NU ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI Ph ar m ac y ,V KHOA Y DƯỢC an d ĐẶNG THỊ QUỲNH NGA ne NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC ici CỦA CÂY CHUA ME ĐẤT HOA VÀNG Sc ho ol o fM ed (Oxalis corniculata L.) Co py rig ht @ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2018 NU ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI Ph ar m ac y ,V KHOA Y DƯỢC an d ĐẶNG THỊ QUỲNH NGA ne NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CHUA ME ĐẤT HOA VÀNG fM ed ici (Oxalis corniculata L.) Sc ho ol o KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH.2013.Y Người hướng dẫn: TS Vũ Đức Lợi Co py rig ht @ PGS.TS Nguyễn Quốc Huy Hà Nội – 2018 NU LỜI CẢM ƠN Ph ar m ac y ,V Em xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi – Chủ nhiệm Bộ môn Dược liệu Dược học cổ truyền, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội PGS.TS Nguyễn Quốc Huy – Cục Khoa học công nghệ Đào tạo, Bộ Y tế trực tiếp hướng dẫn, tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để em nghiên cứu hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn giảng viên thuộc Bộ môn Dược liệu Dược học cổ truyền Bộ môn Hóa dược Kiểm nghiệm thuốc, Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội; cán Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ em nhiều q trình thực khóa luận ne an d Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới tất quý thầy cô Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội dạy dỗ, trang bị kiến thức cho em suốt năm theo học trường ed ici Em xin trân trọng cảm ơn Ban Chủ nhiệm Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt thời gian học tập nghiên cứu trường Sc ho ol o fM Và cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đặc biệt tới gia đình, bạn bè ln theo sát động viên, quan tâm tạo điều kiện giúp em hồn thành khóa luận Co py rig ht @ Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 25 tháng năm 2018 Sinh viên Đặng Thị Quỳnh Nga Ký hiệu, chữ viết tắt CC CH2Cl2 Dichloromethan CHCl3 Chloroform DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer d doublet dt doublet of triplets ESI-MS Electrospray Ionization Mass Spectrometer HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation 10 MeOH ici 11 m/z 12 NMR 13 pTLC 16 fM Nuclear Magnetic Resonance Preparative Thin Layer Chromatography quartet s singlet Thin Layer Chromatography triplet 18 td triplet of doublets 19 v/v volume to volume ratio py rig ht ac y mass to charge ratio q TLC Ph ar m an d ne ed Methanol t @ 17 Column Chromatography Sc ho ol o 15 ,V STT 14 Co Tên đầy đủ NU DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Hình 1.1: Hình vẽ mơ tả Chua me đất hoa vàng Hình 1.2: Cấu trúc hóa học acid oxalic Hình 1.3: Cấu trúc hóa học acid ascorbic Hình 1.4: Một số flavonoid phân lập từ lồi Oxalis corniculata L 10 Hình 1.5: Một số hợp chất khác phân lập từ loài Oxalis corniculata L 12 Hình 2.1: Hình ảnh cụm Chua me đất hoa vàng 16 Hình 2.2: Sơ đồ chiết tách phân đoạn 18 Hình 3.1: Sơ đồ chiết tách phân đoạn loài Oxalis corniculata L 22 Hình 3.2: Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 24 10 Hình 3.3: Cấu trúc hóa học acid eburicoic 26 Hình 3.4: Cấu trúc hóa học 24-methylenecholest4-en-3β,6β-diol 29 Hình 3.5: Cấu