BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM MAI VĂN TRỊ NGHIÊN CỨU TÁC NHÂN GÂY BỆNH VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỪ TỔNG HỢP BỆNH THỐI THÂN CHẢY NHỰA TRÊN CÂY MÍT Ở MIỀN ĐƠNG NAM BỘ Chun ngành: BẢO VỆ THỰC VẬT Mã số: 962122 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ NƠNG NGHIỆP TP Hồ Chí Minh – 2018 ii Cơng trình hồn thành tại: VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Người hướng dẫn: GS.TS NGUYỄN VĂN TUẤT TS NGUYỄN VĂN HÒA Phản biện 1:……………………………… Phản biện 2: ……………………………… Phản biện 3:……………………………… Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Viện họp Viện Khoa học Kỹ thuật Nơng nghiệp miền Nam ngày……tháng……năm…… Có thể tìm hiểu thư viện: Thư viện Quốc gia Thư viện Viện Khoa học Nông nghiệp Việt NamV Thư viện Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp miền Nam MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Mít (Artocarpus heterophyllus Lam., Moraceae) loại ăn có giá trị kinh tế cao nước ta Diện tích trồng mít ước tính 24.000 ha, miền Đơng Nam (ĐN bộ) hai khu vực sản xuất chế biến mít quan trọng Theo thống kê Cục Trồng trọt, kim ngạch xuất mít năm 2017 ước đạt 28 triệu USD, cao so với mặt hàng chơm chơm Do nhu cầu mít cho tiêu thụ nước xuất gia tăng, diện tích trồng mở rộng nhanh chóng năm gần Bệnh thối thân chảy nhựa (TTCN) hại mít bệnh quan trọng phổ biến vùng trồng mít Đơng Nam bộ, trở thành dịch hại mít [5] Bệnh ảnh hưởng đến sinh trưởng, suất, rút ngắn chu kỳ kinh tế vườn cây, xem yếu tố giới hạn sản xuất mít khu vực Ở nước ta, chưa có nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh biện pháp kiểm sốt bệnh TTCN hại mít Do đó, việc nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh phát triển biện pháp nhằm đối phó với bệnh TTCN hại mít cấp thiết 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Xác định tác nhân gây bệnh số biện pháp nhằm giảm bệnh thối thân chảy nhựa (TTCN) mít miền ĐN 1.3 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: Loài Phytophthora gây bệnh bệnh TTCN mít ĐN Thời gian thực hiện: Từ 9/2012 đến 3/2018 1.4 Phạm vi nghiên cứu Đề tài tập trung nghiên cứu xác định loài Phytophthora gây bệnh thí nghiệm (TN) số biện pháp giúp giảm bệnh TTCN hại mít miền Đơng Nam 1.5 Ý nghĩa khoa học đề tài -Đề tài góp phần cung cấp dẫn liệu khoa học bệnh lồi P palmivora gây bệnh TTCN hại mít, làm sở khoa học cho việc nghiên cứu phát triển biện pháp quản lý tổng hợp bệnh gây ký sinh lâynhiễm-qua-đất Phytophthora -Kết đề tài sở khoa học cho việc xây dựng quy trình phòng trừ tổng hợp bệnh TTCN hại mít; giúp cho việc nhận diện phòng trừ bệnh chủ động hiệu hơn, nguồn tài liệu tham khảo cho định hướng nghiên cứu, xây dựng tài liệu giảng dạy, tập huấn 1.6 Những đóng góp luận án - Loài Phytophthora palmivora (Butler) Butler (1919) xác định tác nhân gây bệnh TTCN hại mít miền ĐN dựa đặc điểm hình thái trình tự nucleotide vùng rDNA-ITS gen COX II -Xác định trình tự nucleotide vùng rDNA-ITS gen COX II loài P palmivora gây hại, cung cấp liệu khoa học cho nghiên cứu mầm bệnh quan trọng -Xác định số biện