TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ====== LÊ THU THUỶ ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ VÀ ĐỘ pH ĐẾN QUÁ TRÌNH TẠO MÀNG BIOCELLULOSE TRÊN MƠI TRƯỜNG DỊCH DƯA CHUỘT (CUCUMIS SATIVUS L.1753) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Vi sinh vật học HÀ NỘI - 2019 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ====== LÊ THU THUỶ ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ VÀ ĐỘ pH ĐẾN Q TRÌNH TẠO MÀNG BIOCELLULOSE TRÊN MƠI TRƯỜNG DỊCH DƯA CHUỘT (CUCUMIS SATIVUS L.1753) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Vi sinh vật học Người hướng dẫn khoa học ThS Nguyễn Thị Kim Ngoan HÀ NỘI - 2019 LỜI CẢM ƠN Bằng tất lòng kính trọng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới cô giáo, ThS Nguyễn Thị Kim Ngoan, người tận tình bảo giúp đỡ em thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ lòng biết ơn tới thầy giáo, cô giáo tổ môn Di truyền – Công nghệ sinh học, Khoa Sinh - KTNN, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội nhiệt tình giảng dạy, truyền đạt kinh nghiệm tạo điều kiện giúp đỡ em suốt thời gian em thực đề tài Em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu nhà trường, Ban Chủ nhiệm khoa Sinh - KTNN, Trung tâm thơng tin thư viện, Phòng thí nghiệm Vi sinh vật Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành khóa luận Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè người thân, người ln quan tâm, động viên, khích lệ, giúp đỡ em suốt trình học tập, tiến hành hoàn thiện đề tài Hà Nội, Ngày tháng năm 2019 Sinh viên thực Lê Thu Thủy LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan kết nghiên cứu riêng cá nhân em, tất số liệu thu thập từ thực nghiệm qua xử lý thống kê, hồn tồn khơng có số liệu chép, bịa đặt Đề tài nghiên cứu không trùng với cơng trình nghiên cứu tác giả khác Trong đề tài, em có sử dụng số liệu số tác giả khác, em xin phép tác giả trích dẫn để bổ sung cho khóa luận Nếu sai em xin chịu hồn toàn trách nhiệm Hà Nội, Ngày tháng năm 2019 Sinh viên thực Lê Thu Thủy MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Tính đề tài NỘI DUNG Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vị trí đặc điểm phân loại Gluconacetobacter sinh giới 1.1.1 Vị trí phân loại Gluconacetobacter sinh giới 1.1.2 Đặc điểm phân loại Gluconacetobacter 1.2 Biocellulose (BC) 1.2.1 Cấu trúc 1.2.2 Một số tính chất 1.2.3 Cơ chế tổng hợp 1.2.4 Chức cellulose vi khuẩn Gluconacetobacter 1.3 Điều kiện nuôi cấy 10 1.3.1 Nhiệt độ 10 1.3.2 Độ pH 10 1.3.3 Độ thơng khí 10 1.4 Ứng dụng màng Biocellulose 10 1.5 Tình hình nghiên cứu sản xuất màng Biocellulose 11 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 11 1.5.