trúc hóa học 3β-hydroxylanosta8,24-dien-21-oic 31 ac y Ph ar m an d ne ici fM py rig ht @ 12 Sc ho ol o 11 Co Trang ,V Tên hình ed STT NU DANH MỤC HÌNH STT Tên bảng Bảng 1: Hàm lượng số thành phần loài Oxalis corniculata L ,V Bảng 3.1: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh M 25-26 Bảng 3.2: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh N 27-28 Bảng 3.3: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh P 30-31 Trang ac y Ph ar m an d ne ici ed fM Sc ho ol o @ py rig ht Co NU DANH MỤC BẢNG NU MỤC LỤC ,V ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 10 ac y 1.1 Tổng quan chi Oxalis Ph ar m 1.1.1 Vị trí phân loại chi Oxalis 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Oxalis 1.1.3 Chi Oxalis Việt Nam 1.1.4 Thành phần hóa học chi Oxalis an d 1.2 Tổng quan loài Oxalis corniculata L 1.2.1 Tên gọi ne 1.2.2 Đặc điểm thực vật ici 1.2.3 Phân bố ed 1.2.4 Thành phần hóa học fM 1.2.4.1 Hợp chất acid oxalic 1.2.4.2 Hợp chất acid ascorbic Sc ho ol o 1.2.4.3 Nhóm chất flavonoid 1.2.4.4 Một số hợp chất khác 11 1.2.5 Một số tác dụng dược lý nghiên cứu 12 1.2.5.1 Tác dụng kháng khuẩn 12 @ 1.2.5.2 Tác dụng chống oxy hóa 13 1.2.5.3 Tác dụng chống viêm 13 py rig ht 1.2.5.4 Tác dụng bảo vệ gan 13 1.2.5.5 Tác dụng bảo vệ thần kinh 13 1.2.5.6 Một số tác dụng khác 14 Co 1.2.6 Tác dụng công dụng theo Y học cổ truyền 14 NU CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 ,V 2.1 Đối tượng nguyên vật liệu nghiên cứu 16 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 ac y 2.1.2 Nguyên vật liệu nghiên cứu 16 Ph ar m 2.1.2.1 Hóa chất dung mơi 16 2.1.2.2 Trang thiết bị 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1 Phương pháp chiết xuất phân lập hợp chất 17 an d 2.2.2 Phương pháp xác định cấu trúc hợp chất 19 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21 ne 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất 21 ici 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất 24 ed 3.2.1 Hợp chất 24 fM 3.2.2 Hợp chất 27 3.2.3 Hợp chất 30 Sc ho ol o 3.3 Bàn luận 32 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Co py rig ht @ PHỤ LỤC NU ĐẶT VẤN ĐỀ Ph ar m ac y ,V Việt Nam quốc gia có khí hậu nhiệt đới ẩm gió mùa, tạo nên hệ thực vật đa dạng phong phú Hệ thực vật cung cấp nguồn lương thực dồi mà đem lại nguồn thuốc chữa bệnh quý giá Tuy nhiên, có nhiều thuốc chưa nghiên cứu nghiên cứu chưa có hệ thống Cùng với phát triển tổng hợp hóa dược, việc nghiên cứu phát triển thuốc có nguồn gốc từ dược liệu góp phần nâng cao tính an tồn hiệu điều trị ne an d Chi Oxalis chi lớn họ Chua me đất (Oxalidaceae), có khoảng 950 lồi, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới cận nhiệt đới, số lồi thấy vùng ơn đới ẩm Chi Oxalis Việt Nam có 04 lồi: Chua me đất (Oxalis acetosella L.), Chua me đất hoa vàng (Oxalis corniculata L.), Chua me đất hoa hồng (Oxalis corymbosa DC.) Chua me đất hoa đỏ (Oxalis deppei Lodd.), có 03 lồi dùng để làm thuốc [1, 11] Sc ho ol o fM ed ici Cây Chua me đất hoa vàng có tên khoa học Oxalis corniculata L., thuộc chi Oxalis, phổ biến khắp nước ta, thường mọc lẫn loại trồng khác vườn, ngồi đồng ruộng, bãi sơng, đồi nương rẫy Cây ưa sống nơi đất ẩm chịu bóng Cây người dân dùng để giải nhiệt, kháng sinh, tiêu viêm, làm