pháp làm giảm bệnh, là: (1) Sử dụng giống Lá Lớn có khả chống chịu bệnh; (2) Làm rãnh kết hợp làm mái dốc nước vườn; (3), Bón phân hữu phân gà (12 tấn/ha/năm) phân bò (16 tấn/ha/năm); (4) Tưới đất lần + phun tán lần mùa mưa (tháng 5-10) với Trichoderma harzianum SR18, (5) Phun tán (2 lần) luân phiên với tưới đất (2 lần) Potassium phosphite 1% mùa mưa 1.7 Bố cục luận án Luận án có 208 trang đánh máy, khổ A4 với 36 bảng biểu, 20 hình bao gồm Phụ lục gồm mục sau: Mở đầu (4 trang); Chương I: Tổng quan tài liệu nghiên cứu (38 trang); Chương II: Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu (35 trang); Chương III: Kết thảo luận (84 trang); Kết luận đề nghị (2 trang); Phần Phụ lục Chương I TỔNG QUAN TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU Bệnh TTCN (còn gọi thối gốc chảy mủ, thối thân chảy mủ) hại mít diện Việt Nam từ lâu cho Phytophthora gây [2], [3] Triệu chứng bệnh đặc trưng mảng biến màu màu nâu nhạt vỏ thân cây, tạo thành vết loét sủng nước đổi màu nâu đỏ lớp gỗ bên ngồi Bệnh ảnh hưởng đến rễ, gây triệu chứng thối rễ, thối thối Các loài Phytophthora, bao gồm P palmivora, có liên quan đến thối quả, loét thân thối rễ loài họ hàng mít sa kê (A altilis) mít Tố Nữ (A iNTeger) [50]; [124] Trước chưa có nghiên cứu xác nhận Phytophthora tác nhân gây bệnh chưa có nghiên cứu phòng trừ bệnh TTCN hại mít Việt Nam Do đó, nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh phát triển biện pháp phòng trừ giúp giảm bệnh TTCN hại mít nhu cầu cấp thiết Có 60 lồi Phytophthora ghi nhận gây hại cho nhiều loại trồng tồn giới [50] Nhiều lồi dễ dàng xác định phương pháp hình thái qua sử dụng số đặc điểm hình thái sinh lý mà tiêu biểu khóa phân loại Waterhouse (1963) [151], Stamps et al (1990) [137] Ho (1992) [77] Bên cạnh phương pháp hình thái, phương pháp sinh học phân tử áp dụng để xác định lồi dựa trình tự đệm chuyển mã nội (ITS) DNA ribosome Sự kết hợp biện pháp hình thái sinh học phân tử thường áp dụng phổ biến để xác định lồi Phytophthora xác tin cậy Mỗi bệnh Phytophthora có số đặc điểm riêng, gây khó khăn cho việc khái qt hóa biện pháp kiểm sốt bệnh [59] Do đó, cẩn hiểu rõ ký sinh đặc điểm phát sinh phát triển bệnh yếu tố ảnh hưởng đến việc kiểm soát bệnh Hiểu biết yếu tố với hiểu biết đặc điểm nông học canh tác trồng cho phép phát triển biện pháp kiểm sốt bệnh thích hợp giúp giảm bệnh [50] Phòng trừ hiệu bệnh Phytophthora đạt thông qua việc áp dụng biện pháp đơn lẻ [59] Để đối phó hiệu cần áp dụng biện pháp tổng hợp Quản lý dịch hại tổng hợp (IPM) nhằm giảm bệnh đến mức chấp nhận mặt kinh tế thời gian dài thông qua sử dụng kết hợp biện pháp kiểm soát bệnh [50] Biện pháp quản lý tổng hợp bệnh Phytophthora sầu riêng nghiên cứu khuyến cáo từ 2004 [50] Quy trình quản lý bệnh bao gồm năm nhóm giải pháp dựa (1) biện pháp canh tác, (2) tính kháng/chống chịu, (3) phòng trừ sinh học, (4) sử dụng thuốc hóa học (5) sử dụng Phosphonates [50] Việc nghiên cứu biện pháp phòng trừ bệnh TTCN hại mít, đó, cần tiếp cận theo hướng phòng trừ tổng hợp sở áp dụng nhiều biện pháp phòng trừ có khả giảm bệnh phù hợp với