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 11 1.6 Dưa chuột Cucumis sativus 12 1.6.1 Thành phần dinh dưỡng 12 1.6.2 Ứng dụng 12 Chương ĐỐI TƯỢNG, PHẠM VI, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu hóa chất 14 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 14 2.2 Phạm vi nghiên cứu 15 2.3 Phương pháp nghiên cứu 16 2.3.1 Phương pháp vi sinh 16 2.3.1.1 Phân lập tuyển chọn chủng Gluconacetobacter theo phương pháp truyền thống (Phương pháp Vinogradski Beijerinck) 16 2.3.1.2 Quan sát đặc điểm hình thái cách xếp tế bào tiêu nhuộm kép 17 2.3.1.3 Phương pháp bảo quản chủng giống môi trường thạch nghiêng 17 2.3.1.5 Phương pháp lên men tạo màng Biocellulose 18 2.3.2 Phương pháp hóa sinh 18 2.3.2.1 Phát hoạt tính catalase 18 2.3.2.2 Phương pháp kiểm tra khả oxi hóa ethanol thành acid acetic 18 2.3.2.3 Phát khả oxy hoá acid acetic 18 2.3.2.4 Xác định khả tổng hợp cellulose 19 2.3.3 Phương pháp cảm quan 19 2.3.4 Phương pháp xác định trọng lượng tươi màng Biocellulose 19 2.3.5 Phương pháp toán học 19 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 21 3.1 Phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả tạo màng Biocellulose mơi trường dịch dưa chuột 21 3.1.1 Phân lập vi khuẩn Gluconacetobacter từ môi trường dịch dưa chuột 21 3.1.1.1 Làm giàu mẫu nguyên liệu 21 3.1.1.2 Phân lập vi khuẩn Gluconacetobacter có khả sinh màng Biocellulose 21 3.1.2 Tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả tạo màng Biocellulose dai, mỏng 24 3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ độ pH tới khả tạo màng Biocellulose môi trường dịch dưa chuột 27 3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả lên men tạo màng Biocellulose 27 3.2.2 Ảnh hưởng độ pH tới khả lên men tạo màng Biocellulose 29 3.2.3 Thử nghiệm khả tạo màng Biocellulose môi trường chọn (MT4) 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 33 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Sợi cellulose màng Biocellulose Hình 1.2 Con đường sinh tổng hợp cellulose Gluconaccetobacter Hình 3.1 Chủng giống vi khuẩn Gluconacetobacter 22 Hình 3.2 Khả oxi hóa acid acetic vi khuẩn Gluconacetobacter 24 Hình 3.3 Hình thái tế bào vi khuẩn Gluconacetobacter nhuộm Gram độ phóng đại 1000 kính hiển vi quang học 25 Hình 3.4 Màng Biocellulose chủng vi khuẩn T6 T9 tạo 26 Hình 3.5 Biểu đồ biểu diễn ảnh hưởng nhiệt độ tới trình lên men tạo màng Biocellulose 28 Hình 3.6 Biểu đồ biểu diễn ảnh hưởng độ pH tới trình lên men tạo màng Biocellulose 30 Hình 3.7 Màng Biocellulose thu môi trường chọn lọc MT4 31 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hóa chủng vi khuẩn Gluconacetobacter Bảng 3.1 Một số đặc tính màng Biocellulose .25 Bảng 3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ tới hình thành màng Biocellulose 28 Bảng 3.3 Ảnh hưởng độ pH tới trình lên men tạo màng Biocellulose 30 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Như biết công nghệ sinh học trở thành ngành kĩ thuật chiếm giữ vị trí chủ đạo nhiều quốc gia phát triển toàn giới Là phận công nghệ sinh học, công nghệ vi sinh phát triển mạnh mẽ với thành tựu to lớn có ý nghĩa đời sống đặc biệt ngành như: công nghiệp, nông nghiệp, y học Một nguồn nguyên liệu quan tâm cellulose vi khuẩn hay Bacterial cellulose (BC) Màng sinh học Biocellulose vi khuẩn Gluconacetobacter tạo có cấu trúc đặc tính giống với cellulose thực vật, không chứa hợp chất cao