CÁC GIAI ĐOẠN CỦA Q TRÌNH THỤ TINH TRỨNG BỊ TRONG ỐNG NGHIỆM sv: Nguyễn hữu Hội ĐẠI HỌC THÀNH TÂY KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC MỤC LỤC A- Giới thiệu thụ tinh ống nghiệm B- Nội dung I- Điều kiện xảy trình thụ tinh II- Các trình C- Kết A- Khái niệm Thụ tinh nghiệm (In vitro fertilization): Là phương pháp cho giao tử đực(tinh trùng) giao tử (trứng) gặp thụ tinh bên thể, sau chuyển hợp tử phơi vào buồng tử cung mẹ B- Nội dung I- Điều kiện xảy trình thụ tinh 1- Trứng thành thục 2- Tinh trùng kiện toàn lực thụ tinh – môi trường thiết bị hỗ trợ II- Các trình 1- Tinh trùng xuyên qua lớp tế bào vành phóng xạ 2- tương tác tinh trùng với màng suốt 3- tinh trùng gắn vào vùng suốt 4- phản ứng đỉnh 5- tinh trùng xuyên qua màng suốt 6-sự dung hợp giao tử đực I- Điều kiện xảy trình thụ tinh 1- Trứng thành thục - Thu buồng trứng - Bảo vệ vận chuyển buồng trứng - Hút trứng từ nang - Rửa chọn lọc trứng - Nuôi thành thục trứng ống nhiệm - Sự thành thục trứng Thu trứng - Thu buồng trứng: thu vật chết Mổ cố định buồng trứng lấy kéo cắt buồng trứng - Bảo vệ vận chuyển buồng trứng: buồng trứng rửa 3-4 lần dung dịch nước muối sinh lí có bổ sung kháng sinh bảo quản môi trường PBS, nhiệt độ khống chế 30350C,thời gian chuyển phịng thí nghiệm 2-4 - Hút trứng từ nang: dùng bơm tiêm máy hút chun dụng có kích thước lỗ kim 18G hút nang(d=2-6mm) bước làm tủ vô trùng Rửa chọn lọc trứng dịch nang trứng hút có lẫn trứng tế bào nang trứng bơm vào đĩa Petri Đưa đĩa vào kinh hiển vi soi ( có độ phóng đại 40 đến 100 lần) trứng gắp Pipet thủy tinh rửa vài lần môi trường DPDS môi trường thích hợp Sự thành thục trứng - Sự thành thục nhân + Hình thái + Sinh lí, sinh hóa + Sự ổn định trạng thái Metaphase II (ổn định phân bào) - Sự thành thục nguyên sinh chất - Sự thành thục màng trứng - Nuôi thành thục trứng ống nhiệm - Đánh giá thành thục trứng bò Sự thành thục nhân - Hình thái: tan biến màng nhân, nhiêm sắc thể đặc lại, xuất thể cực thứ nhất, nhiễm sắc thể trạng thái Metaphase II trì đến tinh trùng xâm nhập - Sinh lí, sinh hóa: + hoạt hóa thành thục trứng yếu tố MPF( maturation promoting factor ) + progesterone kích thích sản sinh MPF + MPF thúc đẩy phân bào, đặc lại nhiễm sắc thể , phát triển nhân, xuất thoi phân bào, khơng đặc hiệu Sinh lí, sinh hóa + MPF phức hợp proteinbao gồm liên hợp số cycline protein kanise p34(kiểm sốt phân bào) + q trình lớn lên màng sinh chất , biệt hóa ti thể, tổng hợp , tích lũy nỗn hồng, ARN thơng tin, biến hạt trung tâm, hoàn tất trước xảy phục hồi phân bào trứng(mức AMP vòng trứng tăng ức chế phân bào) Ảnh tinh trùng – Môi trường thiết bị hỗ trợ Dung dịch muối sinh lí:(natri clorid) hay nước muối pha chế với tỷ lệ 0,9%, tức lít nước với gam muối tinh khiết, dung dịch đẳng trương Mơi trường PBS: Phosphate đệm mặn Nó giải pháp dựa muối-nước có chứa natri clorua , natri phosphat, đệm giúp trì số pH HĨA CHẤT KHỐI LƯỢNG (g) NaCl Napyruvate KCl Na2HPO4 0,036 0,2 1,15 0,2 0,1 0,1 100.000 đơn vị 0,5 2-4 KH2PO4 Glucose MgCl26H20 CaCl22H2O Penicillin Streptomycin