điều kiện thực tế sản xuất địa phương Chương II VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Cây mít sử dụng nghiên cứu đồng ruộng độ tuổi khác trồng vườn nông dân, nhân giống cách ghép; mít cho TN nhà lưới sử dụng trồng hạt ghép tùy thí nghiệm (TN) Các mơi trường (MT) ni cấy nấm WA, CMA, V8A, CRA PDA MT chọn lọc cho Phytophthora P10ARP, P5ARP, P5ARP(H), MT nhân nuôi nguồn bệnh số MT khác Hóa chất cần thiết cho việc phân lập xác định tác nhân bệnh (Trung Quốc Đức); thuốc trừ nấm phân bón (nội địa) nơng dược (trong nước nhập nội) Các trang thiết bị dụng cụ cần thiết cho nghiên cứu vi sinh vật, sinh học phân tử 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu Thực từ 9/2012 – 3/2018 phòng TN Viện ăn miền Nam (Tiền Giang) Trung tâm nghiên cứu ăn miền Đông Nam (Bà Rịa Vũng Tàu) vùng trồng mít ĐN gồm tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu (BRVT), Đồng Nai, Bình Dương Bình Phước 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp điều tra tình hình bệnh TTCN Điều tra từ tháng 1/2013 – tháng 12/2014 vườn mít bốn tỉnh nêu trên; vườn rộng ≥ 1.500 m2 hay ≥100 Điều tra theo Quy chuẩn kỹ thuật QG phương pháp điều tra phát sinh vật hại ăn có múi (QCVN-01-119: 2012/BNNPTNT) Chọn theo phương pháp đường chéo góc [11] Mỗi vườn khu vực điều tra, chọn 5-10 điểm đường chéo góc, điểm 2-5 Điều tra bổ sung qua khảo sát rễ, điểm với hố khảo sát/cây Ghi nhận theo thông tin liên quan tổng quát vườn TLB (%) 2.3.2 Phương pháp thu thập phân lập mẫu 2.3.2.1 Mô tả triệu chứng bệnh TTCN Quan sát mơ tả triệu chứng bên ngồi, triệu chứng mơ phía rễ 2.3.2.2 Phương pháp thu thập mẫu Theo phương pháp trình bày DreNTh Sendall (2001) Mẫu mô bệnh gồm mẫu rễ, vỏ thân mô gỗ gần vết bệnh, mẫu mẫu quanh khu vực có vết bệnh điển hình Mẫu đất mẫu rễ thu từ hố 20 x 20 cm, sâu 20 cm khu vực đất rìa tán, gạt bỏ cm đất mặt 2.3.2.3 Phương pháp phân lập - Phân lập trực tiếp từ mô cây: mẫu mảnh mô đặt vào môi trường nuôi cấy (WA, CRA PDA) môi trường chọn lọc đĩa Petri 25±1oC tối để phân lập Môi trường chọn lọc sử dụng gồm P10ARP P5ARP P5ARP(H) - Phương pháp phân lập sử dụng mồi bẫy: Phương pháp ‘bẫy’ cánh hoa hồng (Rosa sp.) mô tả DreNTh Sendall (2001) Nguyễn Văn Tuất Phạm Ngọc Dung (2012) Đã thu 73 mẫu bệnh (35 mẫu từ rễ, 28 mẫu từ mô thân, từ mô từ mô quả) 49 mẫu (isolates) Phytophthora phân lập, sau 10 mẫu chọn ngẫu nhiên ký hiệu từ MD1 đến MD10 cho nghiên cứu 2.3.3 Phương pháp xác định tác nhân gây bệnh 2.3.3.1 Xác định lồi Phytophthora dựa vào đặc điểm hình thái học Mẫu Phytophthora MD1 đến MD 10 chọn để khảo sát đặc điểm sinh thái hình thái dựa vào khóa phân loại Stamps cs (1990), Erwin Riberrio (1996) Gallegly Hong (2008) 2.3.3.2 Xác định loài Phytophthora ứng dụng sinh học phân tử DNA mẫu MD3, MD5, MD6 MD8 tách chiết phương pháp khác giải trình tự hai vùng DNA khác Việc định danh dựa vào việc so sánh tìm trình tự tương đồng (sử dụng cơng cụ BLAST) trình tự COX II ITS mẫu với trình tự tương đồng loài Phytophthora lưu giữ nguồn liệu GenBank (NCBI) 2.3.4 Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh thái mẫu