Đang tải... (xem toàn văn)
Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm mô tả kiểu hình, kiểu gen và đánh giá kết quả điều trị. Kết quả nghiên cứu cho thấy bệnh thiếu enzym betaketothiolase là bệnh có thể điều trị được và có tiên lượng tốt.
Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 BỆNH THIẾU ENZYM BETAKETOTHIOLASE (T2) TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƢƠNG: KIỂU HÌNH, KIỂU GEN, KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ Nguyễn Ngọc Khánh*; Vũ Chí Dũng*; Bùi Phương Thảo*; Cấn Thị Bích Ngọc* Seiji Yamaguchi**; Toshiyuki Fukao***; Nguyễn Thị Hồn* Tóm tắt Mục tiêu: mơ tả kiểu hình, kiểu gen đánh giá kết điều trị Đối tượng phương pháp: 20 bệnh nhân (BN) thiếu enzym betaketothiolase chẩn đoán điều trị Bệnh viện Nhi Trung ương Tiến hành xét nghiệm phân tích axít hữu niệu làm Nhật Bản Bệnh viện Nhi Trung ương; phân tích gen T2 Nhật Bản Kết quả: 20 BN từ 18 gia đình khác có bố mẹ khơng có quan hệ huyết thống 5/18 gia đình có tử vong bệnh cảnh nhiễm toan cấp mắc bệnh 19/20 BN có biểu nhiễm toan cấp Tuổi trung bình xuất cấp 13,2 tháng (6 - 34 tháng) Đa số BN nhập viện lần đầu tình trạng nặng (7 BN phải thở máy) Đặc điểm kiểu hình nhiễm toan ceton cấp là: nơn, khó thở, li bì/hơn mê khởi phát sau nhiễm trùng ỉa chảy viêm phổi Đặc điểm xét nghiệm nhiễm toan ceton nặng với pH 6,5 - 7,05 Nghiên cứu phát đột biến khác nhau: R208X, IVS10-1g > c, A410V, 163_167del5ins2 Trong đó, đột biến R208X thường gặp (75%), đột biến thường gặp giới Tiên lượng bệnh tốt: 78% BN cứu sống phát triển bình thường (6 tháng - tuổi) Kết luận: bệnh thiếu enzym betaketothiolase bệnh điều trị có tiên lượng tốt * Từ khoá: Thiếu hụt betaketothiolase; Thiếu hụt T2; Kiểu hình; Kiểu gen; Bệnh nhi Betaketothiolase (T2) Deficiency in National Hospital of Pediatrics: Phenotypes, Genotypes, Outcome Summary Objective: To describe phenotypes and genotypes of T2 deficiency and to evaluate outcomes Methods: 20 patients were examined and treated at National Hospital of Pediatrics (Hanoi, Vietnam) with diagnosis of T2 deficiency by urinary organic acid analysis from 2005 to 2012 14 patient families have been performed T2 gene analysis in Gifu University (Japan) Results: 20 patients were born to unrelated 18 families and all parents have no consanguinity 5/18 families had children died due to the same condition or children affected Incidence in male was much more than females 19/20 patients presented clinical symptoms of ketone acidotic crisis and patient was asymptomatic The youngest patient without clincal symptoms was diagnosis * Bệnh viện Nhi Trung ương ** Đại học Shimane, Nhật Bản *** Đại học Gifu, Nhật Bản Người phản hồi (Corresponding): Nguyễn Ngọc Khánh (vonglichkhanh@yahoo.com) Ngày nhận bài: 30/11/2014; Ngày phản biện đánh giá báo: 24/12/2014 Ngày báo đăng: 22/01/2015 90 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 by GC/MS at day of age Mean onset of the first crisis was 13.2 months (ranged - 34 months) Most of them presented severe condition on admission with cases required mechanical ventilation Clinical features of the ketonacidotic crises were vomiting (94%), tarchypnea (100%), lethargy/coma (100%) and triggered by infections: fever (82%) diarrhea (41%), pneumonia (59%) Laboratory data of the crises showed severe metabolic