Đang tải... (xem toàn văn)
Đề tài được thực hiện với mục tiêu sau: Khảo sát các kỹ thuật phân tích acid amin ứng dụng vào xác định acid amin trong nhung hươu, xác định dấu ấn trên sắc ký đồ dấu vân tay (finger print) của thành phần acid amin trong nhung hươu tươi và khô để phân biệt với các sản phẩm nhung hươu không tự nhiên, tối ưu hóa qui trình định lượng acid amin trên các mẫu nhung hươu tươi, khô, bột và chế phẩm viên nang.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ACID AMIN TRONG CHẾ PHẨM TỪ NHUNG HƯƠU (Cornu Cervi sp.) Nguyễn Thị Diệu*, Vĩnh Định* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Viện Y Dược Học Dân Tộc TP.Hồ Chí Minh gần sử dụng Nhung hươu để sản xuất chế phẩm đáp ứng nhu cầu điều trị, thị trường nước tín nhiệm Tuy vị thuốc kinh điển, cải tiến dạng bào chế, sử dụng dạng viên nang để nâng cao chất lượng thuốc, đề tài thực với mục tiêu sau: - Khảo sát kỹ thuật phân tích acid amin ứng dụng vào xác định acid amin nhung hươu - Xác định dấu ấn sắc ký đồ dấu vân tay (Finger print) thành phần acid amin nhung hươu tươi khô để phân biệt với sản phẩm nhung hươu khơng tự nhiên.- Tối ưu hóa qui trình định lượng acid amin mẫu nhung hươu tươi, khô, bột chế phẩm viên nang Đối tượng & Phương pháp: - Viên nang Nhung hươu chứa 500 mg bột khô nhung hươu Viện YDHDT - Các acid amin (AA) chuẩn (12 AA) chuẩn nội 3-Nitro-L-tyrosin - Khảo sát thời gian thủy phân protein thành acid amin.- Xây dựng quy trình định lượng đồng thời acid amin SKLHNC Kết quả: - Chọn thời gian thủy phân protein thành AA 24 h - Định tính phản ứng hóa học: có αAA (Tyr, Arg) AA vòng; sắc ký lớp mỏng (SKLM): phát AA AA chưa biết, xem dấu vân tay để định tính AA; sắc ký lỏng hiệu cao (SKLHNC): tách 10 AA Ala, Arg, Gly, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Ser, Val - Xây dựng quy trình định lượng đồng thời AA SKLHNC với: + Điều kiện sắc ký: Máy SKLHNC Alliance Water 2695; đầu dò PDA Waters 2996; cột Xterra, RP 18 (4,6 x 250 mm; µm); to cột: 40 oC; Vtiêm: 20 Ɔl; tốc độ dòng: ml/phút; λ: 460 nm; pha động: Đệm Natri acetat 25 mM (pH 6,5) chứa 4% DMF (A), Acetonitril (B), chương trình gradient dung mơi + Chuẩn bị dung dịch: DABS-Cl mM; đệm Natri acetat 25 mM (pH 6,5) chứa 4% DMF; Nitro-tyrosin (nội chuẩn)141,5 Ɔg/ml HCl 0,001 N; hỗn hợp chuẩn acid amin dung dịch HCl 0,001 N có nồng độ tương tự mẫu cần phân tích: Serin 34,4 Ɔg/ml, Glycin 172,9 Ɔg/ml, Alanin 142,9 Ɔg/ml, Valin 37,5 Ɔg/ml, Leucin 48,7 Ɔg/ml, Phenylalanin 90,6 Ɔg/ml; mẫu thử: hòa cắn thủy phân 24 h với HCl 0,001 N thành 10 ml, lọc, lấy ml pha loãng với nước cất thành 10 ml + Phản ứng tạo dẫn chất: 125 Ɔl mẫu chuẩn (thử), 125 Ɔl nội chuẩn, 250 Ɔl đệm NaHC3 100 mM (pH 8,3), ml DABS-Cl mM Lắc rung nhanh, ủ từ 70 – 72 oC / 12 phút Để nguội Thêm 3,5 ml Na2HP4 50 mM (pH 7,0): EtH (1:1), lắc rung 30 giây, lọc qua màng lọc 0,45 Ɔm + Đánh giá quy trình phân tích: tính tương tích hệ thống, tính đặc hiệu, độ lặp lại, khoảng tuyến tính, độ đúng: