu chuẩn ngành -6c +56 56s ccvz 59 V.1.3 Giải thích thuật gh cssessscsssessssesessescsssesesssesessscessscesssseessseeesssesessseeeesseesess 59 V.1.4 Thiết bị, dụng cụ, hóa Chất so te x3 E993 SE 3E V.LA.L Thiét bi, Aung nh V.1.4.2 Mỗi, hóa Nă “xe V.1.5.1 Số lượng V.1.5.2 Yêu cầu EEsxersrvsee 60 - 60 chất 52 tt 11 13111 11071111 H1 11 g1 ty ghe niệu 61 a,š.ễ'ồ.ễồê'ê.'êễ.ễêễ ”- 62 mẫu ©9111 H11 g7 kg kế cưng cư 62 mẫu để phân tích s6 tk kocxesrksrrria 63 V.1.6 Phương pháp tiến hànhh «SE EE k3 EEKEEEEKE SE E1 gEcgk serrkg 63 V.1.6.1 Xử lý mẫu : se hư TEHSHEH TT gà TH gen 63 V.1.6.2 Phản ứng khuếch đại PCR -s2 sgk Erxkkersrkeererkee 63 V.1.6.3 Tiến hành điện di . ¿5£ se St S2 E+EEEE 13211 110713 11 tk tri tưưo 64 X1 V.1.8 Quy định đảm bảo an fOàn - cà 64 re rrrrkererreg 65 V.2 PHÁT HIỆN YHV VÀ GAV BẰNG KIT IQ2000 YHV/GAYV 65 'JZĂNc V.2.2 Thành ph ân .- + 4.đHA:: 65 s5 E+ESEE3EEEEEEEEEESEEEVSEEEEESEEEEESEEEESEEEEEEEEEEEEErrkerrrrke 65 V.2.3 Thiết bị hóa chất .: sc S ts HE E1 T7 HH Hàng tr ng Hàn tr ngưng 66 V.2.4 Gidi han phat hién va tinh an 67 V.2.5 Chuẩn bị mẫu ly trich RNA v.sssesssssssssessssssssssessssssesssessssssesssssesessessersssesseesees 67 NWZ SN? co áos cố ằ 67 V.2.5.2 Hoà tan RNA HH HH Hà Hà Hang V.2.6 Qui trình khuêch đại - nhe 68 68 V.2.6.2 Điều kiện phản Ứng , nhà HH V,2.6.3 Phương thức chuân bị phản Ứng . - s3 1111919 1118581511 811511 1x, V.2.7, Điện HH HH HH HH HH HH 000000001000000100000000001000100000 WPXäN®u (on vi n6 V.2.7.2 Điện di K0 1441010001114100801.100Á0100810000.100000100.0000060110.0100 V.2.7.3 Thuộc nhuộm gel đọc kẾt - -c« nhe 68 69 70 70 70 71 V.2.6.1 Chuân bị hoá chât phản Ứng cành Hè V.2.8 Doc kết Y0 0H11 1T #14303 Tsáii na 68 71 73 V.3 PHÁT HIỆN VI KHUAN Ở CÁ BẰNG PHƯƠNG PHÁP RELP 74 V.3.1 Phương pháp thu mẫu bệnh phẩm phân lập vi khuẩn 2-5 74 W&W gan o0 0701 74 V.3.2.1 Ly trích DNA Hhì Hà He 74 V.3.2.2 Cắt DNA băng enzym giới hạn TH H11112101nnnreiiee 74 V.3.2.3 Q trình khử puria, biên tính thâm chun .- co 75 V.3.2.4 Quá trình tiên lai lai DNA màng - co co cv ssssirrsee 75 V.3.2.5 Phát vạch DNA HH 75 V.3.3 Xử lý thông kỆ ve Hh nh HH HH1 te 75 V,3.4 Đọc kẾt QUẢ Gv TH S900 Tà HH TT HH H09 909 908 76 PHỤ LỤC 1: CÁC BƯỚC THU MẪU CHÂN ĐOÁN BỆNH 77 Phụ lục 1a Các bước thu mẫu chan đoán bệnh cá 77 Phụ lục 1b Các bước thu mẫu chan đốn bệnh tơm 79 Phụ lục 1c Các bước thu mẫu chan đoán bệnh nhuyễn thể - 80 PHU LUC 2: CAC DAU HIEU BENH THUONG GAP Ở TÔNM «