phân tử như: ligin, peptin, hemicellulose, sáp nến Do chúng có đặc tính vượt trội độ dẻo dai, độ bền, độ khỏe độ đàn hồi Bởi đặc tính ưu việt nên màng Biocellulose xem nguồn nguyên liệu có tiềm năng, ứng dụng nhiều lĩnh vực khác như: công nghiệp sản xuất giấy, màng Biocellulose dùng để sản xuất giấy điện tử chất lượng cao; công nghệ môi trường màng Biocellulose sử dụng làm màng phân tách để xử lý nước biến đổi độ nhớt nước (Brown,1989; Jonas Fonah,1998) Trong y học, màng Biocellulose ứng dụng làm da tạm thời trình điều trị bỏng, loét da, làm mặt nạ dưỡng da cho người; Ngồi ra, màng Biocellulose ứng dụng công nghệ sản xuất pin, làm môi trường chất sinh học, thực phẩm hay thay thực phẩm Để nuôi Gluconacetobacter người ta thường dùng: nước vo gạo, nước dừa già, nước mía, rỉ đường Các loại môi trường nghiên cứu nhiều.Gần đây, phòng thí nghiệm Vi sinh khoa Sinh - KTNN, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội tiến hành lên men tạo màng Biocellulose môi trường dịch dưa chuột Cucumis sativus để ứng dụng vào việc làm mặt nạ dưỡng da cho người Đối với chị em phụ nữ việc đắp mặt nạ tự nhiên mặt nạ từ trái cách dưỡng da đơn giản, tốn mà lại hiệu Từ lâu nay, đắp vàng Đối với chủng thuộc chi Gluconacetobacter có khả phân giải tiếp tục acit acetic thành CO2 H2O làm phục hồi màu xanh ban đầu môi trường Ngược lại, chủng thuộc chi Gluconobacter khơng có khả phân giải acid acetic nên môi trường giữ màu vàng Trong chủng phân lập có đến chủng có khả oxy hóa ethanol thành acid acetic, chúng khác độ mạnh yếu tùy vào loại chủng phân biệt thành nhóm: nhóm sinh trưởng nhanh nhóm sinh trưởng chậm Vì nên việc theo dõi khả phục hồi màu xanh môi trường để phân biệt chi Gluconacetobacter Gluconobacter khó khăn thiếu xác Vậy nên sau bước cần tiếp tục khảo sát khả oxy hóa acetate nhằm phân biệt chủng thuộc chi Gluconacetobacter Gluconobacter Bước 3: Các chủng tuyển chọn bước đem cấy lên mơi trường có chứa calcium acetate Do chi Gluconacetobacter Glucobacter có khả oxy hóa lactate có vi khuẩn thuộc chi Gluconacetobacter có khả oxy hóa acetate Vì thế, mơi trường có chứa calcium acetate, chủng vi khuẩn thuộc chi Gluconacetobacter có khả sử dụng muối acetate làm nguồn cacbon hay nói cách khác chúng có khả oxy hóa acid acetic thành CO2 H2O; giải phóng ATP cung cấp cho 2+ hoạt động sống tế bào đồng thời giải phóng Ca quanh khuẩn lạc tạo vòng phân giải xung Ca(CH3COO)2 + O2 → CaCO3 ↓ + H2O + CO2 Từ thí nghiệm thu chủng vi khuẩn thuộc chi Gluconacetobacter, họ Acetobacteriaceae T6 T9 Hình 3.2 Khả oxi hóa acid acetic vi khuẩn Gluconacetobacter Tiếp tục tiến hành nghiên cứu đặc điểm sinh hóa chủng Gluconacetobacter cách thử hoạt tính catalase chủng Gluconacetobacter (theo phương pháp 2.3.2.1) Kết quả: có xuất bọt khí, chứng tỏ oxy giải phóng ra, điều có nghĩa chủng vi khuẩn có enzim catalase phân giải H2O2 theo phương trình: H2O2 → H2O + O2 3.1.2 Tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả tạo màng Biocellulose dai, mỏng Khi tiến hành nuôi cấy môi trường thạch đĩa, ta dễ dàng quan