đạt yêu cầu (RSD < 2%) + Áp dụng định lượng lô viên nang Nhung hươu: 010111, 020411 030711 Chỉ tiêu khác: tính chất; độ đồng khối lượng, khối lượng làm khô, độ rã, độ nhiễm khuẩn - TCCS đề nghị: tính chất; độ đồng khối lượng: KLTB ± 7,5%; khối lượng làm khô: ≤ 5%, độ rã ≤ 30 phút; định tính AA pưhh, SKLM SKLHNC; định lượng (mg/viên): Ser (≥ 0,33), Gly (≥ 1,73), Ala (≥ 1,43), Val (≥ 0,38), Leu (≥ 0,47) Phe (≥ 0,88); độ nhiễm khuẩn (DĐVN IV) Kết luận: Đã chiết xuất, thủy phân xác định thời gian thủy phân protein; định tính AA phản ứng hóa học, SKLM (dấu vân tay) SKLHNC; xây dựng đánh giá quy trình xác định đồng thời AA với kỹ thuật tạo dẫn chất tiền cột với thuốc thử DABS-Cl; ứng dụng định lượng lô viên nang Nhung hươu; khảo sát tiêu khác góp phần xây dựng tiêu chuẩn sở cho chế phẩm Từ khóa: nhung hươu, thủy phân protein, acid amin, DABS-Cl * Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Vĩnh Định ĐT: 0903639586 Chuyên Đề Dược Học Email: npvdinh@yahoo.com 203 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 ABSTRACT DEVELPING A QUANTITATIN METHD F AMIN ACIDS FRM CERF VELVET Nguyen Thi Dieu, Vinh Dinh * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No - 2014: 203 - 208 Introduction: Cerf velvet is a high value drug which was classified the second one in the four drugs of traditional medicine as Ginseng – Velvet – Cinnamon - Aconite Traditional Medicine Institute of Ho Chi Minh city recently used Cerf velvet for production of Cerf velvet capsules To improve product quality for registration of drugs and to meet the treatment needs at Institute, this study was done with the goal " Developing a quantitation method of amino acids from Cerf velvet” Materials and methods: - Chemicals: Acetonitrile (HPLC); sodium acetate (Merck), DMF (Merck), 3Nitro-L-tyrosine (Sigma Aldrich), DABS-Cl (Fluka); 12 amino acids (AA) standard (Drug Quality control Institute Centre) - Materials: Cerf Velvet capsules containing 500 mg dry powder of Cerf velvet of the Institute Determination the time of protein hydrolysis by TLC and HPLC: weigh accurately 10 g of the powder and extract completely protein by Soxhlet with EtH 75%, evaporate to 10 ml extract; hydrolyse with 0.5% phenol / M HCl at 110 °C in h, 12 h, 18 h, 24 h and 30 h, evaporate to dryness - Qualifying AA by specific reactions, TLC and HPLC - Developing a method for simultaneously assay of AA in Cerf Velvet capsules by HPLC Results and discussion: - The time for protein hydrolysis is 24 h - Determinated α-AA in Cerf Velvet capsules as Tyr, Arg and aromatic acid amins; by TLC determinated AA and unknown acid amins and this method seems as a fingerprint chromatography to identify the AA in samples; by SKLHNC determinated 10 AA - Developed an SKLHNC method to simultaneously assay AA in Cerf velvet capsules with conditions such as: + Static phase: Xterra RP 18 (4.6 x 250 mm; Ɔm); Column temp.: 40 °C; Injection volume: 20 Ɔl; Flow rate: ml/min; PDA