dịu, hạ huyết áp, lợi tiêu hóa, lợi tiểu, giảm ho, tiêu phù thũng, sát trùng [1] Cho đến nay, chưa có nhiều cơng trình nghiên cứu cơng bố thành phần hóa học tác dụng sinh học Chua me đất hoa vàng Việt Nam Để làm sáng tỏ thành phần hóa học lồi này, chúng tơi tiến hành thực đề tài “Nghiên cứu thành phần hóa học Chua me đất hoa vàng (Oxalis corniculata L.)” với mục tiêu: @ Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ Chua me đất hoa vàng Co py rig ht Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập NU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN ,V 1.1 Tổng quan chi Oxalis 1.1.1 Vị trí phân loại chi Oxalis Giới Thực vật (Plantae) Ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Ph ar m ac y Theo hệ thống phân loại thực vật APG III (2009) [37], vị trí phân loại chi Oxalis là: Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) an d Phân lớp Hoa Hồng (Rosidae) Bộ Chua me đất (Oxalidales) ne Họ Chua me đất (Oxalidaceae) Chi Oxalis ici 1.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố chi Oxalis Sc ho ol o fM ed Chi Oxalis, họ Chua me đất (Oxalidaceae): Phần lớn thân thảo sống hai năm hay nhiều năm gần hóa gỗ Thân có củ, có hành khơng, chứa nhiều acid oxalic Lá mọc so le, gồm 3-4 chét, đến 20, có cử động thức ngủ Hoa nách mọc từ gốc, đài cánh hoa, 10 nhị mà ngắn, bao phấn hướng trong, nhị rời hay hợp Bầu ô, vòi nhụy Quả nang mở ô mà vỏ ngồi có đỉnh đàn hồi tung hạt hạt chín Hạt có nội nhũ [3] @ Chi Oxalis chi lớn họ Chua me đất, có khoảng 950 lồi, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Nam Mỹ, Nam Phi, Madagasca, Châu Á Một số lồi thấy vùng ôn đới ẩm [3, 11] py rig ht 1.1.3 Chi Oxalis Việt Nam Co Chi Oxalis Việt Nam có 04 lồi, có 03 lồi dùng để làm thuốc [3, 4] Oxalis acetosella L – Chua me đất, Me chua đất: Cây cao 5-8 cm, gốc mảnh, thân rễ mọc trườn phủ vẩy nạc lông chim Lá có cuống dài, chét ac y ,V NU tạo phân mảnh giống Từ khối lượng phân mảnh phân tử, phương pháp phổ khác người ta xác định cấu trúc chất chưa biết So sánh phổ khối chất chưa biết với phổ khối chất biết giúp định danh chất chưa biết dễ dàng xác Ph ar m Phổ cộng hưởng từ hạt nhân ne an d Phổ proton (1H-NMR hay proton NMR) cho biết mơi trường hóa học proton phân tử Các proton có mơi trường hóa học khác dịch chuyển hóa học khác Phổ proton proton hay nhóm proton có mơi trường hóa học thể phổ đỉnh Đỉnh đỉnh đơn, đơi, ba… tới bảy đỉnh thành phần Diện tích đỉnh tỷ lệ với số lượng proton đỉnh Dựa vào diện tích đỉnh biết số proton đỉnh Sc ho ol o fM ed ici Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon-13 (13C-NMR) cung cấp thông tin mơi trường hóa học carbon Carbon lai hóa sp3 không liên kết với dị tố chuyển dịch khoảng 0-60 ppm Carbon liên kết đơn với oxy (alcol, ether) chuyển dịch khoảng 45-85 ppm Carbon lai hóa sp2 chuyển dịch khoảng 100-150 ppm, có liên kết (đơi) với oxy dịch chuyển tới 240 ppm Với kỹ thuật đo phổ tại, phổ NMR carbon vạch đơn, vạch ứng với carbon (hơn carbon có chung mơi trường hóa học) phân tử @ Các kỹ thuật xác định số lượng proton carbon cho biết số lượng proton liên kết carbon, gián tiếp cho biết số C H phân tử Kỹ thuật thường sử dụng DEPT (Detortionless Enhancement by Polarization Transfer) Co py rig ht Các kỹ thuật phổ hai chiều cho