acidosis (ranged 6.5 - 7.05) (100%), 3 ketonuria (94%), leucocytosis (ranged 19,000/mm - 40,000/mm (82%) and hyperammonemia (29%) Molecular analysis found 14/14 patients of homozygous/compound homozygous mutaions of T2 gene different mutations in 14 patients have been found: R208X, IVS10-1g>c, A410V, 163_167del5ins2 Among of them, R208X mutation is common in Vietnam (75%) as well as worldwide The prognosis were considerably good: 78% of cases had normal development (age ranged month - years) Conclusion: T2 deficiency is a treatable organic aciduria and good prognosis * Key words: Bataketothiolase deficiency; T2 deficiency; Phenotypes; Genotypes; Pediatric patients ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh thiếu hụt enzym betaketothiolase hay gọi mitochondrial acetoacetylCoA thiolase (T2 hay acetyl CoA acetyltranferase 1) bệnh di truyền lặn nhiễm sắc thể thường Trên giới, bệnh Daum RS phát lần đầu vào năm 1971 [3] Đặc trưng bệnh đợt nhiễm toan ceton khơng có triệu chứng lâm sàng Bệnh thường xảy sức khỏe thể có vấn đề nhiễm trùng, viêm ruột… ăn nhiều protein Tuổi xuất lần đầu thường từ - 24 tháng, xảy muộn Nhiều nghiên cứu chưa tìm mối liên quan đột biến gen với mức độ nặng tuổi xuất bệnh [4] Bệnh chữa khỏi hồn tồn phòng cấp tính tái phát chẩn đoán điều trị kịp thời T2 đóng vai trò giáng hố tổng hợp ceton tế bào gan, xúc tác trình giáng hố 2-methylacetoacetyl-CoA thành propionylCoA acetyl CoA q trình chuyển hố isoleucin BN thường tiết qua nước 91 tiểu 2-methyl-3-hydroxybutyrate, 2-methylacetoacetate tiglylglycine (các chất chuyển hoá trung gian isoleucine) [4] T2 cADN người dài khoảng 1.5 kb mã hoá tiền chất protein có 427 amino axít, bao gồm polypeptid đầu có 33-amino axít Gen T2 (ký hiệu gen: ACAT1) dài khoảng 27 kb, gồm 12 exon, 70 đột biến gen tìm thấy Nhìn chung, đột biến gen T2 dị hợp tử, phần lớn BN có đột biến đơn độc [2, 5] Đây bệnh rối loạn chuyển hóa bẩm sinh (RLCHBS) thường gặp Việt Nam: theo ước tính năm có tới 20 BN, giới 40 năm có 90 BN [1], nhóm bệnh nên nhiều bác sỹ nhi khoa chưa chưa tiếp cận với bệnh Do đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu với mục tiêu sau: Mơ tả kiểu hình, kiểu gen đánh giá kết điều trị Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu Đối tƣợng nghiên cứu 20 BN chẩn đoán bệnh thiếu enzym ketothiolase kỹ thuật GC/MS Học viện Shimane (Nhật Bản) Bệnh viện Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Nhi Trung ương từ tháng - 2005 đến - 2012 Phƣơng pháp nghiên cứu Mô tả can thiệp đánh giá trước sau điều trị * Lâm sàng: nghiên cứu phả hệ, tiền sử sản khoa gia đình, phát triển bệnh tật trẻ, triệu chứng lâm sàng đợt tái phát cấp tính, tần suất tái phát, phát triển thể chất tinh thần * Xét nghiệm bản: đường máu, khí máu, amoniac máu, lactate máu, ceton niệu SGOT, SGPT, CK, LDH, ure, creatinin, điện giải đồ máu công thức máu, chụp CT-scan sọ não… * Xét nghiệm đặc hiệu: phân tích axít hữu niệu phương pháp GC/MS Học viện Shimane (Nhật Bản) Bệnh viện Nhi Trung ương * Phân tích gen T2: thực Trường Đại học Gifu (Nhật Bản) - Chiết tách ADN từ máu ngoại vi BN thành viên gia đình BN với QIAamp ADN blood mini kits (Đức) Nguyên lý phát đột biến kỹ thuật giải trình tự tồn gen T2 enzym essay giới hạn tìm đột biến R208X - BN giải trình tự tồn gen T2 để tìm đột biến - BN tiếp sau trước tiên tìm