Đang tải... (xem toàn văn)
Trong luận văn này, tác giả tiến hành nghiên cứu các điều kiện tách và xác định đồng thời chất kháng sinh metronidazole(MTD) và các sulfamit như sulfaguanidine (SGU),sulfamethoxazone (SMX), (SMP), sulfadoxin (SDO) bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) hấp phụ pha ngược ghép nối.
Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ MỞ ĐẦU ………………………………………………………………… Chương 1 TỔNG QUAN ……………………………………………… 1.1 Giới thiệu chung về sulfamit (SAs), metronidazole (MTD) ……… 1.1.1. Cấu trúc phân tử ………………………………………………… 1.1.2 Tính chất vật lý và hố học của các Sulfamit, Metronidazole ………… 1.1.3 Tính chất dược lý và phổ tác dụng của Sulfamit, Metronidazole 1.1.4 Cơ chế tác dụng kháng khuẩn của Sulfamit, Metronidazole 1.1.5 Một số chế phẩm của Sulfamit tiêu biểu ……… ……………… 1.2. Phương pháp xác định……………………………………………… 1.2.1. Một số cơng trình nghiên cứu xác định Sas bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) …………………………………………… 1.2.2. Một số cơng trình nghiên cứu xác định Metronidazole bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) …………………………………… 1.2.3. Một số cơng trình nghiên cứu xác định đồng thời các sulfamit và metronidazole bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC ……… Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU …… Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh 2.1 Đối tượng, mục tiêu và nhiệm vụ nghiên cứu………………… 2.1.1 Đối tượng và mục tiêu nghiên cứu ………………………………… 2.1.2. Nhiệm vụ nghiên cứu …………………………………………… 2.2 Phương pháp nghiên cứu………………………………………… 2.2.1 Nguyên tắc chung và trang bị của phương pháp HPLC …… 2.2.2 2.3 Phân tích định lượng bằng HPLC ………………………… Giới thiệu chung về phương pháp chiết pha rắn … ………… 2.4 Hóa chất và dụng cụ…………………………………………… 2.4.1 Hố chất ………………………………………………… 2.4.2 Dụng cụ ……………………………………………………… Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ……………………………… 3.1. Khảo sát các điều kiện sắc ký ……………………………………… 3.1.1. Chọn bước sóng của detector …………………………………… 3.1.2. Thăm dò khả năng tách của các Sulfamit trên cột RPC18 ……… 3.2. Chọn pha tĩnh …………………………………………………… 3.3. Tối ưu hóa pha động ………………………………………………… 3.3.1. Nồng độ đệm axetat của pha động ……………………………… 3.3.2. Độ pH cho dung dịch đệm axetat Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh ………………………………… 3.3.3. Tỉ lệ thành phần pha động ……………………………………… 3.3.4. Tốc độ pha động 3.4. Đánh giá phương pháp phân tích ………………………………… 3.4.1. Khảo sát lập đường chuẩn trong khoảng nồng độ 0,05 – 1,000ppm 3.4.2. Giới hạn phát hiện (LOD); Giới hạn định lượng (LOQ) 3.4.3. Độ đúng, độ lặp lại của phép đo ………………………………… 3.5. Mẫu thực, quy trình xử lý và kết quả phân tích ………………… 3.5.1. Quy trình xử lý mẫu, xác định hiệu suất thu hồi ………………… 3.5.2. Phân tích mẫu thực ……………………………………………………… KẾT LUẬN ……………………………………………………………… TÀI LIỆU THAM KHẢO Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT STT Viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt ACN Acetonitrin Axetonitrin Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn BNNPTNT CV Coeficient Variation Hệ số biến thiên HPLC High Performance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng hiệu năng cao RP