thông tin tương tác C H gắn trực tiếp nó, proton carbon kế cận (phổ COSY) hay phổ tương tác dị nhân (HETCOR) proton carbon kế cận (thuờng sử dụng kỹ thuật HSQC) hay xa (long-range HETCOR, thuờng dùng HMBC) proton gần không gian (NOESY, ROESY) ,V 3.1 Kết chiết xuất phân lập hợp chất NU CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Co py rig ht @ Sc ho ol o fM ed ici ne an d Ph ar m ac y Phần mặt đất Chua me đất hoa vàng phơi sấy khô, nghiền thành bột (2,4 kg), ngâm chiết với methanol (8,0 lít × lần) Sau đó, dịch chiết methanol quay cất loại dung môi áp suất giảm thu 196 g dịch Lấy 176 g dịch hồ vào 1,5 lít hỗn hợp MeOH : nước (1:1, v/v) chiết phân bố với dung môi theo thứ tự tăng dần độ phân cực n-hexan, dichloromethan ethyl acetat thu phân đoạn tương ứng Sau đó, phân đoạn cất loại dung môi áp suất giảm thu cắn chiết n-hexan (60 g), dichloromethan (28 g), ethyl acetat (18 g) dịch nước lại ,V NU Dược liệu nghiền thành bột (2,4 kg) Cao methanol (196 g) Cao methanol (176 g) Ph ar m Cao methanol lưu (20 g) ac y Chiết methanol (8,0 lít x lần) Thu hồi dung môi an d Phân tán MeOH : nước (1:1) Lắc với n-hexan ne Thu hồi n-hexan Dịch chiết nước fM ed ici Cắn n-hexan (60 g) Sc ho ol o Dịch chiết nước Lắc với dichloromethan Thu hồi dichloromethan Cắn dichloromethan (28 g) Lắc với ethyl acetat py rig ht @ Dịch chiết nước Thu hồi ethyl acetat Cắn ethyl acetat (18 g) Co Hình 3.1: Sơ đồ chiết xuất phân đoạn loài Oxalis corniculata L ac y ,V NU Phân đoạn ethyl acetat phần mặt đất Chua me đất hoa vàng phân tách thô sắc ký cột silica gel pha thường Cột sắc ký làm sạch, đáy cột lót lớp bơng mỏng Cột nhồi phương pháp nhồi cột ướt, pha tĩnh sử dụng silica gel Ổn định cột 24 Ph ar m Cắn ethyl acetat (15 g) trộn với lượng silica gel tối thiểu Nạp mẫu lên cột, rửa giải với hệ dung môi aceton : cloroform : methanol theo gradient nồng độ từ tỷ lệ 3:1:0,1 đến methanol 100% Kiểm tra dịch rửa giải sắc ký lớp mỏng dồn ống có tương đồng cao, cất loại dung môi áp suất giảm thu phân đoạn: A (2,2 g), B (1,6 g), C (800 mg), D (1,4 g), E (1,2 g) F (1,6 g) ne an d Phân đoạn A tiếp tục phân lập sắc ký cột pha thường với hệ dung môi rửa giải CHCl3 : MeOH (20:1, v/v) thu phân đoạn chính: A1, A2 A3 ed ici Phân đoạn A1 tiếp tục phân lập sắc ký cột pha thường với hệ dung môi rửa giải CHCl3 : MeOH (15:1, v/v) thu phân đoạn nhỏ: A1.1, A1.2, A1.3, A1.4 A1.5 fM Phân đoạn A1.1 phân tách sắc ký cột pha đảo với hệ dung môi rửa giải MeOH : H2O (3:2, v/v) thu hợp chất (15 mg) Sc ho ol o Phân đoạn A1.2 phân tách sắc ký cột pha thường với hệ dung môi rửa giải CH2Cl2 : aceton (2:1, v/v) thu hợp chất (20 mg) Co py rig ht @ Phân đoạn A1.3 phân tách sắc ký cột pha đảo với hệ dung môi rửa giải acetonitril : H2O (90:10, v/v) thu hợp chất (12 mg) NU Cắn ethyl acetat ac y ,V Pha thường aceton : chloroform : methanol B, C, D, E, F Pha thường CHCl3 : MeOH A3 A2 A1 ici A1.2 Pha đảo MeOH : H2O fM Pha thường CH2Cl2 : aceton ed A1.1 ne an d Pha thường CHCl3 : MeOH Ph ar m A A1.3 A1.4, A1.5 Pha đảo acetonitril : H2O Sc ho ol o Hình 3.2: Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat 3.2 Kết xác định cấu trúc hợp chất 3.2.1 Hợp chất Tính chất: tinh thể màu trắng, nhiệt độ nóng chảy: 280-283oC @ Phổ IR (KBr) max (cm-1): 3332, 