sát thấy vi khuẩn Gluconacetobacter hình thành khuẩn lạc bóng nhẵn xù xì, phần rìa mép khuẩn lạc phẳng hay gợn sóng, màu trắng đục suốt, khuẩn lạc lồi lên phía mặt thạch tách khỏi mơi trường [28] Để quan sát hình thái cấu tạo vi khuẩn Gluconacetobacter sử dụng phương pháp nhuộm Gram thấy vi khuẩn Gluconacetobacter có dạng hình que thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm Hình 3.3 Hình thái tế bào vi khuẩn Gluconacetobacter nhuộm Gram độ phóng đại 1000 kính hiển vi quang học Các chủng Gluconacetobacter phân lập chọn lọc bước tiếp tục nghiên cứu tuyển chọn tiếp tục để chọn chủng có khả tạo màng Biocellulose Quá trình chọn lọc cần trải qua bước sau: Bước1: Khảo sát khả tạo màng Biocellulose chủng Gluconacetobacter phân lập môi trường (MT3) + Tiến hành nuôi cấy chủng T6 T9 mơi trường dịch thể nhiệt độ thích hợp 30 C theo dõi khả tạo màng Biocellulose chủng + Kết cho thấy khả hình thành màng mơi trường lỏng chủng khác về: tính chất, đặc điểm thời gian hình thành màng Bảng 3.1 Một số đặc tính màng Biocellulose S T T TK ê h nố i T Đ ộ Đ điể dMm 1àn ,g 0m M T 2àn ,g 0dà So sánh thời gian hình thành màng ta thấy chủng Gluconacetobacter T9 có khả hình thành màng chậm (ngày thứ bắt đầu hình thành) Chủng Gluconacetobacter T9 tạo lớp màng dày nhiên màng dễ rách khơng có dẻo dai nên sử dụng để nghiên cứu bước khó khăn Còn chủng Gluconacetobacter T6 khả hình thành màng sớm (ngày thứ bắt đầu hình thành màng), màng tạo thành mỏng dai, hình thức tương đối đẹp T6 T9 Hình 3.4 Màng Biocellulose chủng vi khuẩn T6 T9 tạo Bước 2: Chúng tiến hành kiểm tra chất cellulose màng theo phương pháp Xác định khả tổng hợp cellulose (phương pháp 2.3.2.4) Kết cho thấy chủng Gluconacetobacter có khả hình thành màng Biocellulose Ngồi ra, kiểm tra thêm số đặc tính sinh hóa khác chủng Gluconacetobacter nói hoạt tính catalase, chuyển hóa glycerol thành dihydroxyaceton, khả sinh sắc tố nâu Có thể tạm khẳng định chủng G.xylinus Như vậy, từ nguồn nguyên liệu ban đầu phân lập chủng vi khuẩn tuyển chọn sơ chủng Gluconacetobacter, chủng có khả lên men tạo màng Biocellulose Xuất phát từ 14 nguồn nguyên liệu tác giả Đinh Thị Kim Nhung [14] nghiên cứu đa dạng sinh học chủng Gluconacetobacter tuyển chọn 65 chủng có khả sinh màng Biocellulose Có thể thấy loài vi khuẩn thuộc chủng Gluconacetobacter đa dạng phong phú, chúng sinh trưởng phát triển đuợc nhiều điều kiện môi trường khác Khả tạo màng Biocellulose đa dạng độ dày mỏng, màu sắc cảm quan, mùi vị, tính chất vật lý Phân lập chủng vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T Gluconacetobacter xylinus T9, tuyển chọn chủng vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T6 có khả sinh màng Biocellulose với đặc tính màng mỏng dai, mơi trường có bổ sung dịch dưa chuột 3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ độ pH tới khả tạo màng Biocellulose môi trường dịch dưa chuột 3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả lên men tạo màng Biocellulose Nhiệt độ yếu tố định đến khả hình thành màng Biocellulose chủng