P palmivora Thực từ tháng 1-12 năm 2013 phòng TN Trung tâm nghiên cứu ăn miền ĐN trước mẫu gửi giám định 2.3.4.1 Xác định kiểu kết đôi mẫu Phytophthora spp Sử dụng phương pháp cấy thành cặp đĩa Petri chứa môi trường V8A (Brasier cs, 2003) với hai mẫu tester A1 A2 loài P palmivora P nicotianae xác định kiểu kết đôi (được cung cấp phòng TN Bộ mơn Nơng nghiệp, Thực phẩm Môi trường, ĐH Catania, Italia) với 10 mẫu ký hiệu từ MD1 đến MD10 chọn Mẫu phân lập hình thành bào tử nỗn đĩa Perti với tester A1 ghi nhận A2 với tester A2 xem A1 2.3.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ Đường kính khuẩn lạc Phytophthora MD5được ghi nhận 2; ngày sau cấy môi trường CRA ủ tối quảng cách nhiệt độ 30C từ 30C-390C Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả tạo bào tử nang khảo sát với quảng nhiệt độ từ 9oC đến 36oC với quảng cách 3oC Theo dõi số lượng bào tử nang vào 48 sau kích sinh sản bào tử Mỗi NT nhắc lại lần, lần đĩa Petri 2.3.4.3 Nghiên cứu ảnh hưởng độ pH Ảnh hưởng độ pH môi trường nuôi cấy đến tăng trưởng khuẩn lạc mẫu MD5 môi trường PDA với mức pH 4-9 với quãng cách 0,5 Mức tăng trưởng đường kính tản nấm tính ngày thứ so với ngày thứ sau cấy 2.3.4.4 Khảo sát tính kháng Metalaxyl mẫu Phytophthora Phương pháp ủ đĩa thả sử dụng để khảo sát tính kháng Metalaxyl 10 dòng Phytophthora (MD1 đến MD10) theo Runno-Paurson cs (2016) [130] Sáu đĩa (14 mm) thả đĩa Petri 90 mm chứa 10 ml dung dịch Metalaxyl với nồng độ 0; 10 100 mg/lít; lây nhiễm với giọt 20 µl hỗn hợp chứa 104 bào tử nang/ml 27±1°C Mỗi nồng độ lặp lại đĩa Petri Theo dõi hàng ngày đánh giá sau ngày Dòng phân lập đánh giá kháng hình thành bào tử nang nồng độ Metalaxyl 100 mg/lít, trung bình hình thành bào tử nang 10 mg/lít khơng đĩa 100 mg/lít, mẫn cảm hình thành bào tử nang nước (0 mg/lít) 2.3.4.5 Khả gây bệnh mẫu P palmivora phân lập mít số ăn Phương pháp ủ đĩa (đường kính 15 mm) thả [130] sa kê (A altilis), mít Tố Nữ (A iNTeger) sầu riêng (D zibethinus) thực điều kiện phòng TN 27°C Mỗi lồi có lần lặp lại đĩa Petri (6 đĩa cho đĩa Petri chứa giấy thấm làm ẩm nước cất tiệt trùng) Đĩa lây nhiễm với giọt 20 µl Phytophthora MD5 (105 bào tử/ml) Sử dụng kính hiển vi để kiểm tra tơ nấm bao phủ, vết bệnh hình thành bào tử có ngày sau lây nhiễm 2.3.5 Đặc điểm phát sinh phát triển bệnh TTCN đồng 2.3.5.1 Điều tra mức độ bệnh diễn biến bệnh đồng ruộng Ghi nhận tỷ lệ (%) nhiễm với lượng mưa hàng tháng năm nhằm tìm hiểu đặc điểm phát sinh phát triển bệnh đồng từ 1/2013 – 12/2014 Phương pháp điều tra trình bày phần 2.3.1 2.3.5.2 Điều tra ảnh hưởng số yếu tố sinh thái đến phát sinh phát triển bệnh TTCN Điều tra theo điểm đường chéo góc điểm theo băng hàng trồng đại diện cho vườn, điểm chọn 5-20 để điều tra xác định TLB (%) Mỗi vườn, 5-20 mẫu rễ mẫu đất thu thập để xác định nhanh diện nguồn bệnh phương pháp bẫy nấm a) Ảnh hưởng giống mít khác Khảo sát giống mít phổ biến sản xuất, giống chọn 10 vườn giai đoạn kinh doanh (> năm tuổi) Ghi nhận TLB (%) b) Ảnh hưởng khoảng cách trồng Các khoảng cách trồng chọn để khảo sát x m; x m; x m x m Mười vườn mít Siêu Sớm giai đoạn kinh doanh (≥ 200 cây) điều tra cho khoảng cách trồng TLB (%) ghi nhận c) Ảnh hưởng độ tuổi khác Các độ tuổi chọn để khảo sát gồm từ – năm, từ – năm, từ – năm độ tuổi > năm Mười vườn mít (≥200 cây/vườn) giống Siêu Sớm chọn cho độ tuổi TLB (%) ghi nhận d) Ảnh hưởng địa hình khác 11 20-15) lần (trộn vào giá thể, bón thúc vào tháng sau trồng, lần 10 g/chậu); iv) Lây nhiễm Phytophthora + Bón phân gà (300 ml trộn vào giá thể); v) Lây nhiễm Phytophthora + Bón phân bò (500 ml trộn vào giá thể) Nguồn lây nhiễm mẫu P palmivora MD5 TLB (%) CSB (%) theo dõi 12 tháng sau lây nhiễm d) Ảnh hưởng bón phân hữu đến bệnh TTCN hại mít điều kiện ngồi đồng Khả giảm bệnh TTCN qua bón phân gà phân bò đánh giá vườn mít Siêu Sớm (6 x m, năm tuổi, chưa bón phân chuồng khơng sử dụng loại thuốc trừ nấm bệnh thời gian TN) khu vực có bệnh, đất đỏ vàng Lộc Ninh, tỉnh Bình Phước Bố trí kiểu RCBD; lần lặp lại, 16 lơ; có NT gồm: i) Bón phân gà 12 tấn/ha; ii) Bón phân gà tấn/ha; iii) Bón phân bò 16 tấn/ha; iv) Bón phân bò tấn/ha; v) Khơng bón (đối chứng) Theo dõi TLB (%), CSB (%) suất (kg/cây/năm) 2.3.7 Khả giảm bệnh T harzianum SR18 bệnh TTCN hại mít điều kiện đồng ruộng Thực từ 5/2015-5/2017 Lộc Ninh, Bình Phước vườn mít năm tuổi, giống Siêu Sớm, trồng x m, khu vực có bệnh Bố trí TN theo kiểu RCBD với lần lặp lại; lơ TN có 15 Nấm T harzianum SR18 (108 bào tử/g hỗn hợp) phun mức 2,5 g/lít nước (30 g cho m đường kính tán); đối chứng (nước sạch) Sáu NT gồm: i) Phun T harzianum SR18 lần (tháng 5; 7; 9); ii) Phun T harzianum SR18 lần (tháng 5; 6; 7; 8; 9; 10); iii) Tưới đất T harzianum SR18 lần (tháng 6; 8); iv) Tưới đất T harzianum SR18 lần (tháng 5; 7; 9); v) Tưới đất T harzianum SR18 lần (tháng 5; 7; 9) + Phun T harzianum SR18 lần (tháng 6; 8; 10); vi) Không áp dụng T harzianum SR18 (đối chứng) Chỉ tiêu theo dõi gồm TLB (%) CSB (%); suất (kg/cây/năm) 12 2.3.8 Nghiên cứu phòng trừ bệnh TTCN sử dụng thuốc hóa học a) Ảnh hưởng phun số thuốc hóa học đến bệnh TTCN giai đoạn vườn ươm TN sử dụng giống Siêu Sớm từ vườn ươm mà giá thể xác định nhiễm P palmivora; nhà lưới có mái che, theo kiểu RCBD có lần lặp lại, lơ TN 35 cây; NT gồm: i) Phun Copper oxychloride 850g/kg WP (nồng độ 0,25%); ii) Phun P phosphite 200 g/lít (nồng độ %); iii) Phun Fosetyl -Al 800 g/kg WG (0,25%); iv) Phun Metalaxyl M 40 g/kg + Mancozeb 640 g/kg; (0,3%); v) Phun nước (đối chứng) Theo dõi TLB (%) tỷ lệ diện P palmivora giá thể sau xử lý b) Ảnh hưởng phun số thuốc hóa học đến bệnh TTCN hại mít điều kiện đồng ruộng Thực từ 1/2013-2/2014 vườn mít Siêu Sớm, năm tuổi khu vực có bệnh; trồng x m Đồng Xồi, Bình Phước Bố trí kiểu RCBD với NT lần nhắc, lơ TN có 18 Có NT bao gồm: i) Phun Potassium phosphite 200 g/lít, (nồng độ 0,5%); ii) Phun Copper oxychloride 850 g/kg (0,3%); iii) Phun Fosetyl -Al 800 g/kg (0,25%); iv) Phun Metalaxyl M 40 g/kg + Mancozeb 640 g/kg (0,3%); v) Phun nước (đối chứng) Phun cách 30 ngày từ tháng 5-10 Theo dõi TLB (%) CSB (%); suất (kg/cây/năm) sau xử lý c) Ảnh hưởng số cách áp dụng Potassium phosphite đến bệnh TTCN hại mít điều kiện đồng