1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ Y TẾ BÙI BÍCH MAING NGHIÊN CỨU BỘ XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE VÀ KẼM TRONG TINH DỊCH ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐỐN VƠ SINH NAM TẠI BỆNH VIỆN ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TỪ NĂM 2017- 2018 Chuyên ngành : Mã số : ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS HÀ NỘI - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI BÍCH MAI NGHIÊN CỨU BỘ XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE VÀ KẼM TRONG TINH DỊCH ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐỐN VƠ SINH NAM TẠI BỆNH VIỆN ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TỪ NĂM 2017- 2018 Chuyên ngành : Y sinh học- Di truyền Mã số : 62720301 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Trang PGS.TS Hoàng Thị Ngọc Lan HÀ NỘI - 2017 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .11 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 33 1.1 Một số khái niệm, phân loại nguyên nhân vô sinh nam 33 1.1.1 Khái niệm, phân loại vô tinh thiểu tinh nặng nam giới vô sinh .33 1.1.2 Nguyên nhân vô sinh nam 44 1.2 Các phương pháp chẩn đốn vơ sinh nam Việt Nam giới .1010 1.2.1 Thăm khám lâm sàng 1010 1.2.2 Các kĩ thuật chẩn đốn ngun nhân vơ tinh thiểu tinh .1010 1.2.3 Các xét nghiệm để tìm ngun nhân vơ sinh người nam có tinh trùng .1111 1.3 Phương pháp định lượng fructose kẽm tinh dịch phương pháp so màu .1212 1.3.1 Vai trò frucose kẽm tinh dịch 1212 1.3.2 Các phương pháp định lượng fructose kẽm 1414 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1818 2.1 Đối tượng nghiên cứu .1818 2.2 Thời gian nghiên cứu 1818 2.3 Địa điểm nghiên cứu 1818 2.4 Phương pháp nghiên cứu 1818 2.4.1 Thiết kế nghiên cứu 1818 2.4.2 Các bước nghiên cứu .1919 2.5 Phân tích xử lý số liệu 2525 2.6 Sai số cách khống chế 2626 2.6.1 Sai số .2626 2.6.2 Cách khắc phục .2626 2.7 Đạo đức nghiên cứu .2727 CHƯƠNG 3: DỰ KIẾN KẾT QUẢ 2828 3.1 Một số đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu 2828 3.2 Xây dựng quy trình xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch 2929 3.2 Ứng dụng quy trình định lượng 300 bệnh nhân đánh giá tương đương với kit thương mại đạt chuẩn 3030 3.2.1 Ứng dụng quy trình 3030 3.2.2 Đánh giá tương đương .3131 3.3 Tính tốn độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm tự pha chế 3232 CHƯƠNG 4: DỰ KIẾN BÀN LUẬN 3333 KẾT LUẬN .3333 KIẾN NGHỊ 3333 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Bảng kiểm quy trình kĩ thuật định lượng fructose 2929 Bảng 3.2 Bảng kiểm quy trình kĩ thuật định lượng kẽm 2929 Bảng 3.3 Bảng kiểm chứng quy trình kĩ thuật định lượng fructose .3030 Bảng 3.4 Bảng kiểm chứng quy trình kĩ thuật định lượng kẽm .3030 Bảng 3.5 Nồng độ fructose .3030 Bảng 3.6 Nồng độ kẽm 3131 Bảng 3.7 Bảng thống kê số lượng giá trị tính độ nhạy độ đặc hiệu 3232 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân bố tuổi bệnh nhân .2828 Biểu đồ 3.2 Lý khám .2828 Biểu đồ 3.3 Tiền sử bệnh nhân .2929 ĐẶT VẤN ĐỀ Cùng với phát triển xã hội nhận thức người dân bệnh tật ngày nâng cao việc chăm sóc sức khỏe sinh sản dần quan tâm nhiều tỉ lệ vô sinh muộn cặp vợ chồng ngày tăng Theo tổ chức Y tế Thế giới, 10% - 15% cặp vợ chồng độ tuổi sinh sản bị vơ sinh, 40% nữ giới, 30-40% nam giới, 10% nam nữ, lại 10% khơng rõ ngun nhân [1] Trong vô sinh nữ biết đến nghiên cứu từ lâu gần đây, vơ sinh nam mơí trọng nhiều