BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM VŨ XUÂN DƢƠNG NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH TÊN KHOA HỌC, QUY TRÌNH NHÂN GỐNG IN VITRO VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA TINH DẦU CÂY GỪNG BẢN ĐỊA Ở BẮC KẠN (GỪNG ĐÁ) Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Mã số : 9.42.02.01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Đặng Trọng Lƣơng TS Đỗ Tuấn Khiêm HÀ NỘI - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam Ďoan Ďây cơng trình nghiên cứu tơi thực Các số liệu, kết luận án trung thực chưa Ďược cơng bố cơng trình khác Tác giả Vũ Xuân Dƣơng i LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban Giám Ďốc Viện Khoa học nông nghiệp Việt Nam, thầy cô giáo Ban Ďào tạo sau Ďại học Ďã tạo Ďiều kiện giúp Ďỡ tơi suốt q trình học tập hồn thiện luận án Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới Phó Giáo sư, Tiến sĩ Đặng Trọng Lương Tiến sĩ Đỗ Tuấn Khiêm Ďã tận tình hướng dẫn, Ďộng viên khích lệ, dành nhiều thời gian trao Ďổi Ďịnh hướng cho tơi q trình thực luận án Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới tập thể cán bộ, nghiên cứu viên Bộ môn Kĩ thuật di truyền - Viện Di truyền nông nghiệp; Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam; Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên; Viện Công nghệ sinh học – Viện Hàn lâm khoa học cơng nghệ Việt Nam; Phòng thí nghiệm trọng Ďiểm bảo tồn sử dụng tài ngun thực vật, Phòng thí nghiệm trọng Ďiểm thực vật số tỉnh Quảng Đông, Vườn thực vật Nam Trung Quốc, Viện Hàn lâm khoa học Trung Quốc, Quảng Châu, Trung Quốc; Trung tâm Công nghệ sinh học – Trường Đại học Hùng Vương, Ďã tạo Ďiều kiện giúp Ďỡ tiến hành nghiên cứu chia sẻ kinh nghiệm Ďể hoàn thành luận án Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn tới gia Ďình, bạn bè, Ďồng nghiệp Ďã Ďộng viên truyền nhiệt huyết Ďể tơi hồn thành luận án Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày… tháng… năm 2019 Nghiên cứu sinh Vũ Xuân Dƣơng ii MỤC LỤC Lời cam Ďoan i Lời cảm ơn ii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng viii Danh mục hình x MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết Ďề tài Mục tiêu luận án Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn Ďề tài Những Ďóng góp luận án CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái quát chung họ Gừng (Zingiberaceae Lindl.) 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc Ďiểm hình thái Họ Gừng 1.2 Giới thiệu gừng Bắc Kạn 11 1.3 Tình hình nghiên cứu đa dạng sinh học phân loại họ Gừng 13 1.3.1 Trên giới 13 1.3.2 Ở Việt Nam 15 1.4 Nghiên cứu phân loại thực vật dựa trình tự gen 17 1.4.1 Giới thiệu vùng ITS-rDNA (Internal transcribed spacer) .17 1.4.2 Giới thiệu vùng matK (maturaseK) 18 1.4.3 Một số nghiên cứu phân loại thực vật dựa trình tự gen 18 1.5 Tình hình nghiên cứu nhân giống in vitro họ Gừng 25 1.5.1 Trên giới 25 1.5.2 Ở Việt Nam 29 1.6 Một số nghiên cứu tinh dầu họ Gừng 33 iii 1.6.1 Trên giới 33 1.6.2 Ở Việt Nam 34 CHƢƠNG VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 36 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 36 2.2 Vật liệu nghiên cứu 36 2.3 Nội dung nghiên cứu 37 2.4 Phương pháp nghiên cứu 38 2.4.1 Phương pháp phân loại dựa vào Ďặc Ďiểm hình thái 38 2.4.2 Phương pháp phân loại thực vật dựa trình tự gen 38 2.4.3 Phương pháp nuôi cấy mô 43 2.4.4 Đặc Ďiểm sinh trưởng phát triển có nguồn gốc in vitro .49 2.4.5 Phương pháp phân tích sinh hóa 50 2.4.6 Phương pháp phân tích