ruộng Thực từ tháng 1/2015 – 12/2016 vườn mít Siêu Sớm năm tuổi, đất đỏ nâu, trồng x m Lộc Ninh, Bình Phước Bố trí kiểu RCBD với NT lần lặp lại; lô TN 18 NT gồm: i) Phun tán với Potassium phosphite 200 g/l (1%) (4 lần, cách tuần, bắt đầu cuối tháng 5); ii) Tưới đất với Potassium phosphite lần; iii) Phun tán (2 lần) + tưới đất (2 lần) với Potassium phosphite; iv) Phun lần với Metalaxyl M 40 g/kg + Mancozeb 640 g/kg (0,3%); v) Sử dụng nước (đối 13 chứng) Không sử dụng loại thuốc trừ nấm khác vườn Theo TLB (%) CSB (%) suất (kg/cây/năm) 2.3.9 Xây dựng mơ hình (MH) phòng trừ tổng hợp bệnh TTCN Thực từ 1/2014 – 12/2016 vườn mít giai đoạn kinh doanh, giống Siêu Sớm Mỗi điểm MH chia phần: Lô MH (áp dụng tổng hợp biện pháp phòng trừ) lơ đối chứng (áp dụng theo kỹ thuật nông dân) Điểm MH rộng 3.000 m2 lô đối chứng 4.500 m2; năm tuổi, trồng x m, Xuân Lộc, Đồng Nai Điểm MH lô MH rộng 3.600 m2, đối chứng 3.700 m2, năm tuổi, trồng x m, Đồng Xồi, Bình Phước Điểm MH có lơ MH rộng 5.000 m2, lơ đối chứng 6.000 m2, năm tuổi, trồng x m, Lộc Ninh Bình Phước Các biện pháp áp dụng gồm: i) Làm mương thoát nước sâu 30 x rộng 30 cm hàng; ii) Bón vơi tấn/ha/năm, vào tháng 5; iii) Bón phân gà 12 tấn/ha/năm vào tháng 5; iv) Tưới đất với T harzianumm (1 g cho m2 tán, hỗn hợp 1%) vào tháng và phun tán g cho đường kính tán (3 g/lít) vào tháng 6; 10; v) Potassium phosphite 200 g/lít (nồng độ 1%), 6,25 lít/ha/lần áp dụng; phun tán (tháng 8), tưới đất (tháng 9) Các biện pháp áp dụng hàng năm suốt thời gian thí nghiệm Chỉ tiêu theo dõi gồm: TLB (%); hiệu lực phòng trừ theo Henderson-Tilton; khối lượng (kg/quả); suất (kg/cây/năm) tính hiệu kinh tế 2.3.10 Xử lý số liệu Số liệu xử lý thống kê phần mềm SPSS version 22.0 Số liệu tương đối chuyển đổi thích hợp theo quy định thống kê trước xử lý Trung bình suất mơ hình xử lý thống kê t-test Hiệu lực phòng trừ bệnh tính theo cơng thức Henderson-Tilton 14 Chương III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Triệu chứng bệnh loét thân chảy nhựa mít ĐN Đầu tiên vết biến màu nhỏ xuất vỏ thân, sau vết loét mở rộng, sủng nước, tiết nhựa qua vết loét Bên mô gỗ bị biến màu nâu tối, lan dần theo mạch dẫn (Hình 3.1) b a Hình 3.1 Triệu chứng bệnh thối thân chảy nhựa: Vết loét có màu nâu tối, bị nứt (hình a b) b a Hình 3.2 Triệu chứng bệnh rễ, gây thối rễ Hình 3.3 Triệu chứng gây cháy Hình 3.4 Triệu chứng gây thối 15 Vết bệnh lan rộng tạo thành vết nứt dọc thân Bệnh thường diễn biến chậm với biểu sinh trưởng kém, vàng lá, rụng lá, khô chết ngọn, suy tàn chết dần vài tháng đến vài năm nhanh giống mẩn cảm Cây bị bệnh có sinh trưởng suất giảm dần, nhỏ Bệnh xảy rễ gây thối rễ, gây cháy gây thối (Hình 3.2; Hình 3.3 Hình 3.4) Triệu chứng bệnh phần khơng xảy điều kiện ẩm độ cao, trời âm u kéo dài 3.2 Phân lập xác định tác nhân gây bệnh TTCN hại mít ĐN -Phân lập mẫu bệnh: Từ 49 mẫu phân lập được, qua khảo sát hình thái sơ bộ, cho thấy chúng Phytophthora Kết lây nhiễm nhân tạo (mẫu MD5 MD6) thân, qua giá thể trồng, tạo triệu chứng bệnh đặc trưng, phân lập lại ký sinh gây bệnh mà tương tự với nguồn lây