đột biến R208X kỹ thuật xét nghiệm enzym giới hạn, khơng tìm thấy đột biến này, tiếp tục giải trình tồn gen T2 - Kỹ thuật xét nghiệm enzym giới hạn tìm R208X: R208X (CACG to CATG) tạo vị trí Nla II Khuếch đại đoạn (264 bp) gồm exon introns xung quanh với đầu dò sau: 92 In6s (in intron 6, -79~ -60)5’-CACTATAAGTTAGGCAAAGT-3’ In7as (in intron 7, +39~+20) 5’-TGAAAAGTCTATTCATCCTT-3’ Sau phản ứng khuếch đại, gắn Nla III vào nhánh, sau đưa vào gel polyacrylamide 5% * Tất BN điều trị giai đoạn cấp: nhịn ăn, truyền glucose (10 mg/kg/phút), bổ sung vitamin: biotin (5 - 10 mg/ngày), vitamin B12 (1 mg/ngày), B1 (50 - 100 mg/ ngày), B6 (50 - 100 mg/ngày), B2 (10 - 20 mg/ngày), L carnitin (50 - 100 mg/kg/ngày), điều trị triệu chứng có: hỗ trợ hô hấp, cân nước điện giải, chống toan, truyền máu… Chế độ ăn hạn chế protein mức độ nhẹ (1 - 1,5 g/kg/ngày) Đánh giá kết điều trị sau cấp theo dõi định kỳ tháng/lần Kết nghiên cứu bàn luận Qua năm tiến hành sàng lọc BN, gặp 20 BN thiếu enzym T2 bệnh thường gặp đứng thứ nhóm RLCHBS sau MSUD (22 BN) 20 BN từ 18 gia đình khác Tỷ lệ mắc bệnh Việt Nam cao nhiều so với nước khác: 40 giới có 90 BN [1], Trung Quốc với số dân cao gấp 16 lần so với Việt Nam, có BN năm nghiên cứu Trên thực tế, số BN nhóm Việt Nam nhiều khu vực miền Nam chưa phát có ca mắc bệnh Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 Đặc điểm chung BN tiền sử gia đình Bảng 1: Đặc điểm chung Cùng huyết thống 0/18 Tuổi chẩn đoán (tháng) Thời gian khởi phát Anh/em ruột tử vong/ mắc bệnh Cơn cấp 13,2 ± 6,5 (6 - 34) 3,2 (ngày) 5/18 19/20 Giới nam n÷ 13 Đặc điểm kiểu hình 19/20 BN có kiểu hình đợt nhiễm toan ceton cấp tính bù nặng (pH máu < 7) khơng có triệu chứng cấp BN ngày tuổi chẩn đoán sớm nhờ xét nghiệm phân tích axít hữu niệu có tiền sử chị gái bị mắc bệnh * Biểu lâm sàng xét nghiệm: - Lâm sàng: khó thở: 19 BN (100%); li bì: 19 BN (100%); nước: 19 BN (100%); nôn: 18 BN (95%); sốt: 18 BN (95%); ỉa chảy: BN (42%); viêm phổi: 11 (58%); thở máy vào viện: BN (35%) - Xét nghiệm: toan chuyển hóa: 19 BN (100%); ceton niệu 18 BN (95%); hạ/tăng đường máu: BN (26%); tăng amoniac: BN (31%); tăng bạch cầu: 16 BN (82%) 19 BN (100%) có cấp nhập viện tình trạng nặng: khó thở, li bì, nước, BN (35%) phải thở máy nhập viện Bệnh khởi phát sau nhiễm trùng: BN (42%) ỉa chảy, 11 BN (58%) viêm phổi sốt Biểu xét nghiệm bật: 19 BN (100%) nhiễm toan chuyển hố nặng (pH: 6,5 - 7,1), 18 BN (95%) có ceton niệu, 16 BN (82%) tăng bạch cầu Chính vậy, tất BN nhập viện bị chẩn đoán nhầm viêm phổi nặng (58%) ỉa chảy cấp/mất nước nặng (42%) Đặc điểm kiểu gen 14/20 BN phân tích tìm đột biến gen T2 Tất BN tìm thấy đột biến Trong 14 BN này, BN số khẳng định lại chẩn đoán đo hoạt độ men acetoacetyl-CoA thiolase nguyên bào sợi Phân tích đột biến gen BN nguyên bào sợi, 13 BN lại mẫu ADN tế bào máu ngoại biên Bảng 2: Đặc điểm kiểu gen đột biến gen STT 93 Nguồn gốc từ bố Nguồn gốc từ mẹ R208X 163_167del5ins2 R208X R208X R208X R208X IVS10-1g>c R208X R208X R208X Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 R208X R208X R208X R208X R208X R208X IVS10-1g>c IVS10-1g>c 10 R208X R208X 11 IVS10-1g>c IVS10-1g>c 12 R208X A410V 13 R208X R208X 14 R208X R208X đột biến tìm thấy: R208X, IVS10-1g>c, A410V, 163_167del5ins2 R208X đột biến phổ biến Việt Nam (75%) đột biến mới: 163-167del5ins2 BN đột biến đồng hợp