Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm so sánh độ chính xác của kỹ thuật QF-PCR và kỹ thuật di truyền tế bào trong chẩn đoán lệch bội nhiễm sắc thể (NST) 13, 18, 21, X và Y. Đồng thời, đánh giá giá trị của từng marker của kỹ thuật QF-PCR trong chẩn đoán lệch bội NST 13, 18, 21, X và Y.
TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ-2017 GIÁ TRỊ KỸ THUẬT QF-PCR TRONG CHẨN ĐOÁN MỘT SỐ BẤT THƢ NG LỆCH BỘI NHIỄM SẮC THỂ Hoàng Thị Ngọc Lan*; Lê Việt Dũng* Bùi Đức Thắng**; Lê Phương Thảo** TĨM TẮT Mục tiêu: So sánh độ xác kỹ thuật QF-PCR kỹ thuật di truyền tế bào chẩn đoán lệch bội nhiễm sắc thể (NST) 13, 18, 21, X Y Đồng thời, đánh giá giá trị marker kỹ thuật QF-PCR chẩn đoán lệch bội NST 13, 18, 21, X Y Đối tượng phương pháp: nghiên cứu hồi cứu, cắt ngang mô tả 500 mẫu xét nghiệm từ tế bào ối bạch cầu máu ngoại vi Mỗi mẫu xét nghiệm tiến hành đồng thời phương pháp: xét nghiệm QF-PCR xét nghiệm NST từ tế bào ối từ tế bào máu ngoại vi Kết QF-PCR phân tích máy đọc trình tự tự động ABI 3130 Kết quả: so sánh kết QF-PCR với di truyền tế bào số lượng NST 13, 18, 21, X Y theo phương pháp cho thấy phù hợp với kết karyotype 448/500 (99,6%), QF-PCR cho chẩn đoán 99,8% trường hợp không phù hợp liên quan đến NST giới tính: trường hợp QF-PCR XY, karyotype XX: Kết QF-PCR phù hợp với hình ảnh lâm sàng (người nam, có tinh hồn khơng có tinh trùng); trường hợp thứ 2: QF-PCR XY, karyotype XX/XY Các marker có độ xác cao kỹ thuật QF-PCR SRY (100%), HPRT (85,2%), D13S258 (83%), D18S386 (80,6%), D21S1442 (84%) Một số marker có giá trị chẩn đốn thấp 70% D13S797 (55,2%), D18S390 (52,8%), D21S1446 (60%), X22 (54,6%)… tập hợp marker chẩn đốn cho NST có độ xác cao: 100% với NST 13, 18, 21 99,8% với NST giới tính Kết luận: kỹ thuật QF-PCR cho chẩn đốn nhanh xác lệch bội NST 13, 18, 21 đặc biệt cho NST giới tính * Từ khóa: Nhiễm sắc thể; QF- PCR; Trisomy 21; Trình tự lặp ngắn STR Value of QF-PCR in the Diagnosis of Chromosomes Aneuploidies Summary Objectives: To compare the accuracy of quantitative fluorescent PCR (QF-PCR) technique and cytogenetic technique for the prenatal diagnosis of chromosome aneuploidies 13, 18, 21, X and Y Also, evaluate the value of each marker of QF-PCR technique for the diagnosis of chromosomes aneuploidies 13, 18, 21, X and Y Subjects and methods: A cross-sectional descriptive, retrospective study was conducted on 500 amniotic fluid samples or peripheral blood leukocytes Each sample was applied for both QF- PCR and cytogenetic techniques * Trường Đại học Y Hà Nội ** Bệnh viện Phụ Sản Trung ương Người phản hồi (Corresponding): Hoàng Ngọc Lan (hoangngoclancdts@gmail.com) Ngày nhận bài: 27/07/2017; Ngày phản biện đánh giá báo: 30/08/2017 Ngày báo đăng: 04/09/2017 238 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017 Results: 448/500 (99.6%) of QF-PCR results were matched to cytogenetic results on the number of chromosomes 13, 18, 21, X and Y The QF-PCR for the correct diagnosis was 99.8% Two unsuitable cases related to sex chromosomes: one case was 46,XY by QF-PCR, but it was 46,XX by