Reversed phase Hấp phụ pha đảo LOD Limit of Detection Giới hạn phát hiện LOQ Limit of Quantity Giới hạn định lượng TT UV Vis Thông tư Untraviolet Visibet Tử ngoại – Khả kiến Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1: Bảng 3.2: Bảng 3.3: Bảng 3.4: Bảng 3.5: Bảng 3.6: Bảng 3.7: Bảng 3.8: Bảng 3.9: Bảng 3.10: Bảng 3.11: Diện tích của pic phụ thuộc vào bước sóng detector………………… Thời gian lưu và thứ tự ra pic của các chất phân tích……………… Sự phụ thuộc k’ vào nồng độ đệm axetat của pha động…………… Hệ số dung tích ở các giá trị pH khác nhau………………………… Hệ số dung tích phụ thuộc vào %ACN trong pha động…………… Diện tích pic của các chất phân tích phụ thuộc vào tốc độ pha động Diện tích pic sắc ký phụ thuộc vào nồng độ các chất phân tích……… Bảng giá trị các Ftính của các chất phân tích LOD, LOQ tính theo phương trình hồi quy Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ 0,08ppm) Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ 0,4ppm) Bảng 3.12: Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ 25 27 29 31 3334 36 3839 42 43 45 46 4748 Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh 0,8ppm) Bảng 3.13: Bảng 3.14: Bảng 3.15: Bảng 3.16: Bảng 3.17: Bảng 3.18: Bảng 3.19: Bảng 3.20: Bảng 3.21: Bảng 3.22: Chiều cao píc sắc ký mẫu tơm ở các nồng độ thêm chuẩn khác Kết quả xác định hiệu suất thu hồi các chất phân tích……………… Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm rảo…………………… Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm rảo………………… Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm chân trắng…………… Hàm lượng chất phân tích trong mẫu tơm chân trắng……………… Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm sú…………………… Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm sú…………………… Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm lớt…………………… Hàm lượng chất phân tích trong mẫu tơm lớt……………………… 50 51 52 53 54 54 55 55 56 57 Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1: Hình 2.1: Hình 3.1: Sơ đồ chuyển hố axít folic thành nucle protein………………… Sơ đồ khối hệ thống HPLC đầy đủ……………………………… Phổ hấp thụ trong vùng tử ngoại khả kiến của các Sas…………… 19 2324 Luận văn Thạc sĩ Thái Hình 3.2: Bùi Minh Diện tích của pic phụ thuộc vào bước sóng detector……………… 25 Hình 3.3: Thời gian lưu của các sulfamit…………………………………… 2627 Hình 3.4: Hình 3.5: Hình 3.6: Hình 3.7: Hình 3.8: Hình 3.9: Hình 3.10: Hình 3.11: Hình 3.12: Hình 3.13: Hình 3.14: Hình 3.15: Hình 3.16: Sự phụ thuộc của k’ vào nồng độ đệm axetat trong pha động…… Píc sắc ký ở các giá trị nồng độ đệm khác Sự phụ thuộc của K’ vào pH của pha động Sắc đồ sắc ký ở pH khác Sự phụ thuộc k’ vào tỉ lệ % ACN trong pha động Sắc đồ píc sắc ký tại các tỉ lệ thành phần pha động khác Sự phụ thuộc diện tích píc sắc ký vào tốc độ pha động Sắc đồ tốc độ khác nhau của pha động Đường chuẩn của chất phân tích trong khoảng nồng độ 0,05 1,00ppm… Sắc đồ của các chất phân tích nồng độ khác nhau tại bước sóng 270nm… Sắc đồ của các chất phân tích nồng độ khác nhau tại bước sóng 320nm… Sắc đồ của 5 chất phân tích với nồng độ 0,01ppm………………… Sắc đồ các chất phân tích sau 8 lần bơm mẫu nồng độ 0,08ppm … 29 2930 31 32 34 3435 36 37 3940 40 41 43 45 Luận văn Thạc sĩ Thái