1720, 1648, 890 Co py rig ht Phổ ESI-MS (m/z) = 469 [M]+ tương ứng với công thức C31H50O3 δH (M) ppm δC (1) ppm 1,18 (1H, s) 1,20 (1H, s) 36,1 36,1 1,81 (2H, dt, J = 7,5; 1,80 (2H, dt, J 3,5 Hz) = 7,5; 3,5 Hz) 3,41 (1H, t, J = 10,5 Hz) 3,46 (1H, t, J = 10,5 Hz) 78,0 78,0 - - 39,5 37,4 1,14 (1H, dd, J = 11 Hz) 1,14 (1H, dd, J = 11 Hz) 50,9 50,9 6a: 1,67 (1H, m) 6b: 1,62-1,44 (1H, m) 1,67 (1H, m) 18,7 18,7 7a: 1,62-1,44 (1H, m) 7b: 2,09-2,04 (1H, m) 1,61 (1H, m) 26,8 27,5 Ph ar m an d 26,8 ne ici ed fM 28,7 2,01-1,91 (2H, m) 2,00 (2H, m) 135,4 135,5 - - 134,3 135,3 - - 37,4 39,5 2,01-1,91 (2H, m) 2,00 (2H, m) 21,3 21,3 2,01-1,91 (2H, m) 2,00 (2H, m) 29,3 30,9 - - 44,9 44,9 - - 49,8 49,9 15a: 1,67 (1H, m) 15b: 1,27 (1H, td, J = 12,5 Hz) 1,67 (1H, m) 30,9 32,8 16 2,09-2,04 (1H, m) 2,04 (1H, m) 27,5 28,7 17 2,49-2,39 (1H, m) 2,44 (1H, m) 47,7 49,3 18 1,06 (3H, s) 1,05 (3H, s) 16,4 16,4 11 12 13 @ 14 Sc ho ol o 10 py rig ht 15 Co δC (M) ppm ,V δH (1) ppm ac y Vị trí C NU Bảng 3.1: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh M 1,00 (3H, s) 1,02 (3H, s) 19,4 19,4 20 2,62 (1H, td, J = 10,5; 7,0 Hz) 2,62 (1H, td, J = 10,5; 7,0 Hz) 49,2 47,7 21 - - 191,3 178,8 22 2,09-2,04 (1H, m) 2,04 (1H, m) 31,8 29,4 23 2,33-2,23 (2H, m) 2,27 (2H, m) 31,8 31,8 24 - - 155,9 155,9 25 2,33-2,23 (2H, m) 2,27(2H, m) 34,2 34,2 26 1,60 (3H, d, J = Hz) 1,60 (3H, d, J = Hz) 22,0 21,9 27 1,65 (3H, s) 1,64 (3H, s) 21,9 22,0 28 - - 24,5 24,5 29 - - 28,6 28,6 30 1,23 (3H, s) 1,22 (3H, s) 24,5 21,9 31 4,88 (2H, s) 107,0 107,0 ,V ac y Ph ar m an d ne ici ed 4,87 (2H, s) NU 19 Co py rig ht @ Sc ho ol o fM δH (M), δC (M) acid eburicoic [25] Hình 3.3: Cấu trúc hóa học acid eburicoic Hợp chất thu tinh thể màu trắng, nhiệt độ nóng chảy 280-283oC Phổ khối lượng ESI-MS (m/z) hợp chất 469 [M]+ tương ứng với công thức phân tử C31H50O3 Phổ hồng ngoại hợp chất có dải hấp thụ đặc trưng NU nhóm exomethylen (=CH2) 890 cm-1; nhóm carbonyl (C=O) 1720 cm-1 nhóm hydroxyl (-OH) 3332 cm-1 fM ed ici ne an d Ph ar m ac y ,V Phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu nhóm metyl độ dịch chuyển δH 1,06 ppm (H-28), 1,00 ppm (H-29), 1,23 ppm (H-30), 1,60 ppm (H-26), 1,65 ppm (H-27) hai proton exomethylen δH 4,88 ppm 4,92 ppm (H-31) Ngồi ra, phổ 1H-NMR xuất tín hiệu proton δH 3,45 ppm (1H, t, H-3) Phổ 13C-NMR, DEPT hợp chất xuất tín hiệu 31 carbon, bao gồm carbon methin, 10 carbon methylen, carbon methyl, carbon olefinic, carbonyl carbon bậc Tín hiệu phổ 13C-NMR hợp chất cho thấy tín hiệu carbon nhóm methyl C-18 (δC 16,4 ppm), C-19 (δC 19,4 ppm), C-28 (δC 28,6 ppm), C-29 (δC 16,4 ppm), C-30 (δC 24,5 ppm), đồng thời tín hiệu carbon lại cho thấy cấu trúc gồm hệ thống bốn vòng có liên kết đơi vị trí C-8 (δC 135,4 ppm) C-9 (δC 134,3 ppm), liên kết đôi C-31 (δC 107,0 ppm) C-24 (δC 155,9 ppm) carbonyl C-21 (δC 191,3 ppm) Phổ 13C-NMR xuất tín hiệu δC 78,0 ppm tín hiệu C-3 có gắn nhóm hydroxyl Ngoài ra, phổ HMBC cho thấy tương tác proton carbon phân tử hợp chất Sc ho ol o Kết hợp phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT, HSQC, HMBC cho thấy hợp chất dẫn xuất lanosterol Từ số liệu phổ so sánh với hợp chất M xác định cấu trúc hợp chất acid eburicoic 3.2.2 Hợp chất Tính chất: Chất bột vơ định hình, màu trắng [α]25D = -21,0 (c = 0,1, CHCl3) @ Công thức phân tử: C28H46O2 Khối lượng phân tử: 414 Co py rig ht Bảng 3.2: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh N Vị trí C δH (2) ppm δH (N) ppm δC (2) ppm δC (N) ppm 1,16 (1H, m) 1,16 (1H, m) 40,2 39,7 1,99 (1H, m) 1,97 (1H, m) 30,2 30,1 - - 73,7 73,7 5,39 (1H, s) 5,99 (1H, s) 129,9 129,9 - - 147,1 147,1 - - 67,5 1,33 (1H, m) 1,38 (1H, m) 37,7 1,52 (1H, m) 1,52 (1H, m) 28,4 0,89 (1H, m) 0,87 (1H, m) 55,0 10 - - 11 1,45 (1H, m) 1,49 (1H, m) 12 1,28 (1H, m) 1,28 (1H, m) 13 - - 14 - - 15 1,11 (1H, m) 16 ,V NU Ph ar m ac y 67,5 28,4 55,0 37,3 21,3 21,3 40,7 40,7 42,8 42,8 56,4 56,4 1,13 (1H, m) 24,5 24,5 1,24 (1H, m) 1,23 (1H, m) 28,4 28,5 17 - - 56,5 56,3 18 0,74 (1H, s) 12,2 12,2 19 1,54 (1H, s) 1,54 (1H, s) 21,6 21,6 20 1,40 (1H, m) 1,41 (1H, m) 36,0 36,0 21 0.97 (1H, d, J = 6,5 Hz) 0,99 (1H, d, J = 6,5 Hz) 18,9 18,9 1,24 (1H, m) 1,22 (1H, m) 35,1 35,0 1,97 (1H, m) 1,97 (1H, m) 30,2 30,1 - - 156,7 156,7 2,31 (1H, m) 2,28 (1H, m) 34,1 34,0 0,85 (1H, d, J = 6,5 Hz) 0,88 (1H, d, J = 6,5 Hz) 22,6 22,6 27 0,86 (1H, d, J = 6,5 Hz) 0,89 (1H, d, J = 6,5 Hz) 22,1 22,1 28 4,69 (1H, d, J = 8,0 Hz) 4,84 (1H, d, J = 8,0 Hz) 106,6 106,6 24 25 ne ici ed fM py rig ht @ 26 0,72 (1H, s) Sc ho ol o 23 an d 37,3 22 δH (N), δC (N) 24-methylenecholest-4-ene-3,6-diol [18] Co 37,7 NU ,V ac y Ph ar m an d Hình 3.4: Cấu trúc hóa học 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol fM ed ici ne Hợp chất thu dạng bột màu trắng Phổ 1H-NMR hợp chất cho biết có mặt nhóm methyl δH 0,72 (3H, s, H-18), 1,54 (3H, s, H-19), 0,99 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-21), 0,88 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-26) 0,89 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-27); proton olefin δH 5,99 (1H, s, H-4) proton oxymethin δH 4,55 (2H, m) Phổ 13C-NMR hợp chất cho thấy có mặt 28 carbon bao gồm carbon methyl, 10 methylen, methin carbon bậc @ Sc ho ol o Tương tác HMBC H-26 (δH 0,88) H-27 (δH 0,89) C-24 (δC 156,72)/C-25 (δC 34,08); H-28 (δH 4,84) C-23 (δC 30,19)/C-24 (δC 156,72)/C-25 (δC 34,08) gợi ý có mặt liên kết đơi C-24/C-28 hai nhóm methyl C-25 Tương tác HMBC H-19 (δH 1,54) với C-1 (δC 39,73)/C-5 (δC 147,15)/C-9 (δC 55,03)/C-10 (δC 37,33); H-3 H-6 (δH 4,55) đến C-4 (δC 129,97)/C-5 (δC 147,15)/C-7 (δC 30,95)/C-10 (δC 37,39) cho phép xác định vị trí nhóm hydroxyl C-3 C-6 Co py rig ht Từ phân tích phổ nêu kết hợp so sánh với hợp chất N cho thấy giống số liệu phổ NMR vị trí tương ứng Vì vậy, cấu trúc hợp chất xác định 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol ,V Tính chất: tinh thể màu trắng, nhiệt độ nóng chảy: 258-260oC NU 3.2.3 Hợp chất Phổ IR (KBr) max (cm-1): 3200 (-OH), 1718, 1632 Ph ar m ac y Phổ ESI-MS (m/z) = 455 [M]+ tương ứng với công thức phân tử C30H48O3 Bảng 3.3: Dữ liệu phổ NMR hợp chất chất so sánh P δC (3) ppm δC (P) ppm 1,65 (1H, m) 36,1 35,6 1,82 (2H, dt, J = 9,5; 4,0 Hz) 34,6 34,5 3,43( 1H, d, J = 7,6; 15,8 Hz) 216,0 217,7 - 47,3 47,3 1,81 (2H, dt, J = 9,5; 4,0 Hz) 3,40 (1H, t, J = 9,5 Hz) - 1,15 (1H, t) 1,15 (1H, t) 50,9 51,5 1,78-1,68 (1H, m) 1,67 (1H, m) 18,7 20,1 2,06 (2H, t, J = 5,5; 3,5 Hz) 2,06 (2H, t, J = 5,5; 3,6 Hz) 26,8 25,9 - - 134,3 134,4 - - 135,2 132,2 - - 37,4 37,2 