nhiễm, thỏa mãn nguyên tắc Koch (1876) -Xác định loài Phytohpthora gây bệnh TTCN: Khảo sát hình thái 10 mẫu phân lập (từ MD1-MD10) cho thấy tương đồng với đặc điểm loài P palmivora (E.J Butler) E.J Butler (1919) mô tả trước [56], [59], [131] Dựa vào đặc điểm hình thái khóa phân loại Ho (1992) [74] kết luận chúng P palmivora Kết phân tích trình tự COX II mẫu phân lập MD3, MD5, MD6 MD8 cho kết tương đồng đến 99% với trình tự COX II lồi P palmivora kết phân tích trình tự vùng ITS1-5.8S-ITS2 mẫu cho thấy có tương đồng với vùng ITS1-5.8S-ITS2 mẫu phân lập cơng bố lồi P palmivora Triệu chứng bệnh ghi nhận tương đồng với bệnh Phytophthora Từ kết trên, P palmivora (E.J Butler) E.J Butler (1919) xác định tác nhân gây bệnh TTCN hại mít ĐN 3.3 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học sinh thái mẫu P palmivora phân lập Kết cho thấy 10 mẫu Phytophthora MD1-MD10 có kiểu ghép cặp A1 (Heterothallic) Kết phù hợp với kết công bố 16 trước [59]; [51] Nhiệt độ thích hợp cho tăng trưởng mẫu P palmivora MD5 27°C, tối thiểu 9°C tối đa 36oC; cho sản sinh bào tử nang 270C Mức pH thích hợp từ pH 5-7 P palmivora MD5 có khả gây bệnh cho mít Tố Nữ, sa kê sầu riêng Các mẫu phân lập Phytophthora xếp vào nhóm mẫn cảm với Metalaxyl 3.4 Nghiên cứu quy luật phát sinh, phát triển bệnh 3.4.1 Tình hình bệnh thối thân chảy nhựa đồng Kết điều tra đồng tỉnh trồng mít ĐN cho thấy tỷ lệ bệnh thay đổi từ 14,5-34% Trong đó, tỉnh Đồng Nai 34% 1.962 khảo sát; Bình Phước 20,5% (1.892 cây); Bà Rịa Vũng Tàu 19% (2.126 cây) Bình Dương 14,5% (1.540 cây) 3.4.2 Diễn biến bệnh năm Hình 3.15 Sơ đồ biểu diễn TLB (%) phát sinh tháng lượng mưa trung bình tháng năm 2013 khu vực miền ĐN Kết theo dõi năm 2013 vườn mít tỉnh (BRVT, Bình Dương, Bình Phước Đồng Nai) cho thấy mùa khô Từ tháng 1-4, TLB bệnh phát sinh tháng ít, từ 0-0,1% Đầu mùa mưa TLB phát sinh bắt đầu tăng dần tử tháng với đỉnh tháng 10 (2,2%) Sau đó, TLB phát sinh giảm từ đầu mùa khơ (tháng 11-12), 1,6% vào tháng 11 0,1% vào tháng 12 (Hình 3.15) Kết khảo sát năm 2014 có xu hướng tương tự năm 2013 Như vậy, bệnh TTCN xuất chủ 17 yếu tháng mùa mưa (tháng 5-10) với độ trễ khoảng tháng, trì mức cao tháng 9-10 Từ tháng 12 bệnh giảm mạnh không đáng kể từ tháng -4 3.5 Điều tra ảnh hưởng số điều kiện sinh thái đến bệnh 3.5.1 Ảnh hưởng giống mít đến bệnh Qua điều tra, giống Siêu Sớm có TLB cao nhất, năm 2013: 16,82%, năm 2014 21,84% năm 2015 đến 25,63%; theo sau Viên Linh (với TLB 10,32%; 13,73% 20,35%) Giống Lá Lớn có TLB thấp giống, TLB (%) tương ứng 2,71%; 4,75% 4,36% Hầu hết giống có TLB (%) tăng dần từ 2013 đến 2015 (Bảng 3.9) 3.5.2 Ảnh hưởng khoảng cách trồng đến bệnh TTCN Điều tra qua năm cho thấy khoảng cách trồng x m có TLB thấp (2013: 13,23% 2014: 15,20%); khoảng cách trồng x m 15,75% 1725%; khoảng cách trồng x m 17,92% 21,76% khoảng cách x m 21,42% 24,48% Như vậy, vườn trồng khoảng cách nhỏ có TLB cao (Bảng 3.10) 3.5.3 Ảnh hưởng độ tuổi vườn đến bệnh TTCN Kết điều tra năm 2014 cho thấy vườn có độ tuổi 1-2 năm có TLB năm 2013 2014 7,90% 8,61% thấp vườn độ tuổi 3-4 năm (14,80% 15,90%) Vườn