hoạt tính kháng vi sinh vật .52 2.5 Địa điểm thời gian nghiên cứu .54 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 55 3.1 Vị trí phân loại gừng Bắc Kạn 55 3.1.1 Đặc Ďiểm sinh học gừng Bắc Kạn 55 3.1.2 Phân loại dựa vào Ďặc Ďiểm hình thái 57 3.1.3 Phân loại gừng Bắc Kạn dựa trình tự gen ITS gen matK 62 3.2 Nhân giống gừng Bắc Kạn công nghệ nuôi cấy lớp mỏng 72 3.2.1 Tạo mẫu in vitro 72 3.2.2 Tạo callus từ lát cắt chồi .75 3.2.3 Tái sinh chồi từ callus 76 3.2.4 Nhân chồi in vitro 78 3.2.5 Tái sinh rễ tạo hoàn chỉnh in vitro 83 3.2.6 Giai Ďoạn 86 3.2.7 Quy trình nhân nhanh gừng Bắc Kạn kỹ thuật nuôi cấy lớp mỏng 94 iv 3.3 Đặc điểm nông sinh học gừng Bắc Kạn nuôi cấy mô 98 3.3.1 Động thái tăng trưởng chiều cao 98 3.3.2 Động thái 100 3.3.3 Động thái Ďẻ nhánh 101 3.3.4 Một số yếu tố cấu thành suất giống gừng Bắc Kạn nuôi cấy mô 102 3.4 Thành phần hóa học tinh dầu gừng Bắc Kạn 106 3.4.1 Kết tách chiết tinh dầu 106 3.4.2 Thành phần hóa học tinh dầu 107 3.5 Khả kháng vi sinh vật tinh dầu chiết xuất từ gừng Bắc Kạn .111 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 115 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 117 TÀI LIỆU THAM KHẢO 118 PHỤ LỤC 133 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid ABI Applied biosystems incorporated AFLP Amplified fragment length polymorphism BAP 6-Benzylaminopurin BLAST Basic local alignment search tool bp Base pair cpDNA Chloroplast DNA CTAB Cetyltrimethyl ammoium bromide CT Công thức DNA Deoxyribonucleic acid DNAse Deoxyribonuclease dNTP Deoxyribounucleotide triphosphate ddNTP Dideoxyribonucleotide triphosphate ĐHST Điều hòa sinh trưởng EDTA Ethylenediamine tetraacetate GC-MS Gas chromatography mass spectometry (Phương pháp sắc ký ghép khối phổ) GĐ Gừng Ďá IAA Indole-3-acetic acid IBA Indole butyric acid ITS Internal transcribed spacer Kin Kinetin matK Maturase K ML Maximum Likehood MS Murashige and Skoog (Mơi trường MS, 1962) vi µM Micromol (nồng Ďộ phần triệu mol/l) NAA 1-Naphthaleneacetic acid (Axit 1-Naphthaleneaxetic) NCBI National center for biotechnology information Nu Nucleotide ND Nước dừa ORF Open reading frame (khung Ďọc mở) PCR Polymerase chain reaction RAPD Random amplified polymorphic DNA rbcL Ribulose-bisphosphate carboxylase RFLP Restriction fragment length polymorphism RNA Riboucleic acid RNAse Ribonuclease SSR Simple Sequence Repeates Taq Thermus aquaticus TBE Tris/Borate/EDTA TDZ Thidiazuzon vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Danh sách mẫu gừng Bắc Kạn sử dụng nghiên cứu 36 Bảng 2.2 Hóa chất sử dụng cho tách DNA tổng số 39 Bảng 2.3 Trình tự mồi ITS matK 40 Bảng 2.4 Các thành phần có phản ứng khuếch Ďại vùng ITS matK 41 Bảng 2.5 Chu kì nhiệt khuếch Ďại vùng ITS matK 41 Bảng 3.1 Một số tính trạng Ďặc trưng gừng Bắc Kạn 55 Bảng 3.2 So sánh hình thái lồi Alpinia coriandriodora A bambusifolia 61 Bảng 3.3 Kết Ďo quang phổ DNA tổng số máy NanoDrop Lite Spectrophotometer 62 Bảng 3.4 Mức Ďộ tương Ďồng trình tự gen ITS mẫu gừng Bắc Kạn (mẫu GD01LT) số loài chi Alpinia 65 Bảng 3.5 Hiệu khử trùng công thức sử dụng NaOCl 2,5% 73 Bảng 3.6 Ảnh hưởng tổ hợp TDZ 2,4D Ďến khả tái sinh tạo callus lát cắt chồi (sau tuần nuôi cấy) 75 Bảng 3.7 Ảnh hưởng tổ hợp chất Ďiều hòa sinh trưởng BAP Vitamin B1 Ďến khả tái sinh chồi từ callus (sau tuần nuôi cấy) 77 Bảng 3.8 Ảnh hưởng tổ hợp BAP Kinetin Ďến khả nhân nhanh chồi gừng Bắc Kạn (sau tuần nuôi cấy) 79 Bảng 3.9 Ảnh hưởng hàm lượng nước dừa Ďến hiệu nhân chồi (sau tuần nuôi cấy) 81 