Gluconacetobacter xylinus T6 Trong điều kiện nhiệt độ thấp vi khuẩn sinh trưởng chậm, thời gian nuôi cấy kéo dài, khả tổng hợp cellulose nhiệt độ cao dẫn đến q trình hơ hấp diễn mạnh mẽ gây ảnh hưởng đến trình tổng hợp cellulose Để xác định nhiệt độ tốt cho trình lên men tạo màng, tiến hành nuôi cấy vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T6 pH=5 tủ ấm Binder (Đức) với mức nhiệt độ khác nhau, sau thu hồi xác định khối lượng khơ màng sau ngày nuôi cấy Kết thể qua bảng sau: Bảng 3.2: Ảnh hưởng nhiệt độ tới hình thành màng Biocellulose S N Đặc T hi( điểm T màng BC 1Màng 5khơng hình 2Xuất 0sợi cellulose 2mảnh Màng 5mỏng, dai, 3M m tr d 0àn ỏ o Mm 2, 3, 0, 0, 0, 0, h 3Màng dày, 3, 0, 0, 5dai, nhẵn 0 4Màng 0không hình 4Màng 5khơng hình thành 3.5 Khối lượng 2.5 tươi 1.5 màng BC 0.5 (g) khuẩn ViVi khuẩn T6 15 20 25 30 35 T6 40Nhiệt độ Hình 3.5 Biểu đồ biểu diễn ảnh hưởng nhiệt độ tới trình lên men tạo màng Biocellulose chủng vi khuẩn Gluconacetobacter T6 Từ kết bảng 3.2 cho thấy vi khuẩn Gluconacetobacter vi khuẩn đơn bào nên chúng mẫn cảm với biến hóa nhiệt độ Và nhiệt độ nhân tố định ảnh hưởng tới sinh trưởng vi khuẩn tính mẫn cảm với nhiệt độ phản ứng xúc tác nhờ hệ enzim Trong điều kiện môi trường nhiệt độ thấp (15 – 20 C) phản ứng bị ngưng trệ diễn chậm chạp dẫn đến sinh trưởng vi khuẩn bị chậm lại khơng hình thành mà xuất sợi cellulose lơ lửng dung dịch Còn điều kiện nhiệt độ mơi trường tăng cao (40 – 45 C), vi khuẩn sinh trưởng hệ enzim bị thay đổi hoạt tính dẫn đến màng cellulose khơng hình thành Mỗi chủng vi sinh vật thường có ngưỡng nhiệt độ phát triển khác nhau, chủng vi khuẩn G xylinus T6 sinh trưởng tổng hợp cellulose thích hợp khoảng nhiệt độ 25 – 35 C Khả hình thành màng tốt 30 C Vì vậy, nhiệt độ thích hợp cho q trình lên men tạo màng Biocellulose chủng vi khuẩn G xylinus T6 30 C 3.2.2 Ảnh hưởng độ pH tới khả lên men tạo màng Biocellulose + - Giá trị pH đo nồng độ ion H OH có mơi trường, pH mơi trường ảnh hưởng trực tiếp gián tiếp đến tính chất sinh lí tế bào nên ảnh hưởng đến khả hình thành màng vi khuẩn Gluconacetobacter T6 Để xác định pH thích hợp cho tế bào sinh trưởng tạo màng Biocellulose, tiến hành nuôi cấy vi khuẩn mơi trường có giá trị pH khác 30 C ngày Kết thể qua bảng sau: Bảng 3.3: Ảnh hưởng độ pH tới trình lên men tạo màng Biocellulose S Đ Mm T ộ 10 T p , , Mà2 g , , M 30 , , Mà2 m, , M M Khối lượng tươi màng BC (g) , , , 3.5 2.5 1.5 Vi khuẩn T6 Vi khuẩn T6 0.5 pH Hình 3.6 Biểu đồ biểu diễn ảnh hưởng độ pH tới trình lên men tạo màng Biocellulose chủng vi khuẩn Gluconacetobacter T6 Tại giá trị pH khác thu khối lượng cellulose khác nhau, điều chứng tỏ pH yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất tổng hợp cellulose Gluconacetobacter Chủng vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T6 nuôi cấy môi trường dịch dưa chuột vòng ngày có giá trị pH = không xuất màng, giá trị pH = màng mỏng khoảng pH = – màng tạo thành có độ dày tương đương khối lượng cellulose đạt giá trọ cao mơi trường có giá trị pH = màng có đặc tính