Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá độ ổn định số lượng vi khuẩn (VK) probiotic trong một số dạng bào chế sau thời gian bảo quản. Đối tượng và phương pháp: nghiên cứu gồm Lactobacillus acidophilus dạng bột, cốm, đóng gói nitơ, vi nang và bao kép.
TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 ĐỘ ỔN ĐỊNH SỐ LƢỢNG VI KHUẨN PROBIOTIC TRONG MỘT SỐ DẠNG BÀO CHẾ Lê Thị Thu Hà*; Nguyễn Tú Anh* TÓM TẮT Mục tiêu: đánh giá độ ổn định số lượng vi khuẩn (VK) probiotic số dạng bào chế sau thời gian bảo quản Đối tượng phương pháp: nghiên cứu gồm Lactobacillus acidophilus dạng bột, cốm, đóng gói nitơ, vi nang bao kép; VK chi Enterococcus dạng vi nang, bao kép lưu hành thị trường sau ngày sản xuất 12 tháng, 10 tháng tháng; VK chi Bacillus dạng lỏng sau ngày sản xuất 12 tháng Xác định số lượng VK m i thời điểm phương pháp đếm khuẩn lạc môi trường rắn Kết kết luận: dạng bào chế có nitơ dạng bao kép giúp số lượng VK ổn định Sau 12 tháng, số lượng L acidophilus dạng đóng gói có nitơ Enterococcus dạng bao kép khơng thay đổi Trong đó, số lượng VK L acidophilus dạng bột bị giảm nhi u nhất, khoảng 30 lần so với ban đầu, dạng cốm giảm 30% Enterococcus vi nang giảm 14,3 lần Bacillus dạng lỏng giảm 12,6% sau 12 tháng * Từ khóa: Probiotic; Số lượng vi khuẩn; L acidophilus; Enterococcus; Bacillus The Stability of Probiotic Bacterial Population in some Dosage Forms Summary Objectives: To evaluate the stability of probiotic bacterial population in some dosage forms after storage time Methods: Some probiotic’s preparations were tested including Lactobacillus acidophilus in the freeze-drying powder, granular, nitrogen-packed, micro-capsuled and duo-coated forms; Enterococcus in micro-capsuled form those were produced 12 months, 10 months and months ago; Bacillus in suspension was produced 12 months ago At each period time, the number of survival bacteria is enumerated by plating method Results: The form containing nitrogen and the dual-coated have the most stable bacterial population After 12 months, the population of L acidophilus in the form of packaged with nitrogen and of dual-coated Enterococcus are not changed Meanwhile, the number of bacteria L acidophilus in powder form is reduced the most, about 30 times that of the original, as nuggets reduced to 30% Enterococcus population of microcapsules fell 14.3 times and the liquid Bacillus decrease 12.6% after 12 months * Key words: Probiotic; Bacteria population; L acidophilus; Enterococcus; Bacillus ĐẶT VẤN ĐỀ Ngoài việc sử d ng thực phẩm chức năng, probiotic dùng phổ biến dạng dược phẩm Do dược phẩm probiotic có thành phần vi sinh v t sống, nên chất lượng sản phẩm, c thể số lượng vi sinh v t bị ảnh hưởng nhi u yếu tố ba giai đoạn: * Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Tú Anh (nguyentuanhvn@yahoo.com) Ngày nhận bài: 16/02/2016; Ngày phản biện đánh giá báo: 18/03/2016 Ngày báo đăng: 23/03/2016 27 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 sản xuất, bảo quản sử d ng Đó tác động yếu tố lý hóa q trình bào chế lực tác động, nhiệt độ, hóa chất, tác động dịch sinh học đường tiêu hóa dùng probiotic theo đường uống [1, 2] Đặc biệt, vùng khí h u nhiệt đới nóng, ẩm Việt Nam, số lượng vi sinh v t probiotic bị giảm đáng kể suốt thời gian bảo quản Khi đó, tác d ng probiotic không đạt hiệu mong muốn, khơng có đủ số lượng cần thiết vị trí tác động Đó lý nhà sản xuất không ngừng phát triển kỹ thu t quy trình sản xuất probiotic, từ dạng đơn giản bột, cốm… đến dạng phức tạp vi nang, bao kép… với m c đích nhằm bảo vệ số lượng vi sinh v t chế phẩm Hiện nay, công nghệ bào chế probiotic trải qua hệ ((hình 1) probiotic cung