Bảng 3.10 Ảnh hưởng môi trường MS α-NAA Ďến khả tái sinh rễ tạo hoàn chỉnh (sau tuần nuôi cấy) 83 Bảng 3.11 Sinh trưởng phát triển (sau 30 ngày ngôi) công thức giá thể 86 viii Bảng 3.12 Hàm lượng nước hàm lượng chất khô mơ thân, gừng Bắc Kạn thời kì 89 Bảng 3.13 Động thái tăng trưởng chiều cao gừng Bắc Kạn nuôi cấy mô 99 Bảng 3.14 Động thái 100 Bảng 3.15 Động thái Ďẻ nhánh gừng Bắc Kạn nuôi cấy mô 102 Bảng 3.16 Một số yếu tố cấu thành suất giống gừng Bắc Kạn 103 Bảng 3.17 Lượng tinh dầu thu Ďược từ nuôi cấy mô 01 năm tuổi 106 Bảng 3.18 Thành phần hóa học tinh dầu mẫu nghiên cứu 108 Bảng 3.19 Hàm lượng chất có tinh dầu mẫu nghiên cứu 110 Bảng 3.20 Khả kháng nấm, kháng khuẩn tinh dầu gừng Bắc Kạn nguồn gốc nuôi cấy mô 112 ix Anova: Single Factor Số chồi/callus SUMMARY Groups Count DC CT12 CT13 CT14 CT15 CT16 ANOVA Source of Variation SS Between Groups Within Groups Total 44.31255 0.2192 44.53175 Sum 14.55 17.76282 22.20956 29.12138 21.26901 16.97778 Average 4.85 5.92094 7.403186 9.707126 7.089669 5.659259 Variance 0.0175 0.005931 0.026821 0.032236 0.006578 0.020535 df MS F 8.86251 485.1733 12 0.018267 17 P-value F crit 2.07E13 3.105875 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TILE FILE TSCHOI 6/ 3/19 0: :PAGE Ti le tai sinh choi tu callus VARIATE V005 TILE LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7590.12 1518.02 351.31 0.000 NLAI 1.23457 617284 0.14 0.869 * RESIDUAL 10 43.2098 4.32098 * TOTAL (CORRECTED) 17 7634.57 449.092 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TILEC FILE TSCHOI 6/ 3/19 0: :PAGE Ti le tai sinh choi tu callus VARIATE V007 TILEC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 44.3126 8.86251 532.08 0.000 NLAI 526325E-01 263163E-01 1.58 0.253 * RESIDUAL 10 166563 166563E-01 * TOTAL (CORRECTED) 17 44.5317 2.61951 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TSCHOI 6/ 3/19 0: :PAGE Ti le tai sinh choi tu callus MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ DC CT12 CT13 NOS 3 TILE 15.5556 41.1111 55.5556 TILEC 4.85000 5.92094 7.40319 156 CT14 CT15 CT16 3 78.8889 61.1111 32.2222 9.70713 7.08967 5.65926 SE(N= 3) 1.20014 0.745124E-01 5%LSD 10DF 3.78167 0.234791 MEANS FOR EFFECT NLAI NLAI NOS 6 TILE 47.2222 47.2222 47.7778 TILEC 6.84692 6.74602 6.72215 SE(N= 6) 0.848624 0.526883E-01 5%LSD 10DF 2.67405 0.166023 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TSCHOI 6/ 3/19 0: :PAGE Ti le tai sinh choi tu callus F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TILE TILEC GRAND MEAN (N= 18) NO OBS 18 47.407 18 6.7717 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 21.192 2.0787 4.4 0.0000 1.6185 0.12906 1.9 0.0000 |NLAI | | | 0.8686 0.2530 | | | | Ảnh hƣởng BAP Kin nhân chồi gừng Bắc Kạn Anova: Single Factor Hệ số nhân chồi SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT17 15.2 5.066667 0.017778 CT18 16.8 5.6 0.004444 CT19 17.93333 5.977778 0.004815 CT20 17.3 5.766667 0.001111 CT21 15.13333 5.044444 0.004815 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS 2.112889 0.065926 2.178815 df MS 0.528222 10 0.006593 14 157 F 80.1236 P-value 1.48E07 F crit 3.47805 Anova: Single Factor Chiều cao chồi SUMMARY Groups Count CT17 CT18 CT19 CT20 CT21 Sum Average Variance 15 0.04 16.1 5.366667 0.013333 18.2 6.066667 0.023333 16.4 5.466667 0.013333 13.8 4.6 0.03 ANOVA Source of Variation SS df MS Between Groups Within Groups Total 3.6 0.24 3.84 10 14 0.9 0.024 F 37.5 P-value 5.42E06 F crit 3.47805 Anova: Single Factor Số lá/chồi SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT17 13 4.333333 0.333333 CT18 14 4.666667 0.333333 CT19 14 4.666667 0.333333 CT20 13 4.333333 0.333333 CT21 12 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS 0.933333 2.666667 3.6 df MS 0.233333 10 0.266667 14 F P-value 0.875 0.512105 F crit 3.47805 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE BAP-KI 4/10/18 16:30 :PAGE Ket qua phoi hop BAP Ki nhan choi gung ban dia Bac Kan VARIATE V005 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 2.11289 528222 68.90 0.000 NLAI 459261E-02 229630E-02 0.30 0.752 * RESIDUAL 613332E-01 766665E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 2.17882 155630 - 158 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE BAP-KI 4/10/18 16:30 :PAGE Ket qua phoi hop BAP Ki nhan choi gung ban dia Bac Kan VARIATE V006 CHIEUCAO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.60000 900000 62.07 0.000 NLAI 124000 619999E-01 4.28 0.054 * RESIDUAL 116000 145000E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.84000 274286 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOLA FILE BAP-KI 4/10/18 16:30 :PAGE Ket qua phoi hop BAP Ki nhan choi gung ban dia Bac Kan VARIATE V007 SOLA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 933333 233333 0.82 0.547 NLAI 400000 200000 0.71 0.525 * RESIDUAL 2.26667 283333 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.60000 257143 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE BAP-KI 4/10/18 16:30 :PAGE Ket qua phoi hop BAP Ki nhan choi gung ban dia Bac Kan MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT17 CT18 CT19 CT20 CT21 NOS 3 3 HSNC 5.06667 5.60000 5.97778 5.76667 5.04444 CHIEUCAO 5.00000 5.36667 6.06667 5.46667 4.60000 SOLA 4.33333 4.66667 4.66667 4.33333 4.00000 SE(N= 3) 0.505525E-01 0.695222E-01 0.307318 5%LSD 8DF 0.164846 0.226705 1.00213 MEANS FOR EFFECT NLAI NLAI NOS 5 HSNC 5.50667 5.50000 5.46667 CHIEUCAO 5.40000 5.32000 5.18000 SOLA 4.40000 4.60000 4.20000 SE(N= 5) 0.391578E-01 0.538516E-01 0.238048 5%LSD 8DF 0.127689 0.175605 0.776249 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE BAP-KI 4/10/18 16:30 :PAGE Ket qua phoi hop BAP Ki nhan choi gung ban dia Bac Kan F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC CHIEUCAO SOLA GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 5.4911 15 5.3000 15 4.4000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.39450 0.87559E-01 1.6 0.0000 0.52372 0.12042 2.3 0.0000 0.50709 0.53229 12.1 0.5467 159 |NLAI | | | 0.7516 0.0542 0.5254 | | | | Ảnh hƣởng nƣớc dừa đến hiệu nhân chồi Anova: Single Factor Số lá/chồi SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT22 14 4.666667 0.333333 CT23 15 CT24 13 4.333333 0.333333 CT25 11 3.666667 0.333333 CT26 10 3.333333 0.333333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 5.733333 2.666667 Total df MS 1.433333 10 0.266667 F P-value 5.375 0.014228 8.4 14 Anova: Single Factor Chiều cao chồi SUMMARY Groups Count CT22 CT23 CT24 CT25 CT26 Sum 17.6 17.7 17.3 15.8 14 Average 5.866667 5.9 5.766667 5.266667 4.666667 Variance 0.043333 0.07 0.043333 0.013333 0.003333 df MS F ANOVA Source of Variation SS Between Groups Within Groups 3.342667 0.346667 0.835667 24.10577 10 0.034667 Total 3.689333 14 160 P-value 4.05E05 F crit 3.47805 F crit 3.47805 Anova: Single Factor Hệ số nhân chồi SUMMARY Groups Count CT22 CT23 CT24 CT25 CT26 ANOVA Source of Variation SS Sum 17.73333 18.96667 17.06667 14.13333 11.13333 Average 5.911111 6.322222 