dai, nhẵn Như vậy, pH thích hợp cho trình lên men tạo màng Biocellulose chủng vi khuẩn Gluconacetobacter xylinus T6 3.2.3 Thử nghiệm khả tạo màng Biocellulose môi trường chọn (MT4) Ngay sau xác định ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ độ pH môi trường tới khả tạo màng Biocellulose vi khuẩn G xylinus môi trường MT3, chúng tơi định tiến hành thí nghiệm đánh giá khả tạo màng môi trường chọn (MT4) với điều kiện nhiệt độ 30 C pH = Kết quả: Sau ngày nuôi cấy tiến liên tục với điều kiện dinh dưỡng môi trường ổn định, tối ưu tiến hành thu màng kiểm tra chất lượng màng Biocellulose so sánh với màng thu mơi trường MT3 thấy : chất lượng màng tốt, đảm bảo đầy đủ yêu cầu đặt ra, phù hợp với việc làm mặt nạ dưỡng da Hình 3.7 Màng Biocellulosethu mơi trường chọn lọc MT4 Q trình thử nghiệm lên men tạo màng môi trường chọn MT4 cho kết màng Biocellulose thu đạt tiêu chuẩn mỏng, dai nhẵn so với môi trường ban đầu MT3, phù hợp với mục đích sử dụng làm mặt nạ dưỡng da KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận 1.1 Phân lập, tuyển chọn chủng G xylinus có khả lên men tạo màng Biocellulose có đặc tính mỏng dai, mơi trường có bổ sung dịch dưa chuột 1.2 Tìm nhiệt độ độ pH thích hợp cho q trình lên men tạo màng Biocellulose mơi trường có bổ sung dịch dưa chuột nhiệt độ 30 C pH = Sau ngày nuôi cấy thử nghiệm môi trường MT4 tĩnh ta thu màng mỏng, dai, nhẵn đạt tiêu chuẩn làm mặt nạ dưỡng da Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn nên xin đề nghị số ý kiến sau: + Tiến hành thí nghiệm quy mơ lớn hơn, lặp lại thí nghiệm nhiều lần để kiểm chứng kết thu + Tiến hành nghiên cứu để tìm kiếm nguồn dinh dưỡng thích hợp như: Pepton, Nitơ, Cacbon đến hình thành màng + Các khâu xử lý, bảo quản đóng gói màng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Nguyễn Lân Dũng (1976), Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật học, tập 1- 2- 3, Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội [2] Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo, Vương Trọng Hào (1990), Thực hành vi sinh vật, Nxb giáo dục, tr 17-34, 63-74, 89-92 [3] Đặng Thị Hồng (2007), Phân lập, tuyển chọn nghiên cứu số đặc tính sinh học vi khuẩn Acetobacter xylinum chế tạo màng sinh học, Luận văn thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội [4] Nguyễn Quỳnh Hương (2005), Đa dạng hóa mơi trường sản xuất bacterial cellulose từ vi khuẩn Acetobacter xylinum, Luận văn Thạc sĩ sinh học Trường Đại Học Nông Lâm TP.HCM [5] Nguyễn Thúy Hương (2008), “Ảnh hưởng nguồn chất kiểu lên men đến suất chất lượng cellulose vi khuẩn”, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ, số 24, trang 205-210 [6] Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh (2006), “Nghiên cứu đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng”, Tạp chí dược học, số 361 [7] Nguyễn Thị Nguyệt (2008), Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum cho màng Bacterial cellulose làm mặt nạ dưỡng da, Luận văn Thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội [8] Đinh Thị Kim