detector set at 460 nm; Mobile phase is a mixture of acetonitrile and buffer (4% DMF/25 mM sodium acetate, pH 6.5) was run in gradient program + Stock solution: 3-Nitro-L-tyrosine (IS) 141.5 Ɔg/ml in 0.001 N HCl; mixed of AA standard in 0.001 N HCl with similar concentrations of samples to be analyzed: 34.4 Ɔg/ml Ser, 172.9 Ɔg/ml Gly, 142.9 Ɔg/ml Ala, 37.5 Ɔg/ml Val, 48.7 Ɔg/ml Leu, 90.6 Ɔg/ml Phe; Samples: dissolve the hydrolyzed residue of 24 h in 0.001 N HCl, transfer to a 10 ml volumetric flask, and filter Transfer accuratery ml of the filtrate to a 10 ml volumetric flask, diluted with distilled water to volume + Derivatizing condition: 125 Ɔl AA standard (sample) solution, 125 Ɔl IS, 250 Ɔl 100 mM NaHC3 buffer, pH 8.3 and ml mM DABS-Cl Lắc rung quickly, incubated at 70 to 72 oC / 12 min, cooled Add 3.5 ml 50 mM Na2HP4, pH 7.0: EtH (1:1), lắc rung 30 sec, filtered through a 0.45 Ɔm filter + Validated the SKLHNC method: the system compatibility, specificity, repeatability, linear range, accuracy were conformed (RSD < 2%) + Applied to assay three lots of Cerf velvet capsules: 010111, 020411 and 030711 + ther criteria: Characteristics; Mass uniformity; Loss of weight; Disintegration time; Microbiological contamination - In-house specification is proposed such as: Characteristics; Mass uniformity: average mass ± 7.5%; Loss of weight ≤ 5%, Disintegration time ≤ 30 min; determine AA by CR, TLC and SKLHNC; Assay (mg/capsule): Ser ≥ 0.33, Gly ≥ 1.73, Ala ≥ 1.43, Val ≥ 0.38, Leu ≥ 0.47 Phe ≥ 0.88; Microbiological contamination (Vietnamese Pharmacopoeria, 2009) Conclusion: Protein in Cerf velvet has been extracted, hydrolyzed and the time to hydrolyse protein was 24 h; identified AA by CR, TLC (as a fingerprint TLC) and by SKLHNC; Developed an SKLHNC method to simultaneously assay AA using offline derivatisation technical with DABS-Cl reagent, the method was rapid, accurate and precise; Assayed lots Cerf velvet capsules; ther criteria; Contributed to develop an in-house specification for Cerf velvet capsules Keywords: Cerf velvet, Cornu cervi 204 Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học ĐẶT VẤN ĐỀ Nhung hươu vị thuốc quý đứng thứ hai sau Nhân sâm tứ bảo dược Y học cổ truyền Sâm-Nhung-Quế-Phụ, có tác dụng tăng sức đề kháng thể, giảm mệt mỏi, nâng cao sức làm việc Nhung hươu sử dụng để sản xuất chế phẩm để đáp ứng nhu cầu điều trị thị trường nước Nhằm nâng cao chất lượng thuốc làm sở để đăng ký đáp ứng nhu cầu điều trị bệnh nhân, đề tài thực với mục tiêu sau: - Khảo sát xác định thời gian thủy phân protein viên nang nhung hươu thành acid amin - Định tính acid amin phản ứng hóa học, sắc ký lớp mỏng (SKLM) SKLHNC - Xây dựng quy trình định lượng số acid amin viên nang nhung hươu ĐỐI TƯỢNG -PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Viên nang Nhung hươu chứa 500 mg bột khô nhung hươu Viện YDHDT SKLHNC: chiết kiệt protein 10 g bột thuốc Soxhlet với EtOH 75%, thu 10 ml dịch