Bovine Serum Albumin – Môi trường thiết bị hỗ trợ Mơi trường DPBS HĨA CHẤT TRỌNG LƯỢNG (g) NaCl KCl Na2HPO4 80 11,2 10 1,32 1,21 0,5 0,36 1.000.000 đơn vị KH2PO4 Glucose CaCl22H2O MgCl27H20 Streptomyci Napyruvate Na penicillin G Thiết bị II- Các trình 1- Tinh trùng xuyên qua lớp tế bào vành phóng xạ 2- tương tác tinh trùng với màng suốt 3- tinh trùng gắn vào vùng suốt 4- phản ứng đỉnh 5- tinh trùng xuyên qua màng suốt 6-sự dung hợp giao tử đực 7- hoạt hóa tế bào trứng 1- Tinh trùng xuyên qua lớp tế bào vành phóng xạ • Trứng thành thục bao bọc xung quanh nhiều lớp tế bào cumulus chúng tạo lên đám ma trận giàu axit hyaluronic • Trong invivo tinh trùng tiếp xúc trực tiếp với vùng suốt trứng lớp tế bào cumulus tan trứng vào vòi trứng Nhưng invitro đám tế bào nằm bao quanh trứng có tinh trùng kiện toàn lực qua lớp tế bào acrosom nguyên vẹn 1- Tinh trùng xun qua lớp tế bào vành phóng xạ • Hyaluronidaza với lượng liên kết với màng ngồi tinh trùng giúp xuyên qua lớp tế bào cumulus dễ dàng 2- tương tác tinh trùng với màng suốt • Trước xuyên qua màng suốt trứng tinh trùng bám vào bề mặt màng suốt thực phản ứng acrosom 3- Tinh trùng gắn vào vùng suốt • Tinh trùng kiện tồn lực kết dính vào vùng suốt ZP3 (chuối oligosaccharit có chứa fucose Nacetyl glusamin) tinh trùng nhận biết xảy phản ứng đỉnh bọc lọ màng acrosom 4- phản ứng đỉnh 4- phản ứng đỉnh • Đặc trưng dung giải màng sinh chất màng ngồi acrosom tinh trùng • Một mặt hình thành bọng màng mặt khác tạo nên lỗ trống chất chứa acrosom giải phóng ngồi • Phản ứng xảy nhanh, phụ thuộc vào nồng độ Ca2+(tăng nội bào) • Cảm ứng phản ứng đỉnh màng suốt trứng • ZP3 có chức : gắn kết tinh trùng, phát động phản ứng đỉnh 5- tinh trùng xuyên qua màng suốt • Khi thực phản ứng đỉnh tinh trùng thải bọng màng lên bề mặt vùng suốt chui qua lớp vỏ bọc theo đường chéo góc có bờ mép nhị enzym • Các enzym hyaluronidaza phân hủy axit hyaluronic vùng suốt, acrosin không làm tan rã vùng suốt thủy phân phần số glycoprotein hai giải phóng với enzym nằm màng acrosom tếp xúc trực tiếp với vùng suốt xam nhập vào 7- Sự hoạt hóa tế bào trứng • Nỗn bào tinh trùng hoạt hóa kèm theo biến đổi trao đổi chất thay đổi quan trọng tế bào • Sự xuất bào hạt lớp vỏ , hoàn thành phân chia giảm nhiễm lần thứ biểu lớp vỏ trứng C- Kết • Sau 48 kể từ thời điểm thụ tinh hợp tử phân chia giai đoạn 2-4 tế bào quan sát kính hiển vi soi Xin chân thành cảm ơn ! Chúc bạn thành công The End ... trình thụ tinh 1- Trứng thành thục - Thu buồng trứng - Bảo vệ vận chuyển buồng trứng - Hút trứng từ nang - Rửa chọn lọc trứng - Nuôi thành thục trứng ống nhiệm - Sự thành thục trứng Thu trứng. .. dụng trứng vào thụ tinh ống nghiệm ) mà đẻ đối chứng Hình ảnh trứng bị thành thục 2- Tinh trùng kiện toàn lực thụ tinh • Loại bỏ tinh pha lỗng tinh trùng môi trường (PBS, 199 ) để xảy q trình thụ. .. Giới thiệu thụ tinh ống nghiệm B- Nội dung I- Điều kiện xảy trình thụ tinh II- Các trình C- Kết A- Khái niệm Thụ tinh nghiệm (In vitro fertilization): Là phương pháp cho giao tử đực (tinh trùng)