cytogenetics The QF-PCR results were consistent with the clinical (male, testicular but not have sperm); Case 2: QF-PCR is XY, choromosome mosaicism was XX/XY The most accurate markers in the QF-PCR technique were SRY (100%), HPRT (85.2%), D13S258 (83%), D18S386 (80.6%), D21S1442 (84%) Some markers have diagnostic values below 70%, such as D13S797 (55.2%), D18S390 (52.8%), D21S1446 (60%), X22 (54.6%) The set of diagnostic markers of each chromosome is highly accurate: 100% with chromosomes 13, 18, 21 and 99.8% with sex chromosomes Conclusion: Diagnosis of aneuploidies of chromosome 13, 18, and 21, especially for sex chromosomes are highly accurate * Keywords: Chromosome; QF-PCR; Trisomy 21; Short tandem repeat; Aneuploidies ĐẶT VẤN ĐỀ Lệch bội nhiễm sắc thể (NST) nguyên nhân gây dị tật bẩm sinh, chậm phát triển tâm thần, thể chất Việc chẩn đốn sớm lệch bội NST thời kỳ phơi thai cần thiết để hạn chế trẻ bị bất thường bẩm sinh Gần đây, kỹ thuật di truyền phân tử QF-PCR (quantitative fluorescence - polymerase chain reaction) gọi phản ứng chuỗi polymer huỳnh quang định lượng dùng để khuếch đại trình tự lặp ngắn (STR-short tandem repeat) để chẩn đoán nhanh bất thường số lượng NST định lượng trình tự lặp ngắn STR có tính đa hình cao số locus định NST 13, 18, 21, X Y, cặp mồi huỳnh quang Trong chẩn đoán trước sinh, xét nghiệm QF-PCR cần từ 0,5 - ml dịch ối, không cần qua nuôi cấy tăng sinh tế bào Thời gian trả kết nhanh (khoảng sau lấy mẫu) Trong kỹ thuật QF-PCR, người ta sử dụng marker để chẩn đoán số lượng NST Mỗi marker có độ xác khác Do vậy, thực đề tài nhằm: - So sánh độ xác kỹ thuật QF-PCR kỹ thuật di truyền tế bào chẩn đoán số bất thường lệch bội NST 13, 18, 21, X Y; - Đánh giá giá trị marker kỹ thuật QF-PCR chẩn đoán số bất thường lệch bội NST 13, 18, 21, X Y ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng địa điểm nghiên cứu 500 mẫu tế bào ối bạch cầu máu ngoại vi Xét nghiệm thực Trung tâm Chẩn đoán Trước sinh Bệnh viện Phụ Sản Trung ương từ tháng - 2015 đến tháng - 2017 Phƣơng pháp nghiên cứu Nghiên cứu cắt ngang mô tả, hồi cứu Mỗi mẫu xét nghiệm tiến hành đồng thời phương pháp: xét nghiệm QF-PCR phương pháp phân tích NST lập karyotype từ mẫu tế bào ối nuôi cấy mẫu máu ngoại vi So sánh kết xét nghiệm 239 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ-2017 * Phương pháp QF-PCR: - Kết thu từ hệ thống điện di mao quản máy đọc trình tự tự động ABI 3130 XL phân tích phần mềm chuyên dụng Genmapper ID 3.2 - Khi xác định số alen thông qua số lượng đỉnh (peak), dựa vào tỷ lệ đỉnh STR thu Từ 0,8 - 1,4:1: bình thường, ≤ 0,6:1 ≥ 1,8:1: lệch bội NST; từ 1,6:1: alen ≥ 20 base pair bình thường Các mẫu trisomy tạo kiểu alen hay alen không cân xứng marker vùng NST Chẩn đoán trisomy chấp nhận có marker NST có dạng alen hay alen khơng cân xứng tỷ lệ * Phương pháp di truyền tế bào: nuôi cấy tế bào ối tế bào máu ngoại vi phân tích NST, lập karyotype theo tiêu chuẩn Hội nghị Quốc tế Di truyền (2015 - ISCN) TM Bộ kit Aneufast QF-PCR gồm có 36 marker, đó: marker chẩn đốn cho NST số 21: D21S1414, D21S1411, D21S1446, D21S1437, D21S1809, D21S1412, D21S1435, D21S1442 marker chẩn đoán cho NST số 18: D18S391, D18S390, D18S535, D18S386, D18S858, D18S499, D18S1002, D18S976 marker chẩn đoán cho NST số 13: D13S631, D13S634, D13S258, D13S305, D13S628, D13S742, D13S797 13 marker chẩn đốn cho NST giới tính Trong đó, marker SRY chẩn đoán riêng cho NST Y; marker TAF9L, HPRT, DXS6803, DXS6809, DXS8377, DXS981, DXS1187 240 chẩn đoán riêng cho NST X; marker AMXY, X22, DXYS267, DXYS218, DXYS156 chẩn đoán cho X Y Chia marker thành lọ S1+S2, gồm 21 marker (6 marker cho NST X,Y, NST 13, 18, 21 có marker) Ngồi ra, lại chia vào lọ extra marker cho NST giới (7 marker), NST 13 (2 marker), 18 (3 marker), 21 (3 marker) Khi tiến hành kỹ thuật QF-PCR, thường cần marker lọ S1 S2 Trong số trường hợp nghi ngờ kết quả, sử dụng lọ khác (lọ MXY, lọ M13, lọ M18, lọ M21), lọ này, marker S1, S2, có thêm số marker gọi extra marker KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU So sánh kết QF-PCRv i kết karyotype Phù hợp với kết karyotype 56 mẫu lệch bội (100%), 33 trường hợp trisomy 21, 11 thai trisomy 18, thai trisomy 13, trường hợp 47,XXX, Klinefelter (47,XXY), hội chứng Turner (45,X), thai hội chứng siêu nam (47, XYY); 442 trường hợp bình thường phù hợp kết quả, 247 trường hợp 46,XY 195 trường hợp 46,XX trường hợp không phù hợp kết quả: trường hợp QF-PCR chẩn đoán 46,XY kết karyotype thể khảm 46,XX/ 46,XY; trường hợp QF-PCR chẩn đoán XY karyotype XX Như vậy, sử dụng kỹ thuật QF-PCR phù hợp chung cho tất trường hợp 498/500 = 99,6% TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017 Đ xác marker kỹ thuật QF-PCR * Các marker chẩn đoán cho NST số 13: Trong marker dùng phổ biến (S1+S2) để chẩn đoán cho NST 13, độ phù hợp với karyotype marker D13S258, D13S305, D13S631, D13S634, D13S797 83%, 77,2%, 75%, 72,2%, 55,2% Các extra marker chẩn đốn cho NST 13, D13S742 có độ phù hợp 76,5%, D13S628 có độ phù hợp 58,8% Chỉ có 17 BN làm extra marker nên cỡ mẫu chưa đủ lớn để đánh giá có ý nghĩa thống kê * Các marker chẩn đoán cho NST số 18: Trong marker dùng phổ biến (S1+S2) để chẩn đoán cho NST 18, độ phù hợp với karyotype marker D18S386, D18S976, D18S535, D18S391, D18S390 theo thứ tự 80,6%, 77,8%, 76,2%, 63%, 52,8% Các extra marker chẩn đoán cho NST 18, D18S1002 có độ phù hợp 100%, sau D18S499 có độ phù hợp 76,2% D18S858 có độ phù hợp 61,9% Tuy nhiên, có 21 BN làm extra marker NST 18, nên cỡ mẫu chưa đủ lớn để đánh giá có ý nghĩa thống kê * Các marker chẩn đoán cho NST số 21: Trong marker dùng phổ biến (S1+S2) để chẩn đoán cho NST 21, độ phù hợp với karyotype marker D21S1442, D21S1411, D21S1414, D21S1435, D21S1446 theo thứ tự 84%, 83,8%, 80,6%, 73,8%, 60% Các extra marker chẩn đoán cho NST 21 thấy marker D21S1412 có độ phù hợp cao (73,3%), sau marker D21S1437 có độ phù hợp 66,7% marker D21S1809 có độ phù hợp 60% Tuy nhiên, 15 BN làm extra marker NST 21, nên cỡ mẫu chưa đủ lớn để đánh giá có ý nghĩa thống kê * Các marker chẩn đoán cho NST giới tính: Marker SRY chẩn đốn cho NST Y có độ xác 100%, độ phù hợp với kết karyotype 99,8%, có bệnh nhân kiểu hình nam (kết QF-PCR có gen SRY, kết NST 46,XX) Marker HPRT chẩn đoán cho NST X 85,2% Các marker chẩn đoán cho NST X Y, chẩn đoán lệch bội liên quan đến NST giới tính, marker có độ phù hợp gần nhau, khoảng 55 - 72% Trong chẩn đốn mẫu XX, marker AMXY có độ phù hợp thấp (10,6%), marker DXYS267 có độ phù hợp cao (68,3%) Trong chẩn đốn mẫu XY, marker AMXY có độ phù hợp cao 100%, thấp marker X22 (56,6%) Nói chung, tất trường hợp, marker có độ phù hợp là: DXYS267 (71%), DXYS218 (63,8%), AMXY (60,4%), X22 (54,6%) Các extra marker NST giới tính, chẩn đốn mẫu lệch bội liên quan đến NST giới tính, marker TAF9L chẩn đốn cho NST X có độ phù hợp cao (83,3%) Trong chẩn đốn mẫu XX, marker DXS8377 có độ phù hợp cao (80%) Nói chung marker DXS8377 có độ 241 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ-2017 phù hợp cao (77,8%) chẩn đoán trường hợp làm extra marker Tuy nhiên, có 18 bệnh nhân làm extra marker NST giới tính nên cỡ mẫu chưa đủ lớn để đánh giá có ý nghĩa thống kê BÀN LUẬN Đ phù hợp kỹ thuật QF-PCR so v i kỹ thuật di truyền tế bào Hiện nay, kỹ thuật di truyền tế bào (lập karyotype) coi tiêu chuẩn vàng để chẩn đốn xác bất thường số lượng NST Do vậy, so sánh kết QF-PCR với kết NST để đánh giá độ xác kỹ thuật QFPCR Trong nghiên cứu này, dùng kỹ thuật QF-PCR phát 56 mẫu bất thường lệch bội NST (13, 18, 21, X Y) trùng với 56 mẫu kỹ thuật di truyền tế bào, tỷ lệ phù hợp 100%, tương tự kết Nguyễn Khắc Hân Hoan (2013) [1] You Jung Shin (2016) [6] đưa Với mẫu lệch bội NST giới tính phù hợp hai kỹ thuật QF-PCR di truyền tế bào (tỷ lệ 100%), giống với kết Nagy B (2015) thấy 50 mẫu lệch bội NST giới tính tổng số 20.173 mẫu ối [7] Trong 444 mẫu khơng lệch bội (443 mẫu bình thường mẫu khảm), kỹ thuật QF-PCR chẩn đoán 442 mẫu giống với kỹ thuật di truyền tế bào (99,6%), tỷ lệ chẩn đoán 99,8%, phù hợp với nghiên cứu You Jung Shin (2016) [6] Trong nghiên cứu, có trường hợp cho kết khơng phù hợp hai kỹ thuật Kỹ thuật QF-PCR có kết phù hợp với NST 498/500 (99,6%), 242 tương tự với nghiên cứu Hoàng Thị Ngọc Lan (2016) [2] Sau hai trường hợp mà kết QF-PCR trả lời khác với kết karyotype Ở trường hợp thứ nhất, kết karyotype 46,XX mà bệnh nhân có kiểu hình nam Bệnh nhân làm kỹ thuật QF-PCR phát có gen SRY (hiện đỉnh marker SRY- có NST Y), marker HPRT đỉnh, marker lại AMXY, X22, DXYS218, DXYS267 có tỷ lệ 1:1 Các NST 13, 18, 21 đọc bình thường Tổng hợp lại kết QF-PCR trả lời nam có gen biệt hóa tinh hồn SRY Kết hợp với kết NST 46,XX, trường hợp mà gen biệt hóa tinh hồn SRY nằm nhánh ngắn NST Y chuyển sang NST X trình giảm phân tạo giao tử Vì vậy, người có NST X, thực NST X chứa gen SRY, nên người có kiểu hình nam, khơng có gen nhánh dài NST Y, khơng có tinh trùng tinh dịch Kỹ thuật QF-PCR giúp phát số đột biến cấu trúc nhỏ mà karyotype khơng xác định được, để có kết luận di truyền xác Tương tự với nghiên cứu Liu X (2015), trường hợp bất thường cấu trúc NST X 2436 mẫu ối [8] Ở trường hợp thứ hai thai có kết QF-PCR bình thường 46,XY, điều gợi ý thai nam bình thường Khi đối chứng với kết phân tích karyotype, lúc đầu thấy đa số cụm đọc 46,XX thai