chiết; thủy phân 0,5% phenol / HCl M 110 oC h, 12 h, 18 h, 24 h 30 h, cô dến cắn - Định tính AA phản ứng hóa học (pưhh), SKLM SKLHNC - Xây dựng quy trình định lượng đồng thời AA SKLHNC KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Khảo sát chọn thời gian thủy phân protein sắc ký lớp mỏng Mẫu thành phẩm thủy phân h 12 h 18 h 24 h 30 h Hỗn hợp acid amin (Arg, Lys, Gly, Ala, His, Val Phe) Mẫu nguyên liệu thủy phân 24 h + Chuẩn đối chiếu: Tên Hàm lượng - L-Alanin 100,59 % Glycin 99,10 % Histidin.HCl 100,5 % L-Arginin 99,83 % L-Lysin.HCl 99,80 % L-Serin 99,09 % L-Valin 99,90 % L-Isoleucin 99,880 % L-Leucin 99,14% Phenylalanin 99,50 % Prolin 99,30 % Threonin 100,26 % Lô 0100071 0100068 0100065 0100077 0100078 0100091 0100069 0100073 0100080 0100070 0100083 0100074 Nguồn Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Viện KN thuốc TW Chuẩn nội: 3-Nitro-L-tyrosin (Sigma Aldrich, Pcode: 101005822, CAS: 621-44-3) Hình 1: Sắc ký đồ mẫu thủy phân protein thời gian khác Thuốc thử: 4-(Dimethylamino)azobenzen-4’sulfonyl clorid (DABS-Cl, Fluka, Pcode: 100999094, CAS: 56512-49-3) Các vết acid amin mẫu thùy phân 18 h, 24 h 30 h có màu sắc gần tương đương, phải dùng HPLC để xác định thời gian thủy phân thích hợp dựa vào tỉ lệ diện tích pic acid amin nội chuẩn Phương pháp nghiên cứu - Khảo sát chọn thời gian thủy phân protein thành acid amin (AA) SKLM 204 Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học Khảo sát chọn thời gian thủy phân protein HPLC Hình 2: Tỷ lệ diện tích đỉnh acid amin nội chuẩn (Saa/Sis) thời gian thủy phân 18, 24, 30 biết Arginin), Xanthoproteic (phát acid Để định lượng đồng thời acid amin Serin, amin vòng) Glycin, Alanin, Valin, Leucin Phenylalanin thời gian thủy phân protein tốt 24 h + Định tính acid amin SKLM chiều: + Định tính phản ứng hóa học: dịch thủy phân protein cho phản ứng dương tính với thuốc thử Ninhydrin (có acid α-amin), thuốc thử Millon (phát tyrosin), Saccaguichi (nhận Chiều 1: Isopropanol – amoniac đđ (7:3) Val His Chiều 2: n-butanol – acid acetic băng – nước (3:1:1) Phe Phe Val His Ala Gly Arg Ala Gly Lys Arg Hỗn hợp Lys Thử Hình 2: SK đồ chiều AA chuẩn (Arg, Lys, Gly, Ala, His, Val Phe) mẫu viên (đánh dấu ) Trên SK đồ xác định số acid amin viên nhung hươu có đủ acid amin hỗn hợp chuẩn (Arginin, Lysin, Glycin, Alanin, Histidin, Valin Phenylalanin), ngồi có acid amin khác chưa xác định Chuyên Đề Dược Học Do dùng SKLM chiều xem SK dấu vân tay để định tính acid amin nhung hươu + Định tính acid amin SKLHNC: 205 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Lysin Nghiên cứu Y học Hình 3: Sắc ký đồ định tính acid amin có chế phẩm Hệ thống SKLHNC Alliance Waters 2695; đầu dò PDA 2996; Cột sắc ký Xterra, RP 18 (4,6 x 250 mm; μm); Nhiệt độ cột: 40 oC; Thể tích tiêm: 20 μl; Tốc độ dòng: ml/phút; Bước sóng phát hiện: 460 nm; Pha động: Acetonitril – dung dịch đệm (Natri acetat 25 mM pH 6,5 chứa 4% DMF), chương trình gradient dung mơi theo bảng Bảng 