cấp thị trường với nhi u dạng sử d ng khác [3] Vì v y, khảo sát thực nhằm: Đưa nhận định ảnh hưởng dạng bào chế đến số lượng vi sinh vật probiotic sau thời gian sản xuất lưu hành Hình 1: Các hệ cơng nghệ bào chế probiotic VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣ ng nghiên cứu L acidophilus dạng bột, cốm, đóng gói nitơ, vi nang bao kép; VK chi Enterococcus dạng vi nang, bao kép lưu hành thị trường sau ngày sản xuất 12 tháng, 10 tháng tháng; VK chi Bacillus dạng lỏng sau ngày sản xuất 12 tháng M i đối tượng nghiên cứu khảo sát 03 đơn vị đóng gói nhỏ Phƣơng pháp nghiên cứu * Xác định số lượng VK phương pháp đếm khuẩn lạc môi trường rắn: Pha loãng mẫu cấp 10 dung dịch NaCl 0,85% thành dãy nồng độ liên 28 tiếp M i độ pha loãng lấy 200 μl dịch trải môi trường thạch tương ứng: MRS (Merck) L acidophilus, Slanetz Bartley Enterococcus thạch dinh dưỡng NA (Merck) Bacillus Ủ 37oC 24 - 48 Đếm số khuẩn lạc hộp có 30 - 300 khuẩn lạc [4, 6] M i nồng độ pha loãng lặp lại lần Xác định số tế bào VK/1 ml dịch theo công thức: N A= xD V N: số khuẩn lạc trung bình độ pha lỗng V: thể tích dịch mẫu đem trải D: độ pha lỗng TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 Xử lý kết phân tích thống kê mơ tả, so sánh số lượng VK trung bình phép kiểm định ANOVA phân phối student để đánh giá khác biệt số lượng VK sau thời gian bảo quản số lượng VK ban đầu [7] KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Số lƣ ng VK L acidophilus dạng bào chế sau hoảng thời gian Tại m i khoảng thời gian, dạng bào chế thử nghiệm 03 đơn vị đóng gói riêng lẻ lặp lại 03 lần m i độ pha loãng Kết phân phối student cho thấy sau khoảng thời gian bảo quản, số lượng L acidophillus dạng bào chế bột, cốm, vi nang đ u giảm so với ban đầu (p > 0,05); có dạng đóng gói nitơ, lượng VK có giảm, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p < 0,05), thời điểm sau 12 tháng Tiếp theo, đánh giá khác biệt số lượng VK thời điểm dạng bào chế khác (bảng 1) phân tích ANOVA Bảng 1: Dân số trung bình L acidophilus dạng bào chế Sản phẩm Số lƣ ng Sau Sau 10 VK ban đầu tháng tháng (CFU/đv) (CFU/đv) (CFU/đv) Sau 12 tháng (CFU/đv) Bột 108 x 106 x 106 x 106 Cốm 108 x 107 3,5 x 107 x 107 Đóng gói nitơ 108 6,8 x 107 6,8 x 107 6,9 x 107 Vi nang 108 5,3 x 107 x 107 3,8 x 107 Bao kép 108 x 106 8,4 x 106 x 106 (CFU: đơn vị tạo khuẩn lạc; đv: đơn vị đóng gói) Sau 8, 10 12 tháng đ u thu giá trị F > F crit, nghĩa dạng bào chế có ảnh hưởng đến số lượng VK suốt q trình bảo quản Trong đó, đóng gói nitơ có khả bảo vệ L acidophillus vi khuẩn kị khí tốt mơi trường đóng gói loại bỏ oxy, L acidophillus ổn định dạng bột, nhược điểm dạng thuốc bột dễ chịu tác động nhiệt độ độ ẩm trình bảo quản Mặc dù vi nang bao kép hai dạng bào chế thuộc hệ nhất, tác d ng bảo vệ L acidophillus u kiện bảo quản chưa thực hiệu Tuy nhiên, dạng lại có ưu điểm b t v đặc tính sinh học, khả bảo vệ L acidophillus mơi trường dày phóng thích VK đến vị trí tác động ruột [8] Số lƣ ng VK chi Enterococcus dạng bào chế sau hoảng thời gian Hiện nay, Enterococcus thường bào chế 02 dạng vi nang bao kép Khi khảo sát số lượng VK Enterococcus dạng bao kép, phân phối student cho kết giá trị p lô sản xuất đ u < 0,05, nghĩa số lượng Enterococcus qua thời gian bảo quản 8, 10, 12 tháng khơng có khác biệt so với số lượng VK ban đầu Trong đó, phân tích tương tự Enterococcus đóng gói vi nang, giá trị p tất hời điểm khảo sát đ u > 0,05, cho thấy số lượng VK giảm theo thời gian (bảng 2) Có thể vi nang gồm 02 lớp bao Lớp bao thứ chủ yếu có tác d ng bảo vệ VK không bị ảnh hưởng dung môi nhiệt độ trình bao lớp thứ hai Còn lớp bao thứ hai tan 29 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 