Đã có nhiều phương pháp đời đề phục vụ cho việc chẩn đốn điều trị vơ nam siêu âm tinh hồn, mổ thăm dò tinh hồn, xét nghiệm gen, nhiễm sắc thể, gần xét nghiệm hóa sinh tinh dịch áp dụng để đánh giá chức sinh sản nam giới Fructose kẽm hai chất có vai trò quan trọng sức khỏe nam giới định lượng phương pháp hóa sinh Theo WHO năm 2010, nồng độ fructose tinh dịch thấp đặc trưng cho tình trạng tắc nghẽn ống dẫn tinh (bất sản ống dẫn tinh, bất sản túi tinh,…) [2] Nồng độ fructose tinh dịch bình thường khẳng định chức đường dẫn tinh, túi tinh bình thường, khơng gặp trường hợp tắc nghẽn [3] Chính lý này, phương pháp định lượng fructose tinh dịch khuyến cáo cho bác sĩ lâm sàng xác định bệnh nhân có tinh trùng hay không mà không cần sử dụng đến biện pháp xâm lấn Bên cạnh số fructose kẽm đóng vai trò quan trọng tinh trùng Nồng độ kẽm có liên quan đến số lượng, độ di động hình thái tinh trùng; cải thiện nồng độ testosterone máu cải thiện khả tình dục [4] Vì định lượng nồng độ kẽm tinh dịch cần thiết xét nghiệm thường quy để bổ sung cho xét nghiệm tinh dịch đồ thông thường, giúp bác sĩ lâm sàng đưa lời khuyên chế độ ăn uống để làm tăng số lượng chất lượng tinh trùng tăng khả thụ thai Ở Việt Nam, xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch chưa phổ biến hóa chất xét nghiệm phải nhập từ nước với giá thành cao Xuất phát từ vấn đề thực tế trên, thực đề tài: “ Nghiên cứu xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch ứng dụng chẩn đốn vơ sinh nam Bệnh viện Đại học Y Hà Nội từ năm 2017- 2018”, với mục tiêu sau: Xây dựng quy trình xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch So sánh kết định lượng fructose kẽm tinh dịch xét nghiệm tự pha với kit thương mại Xác định độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm 28 CHƯƠNG DỰ KIẾN KẾT QUẢ 3.1 Một số đặc điểm chung đối tượng nghiên cứu Tuổi bệnh nhân < 20 20-50 >50 Biểu đồ 3.1 Phân bố tuổi bệnh nhân Hiếm muộn Kiểm tra Xuất tinh bất thường Khác Lý khám Biểu đồ 3.2 Lý khám 29 Tiền sử Bệnh tồn thân Tiếp xúc/ ngộ độc hóa chất, phóng xạ Chấn thương Viêm nhiễm Khơng có tiền sử đặc biệt Biểu đồ 3.3 Tiền sử bệnh nhân 3.2 Xây dựng quy trình xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch Bảng 3.1 Bảng kiểm quy trình kĩ thuật định lượng fructose Các bước … Nội dung Cách tiến hành Ý nghĩa Bảng 3.2 Bảng kiểm quy trình kĩ thuật định lượng kẽm Các bước Nội dung Cách tiến hành Ý nghĩa … Bảng 3.3.Bảng kiểm chứng quy trình kĩ thuật định lượng fructose Nhóm STT OD fructose Nồng độ fructose p 30 … Bảng 3.4 Bảng kiểm chứng quy trình kĩ thuật định lượng kẽm Nhóm STT … OD kẽm Nồngđộ kẽm p 3.2 Ứng dụng quy trình định lượng 300 bệnh nhân đánh giá tương đương với kit thương mại đạt chuẩn 3.2.1 Ứng dụng quy trình Bảng 3.5 Nồng độ fructose Nhóm STT Bộ tự pha Dưới Bình ngưỡng thường Bộđạt chuẩn Dưới Bình ngưỡng Tổng thường … … … Bảng 3.6.Nồng độ kẽm Nhóm STT Bộ tự pha Dưới Bình ngưỡng … … thường Bộđạt chuẩn Dưới Bình ngưỡng thường Tổng 31 … 3.2.2 Đánh giá tương đương  Ứng dụng phương pháp xây dựng biểu đồ Bland- Altman: phương phápkhảo sátđịnh lượng tương hợp phépđo khác hay cách nói khác kiểm nghiệm xét nghiệm so với xét nghiệmđã công nhậnđạt chuẩn 3.3 Tính tốn độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm tự pha chế Bảng 3.7 Bảng thống kê số lượng giá trị tính độ nhạy độ đặc hiệu Âm tính Âm tính Dương Dương thật giả tính thật tính giả Tổng Tổng Trong đó: - Âm tính thật: Là nồng độ fructose kẽm ngưỡng bình thường thử nghiệm với xét nghiệm - Âm tính giả: Là nồng độ fructose kẽm ngưỡng bình thường 32 thử nghiệm với xét nghiệm tự pha chế ngưỡng với xét nghiệm đạt chuẩn - Dương tính thật: Là nồng độ fructose kẽm ngưỡng bình thường thử nghiệm với xét nghiệm - Dương tính giả: Là nồng độ fructose kẽm ngưỡng bình thường thử nghiệm với xét nghiệm tự pha chế ngưỡng bình thường với xét nghiệm đạt chuẩn  Cơng thức tính độ nhạy: Độ nhạy =  Cơng thức tính độ đặc hiệu: Độ đặc hiệu = 33 CHƯƠNG DỰ KIẾN BÀN LUẬN Dự kiến bàn luận theo kết KẾT LUẬN Dự kiến kết luận theo mục tiêu KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO Agarwal A Sabanegh E (2011), Male infertility, 10th, Elsevier Saunders, Philadelphia World Health Organization (2010), Laboratory manual for the examination and processing of human semen, Cambridge University Press, New York Muhammad S K Zahoor A., Mudassir A K (2010), "Seminal fructose in various classes of infertile patients", Pak J Physiol., 6(1), tr 36-38 Cooper T.G., Noonan E., Von Eckardstein S et al (2010) World Health Organization reference values for human semen characteristics Update, 16 (3), 231 – 245 Padubidri Daftary (2011), Shaw’s Textbook of Gynaecology, 15th edition, Elsevier,204 Nguyễn Xuân Quý, Phạm Ngọc Quốc Duy, Hồ Mạnh Tường (2002) Khảo sát tinh dịch đồ cặp vợ chồng muộn điều trị bệnh viện Phụ Sản Từ Dũ từ tháng đến tháng năm 2001 Tạp chí Phụ sản Việt Nam, (3), 71 – 75 Trần Đức Phấn, Trịnh Văn Bảo, Hoàng Thu Lan (2002) Đặc điểm tinh dịch người nam giới cặp vợ chồng thiểu sinh sản Tạp chí Y học thực hành, (407), 38 – 41 Lê Hoàng Anh Hồ Mạnh Tường (2012), Phân tích kết 4.060 tinh dịch đồ theo tiêu chuẩn WHO 2010 cặp vợ chồng khám muộn, Hội nghị khoa học thường niên HOSREM lần VIII, 2012 WHO (1987) Towards more objectivity in diagnosis and management of male infertility International Journal of Andrology, 17 10 Phan Văn Quyền (2000), Khám làm bệnh án cặp vợ chồng vô sinh, Lớp vô sinh hỗ trợ sinh sản khoá IV, 14 – 20 11 Yoshiyoki K et al (2001) Molecular analysis of hypospadias in a boy with dicentric Y Chromosome The Journal of urology, 385, 1244 – 1245 12 Nguyễn Bửu Triều, Trần Quán Anh (2002), Vô sinh nam giới, Bệnh học giới tính nam, Nhà xuất Y học, 240 – 271 13 Lanfranco F (2004) Klinefelter's syndrome.Lancet 364 273 – 283 14 Phùng Huy Tuân (2005), Bất thường di truyền vô sinh nam, Sức khoẻ sinh sản, 10 – 15 15 Trần Đức Phấn (2003), Tình hình vơ sinh vùng có nguy nhiễm chất độc hoá học chiến tranh, bước đầu phân tích ngun nhân tình trạng đó, Báo cáo tổng kết đề tài nhánh 16 Poogothai J., Gopenath T.S, Maronnayaki S (2009) Genetics of human male infertility Singaporemed J., 50 (4), 336 – 347 17 Setchell B.P., Waites G.M.H (1970) Changes in the permeability of testicular capillaries and of blood - testis barrier after the injection of cadmium chloride in rat J Endocrinol, (7), 81 – 86 18 Voght P.H (1996), Human Y chromosome function in male germ cell development Advances in Developmental Biology 1(4), 141 - 157 19 Ferlin A., Barbara A., Elena S et al (2007) Molecular and clinical characterization of Y chromosome Microdeletions in infertile men: A 10-year experience in Italy J Clin Endocrinol Metab, 92(3), 762 - 770 20 Kitpramuk T (1995) Male fertility and male infertility assessment Workshop in Andrology, 42-49 21 Longepied G., Saut N., Aknin-Seifer I et al (2010) Complete deletion of the AZFb