1: Chương trình gradient dung môi Thời gian (phút) 20 32 34 36 44 Acetonitril (%) 15 40 70 70 15 15 dung dịch đệm (%) 85 60 30 30 85 85 Sắc ký đồ cho thấy đỉnh chuẩn nội (3Nitro-L-tyrosin) tách rõ rệt 32,64 phút rửa giải vùng có đỉnh acid amin viên nang nhung hươu Diện tích chiều cao đỉnh chuẩn nội tương đương với diện tích chiều cao đỉnh khác sắc ký đồ Xây dựng quy trình định lượng đồng thời acid amin SKLHNC - Điều kiện sắc ký 206 Dung dịch nội chuẩn: cân 28,3 mg Nitro tyrosin vào bình định mức 20 ml, hòa tan HCl 0,01 N điền đến vạch với dung dịch Hút xác ml dung dịch cho vào bình định mức 10 ml, pha loãng nước cất lần điền đến vạch Dung dịch mẫu chuẩn đối chiếu: Chuẩn bị hỗn hợp chuẩn acid amin dung dịch HCl 0,001 N có nồng độ tương tự mẫu cần phân tích: Serin 34,4 Ɔg/ml, Glycin 172,9 Ɔg/ml, Alanin 142,9 Ɔg/ml, Valin 37,5 Ɔg/ml, Leucin 48,7 Ɔg/ml, Phenylalanin 90,6 Ɔg/ml - Dung dịch mẫu thử: sau chiết protein từ mẫu thử bột nhung hươu, thủy phân protein thành acid amin 24 Hòa cắn thủy phân 24 h với lượng vừa đủ dung dịch HCl 0,001 N, cho vào bình định mức 10 ml, tráng cốc điền đến vạch với dung dịch Lọc bỏ 2ml dịch lọc đầu (dung dịch thử gốc) Hút xác ml dịch lọc cho vào bình định mức 10 ml, thêm nước cất đến vạch (dung dịch phản ứng) Thực phản ứng tạo dẫn chất trước qua cột sắc ký: hút xác 125 μl dung dịch mẫu chuẩn (thử), thêm xác 125 μl dung dịch nội chuẩn, thêm 250 μl dung dịch đệm Natri bicarbonat 100 mM (pH 8,3), Chuyên Đề Dược Học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 thêm ml thuốc thử DABS-Cl mM Lắc rung nhanh, ủ nhiệt độ từ 70 – 72 oC Để nguội phút Thêm 3,5 ml dung dịch Na2HPO4 50 mM (pH 7,0): EtOH (1:1), lắc rung 30 giây, lọc qua màng lọc 0,45 mm (Dung dịch tiêm vào hệ thống sắc ký) Đánh giá quy trình phân tích Nghiên cứu Y học Khảo sát độ lặp lại Kết lần đo cho kết RSD < 2,0% Khảo sát tính tuyến tính Bảng 2: Phương trình hồi quy tuyến tính hệ số tương quan nồng độ tỷ lệ diện tích đỉnh Phương trình hồi quy Serin ŷ = 8,5006 x Glycin ŷ = 11,6472 x Alanin ŷ = 7,1457 x Valin ŷ = 7,6209 x Leucin ŷ = 7,2633 x Phenylalanin ŷ = 1,3892 x Acid amin Khảo sát tính tương tích hệ thống Mỗi acid amin có RSD% thơng số đạt qui định: α > 1; RS ≥ 1,5; 0,8 ≤ AS ≤ 1,5; N lớn: > 75.000 Vậy quy trình lượng đồng thời Serin, Glycin, Alanin, Valin, Leucin, Phenylalanin đạt tính tương thích hệ thống Hệ số tương quan R² = 0,9998 R = 0,9991 R² = 0,9996 R² = 0,9993 R² = 0,9999 R² = 0,9992 Khoảng nồng độ (mg/ml) 0,0185 – 0,1298 0,0582 – 0,4658 0,0924 – 0,7396 0,0209 – 0,1464 0,0264 – 0,1849 0,0519 – 0,4149 Khảo sát độ Khảo sát tính đặc hiệu Kết khảo sát cho thấy Mẫu trắng nội chuẩn khơng có đỉnh trùng với đỉnh hoạt chất Khi thêm lượng acid amin chuẩn vào mẫu thử, diện tích đỉnh acid amin tương ứng tăng lên so với trước thêm chuẩn Phổ UV-Vis mẫu thử giống phổ UV-Vis mẫu chuẩn Kiểm tra độ tinh khiết pic mẫu thừ mẫu chuẩn đạt (Purity Angle (PA) < Purity Threshold (TH)) Kết cho thấy tỷ lệ phục hồi