Hình 3.17: Hình 3.18: Hình 3.19: Hình 3.20: Hình 3.21: Hình 3.22: Hình 3.23: Hình 3.24: Hình 3.25: Hình 3.26: Hình 3.27: Hình 3.28: Bùi Minh Sắc đồ các chất phân tích sau 8 lần bơm mẫu nồng độ 0,4ppm …… Sắc đồ các chất phân tích sau 8 lần bơm mẫu nồng độ 0,8ppm …… Sơ đồ xử lý mẫu Tôm Sắc đồ hiệu suất thu hồi theo quy trình xử lý mẫu tơm Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm rảo khi phân tích thêm chuẩn… Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU trong mẫu tơm rảo……… Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm chân trắng khi phân tích thêm chuẩn Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU trong mẫu tơm chân trắng Đường chuẩn của SGU, SMP trong mẫu tơm sú khi phân tích thêm chuẩn Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU, SMP trong tơm sú……… Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm lớt khi phân tích thêm chuẩn… Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU trong tơm lớt…………… 47 48 49 50 53 53 54 54 55 56 57 57 Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh MỞ ĐẦU Dư lượng kháng sinh trong thực phẩm hiện là vấn đề quan ngại của hầu hết các cơ quan kiểm sốt thực phẩm trên thế giới. Một số loại kháng sinh thơng thường (chloramphenicol, malachite green, metronidazole…) bản thân nó có thể gây ra tác động có hại cho sức khoẻ người tiêu dùng, một số loại khác như các kháng sinh nhóm nitrofurans qua q trình trao đổi chất trong cơ thể động vật có thể sinh ra những hợp chất có độc tính cao đối với cơ thể sống. Họ thuốc kháng khuẩn Sulfamit (SAs) là nhóm kháng khuẩn có hoạt phổ rộng, được sử dụng nhiều trong trong ni trồng, chế biến nơng thủy sản, v.v Việc sử dụng chất này một cách tùy tiện có thể dẫn đến tồn dư một lượng lớn quá giới hạn cho phép trong cơ thể động vật. Khi người tiêu dùng sử dụng thực phẩm có dư lượng lớn sulfamit hay các chất kháng sinh trong thời gian 10 Luận văn Thạc sĩ Bùi Minh Thái Xây dựng đồ thị biểu diễn diện tích pic theo nồng độ chất thêm Nồng độ chất phân tích trong mẫu Cx được tính theo cơng thức: Cx = A/B (với A, B hệ số trong phương trình hồi quy của đồ thị thêm chuẩn) Khoảng tin cậy của nồng độ chất phân tích trong mẫu là: Sx Cx ( Sa ) a ( Sb ) b Trong đó: Cx : Nồng độ chất phân tích có trong dung dịch bơm vào cột tách a,b là hệ số trong phương trình hồi qui Sa, Sb : sai số của hệ số trong phương trình hồi qui Sx là sai số nồng độ xác định theo phương pháp thêm chuẩn Khối lượng chất phân tích có trong a(g) mẫu cân đơng khơ ban đầu là : mcpt = V*Cx*F*103(mg) Trong đó mcpt : Khối lượng chất phân tích trong a (g) mẫu (mg) V : Thể tích dung dịch được pha từ a(g) (ml) F : Hệ số pha lỗng Cx : Nồng độ của chất phân tích xác định được từ phương trình hồi quy 103 : Hế số chuyển từ µg sang mg 3.5.2.1. Mẫu tơm rảo Khối lượng mẫu thịt tơm tươi : 142,8g Khối lượng mẫu sau khi đơng khơ : 32,9g Lượng nước có trong mẫu : 77% Với mỗi mẫu được xử lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị trung bình. 66 Luận văn Thạc sĩ Bùi Minh Thái Kết quả phân tích như sau: Bảng 3.15: Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm rảo Chất phân tích SGU Diện tích píc sắc ký (mAu.s) Mẫu thêm chuẩn Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm chất phân tích 0,2ppm chất phân tích 45766 75734 Mẫu tơm Rảo 22151 Ta có phương trình hồi quy: 80000 Spic(mAu.s) 70000 60000 50000 40000 Y=A+B*X He so Gia tri Sai so -A 21092.16667 2367.62331 B 267915 18339.5313 30000 20000 R SD N P -0.99767 2593.60139 0.04351 10000 -0,15 -0,10 -0,05 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 CSGU(ppm) Hình 3.21: Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm rảo khi phân tích thêm chuẩn Bảng 3.16: Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm rảo Chất phân tích SGU CSAs từ đường chuẩn (ppm) Hàm lượng chất trong mẫu đông khô (ppm) Hàm lượng chất trong mẫu tươi (ppm) 0,079 ± 0,010 0,53 ± 0,07 0,12 ± 0,02 67 Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh mV 7.0 Detector A Ch1:270nm mV 7.0 Detector A Ch1:270nm 6.0 6.0 5.0 5.0 4.0 4.0 3.0 3.0 2.0 2.0 mV Detector A Ch1:270nm 7.0 6.0 1/3.407 5.0 1/3.363 4.0 1/3.441 3.0 2.0 1.0 1.0 1.0 0.0 0.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 Mẫu chưa thêm Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm Hình 3.22: Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU trong mẫu tơm rảo 3.5.2.2. Mẫu tơm chân trắng Khối lượng mẫu thịt tươi : 150,1g Khối lượng mẫu sau khi đơng khơ : 30,5g Lượng nước có trong mẫu :79,7% Bảng 3.17: Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm chân trắng Chất phân tích SGU Mẫu tơm Diện tích píc sắc ký (mAu.s) Mẫu thêm chuẩn Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm chân trắng 0,1ppm chất phân tích chất phân tích 30407 59365 74137 Ta có phương trình hồi quy: 68 Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh 90000 6000 Spic(mAu.s) 80000 5000 70000 4000 60000 50000 3000 40000 Y=A+B*X 20000 -0.15 -0.10 -0.05 0.00 1000 R SD N P -0.99899 1708.92734 0.02862 10000 -0.20 2000 He so Gia tri Sai so -A 31104.66667 1560.03009 B 268650 12083.94113 30000 0.05 0.10 0.15 0.20 0.0 CSGU(ppm) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 Hình 3.23: Đường chuẩn SGU Hình 3.24: Sắc đồ pic sắc ký khi thêm mẫu tơm chân trắng khi phân tích thêm chuẩn SGU trong mẫu tơm chân trắng chuẩn Bảng 3.18: Hàm lượng chất phân tích trong mẫu tơm chân trắng Chất phân CSAs từ đường tích chuẩn (ppm) SGU 0,115 ± 0,008 Hàm lượng chất trong mẫu đông khô(ppm) 0,77 ± 0,05 Hàm lượng chất trong mẫu tươi(ppm) 0,16 ± 0,01 3.5.2.3. Mẫu tôm Sú Khối lượng mẫu thịt tôm tươi : 123,6g Khối lượng mẫu sau khi đơng khơ: 37,4g Lượng nước có trong mẫu : 69,7% Với mỗi mẫu được xử lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị trung bình. Kết quả phân tích như sau: Bảng 3.19: Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm sú Chất phân tích Mẫu tơm sú Diện tích píc sắc ký (mAu.s) Mẫu thêm chuẩn Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm chất phân tích 69 0,2ppm chất phân tích Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh SGU 18451 30532 45849 SMP 7010 20175 35745 Ta có phương trình hồi quy: 40000 50000 45000 Spic(mAu.s) 35000 40000 Spic(mAu.s) 30000 35000 25000 30000 20000 25000 Y=A+B*X 20000 15000 10000 -0,15 -0,10 -0,05 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 C (ppm) He so Gia tri Sai so -A 6609.16667 896.29058 B 143675 6942.63699 