interval from the Y chromosome in an oligozoospermic man Human Reproduction, 25(10), 2655 – 2663 22 Krausz C., Hoefsloot L., Simoni M et al (2013), EAA/EMQN best practiceguidelines for molecular diiiagnosis of Y-chromosomal microdeletions: state-of-the-art 2013 Andrology 2(1), – 14 23 Trieu H., Richard M., Trounson A (2002) Selected genetic factors associated with male infertility Human Reproduction Update, 8(2), 183 - 198 24 Muallem A., Shultz J., Pryor J et al (1999) Defining regions of the Y chromosome responsible for male infertility and identification of a fourth AZF region (AZFd) by Y chromosome microdeletion detection Mol Reprod Dev, 53(1), 27 – 41 25 Shah K., Gayathri S Nicola G et al (2003) The genetic basis of infertility Society for Reproduction and Fertility, 126(1), 13 - 25 26 Nguyễn Xuân Bái (2002), Nghiên cứu đặc điểm tinh dịch đồ 1000 cặp vợ chồng vô sinh, Luận văn thạc sỹ y học, Trường Đại học Y Hà Nội 27 Irvine D.S (2002) Male infertility: Causes and management Medical progress 28 Duran E.H., Morshedi M., Taylor S et al (2002) Sperm DNA quality predicts intrauterine insemination outcome: a prospective cohort study Hum Report, 17, 3122 – 3128 29 Evenson D.P., Jost L.K., Marshall D et al (1999) Utility of the sperm chromatin structure assay as a diagnostic and prognostic tool in the human fertility clinic Hum Reprod, 14, 1039 – 1049 30 Rajalakhshmi M., Sherma R.S., David G.F.X (1989) Seminal fructose in normal and infertile men Contraception, 39, 299 – 306 31 Gonzales G.F (2001) Function of seminal vesicles and their role on male fertility Asian J Androl, (4), 251– 258 32 Schirren C., Schireng A., Hamburg G (1983), Textbook of practical Andrology, 17 – 31 33 Lewis Jones D.I., Aird I.A., Biljan M.M (1996) Effects of sperm activity on zinc and fructose concentrations in seminal plasma Oxford Journals, Human Reproduction, 11 (11), 2465 – 2467 34 WHO (2010), Laboratory manual for the examination and processing of human semen, 5thed, Cambridge University Press 35 WHO (1987), Laboratory manual for the examination of human semen and semen – cervical mucus interaction, Cambridge University Press, – 67 36 Daudin M et al (2000) Congenital bilateral absence of the vas deferens: clinical characteristics, biological parameters, cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene mutations, and implications for genetic counseling Fertility and Sterility, 74, 1164 – 1174 37 Gonzales G.F (1994) Test for androgen activity at the male reproductive tract in infertile men Arch Androl, 32, 235 – 242 38 Schoenfeld C., Amelar R.D., Dubin L et al (1979) Prolactin, fructose, and zinc levels found in human seminal plasma Fertil Steril, 32 (2), 206 – 208 39 Andrade Rocha F.T (2001) Sperm parameters in men with suspected infertility Sperm characteristics, strict criteria sperm morphology analysis and hypoosmotic swelling test J Reprod Med., 46, 577 – 582 40 Mahmoud Hussein Hadwan, Lamia A Almashhedy, Abdul Razzaq S Alsalman (2013) The Key Role of Zinc in Enhancement of Total Antioxidant Levels in Spermatozoa of Patients with Asthenozoospermia American Journal of Molecular and Cellular Biology, 2, 1178 – 1185 41 Sonoko Y, Chiemi M, Kazuya K et al (2009) Zinc is an essential trace element for spermatogenesis PubMed,106, 10859–10864 42 Ebisch I.M, van Heerde W.L, Thomas C.M, et al (2003) C677T methylenetetrahydrofolate reduct- ase polymorphism interferes with