nữ bình thường, tính chất gợi ý từ kết QFPCR, tiếp tục đọc thêm nhiều cụm TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017 phát thấy 60% cụm NST khác có hình ảnh 46,XY Kết luận cuối thể khảm 46,XX/46,XY Như vậy, trường hợp khảm cho thấy khả bổ sung chẩn đoán phương pháp, giúp đưa kết xác Điều phù hợp với nghiên cứu Lildballe D L (2014) [4] Hoàng Thị Ngọc Lan (2016) [2] QF-PCR phát số bất thường tương ứng với marker, không phân biệt dòng tế bào, NST, gây khó khăn chẩn đoán trường hợp khảm đột biến cấu trúc NST [3] Như vậy, nên sử dụng kỹ thuật QF-PCR xét nghiệm bổ sung cho kỹ thuật di truyền tế bào Đ xác marker kỹ thuật QF-PCR * Các marker chẩn đoán cho NST 13 : Tập hợp marker chẩn đốn cho NST 13 có độ xác với kết luận NST 100% Các marker lọ S1, S2 chẩn đốn cho NST 13, độ xác marker chẩn đoán chung cho NST 13 theo thứ tự: D13S258 (83%), D13S305 (77,2%), D13S631 (75%), D13S634 (72,2%), D13S797 (55,2%) Kết khác với thứ tự độ xác marker mà Hãng Aneufast đưa ra: D13S258 (89%), D13S634 (84%), D13S631 (78%), D13S305 (75%), D13S797 (65%) [2] Marker D13S258 có độ xác cao nhất, kết phù hợp với nghiên cứu Hoàng Thị Ngọc Lan (2016) (83,2%) [2] Marker D13S634 cho kết chẩn đoán chung (72,2%) thấp so với Hãng Aneufast đưa 84% thấp so với nghiên cứu Trần Nguyễn An Phú 89% [4] (sử dụng với kít Devyser) 17 mẫu chạy lại extra marker, marker D13S742 D13S628 có độ xác chung 76,5% 58,8% Vì số mẫu chạy extra marker ít, nên cỡ mẫu chưa đủ lớn để đánh giá có ý nghĩa thống kê, góp phần chẩn đoán trường hợp nghi ngờ bất thường số lượng NST 13 * Các marker chẩn đoán cho NST 18: Tập hợp marker chẩn đoán cho NST 18 có độ xác với karyotype 100% Các marker lọ S1, S2 chẩn đốn cho NST 18, độ xác marker chẩn đoán chung cho NST 18 là: D18S386 (80,6%), D18S976 (77,8%), D18S535 (76,2%), D18S391 (63%), D18S390 (52,8%) Kết chẩn đoán chung khác với thứ tự mà Hãng Aneufast đưa từ cao xuống thấp là: D18S386 (89%), D18S535 (82%), D18S976 (76%), D18S391 (75%) D18S390 (75%) [5] Marker D18S386 có độ xác cho chẩn đốn cao giống kết Trần Nguyễn An Phú 90% [4] (sử dụng kít Devyser) Trong chẩn đốn cho NST 18, nhìn chung marker kít Aneufast có giá trị chẩn đốn ngang 21 mẫu phải chạy lại extra marker marker D18S1002 có độ xác tuyệt đối 100%, sau marker D18S499 D18S858 có độ xác 76,2% 61,9% Vì số mẫu chạy extra marker ít, nên cỡ mẫu chưa đủ lớn để đánh giá có ý nghĩa thống kê, góp phần chẩn đốn trường hợp nghi ngờ bất thường số lượng NST 18 243 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ-2017 * Các marker chẩn đoán cho NST 21: Tập hợp marker chẩn đốn cho NST 21 có độ xác với karyotype 100% Các marker lọ S1, S2 chẩn đốn cho NST 21, độ xác là: D21S1442 (84%), D21S1411 (83,8%), D21S1414 (80,6%), D21S1435 (73,8%), D21S1446 (60%) Kết chẩn đoán chung khác thứ tự độ xác marker từ cao xuống thấp Hãng Aneufast đưa là: D21S1411 (93%), D21S1414 (85%), D21S1446 (77%), D21S1442 (76%), D21S1435 (75%) [5] Marker D21S1442 có độ xác cao Trong nghiên cứu Vũ Thị Huyền (2012) 90 mẫu ối, marker D21S1442 có độ xác thấp chẩn đốn mẫu lệch bội (65,4%) chẩn đoán chung (71,1%) Sự khác cỡ mẫu hai nghiên cứu khác (90 500) marker D21S1442 D21S1411 có độ xác cao chẩn đốn mẫu bình thường (83,7%) xấp xỉ mẫu chung (84% 83,8%) Độ xác marker D21S1411 chẩn đoán chung tương tự với kết Hoàng Thị Ngọc Lan 84,7% [2] Điều cho thấy marker chẩn đoán cho NST 21 kit Aneufast có giá trị gần 15 mẫu phải chạy lại extra marker, marker D21S1412 có độ xác 73,3%, marker D21S1437 D21S1809 có độ xác tương ứng 66,7% 60% Vì số mẫu chạy extra marker nên cỡ mẫu chưa đủ lớn để đánh giá có ý nghĩa thống kê, góp phần chẩn đoán trường hợp nghi ngờ bất thường số lượng NST 21 244 * Các marker chẩn đốn cho NST giới tính: Tập hợp marker chẩn đốn cho NST giới tính có độ xác kết luận di truyền 99,8%, trường hợp sai thể khảm 46,XX/46,XY Tỷ lệ phù hợp kỹ thuật QF-PCR di truyền tế bào chẩn đốn NST giới tính 99,6%, trường hợp khơng phù hợp trường hợp người có kiểu hình nam, karyotype 46,XX thể khảm 46,XX/46,XY Độ phù hợp marker SRY chẩn đoán cho NST giới tính Y với di truyền tế bào cao (99,8%), trường hợp sai người có kiểu hình nam, karyotype 46,XX Mặc dù vậy, độ xác marker chẩn đốn cho NST Y so với kết luận di truyền 100%, phù hợp với nghiên cứu Hoàng Thị Ngọc Lan (2016) [2] Marker HPRT chẩn đốn cho NST X có độ phù hợp cao với di truyền tế bào: chẩn đốn mẫu XY 98,5%, chẩn đốn mẫu lại độ xác thấp Nhìn chung, tất trường hợp độ phù hợp HPRT cao (85,2%), kết phù hợp với nghiên cứu Hoàng Thị Ngọc Lan (2016) 92% [2] cao kết Trần Nguyễn An Phú (2012) đưa 78% [6, 7] 18 mẫu nghi ngờ có bất thường NST giới kiểm tra lại extra marker Trong extra marker X, marker TAF9L chẩn đốn lệch bội bất thường khác có độ xác cao (83,3%), marker DXS8377 có độ TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ HÌNH THÁI HỌC-2017 xác cao 18 mẫu 77,8% Trong marker chẩn đoán cho NST X Y, marker lọ S1 S2 AMXY, X22, DXYS218, DXYS267 extra marker DXYS156, có độ phù hợp cao với di truyền tế bào Marker DXYS267 có độ phù hợp cao (71%), tương đương với kết Trần Nguyễn An Phú (2012) đưa 68% (sử dụng kít Devyser) [4] Trong chẩn đốn mẫu XY, marker AMXY chẩn đốn xác 100%, nhiên chẩn đốn mẫu XX, độ xác thấp (10,1%) 18 mẫu làm với extra marker DXYS156, độ xác chung chẩn đốn 27,8%, số mẫu nên cỡ mẫu chưa đủ lớn để đánh giá có ý nghĩa thống kê, góp phần chẩn đoán trường hợp nghi ngờ bất thường NST giới Điều cho thấy marker kít Aneufast có giá trị chẩn đốn khơng giống nhau, với nguyên tắc đọc kết quả, cần 2/5 marker có tỷ lệ giống nên tỷ lệ chẩn đốn cao (99,8%) Tóm lại, độ xác tập hợp marker chẩn đoán cho NST cao, 100% với NST 13, 18, 21 NST Y, 99,8% với NST giới tính X khảm trình bày phần Phù hợp với kết NST 99,6%, có trường hợp không phù hợp mô tả phần Các extra marker có giá trị chẩn đốn không cao marker S1, S2 nhờ có extra marker mà chúng tơi chẩn đốn trường hợp nghi ngờ NST trisomy hay bình thường KẾT LUẬN * Kết QF-PCR so với kỹ thuật di truyền tế bào chẩn đoán nhanh xác lệch bội NST 13, 18, 21 đ c biệt cho chẩn đốn giới tính Phù hợp với kết karyotype 448/500 (99,6%), chẩn đoán 99,8% trường hợp không phù hợp liên quan đến NST giới tính: - QF-PCR