10000 R SD N P -0.99768 1321.09147 0.04334 5000 -0,20 Y=A+B*X 15000 He so Gia tri Sai so -A 17911.66667 1205.986 B 136990 9341.52736 5000 -0.10 -0.05 0.00 R SD N P -0.99883 981.83714 0.03074 0.05 0.10 0.15 0.20 SGU CSMP(ppm) Hình 3.25: Đường chuẩn của SGU, SMP trong mẫu tơm sú khi phân tích thêm chuẩn Bảng 3.20: Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm sú Hàm lượng chất Chất phân CSAs từ đường tích chuẩn (ppm) SGU 0,130 ± 0,012 0,87 ± 0,08 SMP 0,046 ± 0,007 0,30 ± 0,04 trong mẫu đơng khơ (ppm) 70 Hàm lượng chất trong mẫu tươi (ppm) 0,26 ± 0,02 0,09 ± 0,01 Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh mV 5.0 Detector A Ch1:270nm mV 5.0 Detector A Ch1:270nm mV 5.0 Detector A Ch1:270nm 4.0 4.0 1/3.340 4.0 3.0 3.0 1/3.358 3.0 2.0 2.0 2/4.476 2/4.877 1.0 1.0 2/4.675 1/3.308 2.0 1.0 0.0 0.0 0.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Mẫu chưa thêm Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm Hình 3.26: Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU, SMP trong tơm sú 3.5.2.4. Mẫu tơm lớt Khối lượng mẫu tơm tươi : 132,5g Khối lượng mẫu sau khi đơng khơ: 28,4g Lượng nước có trong mẫu : 78,6% Với mỗi mẫu được xử lý ba lần, phân tích lặp lại ba lần lấy giá trị trung bình. Kết quả phân tích như sau: Bảng 3.21: Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm lớt Diện tích píc sắc ký (mAu.s) Chất phân tích SGU Mẫu tơm lớt Mẫu thêm chuẩn Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm chất phân tích 0,2ppm chất phân tích 26845 40548 Ta có phương trình hồi quy: 71 60849 Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh 65000 60000 Spic(mAu.s) 55000 50000 45000 40000 35000 30000 Y=A+B*X 25000 He so Gia tri Sai so -A 25745.3333 2458.929 B 170020 19046.78538 20000 15000 10000 5000 -0,20 -0,15 -0,10 -0,05 0,00 R SD N P -0.99883 2693.62222 0.07102 0,05 0,10 0,15 0,20C SGU (ppm) Hình 3.27: Đường chuẩn SGU trong mẫu tơm lớt khi phân tích thêm chuẩn Bảng 3.22: Hàm lượng chất phân tích trong mẫu tơm lớt CSAs từ đường tích chuẩn (ppm) SGU 0,151 ± 0,022 Hàm lượng chất Hàm lượng chất trong mẫu đông trong mẫu khô(ppm) tươi(ppm) 1,00 ± 0,15 0,21 ± 0,03 mV 10.0 Detector A Ch1:270nm 9.0 9.0 9.0 8.0 8.0 8.0 7.0 7.0 7.0 6.0 6.0 6.0 5.0 5.0 5.0 4.0 4.0 4.0 3.0 3.0 3.0 2.0 2.0 1.0 1.0 1.0 0.0 0.0 0.0 2.0 1/3.395 mV 10.0 Detector A Ch1:270nm 1/3.427 mV 10.0 Detector A Ch1:270nm 1/3.485 Chất phân 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 Mẫu chưa thêm Mẫu thêm chuẩn 0,1ppm Mẫu thêm chuẩn 0,2ppm 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 Hình 3.28: Sắc đồ pic sắc ký khi thêm chuẩn SGU trong tơm lớt 72 Luận văn Thạc sĩ Bùi Minh Thái Nhận xét: Với kết quả xác định trên cho thấy trong các mẫu tơm đều xuất hiện chất dư lượng kháng khuẩn SGU. Với giới hạn dư lượng sulfamit trong thịt thủy sản cho phép là 0,1ppm( theo thơng tư số:29/2010/TTBNNPTNT) thì các mẫu tơm mà chúng tơi phân tích đều vượt mức giới hạn. Với mẫu tơm sú, tơm lớt dư lượng gấp 2 lần lượng cho phép. Khơng phát hiện thấy MTD, SMX, SDO, SMP( trừ tơm sú) trong các mẫu tơm 73 Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh KẾT LUẬN Trên cơ sở nghiên cứu các điều kiện thực nghiệm, nhằm ứng dụng kỹ thuật