the effects of folic acid and zinc sulfate on sperm concentration Fertil Steri,80,1190–1194 43 Akinloye O, Abbiyesuku F, Oquntibeju O et al (2011) The impact of blood and seminal plasma zinc and copper concentrations on spermogram and hormonal changes in infertile Nigerian men Reproductive Biology, 11, 83-89 44 Janet C King et al (2000) Determinants of maternal zinc status during pregnancy American Journal of Clinical Nutrition, 71, 1334-1343 45 Michel V, Jean-Pierre C, Luc C et al (1985) Acid Phosphatase and Zinc in Semen of Subjects with No Clinical Evidence of Prostatic Disease Clin Chem, 31, 878-880 46 Omar F Abdul-Rasheed (2009) The relationship between seminal plasma zinc levels and high molecular weight zinc binding protein and sperm motility in Iraqi infertile men Saudi Med J, 30, 1138-1143 47 Hasan A, Masood A, Mukhtiar B, Moazzam A et al (2007) Relationship of zinc concentrations in blood and seminal plasma with various semen parameters in infertile subjects Pak J Med Sci, 23, 111-114 PHỤ LỤC BỆNH ÁN NGHIÊN CỨU Ngày làm bệnh án: Mã số BA: I- HÀNH CHÍNH Họ tên BN: Tuổi: Địa chỉ: Nghề nghiệp: Điện thoại: II- LÝ DO ĐI KHÁM Lý khám: Khám lần thứ: III-TIỀN SỬ Lối sống: - Thuốc lá: điếu/ ngày - Bia, rượu: cốc/chén/ ngày Số năm hút: - Luyện tập thể thao: - Số lần ăn đậu phụ, uống sữa đậu nành/tuần: - Số lần ăn hải sản, thịt đỏ/tuần: Bệnh lý toàn thân: - Bệnh toàn thân từ trước đến ( Xơ gan, tiểu đường, béo phì, bệnh tự miễn, tiếp xúc hóa chất, phóng xạ, thuốc gây vơ sinh….) : - Trong vòng tuần trở lại đây: + Có sốt khơng: + Có căng thẳng, stress khơng: + Có ngộ độc hóa chất, phóng xạ khơng: - Bệnh lý phận sinh dục: + Tiền sử chấn thương: + Tiền sử phẫu thuật: + Tiền sử viêm nhiễm (lậu, giang mai,…): IV- KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM Kết tinh dịch đồ Thể tích pH Mật độ Tổng % Hình thái tinh trùng bất thường Đi Bào tương sống Đầu Cổ Vận tốc Kết nồng độ fructose kẽm Nồng độ Kit sử dụng Kit thương mại Kit tự pha chế Fructose Kẽm V- GHI CHÚ Bảng thu thập số liệu định lượng fructose kẽm Nhóm STT Nồng độ fructose Đạtchuẩ Tự pha n Nồng độ kẽm Tự pha Đạt chuẩn Ghi … … … Kế hoạch nghiên cứu: bắtđầu thực từ tháng 9/2017 đến tháng 6/2018 STT Nội dung công việc Viết đề cương Hồn thành quy trình định lượng fructose kẽm Định lượng 300 bệnh nhân kit tự pha kit thương mại Phân tích kết quả, viết luận văn, chỉnh sửa luận văn Thời gian 07- 08/2017 09- 10/2017 10/2017- 4/2018 4/2018- 06/2018 Ghi Nguồn kinh phí: nằm phần đề tài :” “Nghiên cứu phát triển xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch ứng dụng chẩn đốn vơ sinh nam” cấp Bộ Y tế; thuộc Chương trình nghiên cứu khoa học phát triển công nghệ TS Nguyễn Thị Trang chủ nhiệm đề tài phê duyệt tháng 3/ 2017 ... HÀ NỘI - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BÙI BÍCH MAI NGHIÊN CỨU BỘ XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG FRUCTOSE VÀ KẼM TRONG TINH DỊCH ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐỐN VƠ SINH NAM TẠI BỆNH... tài: “ Nghiên cứu xét nghiệm định lượng fructose kẽm tinh dịch ứng dụng chẩn đốn vơ sinh nam Bệnh viện Đại học Y Hà Nội từ năm 2017- 2018 , với mục tiêu sau: X y dựng quy trình xét nghiệm định. .. SINH NAM TẠI BỆNH VIỆN ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TỪ NĂM 2017- 2018 Chuyên ngành : Y sinh học- Di truyền Mã số : 62720301 ĐỀ CƯƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Thị Trang PGS.TS