5.688889 4.711111 3.711111 Variance 0.002593 0.004815 0.004815 0.013704 0.018148 df MS F Between Groups Within Groups 13.30844 0.088148 3.327111 377.4454 10 0.008815 Total 13.39659 14 P-value 7.36E11 BALANCED ANOVA FOR VARIATE HSNC FILE NUOC DUA 7/10/18 22:21 :PAGE Anh huong cua nuoc dua den hieu qua nhan choi F crit 3.47805 VARIATE V005 HSNC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 13.3084 3.32711 611.09 0.000 NLAI 445926E-01 222963E-01 4.10 0.059 * RESIDUAL 435565E-01 544456E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 13.3966 956900 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEUCAO FILE NUOC DUA 7/10/18 22:21 :PAGE Anh huong cua nuoc dua den hieu qua nhan choi VARIATE V006 CHIEUCAO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 3.34267 835667 20.80 0.000 NLAI 253334E-01 126667E-01 0.32 0.741 * RESIDUAL 321333 401667E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.68933 263524 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SOLA FILE NUOC DUA 7/10/18 22:21 :PAGE Anh huong cua nuoc dua den hieu qua nhan choi VARIATE V007 SOLA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= 161 CT$ 5.73333 1.43333 7.82 0.008 NLAI 1.20000 600000 3.27 0.091 * RESIDUAL 1.46667 183333 * TOTAL (CORRECTED) 14 8.40000 600000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NUOC DUA 7/10/18 22:21 :PAGE Anh huong cua nuoc dua den hieu qua nhan choi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT22 CT23 CT24 CT25 CT26 NOS 3 3 HSNC 5.91111 6.32222 5.68889 4.71111 3.71111 CHIEUCAO 5.86667 5.90000 5.76667 5.26667 4.66667 SOLA 4.66667 5.00000 4.33333 3.66667 3.33333 SE(N= 3) 0.426011E-01 0.115710 0.247207 5%LSD 8DF 0.138918 0.377320 0.806116 MEANS FOR EFFECT NLAI NLAI NOS 5 HSNC 5.27333 5.33333 5.20000 CHIEUCAO 5.44000 5.50000 5.54000 SOLA 4.40000 3.80000 4.40000 SE(N= 5) 0.329987E-01 0.896289E-01 0.191485 5%LSD 8DF 0.107605 0.292271 0.624414 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NUOC DUA 7/10/18 22:21 :PAGE Anh huong cua nuoc dua den hieu qua nhan choi F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HSNC CHIEUCAO SOLA GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 5.2689 15 5.4933 15 4.2000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.97821 0.73787E-01 1.4 0.0000 0.51335 0.20042 3.6 0.0004 0.77460 0.42817 10.2 0.0076 Tạo hoàn chỉnh in vitro Anova: Single Factor Số rễ trung bình SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT27 7.433333 2.477778 0.018148 CT28 8.7 2.9 0.007778 CT29 11.06667 3.688889 0.007037 CT30 13.46667 4.488889 0.01037 CT31 14.8 4.933333 0.017778 162 |NLAI | | | 0.0592 0.7409 0.0908 | | | | CT32 CT33 CT34 CT35 CT36 CT37 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total 3 3 3 SS SS 4.133333 0.007778 3.777778 0.01037 4.533333 0.007778 5.511111 0.01037 4.944444 0.013704 4.055556 0.01037 df 24.22357 0.242963 24.46653 Anova: Single Factor Chiều dài rễ TB SUMMARY Groups Count CT27 CT28 CT29 CT30 CT31 CT32 CT33 CT34 CT35 CT36 CT37 ANOVA Source of Variation 12.4 11.33333 13.6 16.53333 14.83333 12.16667 MS F 10 2.422357 219.3415 22 0.011044 32 Sum 6.9 9.3 10.1 10.9 12.5 12.1 9.4 11 13.3 12.7 12 Average 2.3 3.1 3.366667 3.633333 4.166667 4.033333 3.133333 3.666667 4.433333 4.233333 Variance 0.04 0.01 0.023333 0.003333 0.013333 0.043333 0.023333 0.013333 0.023333 0.023333 0.04 df MS F Between Groups Within Groups 11.88727 0.513333 10 1.188727 50.94545 22 0.023333 Total 12.40061 32 163 P-value F crit 1.22E19 