ruột Vì v y, với vai trò bảo vệ VK probiotic, chi Lactobacillus Enterococcus vi nang đ u khơng cao Dạng bao kép có 02 lớp Lớp bao thứ hệ thống peptid/protein, kiểm soát q trình phóng thích VK theo pH Lớp bao thứ hai h n hợp polysaccharid hydrocolloid, bảo vệ VK chống lại độ ẩm, nhiệt độ, áp suất… Do đó, ưu điểm bao kép giúp làm tăng độ ổn định VK suốt trình sản xuất lưu hành probiotic, đặc biệt chi Enterococcus Bảng 2: Số lượng trung bình Enterococcus dạng bào chế Sản phẩm Số lƣ ng VK ban đầu (CFU/đv) Vi nang 10 1,8 x 10 1,1 x 10 7 x 10 Bao kép 10 3,6 x 10 3,6 x 10 2,8 x 10 Sau tháng (CFU/đv) Sau 10 tháng (CFU/đv) Sau 12 tháng (CFU/đv) Số lƣ ng VK chi Bacillus sau 12 tháng Bảng 3: Số lượng Bacillus dạng lỏng sau 12 tháng Bacillus dạng lỏng Lần lặp lại Đơn vị đóng gói x 10 6,8 x 10 2 x 10 6,9 x 10 x 10 6,4 x 10 x 10 6,7 x 10 x 10 6,4 x 10 2 x 10 6,5 x 10 x 10 6,2 x 10 x 10 6,2 x 10 x 10 6,2 x 10 2 x 10 6,1 x 10 x 10 6,1 x 10 x 10 6,1 x 10 Trung bình (M2) Đơn vị đóng gói Trung bình (M3) Sau 12 tháng (CFU/đv) Trung bình (M1) Đơn vị đóng gói Số lƣ ng VK ban đầu (CFU/đv) Để so sánh khác biệt số trung bình M1, M2, M3, chúng tơi dựa vào phân tích ANOVA, F = 1,1 < Fcrit = 5,4 cho thấy số lượng VK trung bình đơn vị đóng gói khơng khác biệt Để so sánh giá trị trung bình với số VK ban đầu, dùng phân phối student, giá trị p = 4,56 > 0,05, nghĩa sau 12 tháng bảo quản, số lượng Bacillus dạng lỏng bị giảm so với ban đầu (tỷ lệ giảm 12,6%) 30 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 4-2016 KẾT LUẬN Dạng bào chế thời gian bảo quản ảnh hưởng đáng kể đến số lượngvi sinh v t chế phẩm probiotic Theo kết khảo sát, dạng đóng gói nitơ, bao kép có số lượng VK ổn định qua thời gian bảo quản 8, 10 12 tháng Dạng bột, cốm, vi nang dạng lỏng có số lượng VK giảm sau 8, 10 12 tháng Có thể nh n thấy m i vi sinh v t phù hợp với dạng bào chế định, dạng đóng gói nitơ thích hợp L acidophilus, số lượng Enterococcus ổn định dạng bao kép Tuy nhiên, để chọn lựa dạng bào chế tối ưu, cần khảo sát thêm khả chịu đựng dịch vị, dịch m t chúng, nhằm đảm bảo probiotic đến nơi tác động bám dính lên thành ruột để phát huy tác d ng sinh học TÀI LIỆU THAM KHẢO Lê Quan Nghiệm, Huỳnh V n Hóa Bào chế sinh dược học, t p 2005 Lê Quan Nghiệm, Huỳnh V n Hóa Bào chế sinh dược học, t p 2005 Nguyễn V n Thanh, Phạm Thị Minh Tâm Xây dựng qui trình kiểm tra chất lượng chế phẩm probiotic có chứa VK thuộc chi Lactobacillus Tạp chí Kiểm nghiệm Thuốc 2004, tr.9-11 Trần Linh Thước Phương pháp phân tích vi sinh v t nước, thực phẩm mỹ phẩm Nhà xuất Giáo d c 2005 Đặng v n Hòa, Võ Thị Bạch Huệ Sử d ng thống kê phân tích số liệu 2007 Sandholm M Technologycal challenges for future probiotic food African Journal of Biotechnology 2007, pp.505-509 W Hsinlin, CF Hwang Viable counts, characteristic evaluation for commercial lactic acid bacteria products Food Microbiology 2005, pp.74-81 A Kuvic, H Singh Recent advances in microencapsulation of probiotics for industrial applications and targeted delivery Trends Food Sci Technol 2007, 18, pp.240-251 31 ... QUÂN SỰ SỐ 4-2016 KẾT LUẬN Dạng bào chế thời gian bảo quản ảnh hưởng đáng kể đến số lượngvi sinh v t chế phẩm probiotic Theo kết khảo sát, dạng đóng gói nitơ, bao kép có số lượng VK ổn định qua... tháng Dạng bột, cốm, vi nang dạng lỏng có số lượng VK giảm sau 8, 10 12 tháng Có thể nh n thấy m i vi sinh v t phù hợp với dạng bào chế định, dạng đóng gói nitơ thích hợp L acidophilus, số lượng. .. trí tác động ruột [8] Số lƣ ng VK chi Enterococcus dạng bào chế sau hoảng thời gian Hiện nay, Enterococcus thường bào chế 02 dạng vi nang bao kép Khi khảo sát số lượng VK Enterococcus dạng bao