1,97-1,92 (2H, m) 1,95 (2H, m) 21,3 21,1 12 1,97-1,92 (2H, m) 1,95 (2H, m) 29,4 29,3 13 - - 44,9 44,0 14 - - 49,9 49,7 15 1,26 (1H, td) 1,26 (1H, td) 30,9 29,7 16 2,46-2,35 (2H, m) 2,37 (2H, m) 27,5 27,4 17 2,46-2,35 (2H, m) 2,37 (2H, m) 47,8 47,0 10 ne ici ed fM py rig ht @ 11 Sc ho ol o an d 1a: 1,80 (1H, dt, J = 9,5; 4,0 Hz) 1b: 1,85-1,44 (1H, m) Co δH (P) ppm δH (3) ppm Vị trí C 1,06 (3H, s) 1,03 (3H, s) 16,4 19 1,00 (3H, s) 1,08 (3H, s) 19,4 20 2,61 (1H, td, J = 9,5; 4,0 Hz) 2,60 (1H, td, J = 9,5; 4,0 Hz) 49,1 47,4 21 - - 178,7 22 22a: 1,97-1,92 (2H, m) 22b: 1,78-1,68 (1H, m) 1,67 (1H, m) ac y 181,3 33.4 32,4 23 23a: 2,46-2,35 (2H, m) 23b: 2,29-2,25 (1H, m) 2,37 (1H, m) 26,8 26,9 24 5,32 (1H, t) 5,34 (1H, t) 124,9 123,5 25 - - 131,7 132,7 26 1,60 (3H, s) 1,63 (3H, s) 17,8 17,6 27 1,65 (3H, s) 1,67 (3H, s) 25,8 25,7 28 1,06 (3H, s) 1,26 (3H, s) 16,4 21,3 29 0,99 (3H, s) 1,03 (3H, s) 28,7 26,6 30 1,23 (3H, s) 24,5 24,5 ,V Ph ar m an d ne ici 19,6 ed 1,08 (3H, s) 15,8 NU 18 py rig ht @ Sc ho ol o fM δH (P), δC (P) 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic [8] Hình 3.5: Cấu trúc hóa học 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic Co Hợp chất thu dạng tinh thể màu trắng, điểm nóng chảy 258-260oC Phổ ESI-MS (m/z) = 455 [M]+ cho biết khối lượng phân tử 454, tương ứng với công thức phân tử C30H48O3 Phổ 1H-NMR hợp chất có ,V NU xuất tín hiệu proton methyl 1,06 (3H, s, H-18), 1,00 (3H, s, H19), 1,60 (H-26), 1,65 (H-27), 1,06 (3H, s, H-28), 0,99 (3H, s, H-29), 1,23 (3H, s, H-30) Ph ar m ac y Phổ 13C-NMR, DEPT hợp chất cho thấy tín hiệu 30 carbon carbon methin, 10 carbon methylen, carbon methyl, carbon olefinic, carbonyl carbon bậc Các tín hiệu phổ cho thấy cấu trúc hợp chất bao gồm hệ thống bốn vòng, có liên kết đơi vị trí C-8 (δC 135,0 ppm) C-9 (δC 134,3 ppm) Hợp chất có xuất tín hiệu carbon olefinic C-24 (δC 124,9 ppm) C-25 (δC 134,6 ppm) carbonyl C-21 (δC 178,7 ppm) Ngoài phổ HMBC cho thấy an d tương tác proton carbon phân tử ici ne Kết hợp phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT, HSQC, HMBC cho thấy hợp chất dẫn xuất lanosterol Từ số liệu phổ so sánh với hợp chất P xác định cấu trúc hợp chất phù hợp với cấu trúc acid 3βhydroxylanosta-8,24-dien-21-oic ed 3.3 Bàn luận Sc ho ol o fM Đề tài sử dụng phương pháp ngâm chiết siêu âm với dung mơi MeOH Phương pháp có ưu điểm tiết kiệm thời gian, hiệu suất cao Cắn toàn phần sau chiết phân bố với dung mơi theo thứ tự tăng dần độ phân cực n-hexan, dichloromethan ethyl acetat Phương pháp sắc ký cột phân lập ba hợp chất từ phần mặt đất Chua me đất hoa vàng thu hái tỉnh Hà Tĩnh Co py rig ht @ Đề tài xác định cấu trúc hợp chất phân lập thơng qua kết đo nhiệt độ nóng chảy, phổ khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân so sánh với liệu công bố hợp chất liên quan Ba hợp chất phân lập xác định cấu trúc là: acid eburicoic (1), 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol (2) acid 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic (3) Các hợp chất 1, 2, lần phân lập từ phần mặt đất Chua me đất hoa vàng Đây đóng góp đề tài, góp phần bổ sung kiến thức thành phần hóa học lồi Oxalis corniculata L NU Acid eburicoic Ph ar m ac y ,V Tác dụng giảm đau, chống viêm: mơ hình gây phù chân