2.296696 P-value F crit 7.15E13 2.296696 Anova: Single Factor Chiều cao TB/cây SUMMARY Groups Count CT27 CT28 CT29 CT30 CT31 CT32 CT33 CT34 CT35 CT36 CT37 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS 20.97636 0.613333 21.5897 Sum 20.1 22.4 25.4 27.8 27.8 26.1 24.9 26.6 28.9 25.9 25.6 Average 6.7 7.466667 8.466667 9.266667 9.266667 8.7 8.3 8.866667 9.633333 8.633333 8.533333 Variance 0.07 0.043333 0.023333 0.003333 0.013333 0.01 0.04 0.043333 0.023333 0.013333 0.023333 df MS F 10 2.097636 22 0.027879 75.2413 32 Anova: Single Factor Số TB/cây SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT27 2.666667 0.333333 CT28 10 3.333333 0.333333 CT29 11 3.666667 0.333333 CT30 12 CT31 13 4.333333 0.333333 CT32 11 3.666667 0.333333 CT33 10 3.333333 0.333333 CT34 14 4.666667 0.333333 CT35 16 5.333333 0.333333 CT36 14 4.666667 0.333333 CT37 13 4.333333 0.333333 164 P-value F crit 1.19E14 2.296696 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 17.33333 6.666667 Total 24 df MS 10 1.733333 22 0.30303 F P-value F crit 5.72 0.000322 2.296696 32 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO RE/CH FILE TAO RE 15/10/18 15:26 :PAGE Ket qua nghien cuu moi truong tao cay hoan chinh VARIATE V005 SO RE/CH LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 10 24.2236 2.42236 209.20 0.000 NLAI 113804E-01 569022E-02 0.49 0.624 * RESIDUAL 20 231584 115792E-01 * TOTAL (CORRECTED) 32 24.4665 764579 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEU DA FILE TAO RE 15/10/18 15:26 :PAGE Ket qua nghien cuu moi truong tao cay hoan chinh VARIATE V006 CHIEU DA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 10 11.8873 1.18873 59.98 0.000 NLAI 116970 584848E-01 2.95 0.074 * RESIDUAL 20 396364 198182E-01 * TOTAL (CORRECTED) 32 12.4006 387519 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEU CA FILE TAO RE 15/10/18 15:26 :PAGE Ket qua nghien cuu moi truong tao cay hoan chinh VARIATE V007 CHIEU CA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 10 20.9764 2.09764 83.30 0.000 NLAI 109697 548485E-01 2.18 0.138 * RESIDUAL 20 503637 251818E-01 * TOTAL (CORRECTED) 32 21.5897 674678 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO LA FILE TAO RE 15/10/18 15:26 :PAGE Ket qua nghien cuu moi truong tao cay hoan chinh VARIATE V008 SO LA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 10 17.3333 1.73333 5.84 0.000 NLAI 727273 363636 1.22 0.315 * RESIDUAL 20 5.93939 296970 165 * TOTAL (CORRECTED) 32 24.0000 750000 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TAO RE 15/10/18 15:26 :PAGE Ket qua nghien cuu moi truong tao cay hoan chinh MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT27 CT28 CT29 CT30 CT31 CT32 CT33 CT34 CT35 CT36 CT37 NOS 3 3 3 3 3 SO RE/CH CHIEU DA CHIEU CA 2.47778 2.30000 6.70000 2.90000 3.10000 7.46667 3.68889 3.36667 8.46667 4.48889 3.63333 9.26667 4.93333 4.16667 9.26667 4.13333 4.03333 8.70000 3.77778 3.13333 8.30000 4.53333 3.66667 8.86667 5.51111 4.43333 9.63333 4.94444 4.23333 8.63333 4.05556 4.00000 8.53333 SO LA 2.66667 3.33333 3.66667 4.00000 4.33333 3.66667 3.33333 4.66667 5.33333 4.66667 4.33333 SE(N= 3) 0.621268E-01 0.812778E-01 0.916185E-01 0.314627 5%LSD 20DF 0.183272 0.239767 0.270272 0.928138 MEANS FOR EFFECT NLAI NLAI NOS 11 11 11 SO RE/CH 4.13030 4.10909 4.15455 CHIEU DA 3.63636 3.57273 3.71818 CHIEU CA 8.47273 8.50909 8.60909 SO LA 3.81818 4.00000 4.18182 SE(N= 11) 0.324446E-01 0.424459E-01 0.478462E-01 0.164308 5%LSD 20DF 0.957107E-01 0.125214 