XY, karyotype XX: kết QF-PCR phù hợp với hình ảnh lâm sàng (người nam, có tinh hồn khơng có tinh trùng) - QF-PCR XY, karyotype XX/XY * Giá trị chẩn đoán marker kỹ thuật QF-PCR: - Các marker có độ xác cao SRY (100%), HPRT (85,2%), D13S258 (83%), D18S386 (80,6%), D21S1442 (84%) - Một số marker có giá trị chẩn đốn thấp < 70% D13S797 (55,2%), D18S390 (52,8%), D21S1446 (60%), X22 (54,6%)… tập hợp marker chẩn đoán cho NST có độ xác cao: 100% với NST 13, 18, 21 99,8% với NST giới tính - Các extra marker có giá trị chẩn đốn khơng cao marker S1, S2, extra marker giúp chẩn đoán trường hợp nghi ngờ NST trisomy hay bình thường TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Khắc Hân Hoan, Phùng Như Toàn Quách Thị Hồng Oanh Giá trị QF-PCR chẩn đốn nhanh trước sinh rối loạn số lượng nhiễm sắc thể Tạp chí Nghiên cứu Y học 2013, 17, tr.149-156 245 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ CHUYÊN ĐỀ-2017 Hoàng Thị Ngọc Lan, Bùi Đức Thắng, Hoàng Thị Hương Giá trị chẩn đoán bất thường số lượng nhiễm sắc thể marker kỹ thuật QF-PCR Tạp chí Y học Việt Nam 2016, 444 (2) reaction for rapid prenatal diagnosis of fetal aneuploidies in chorionic villus sampling in a single institution Obstetrics & Gynecology Science 2016, 59 (6), pp.444-453 Vũ Thị Huyền Áp dụng kỹ thuật QFPCR để chẩn đoán trước sinh hội chứng Down Luận văn Tốt nghiệp Bác sĩ nội trú Trường Đại học Y Hà Nội, Hà Nội 2012 Nagy B., Nagy R.G., Lazar L et al Detection of sex chromosome aneuploidies using quantitative fluorescent PCR in the Hungarian population Clinica Chimica Acta 2015, 445, pp.2-6 Trần Nguyễn An Phú Ứng dụng kỹ thuật QF-PCR vào phát lệch bội nhiễm sắc thể chẩn đoán trước sinh mẫu gai rau Luận văn Thạc sỹ Sinh học Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Thành phố Hồ Chí Minh 2012 Liu X., Zhang Y., Cui W et al Application of quantitative fluorescence PCR for the prenatal diagnosis of common fetal chromosomal aneuploidies Chinese Journal of Medical Genetics 2015, 32 (5), pp.635-640 Aneufast - User’s manual v3 Multiplex QF-PCR kit for rapid detection of trisomy 13, 18, 21 and sex chromosomes aneuploidies 2015 Lildballe D.L., Vogel I., O.B Petersen O.B et al Diagnostic performance of quantitative fluorescence PCR analysis in high-risk pregnancies after combined firsttrimester screening Danish Medical Journal 2014, 61 (11), p.4964 Shin Y.J., Chung J.H., Kim D.J et al Quantitative fluorescent polymerase chain 246 ... QF-PCR kỹ thuật di truyền tế bào chẩn đoán số bất thường lệch bội NST 13, 18, 21, X Y; - Đánh giá giá trị marker kỹ thuật QF-PCR chẩn đoán số bất thường lệch bội NST 13, 18, 21, X Y ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG... mẫu) Trong kỹ thuật QF-PCR, người ta sử dụng marker để chẩn đoán số lượng NST Mỗi marker có độ xác khác Do vậy, thực đề tài nhằm: - So sánh độ xác kỹ thuật QF-PCR kỹ thuật di truyền tế bào chẩn đoán. .. QF-PCR với kết NST để đánh giá độ xác kỹ thuật QFPCR Trong nghiên cứu này, dùng kỹ thuật QF-PCR phát 56 mẫu bất thường lệch bội NST (13, 18, 21, X Y) trùng với 56 mẫu kỹ thuật di truyền tế bào,