tử, BN đột biến dị hợp tử Đột biến gen IVS101g>c (exon 11-skipping): BN đồng hợp tử, BN dị hợp tử Trên giới, tìm thấy 70 đột biến gen 70 BN Trong đột biến này, có vài đột biến tìm thấy gia đình khơng có quan hệ huyết thống: ví dụ c.149 delC BN Nhật Bản, c.455G> T(G152A), c.890C>T(Q272X), IVS8+1g>t, c 890C>T(T297M) and IVS11+2t>c người da trắng [6] Trong đó, nghiên cứu đột biến R208X thường gặp người Việt Nam (75%) Do đó, đột biến R208X kiểu gen hay gặp quần thể người Việt Nam Kết điều trị 19/19 BN (100%) cứu sống đợt cấp đầu tiên; thời gian điều trị trung bình đợt cấp 15 ± 2,7 ngày; BN 94 thơng tin; 14/20 BN sống phát triển bình thường; BN chậm phát triển tinh thần vận động trung bình; BN tử vong lúc tuổi đợt cấp tái phát thứ BN tử vong di chứng não lúc tuổi Tuổi sống trung bình 48 tháng (6 tháng - tuổi) 12/16 BN có đợt cấp tái phát Tuổi xuất cấp tái phát: 18,8 ± 6,8 tháng KẾT LUẬN Bệnh thiếu men T2 bệnh RLCHBS thường gặp Việt Nam với bệnh cảnh điển hình nhiễm toan ceton cấp Bệnh có tiên lượng tốt: 78% cứu sống hồn tồn khơng có di chứng Đột biến R208X đột biến thường gặp Việt Nam tiếp tục nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO GA Mitchell, T Fukao Chapter 102 inborn errors of ketone body metabolism, in: C R Scriver, AL Beaudet, WS Sly, D Valle(Eds.) Metabolic and molecular bases of inherited th disease ed., McGraw-Hill, Inc, New York 2001, pp.2327-2356 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 M Kano, T Fukao, S Yamaguchi, T Orii, T Osumi, T Hashimoto Structure and expression of the human mitochondrial acetoacetyl-CoA thiolase-encoding gene Gene 1991, 109, pp.285-290 RS Daum, P Lamm, OA Mamer, CR Scriver A “new” disorder of isoleucine catabolism Lancet 1971, 2, pp.1289-1290 T Fukao, CR Scriver, N Kondo and T2 Collaborative Working Group The clinical phenotype and outcome of mitochondrial acetoacetyl-CoA thiolase deficiency (enzymketothiolase deficiency) in 26 enzymatically proved and mutation defined patients Mol Genet Metab 2001, 72, pp.109-114 95 T Fukao, S Yamaguchi, M Kano, T Orii, Y Fujiki, T Osumi, T Hashimoto Molecular cloning and sequence of the complementary DNA encoding human mitochondrial acetoacetyl-coenzyme: A thiolase and study of the variant enzymes in cultured fibroblasts from patients with 3-ketothiolase deficiency J Clin Invest 1990, 86, pp.2086-2092 T Fukao, S Yamaguchi, T Orii, RBH Schutgens, T Osumi, T Hashimoto Identification of three mutant alleles of the gene for mitochondrial acetoacetyl-CoA thiolase: a complete analysis of two generations of a family with 3-ketothiolase deficiency J Clin Invest 1992, 89, pp.474-479 Tạp chí y - dược học quân số 2-2015 96 ... tả kiểu hình, kiểu gen đánh giá kết điều trị Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu Đối tƣợng nghiên cứu 20 BN chẩn đoán bệnh thiếu enzym ketothiolase kỹ thuật GC/MS Học viện Shimane (Nhật Bản) Bệnh. .. ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh thiếu hụt enzym betaketothiolase hay gọi mitochondrial acetoacetylCoA thiolase (T2 hay acetyl CoA acetyltranferase 1) bệnh di truyền lặn nhi m sắc thể thường Trên giới, bệnh Daum... Việt Nam (75%) Do đó, đột biến R208X kiểu gen hay gặp quần thể người Việt Nam Kết điều trị 19/19 BN (100%) cứu sống đợt cấp đầu tiên; thời gian điều trị trung bình đợt cấp 15 ± 2,7 ngày; BN 94