Nhung (1996), Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Acetobacter ứng dụng chúng lên men acidacetic theo phương pháp chìm, Luận án PTS Sinh học, Trường Đại học Tổng hợp Hà Nội [9] Đinh Thị Kim Nhung, Dương Minh Lam (2012), “Nghiên cứu định danh chủng vi khuẩn BHN2_21 có khả tạo màng Bacterial cellulose (BC) phân lập từ mẫu bia Hà Nội”, Kỷ yếu toàn văn Hội nghị Khoa học lần 8, ĐHKHTN- ĐHQG Thành phố Hồ Chí Minh, ngày 10 tháng 11, năm 2012 [10] Đinh Thị Kim Nhung, Nguyễn Thị Thùy Vân, Hoàng Thị Thảo (2011), “Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum sinh tổng hợp màng Bacterial cellulose ứng dụng điều trị bỏng”, Tạp chí Y học thảm họa bỏng, ISSN 1859-3461 Số 2, tr 122-127 [11] Đinh Thị Kim Nhung (2012), Nghiên cứu thu nhận màng cellulose từ vi khuẩn Acetobacter, ứng dụng trị bỏng, Đề tài trọng điểm cấp Bộ (20102012) [12] Trần Như Quỳnh (2009), Nghiên cứu số đặc tính vật lý màng bacterial cellulose từ Acetobacter xylinum, ứng dụng trị bỏng Luận văn Thạc sĩ sinh học ĐHSP Hà Nội [13] Trần Linh Thước (2006), Phương pháp phân tích vi sinh vật, Nxb giáo dục, 2006, tr 1- 29, 40- 69 [14] Nguyễn Thị Thùy Vân (2009), Nghiên cứu đặc tính sinh học khả tạo màng Bacterial cellulose vi khuẩn Acetobacter xylinum phân lập từ số nguồn nguyên liệu Việt Nam, Luận văn Thạc sĩ khoa học sinh học, trường ĐHSP Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh [15] Alexander Steinbuchel, Sang Ki Rhee (2005) Polysaccharides and polyamides in the food industry, www.wiley.vch pp 31-85 [16] Barbara Surma - S'lusarska, Sebastion, Presler, Dariusz Danielewicz (2008), "Characteristics of Bacterial Cellulose Obtained from Actobacter xylinum culture for applycation in papermarking", FIBRES TEXTILES in Eastem Europe, vol 16, No 4, pp 108-111 [17] Bergey H, John G Holt( 1992) Bergey’s manual of dererminativa bacteriology, Wolters kluwer health,p.71- 84 [18] Brown A.J (1886), ”An acetic ferment which forms cellulose”, J.Chem Soc., 49, 432-439 [19] Yamanaka S, Ishihanra M, Sugiyama J (2000) ”Structural mod-ification of bacterial cellulose”, Cellulose 7: 213-225 PHỤ LỤC Hình 1: Một số mẫu màng thu điều kiện mơi trường khác Hình 2: Khả tạo cellulose chủng Gluconacetobacter Hình 3:Hoạt tính Catalase Hình 4: Chuyển hóa ethanol thành acid acetic vi khuẩn Acetic ... tạo màng Biocellulose dai, mỏng 24 3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ độ pH tới khả tạo màng Biocellulose môi trường dịch dưa chuột 27 3.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ tới khả l n men tạo màng. ..TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PH M HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN ====== L THU THUỶ ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ VÀ ĐỘ pH ĐẾN QUÁ TRÌNH TẠO MÀNG BIOCELLULOSE TRÊN MƠI TRƯỜNG DỊCH DƯA CHUỘT (CUCUMIS SATIVUS L. 1753). .. định l a chọn đề tài Ảnh hưởng nhiệt độ độ pH đến trình tạo màng Biocellulose môi trường dịch dưa chuột (Cucumis sativus L. 1753) Mục đích nghiên cứu Xác định nhiệt độ, độ pH thích hợp cho q trình