chuột λ-carrageenan, acid eburicoic phân lập từ lồi Antrodia camphorata có khả làm giảm phù chân sau gây viêm giờ; tăng hoạt tính catalase (CAT), superoxid dismutase (SOD) peroxidase glutathion (GPx) mô; giảm đáng kể malondialdehyd (MDA), oxit nitric (NO), TNF-α, interleukin-1β (IL-1β); ức chế iNOS cyclooxygenase-2 (COX-2); giảm xâm nhập bạch cầu trung tính hai chân sau Cơ chế chống viêm khả giảm cytokin tăng hoạt động enzym chống oxy hóa acid eburicoic [20] ed ici ne an d Tác dụng bảo vệ gan: acid eburicoic phân lập từ lồi Antrodia camphorata có tác dụng chống lại tổn thương gan carbon tetrachlorid gây Cụ thể, hợp chất hạn chế tăng aspartat aminotransferase (AST), alanin aminotransferase (ALT) peroxid lipid; tăng hoạt tính catalase (CAT), superoxid dismutase (SOD) peroxidase glutathion (GPx); giảm oxit nitric (NO) TNF-α; ức chế iNOS COX-2 Tác dụng bảo vệ gan chế chống oxy hóa chống viêm acid eburicoic [15] fM 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol Sc ho ol o Nghiên cứu rằng, 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol phân lập từ loài san hơ Alcyonium patagonicum polyhydroxysterol có khả gây độc tế bào ung thư bạch cầu chuột với giá trị IC50 mg/ml [21] 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic py rig ht @ Nghiên cứu rằng, 3β-hydroxylanosta-8,24-dien-21-oic phân lập từ dịch chiết dichloromethan loài nấm Fomitopsis pinicola (Swartz ex Fr.) Karst steroid có tác dụng kháng khuẩn chống lại chủng vi sinh vật Bacillus subtilis thí nghiệm sinh học TLC [8] Co Như vậy, hợp chất phân lập góp phần việc định hướng nghiên cứu thêm thành phần hóa học tác dụng sinh học Chua me đất hoa vàng NU KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ,V Kết luận ac y Qua trình tiến hành làm thực nghiệm, đề tài đạt mục tiêu đề thu kết sau đây: Ph ar m - Đã chiết xuất phân lập ba hợp chất với phương pháp sắc ký cột từ phân đoạn dịch chiết ethyl acetat phần mặt đất Chua me đất hoa vàng an d - Đã xác định cấu trúc hóa học ba hợp chất phân lập trên: acid eburicoic (1), 24-methylenecholest-4-en-3β,6β-diol (2) acid 3βhydroxylanosta-8,24-dien-21-oic (3) ne Các hợp chất lần phân lập từ phần mặt đất Chua me đất hoa vàng Kiến nghị ed ici - Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học từ phân đoạn dịch chiết ethyl acetat phần mặt đất Chua me đất hoa vàng fM - Tiến hành định lượng hợp chất phân lập mẫu nghiên cứu Sc ho ol o - Xây dựng tiêu chuẩn dược liệu, cao dược liệu dựa thành phần hóa học Co py rig ht @ - Tiến hành nghiên cứu tác dụng sinh học cắn toàn phần, cắn phân đoạn hợp chất phân lập từ Chua me đất hoa vàng ... Oxalis Việt Nam có 04 l i: Chua me đất (Oxalis acetosella L. ), Chua me đất hoa vàng (Oxalis corniculata L. ), Chua me đất hoa hồng (Oxalis corymbosa DC .) Chua me đất hoa đỏ (Oxalis deppei Lodd .), ... ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI Ph ar m ac y ,V KHOA Y DƯỢC an d ĐẶNG THỊ QUỲNH NGA ne NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CHUA ME ĐẤT HOA VÀNG fM ed ici (Oxalis corniculata L. ) Sc ho ol o KHÓA LUẬN... trình nghiên cứu cơng bố thành phần hóa học tác dụng sinh học Chua me đất hoa vàng Việt Nam Để l m sáng tỏ thành phần hóa học l i này, chúng tơi tiến hành thực đề tài Nghiên cứu thành phần hóa học