phân tích HPLC – UVVis để tách, xác định đồng thời metronidazole và một số sulfamit (SGU, SMP, SDO, SMX) trong một số loại tơm, chúng tơi thu được một số kết quả sau đây: Đã chọn được các điều kiện tối ưu cho q trình sắc ký: Cột tách RP C18: 25 cm × 4,6 mm; 5mm Detector UVVIS: 2 kênh l = 270 nm; l =320nm.Rise time = 0,1 s; Range = 0,01 AUFS Máy ghi: tốc độ giấy = 1 mm/phút; thế ghi = 10 mV Thành phần pha động: dung dịch đệm axetat (pH = 4,5) 10mM /aceto nitril: 80/20 (v/v) Tốc độ pha động: 1 ml/phút 2. Đã đánh giá phương pháp phân tích: Khoảng tuyến tính của các sulfamit: 0,05 – 1,00ppm Giới hạn phát hiện: 0,012 – 0,029 ppm Giới hạn định lượng: 0,040 0,096 ppm Hệ số biến thiên: 0,2% – 5% trong khoảng nồng độ 0,08 0,8ppm 3. Khảo sát mẫu thực Chọn quy trình xử lý mẫu thích hợp, hiệu suất thu hồi các chất phân tích trong mẫu tơm đạt từ 71 90% 74 Luận văn Thạc sĩ Bùi Minh Thái Xác định dư lượng SGU trong mẫu tôm chân trắng: 0,16 ± 0,01ppm, tôm lớt: 0,21±0,03ppm, tơm rảo:0,12±0,02ppm, tơm sú :0,26±0,02ppm, dư lượng SMP trong tơm sú 0,09 ± 0,01ppm Khơng phát hiện thấy MTD, SDO, SMX, SMP( trừ tơm sú) trong các mẫu tơm Từ các kết quả thu được, chúng tơi thấy phương pháp HPLC – Detector UV Vis có độ nhạy cao, thích hợp cho phân tích đồng thời metronidazole và các chất kháng khuẩn SGU, SMP, SDO và SMX trong tơm Chúng tơi hy vọng những nghiên cứu trên sẽ góp phần vào việc ứng dụng kỹ thuật HPLC – UVVis nói riêng và các kỹ thuật HPLC nói chung để xác định metronidazole và các hợp chất thuộc họ sulfamit trong thực phẩm, nhằm phục vụ đắc lực cho các ngành khoa học và đặc biệt trong lĩnh vực vệ sinh an toàn thực phẩm, giúp bảo vệ sức khoẻ cho con người. 75 Luận văn Thạc sĩ Thái Bùi Minh TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Chu Đình Bính, Phạm Luận, Nguyễn Thị Ánh Nguyệt, Nguyễn Phương Thanh (2007), “Xác định dư lượng các chất kháng khuẩn họ sulfamit trong thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao”, Tạp chí Khoa học và Cơng nghệ, 45(1B), tr 33 – 41 Nguyễn Thị Kim Dung (2004), Xác định sulfonamide trong thuốc bằng phương pháp hấp thụ nguyên tử, Luận văn Thạc sĩ khoa học, Đại học Quốc gia Hà Nội Trần Đức Hậu, Nguyễn Đình Hiển, Thái Duy Thìn, Huỳnh Kim Thoa, Nguyễn Văn Thục (2006), Hố dược tập 2, Bộ mơn hố dược, Đại học Dược, Hà Nội Nguyễn Thị Phương Linh (2006), Xác định gián tiếp hàm lượng sulfamethoxazole trong thuốc bằng phép đo FAAS, Luận văn thạc sĩ khoa học, Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Luận (1998), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu nâng cao , Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Thị Ánh Nguyệt (2007), Nghiên cứu tách và xác định đồng thời một số sulfamit trong thức ăn chăn ni và thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu nâng cao (HPLC), Luận văn thạc sĩ khoa học, Đại học Quốc gia Hà Nội 76 Luận văn Thạc sĩ Bùi Minh Thái Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung, Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi(2003), Hóa học phân tích Phần 2(Các phương pháp phân tích cơng cụ), Đại học Quốc Gia Hà Nội Tạ Thị Thảo (2005), Thống kê trong hố phân tích, Đại học Quốc gia Hà Nội Tiêu chuẩn ngành (2004), Sulfonamit