thực nghiệm hàm lượng acid amin nằm khoảng 98 – 102% Kết luận: quy trình định lượng đồng thời acid amin Serin Glycin, Alanin, Valin, Leucin Phenylalanin dịch thủy phân viên nang nhung hươu sắc ký lỏng hiệu cao đạt yêu cầu tính tương thích hệ thống, tính đặc hiệu, độ lập lại, tính tuyến tính độ quy trình kiểm nghiệm Kết định lượng acid amin viên nang nhung hươu Bảng 3: Kết định lượng acid amin viên nang nhung hươu lô Serin (mg/viên) Glycin (mg/viên) Alanin (mg/viên) Valin (mg/viên) Leucin (mg/viên) Phenylalanin (mg/viên) RSD (%) 0,88 0,88 1,30 1,39 1,42 1,53 µ 0,38 ± 0,0035 1,92 ± 0,0177 1,58 ± 0,0216 0,42 ± 0,0060 0,54 ± 0,0080 1,00 ± 0,0161 RSD (%) 1,35 1,27 1,69 1,52 1,25 1,43 µ 0,34 ± 0,0048 1,79 ± 0,0238 1,48 ± 0,0262 0,39 ± 0,0062 0,49 ± 0,0064 0,91 ± 0,0137 STT Lô 010111 lô 020411 lô 030711 RSD (%) 1,76 0,91 1,03 1,71 1,25 1,00 µ 0,38 ± 0,0070 1,90 ± 0,0181 1,56 ± 0,0169 0,39 ± 0,0069 0,50 ± 0,0066 1,03 ± 0,0107 KẾT LUẬN Qua thực nghiệm, đề tài đạt kết nghiên cứu sau: + Chiết thủy phân protein pha lỏng HCl M chứa 0,5% phenol ống thủy phân + Định tính acid amin sắc ký lớp mỏng Chuyên Đề Dược Học 207 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 chiều chiều TÀI LIỆU THAM KHẢO + Tạo dẫn chất trước cột acid amin với thuốc thử DABS-Cl + Sử dụng chương trình gradient dung mơi phương pháp SKLHNC với detector PDA để phân tích hỗn hợp acid amin + Xây dựng đánh giá quy trình xác định đồng thời hỗn hợp acid amin Serin, Glycin, Alanin, Valin, Leucin Phenylalanin dịch thủy phân viên nang Nhung hươu Viện Y Dược Học Dân tộc TP.HCM với kỹ thuật tạo dẫn chất tiền cột với thuốc thử DABS-Cl Bộ Y Tế (2009), "Chuyên luận Lộc Nhung" Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học Bộ Y Tế (2009), "Phụ lục 10,11 Phương pháp phân tích acid amin", Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học Trần Thị Bích Vân, Trần Việt Hùng, Trịnh Văn Lẩu, Nguyễn Thị Chinh, Bùi Đình Sơn (2008), "Nghiên cứu định tính, định lượng acid amin thiết yếu chế phẩm thuốc phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - tạo dẫn xuất cột", Kiểm nghiệm thuốc, (19): 13 – 16 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập 1, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tr 1133 – 1136 Ngày nhận báo: 14.12.2012 Ngày phản biện nhận xét báo: 20.3.2013 Ngày báo đăng: 208 10.03.2014 Chuyên Đề Dược Học ... sát xác định thời gian thủy phân protein viên nang nhung hươu thành acid amin - Định tính acid amin phản ứng hóa học, sắc ký lớp mỏng (SKLM) SKLHNC - Xây dựng quy trình định lượng số acid amin viên... hiệu, độ lập lại, tính tuyến tính độ quy trình kiểm nghiệm Kết định lượng acid amin viên nang nhung hươu Bảng 3: Kết định lượng acid amin viên nang nhung hươu lô Serin (mg/viên) Glycin (mg/viên)... tay để định tính acid amin nhung hươu + Định tính acid amin SKLHNC: 205 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Lysin Nghiên cứu Y học Hình 3: Sắc ký đồ định tính acid amin có chế phẩm Hệ