0.141145 0.484704 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TAO RE 15/10/18 15:26 :PAGE Ket qua nghien cuu moi truong tao cay hoan chinh F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE SO RE/CH CHIEU DA CHIEU CA SO LA GRAND MEAN (N= 33) NO OBS 33 4.1313 33 3.6424 33 8.5303 33 4.0000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.87440 0.10761 2.6 0.0000 0.62251 0.14078 3.9 0.0000 0.82139 0.15869 1.9 0.0000 0.86603 0.54495 13.6 0.0004 Giai đoạn Anova: Single Factor Tỉ lệ sống SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT38 286.6667 95.55556 3.703704 CT39 246.6667 82.22222 3.703704 CT40 220 73.33333 11.11111 CT41 240 80 11.11111 166 |NLAI | | | 0.6240 0.0740 0.1377 0.3155 | | | | ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 781.4815 59.25926 Total 840.7407 Anova: Single Factor Chiều cao trung bình SUMMARY Groups Count CT38 CT39 CT40 CT41 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS 0.166667 0.08 0.246667 df MS F 260.4938 35.16667 7.407407 P-value F crit 5.9E-05 4.066181 11 Sum Average Variance 29 9.666667 0.023333 28.3 9.433333 0.003333 28.2 9.4 0.01 28.1 9.366667 0.003333 df MS F P-value F crit 0.055556 5.555556 0.023417 4.066181 0.01 11 Anova: Single Factor Số trung bình/cây SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT38 17 5.666667 0.333333 CT39 17 5.666667 0.333333 CT40 16 5.333333 0.333333 CT41 17 5.666667 0.333333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 0.25 2.666667 df MS 0.083333 0.333333 Total 2.916667 11 167 F P-value F crit 0.25 0.859204 4.066181 Anova: Single Factor Số rễ trung bình/cây SUMMARY Groups Count Sum Average Variance CT38 18 CT39 17 5.666667 0.333333 CT40 16 5.333333 0.333333 CT41 17 5.666667 0.333333 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups SS 0.666667 df MS F P-value F crit 0.222222 0.888889 0.487183 4.066181 0.25 Total 2.666667 11 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TI LE 15 FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi VARIATE V005 TI LE 15 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 432.407 144.136 20.30 0.002 NLAI 1.85185 925926 0.13 0.880 * RESIDUAL 42.5926 7.09877 * TOTAL (CORRECTED) 11 476.852 43.3502 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEU CA FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi VARIATE V006 CHIEU CA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 691665E-01 230555E-01 10.37 0.009 NLAI 666672E-02 333336E-02 1.50 0.297 * RESIDUAL 133334E-01 222224E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 891666E-01 810606E-02 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO LA 15 FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi VARIATE V007 SO LA 15 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 250000 833333E-01 1.00 0.456 NLAI 1.50000 750000 9.00 0.016 * RESIDUAL 500000 833333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.25000 204545 168 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO RE 15 FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi VARIATE V008 SO RE 15 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 250000 833333E-01 1.00 0.456 NLAI 1.50000 750000 9.00 0.016 * RESIDUAL 500000 833333E-01 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.25000 204545 BALANCED ANOVA FOR VARIATE TI LE 30 FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi VARIATE V010 TI LE 30 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 781.481 260.494 27.23 0.001 NLAI 1.85185 