trong sản phẩm thuỷ sảnPhương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao, 28 TCN 196:2004 10 Vũ Cẩm Tú (2009), Xác định các sulfamit trong mẫu Dược phẩm và thực phẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao(HPLC), Khóa luận tốt nghiệp, Đại học Khoa học Tự nhiên Tiếng Anh 11 A. V. Pereira, Q. B. Cass(2005), “High performance liquid chromatography method for the simultaneous determination of sulfamethoxazole and trimethoprim in bovine milk using an online cleanup column”, Journal of chromatography B, 826, pp. 139 146 12 Cheong, C.K., Hajeb, P.Jinap, S and IsmailFitry, M.R(2010), “Sulfonamides determination in chicken meat products from Malaysia’’, International Food Research Journal,17, pp. 885892 13 Craig D.C Salisbury, Jason C Sweet, Roger Munro(2004), “ Determination of sulfonamide residues in the Tissues of food animals using automated precolumn derivatization and liquid chromatography with fluorescence detection”, Journal of AOAC international, 87( 5), pp.1264 1268 14 D.G Kennedy, R.J.McCracken, A.Cannavan, S.A.Hewitt (1998),“Use of liquid chromatographymass spectrometry in the analysis of residues of antibiotics on meat and milk”. Journal of chromatography A, 812, pp.7798 15 Gertraud Suhren and W Heeschen(1993) “Detection of eight sulphonamides and dapsone in milk by a liquid chromatographic method”, Analytica Chimica Acta, 275, pp. 329333 77 Luận văn Thạc sĩ Bùi Minh Thái 16 Hadir M Maher, Rasha M Youssef, Riad H Khalil and Sabry M El Bahr(2008), “ Simultaneous multiresidue determination of metronidazole and spiramycin in fish muscle using high performance liquid chromatography with UV detection ’’, Journal of Chromatography B, 876(2), pp.175181 17 HanWen Sun, FengChi Wang and LianFeng Ai(2007), “ Simultaneous determination of seven nitroimidazole residues in meat by using HPLCUV detection with solidphase extraction”, Journal of Chromatography B, 857(2), pp. 296300. 18 Ivan Pecorelli, Rita Bibi, Laura Fioroni, Roberta Galarini (2004) ,“Validation of a confirmatory method for the determination of sulphonamides in muscle according to the European Union regulation 2002/657/EC”, Journal of chromatography A, 1032(12),pp. 2329 19 M Brandtner, W Hela, R Widek, R Suhuh (2003), “Determination of sulfonamides in animal tissues using cation exchange reversed phase sorbent for sample cleanup and HPLCDAD for detection”, Food Chemistry, 83, pp 601608 20 Naser Tavakoli, Jaleh Varshosaz, Farid Dorkoosh and Mohammad R. Zargarzadeh (2007), “Development and validation of a simple HPLC method for simultaneous in vitro determination of amoxicillin and metronidazole at single wavelength’’, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 43(1), pp.325 329 21 Naoto Furusawa(2000), “Simplified determining procedure for routine residue monitoring of sulphamethazine and sulphadimethoxine in milk”. Journal of chromatography A, 898, pp.185 – 191 22 PVinas, C.Lopez Erroz,N.Campillo, M.Hernandez(1996), “ Determination of sulphonamides in foods by liquid chromatography with postcolumn fluorescence derivatization”, Journal of Chromatography A, 726(12), pp.125131 78 Luận văn Thạc sĩ Bùi Minh Thái 23 QiongHui Zou, XiangFeng