925927 0.10 0.909 * RESIDUAL 57.4074 9.56791 * TOTAL (CORRECTED) 11 840.741 76.4310 BALANCED ANOVA FOR VARIATE CHIEU CA FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi VARIATE V011 CHIEU CA LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 166667 555556E-01 10.00 0.010 NLAI 466667E-01 233334E-01 4.20 0.072 * RESIDUAL 333332E-01 555554E-02 * TOTAL (CORRECTED) 11 246667 224243E-01 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO LA 30 FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi VARIATE V012 SO LA 30 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 250000 833333E-01 0.25 0.859 NLAI 666667 333333 1.00 0.424 * RESIDUAL 2.00000 333333 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.91667 265152 BALANCED ANOVA FOR VARIATE SO RE 30 FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi VARIATE V013 SO RE 30 LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 666667 222222 0.73 0.574 NLAI 166667 833333E-01 0.27 0.772 * RESIDUAL 1.83333 305556 - 169 * TOTAL (CORRECTED) 11 2.66667 242424 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 SE(N= 5%LSD NOS 3 3 TI LE 15 97.7778 88.8889 81.1111 86.6667 3) 6DF CT$ CT1 CT2 CT3 CT4 1.53826 5.32110 NOS 3 3 TI LE 30 95.5555 82.2222 73.3333 80.0000 CHIEU CA 9.43333 9.30000 9.26667 9.23333 SO LA 15 5.33333 5.33333 5.00000 5.33333 SO RE 15 5.33333 5.33333 5.00000 5.33333 0.272167E-01 0.166667 0.941468E-01 0.576527 0.166667 0.576527 CHIEU CA 9.66667 9.43333 9.40000 9.36667 SO LA 30 5.66667 5.66667 5.33333 5.66667 SO RE 30 6.00000 5.66667 5.33333 5.66667 SE(N= 3) 1.78586 0.430331E-01 0.333333 0.319142 5%LSD 6DF 6.17758 0.148858 1.15305 1.10396 MEANS FOR EFFECT NLAI NLAI SE(N= 5%LSD NOS 4 TI LE 15 88.3333 88.3333 89.1667 4) 6DF NLAI 1.33218 4.60821 NOS 4 TI LE 30 82.5000 82.5000 83.3333 CHIEU CA 9.27500 9.32500 9.32500 SO LA 15 5.00000 5.00000 5.75000 SO RE 15 5.00000 5.00000 5.75000 0.235703E-01 0.144338 0.815335E-01 0.499287 0.144338 0.499287 CHIEU CA 9.55000 9.45000 9.40000 SO LA 30 5.25000 5.75000 5.75000 SO RE 30 5.75000 5.50000 5.75000 SE(N= 4) 1.54660 0.372677E-01 0.288675 0.276385 5%LSD 6DF 5.34994 0.128915 0.998573 0.956061 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE RA NGOI 21/10/18 23: :PAGE Ket qua nghien cuu gia the giai doan ngoi 10 F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TI LE CHIEU SO LA SO RE TI LE CHIEU SO LA SO RE 15 CA 15 15 30 CA 30 30 GRAND MEAN (N= 12) NO OBS 12 88.611 12 9.3083 12 5.2500 12 5.2500 12 82.778 12 9.4667 12 5.5833 12 5.6667 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 6.5841 2.6644 3.0 0.0020 0.90034E-010.47141E-01 0.5 0.0095 0.45227 0.28868 5.5 0.4558 0.45227 0.28868 5.5 0.4558 8.7425 3.0932 3.7 0.0010 0.14975 0.74535E-01 0.8 0.0103 0.51493 0.57735 10.3 0.8590 0.49237 0.55277 9.8 0.5737 170 |NLAI | | | 0.8797 0.2966 0.0162 0.0162 0.9086 0.0722 0.4237 0.7719 | | | | ... dụng vào việc tạo nguồn giống bệnh cung cấp cho người dân, lựa chọn Ďề tài: Nghiên cứu xác định tên khoa học, quy trình nhân giống in vitro hoạt tính sinh học tinh dầu gừng địa Bắc Kạn (Gừng đá). .. gen gừng Ďịa Bắc Kạn Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học Cung cấp dẫn liệu khoa học Ďặc Ďiểm hình thái, tên khoa học, thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu. .. tiêu luận án Xác Ďịnh tên khoa học loài gừng Ďịa Bắc Kạn, xây dựng quy trình nhân giống cơng nghệ ni cấy mơ từ lát cắt chồi, bước Ďầu xác Ďịnh thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu thu Ďược