Wang,Yuan Liu, Jin Wang, Jia Song, Hui Gao, Jie Han(2007), “ Determination of sulphonamides in animal tissues by high performance liquid chromatography with precolumn derivatization of 9 fluorenylmethyl chloroformate”, Journal of Separation Science ,30(16), pp. 2647–2655 24 Richard Lindberg, PerÅke Jarnheimer, Björn Olsen, Magnus Johansson and Mats Tysklind (2004), “Determination of antibiotic substances in hospital sewage water using solid phase extraction and liquid chromatography/mass spectrometry and group analogue internal standards”, Chemosphere, 57(10) ,pp.1479 1488 25 Rodrigo H.M.M. Granja, Alfredo M. Montes Niño, Fernanda Rabone and Alessandro Gonzalez Salerno(2008), “A reliable highperformance liquid chromatograph with ultraviolet detection for the determination of sulfonamides in honey” , Analytica Chimica Acta , 613(1), pp. 116119. 26 Ticiano Gomes do Nascimento, Eduardo de Jesus Oliveira and Rui Oliveira Macêdo(2005),’’ Simultaneous determination of ranitidine and metronidazole in human plasma using high performance liquid chromatography with diode array detection’’, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 37( 4), pp. 777783. 27 Theresa A. Gehring, Bill Griffinb, Rod Williams , Charles Geiseker ,Larry G Rushing , Paul H Siitonen(2006), “ Multiresidue determination of sulfonamides in edible catfish, shrimp and salmon tissues by high performance liquid chromatography with postcolumn derivatization and fluorescence detection”, Journal of Chromatography B, 840,pp.132–138 28 W.M.A. Niessen(1998), “Analysis of antibiotics by liquid chromatography – mass spectrometry”. Journal of chromatography A, 812, pp. 53 – 75 29 W. Hela, , M. Brandtner, R. Widek and R. Schuh(2003), “ Determination of sulfonamides in animal tissues using cation exchange reversed phase sorbent 79 Luận văn Thạc sĩ Bùi Minh Thái for sample cleanup and HPLC–DAD for detection”, Food Chemistry,83(4), pp.601608 30 Xiaojia Huang, Dongxing Yuan, Benli Huang (2007) ,“Simple and rapid determination of sulfonamides in milk using Ether type column liquid chromatography”, Talanta ,72 ,pp.1298 1301 31 Wang P, Li J, Zheng H.(2007), “ Simultaneous determination of seven sulfonamides and metronidazole and chloramphenicol in cosmetics by high performance liquid chromatography’’, Chineses journal of chromatography, 25(5), pp.743746 32 Wikipedia, “the free encyclopedia (2005), sulfonamide (medicine)”. Http://en.wikipedia.org/wiki/Sulfonamide (medicin) 33 Http://www.uptodate.com/contents/metronidazoleanoverview 80 ... Tối ưu hố các điều kiện xử lý mẫu phân tích: Chọn phương pháp xử lý mẫu và xác định hiệu suất thu hồi Xây dựng quy trình phân tích và ứng dụng quy trình nghiên cứu để phân tích một số mẫu tơm 2.6 Phương pháp nghiên cứu. .. Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ 0,4ppm) Bảng 3.12: Khảo sát độ đúng, độ lặp lại của phương pháp phân tích (nồng độ 25 27 29 31 3334 36 3839 42 43 45 46 4748 Luận văn Thạc sĩ Thái... Chiều cao píc sắc ký mẫu tơm ở các nồng độ thêm chuẩn khác Kết quả xác định hiệu suất thu hồi các chất phân tích …………… Kết quả phân tích các chất đối với mẫu tơm rảo…………………… Hàm lượng các chất phân tích trong mẫu tơm