có độ tuổi 5-6 năm có TLB 20,31% năm 2013 22,60% Vườn có độ tuổi > năm có TLB cao nhất, lên đến 24,50% năm 2013 25,80% năm 2014 (Bảng 3.11) 3.5.4 Ảnh hưởng địa hình vườn đến bệnh TTCN Địa hình vườn có ảnh hưởng đến TLB (%) Kết khảo sát năm 2014 cho thấy mít trồng khu vực thấp (chân đồi) có TLB (25,50%) cao mít trồng khu vực (lưng đồi) (17,42%) khu vực cao (đỉnh đồi) (14,52%) Kết điều tra cho thấy vườn nằm đất (độ dốc < 2%) có TLB 21,81% cao so với vườn đất dốc (10-30%) có tỷ TLB 15,80% 18 3.5.5 Ảnh hưởng loại hình canh tác đến bệnh TTCN hại mít Việc trồng xen vườn ảnh hưởng đến TLB (%) Từ kết năm 2014 cho thấy TLB (%) vườn xen với dứa (27,36%) sầu riêng (26,53%) cao vườn trồng (17,64%) Do đó, để giảm áp lực bệnh vườn, nên trồng không trồng xen với dứa sầu riêng 3.6 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ bệnh TTCN hại mít 3.6.1 Nghiên cứu tuyển chọn giống mít chống chịu bệnh TTCN 3.6.1.1 Đánh giá tính chống chịu số giống/dòng mít P palmivora qua lây nhiễm mô lây nhiễm mô đoạn cành non Dựa tốc độ phát triển diện tích vết bệnh chia tính chống chịu của 22 giống/dòng mít thành nhóm gồm: i) Nhóm giống có tính chống chịu (Lá Lớn, Mã Lai, Tố Tây, MTNĐN04, MTNĐN05, MTNĐN06, MTNĐN07 MTNĐN08), Lá Lớn có tính chống chịu cao ii) Nhóm giống mẫn cảm cao (Siêu Sớm, Ruột Đỏ, Viên Linh, M97I) Siêu Sớm giống mẩn cảm nhất; iii) Nhóm giống mẫn cảm (nhóm trung gian) gồm Không Hạt, M102, M98, M99, MBRVT32H, MBRVT33H, MĐN02H, MĐN06H, MĐN07H, MĐN09H 3.6.1.2 Đánh giá khả chống chịu từ hạt số giống mít có tiềm chống chịu Sau hai tháng lây nhiễm trồng chậu, kết cho thấy giống tham gia TN nhiễm bệnh Cây giống Siêu Sớm có TLB 55,72%, cao có ý nghĩa so với giống khác TN Cây giống Lá Lớn có TLB (27,14%) thấp có ý nghĩa so NT giống Siêu Sớm Cây giống khác có TLB trung gian hai NT 3.6.2 Nghiên cứu phòng trừ bệnh biện pháp canh tác 3.6.2.1 Khảo sát diện nguồn bệnh giống Kết khảo sát cho thấy tỷ lệ giống có triệu chứng bệnh vườn ươm thay đổi từ 0,11-0,19%, tỷ lệ vườn ươm có diện P palmivora giống ghi nhận từ 80-90,9% Điều cho thấy 19 giống chứa nguồn bệnh làm lây lan bệnh từ vườn ươm đến vườn sản xuất 3.6.2.2 Ảnh hưởng biện pháp tiêu nước đến bệnh TTCN hại mít Ở năm thứ sau xử lý, TLB đạt thấp NT Làm rảnh thoát nước + Làm mái dốc (9,98%), thấp có ý nghĩa so với NT lại Theo sau NT khơng làm bồn + làm rảnh thoát nước (13,34%), cao NT thấp có ý nghĩa với NT lại NT làm bồn đắp + bờ quanh gốc (21,64%) NT khơng làm mơ cạn rãnh nước (18,34%) cao có ý nghĩa so với hai NT nêu CSB (%) thấp NT Làm rảnh thoát nước + Làm mái dốc (3,18%) NT khơng làm bồn + làm rảnh nước (3,64%), thấp có ý nghĩa so với NT làm bồn + đắp bờ quanh gốc (9,16%) NT không làm mô cạn rãnh thoát nước (7,50%) Kết cho thấy việc tạo điều kiện thoát nước tốt qua làm rãnh làm mái dốc giúp ngăn chặn bệnh gia tăng giúp giảm bệnh 3.6.2.3 Ảnh hưởng bón phân hữu đến bệnh TTCN hại mít a) Ảnh hưởng bón phân hữu đến bệnh trồng chậu NT bón phân gà (11,67%) có TLB thấp có ý nghĩa với NT lại theo sau NT bón phân bò (20,00%) cao NT bón phân gà thấp có ý nghĩa so với NT lây nhiễm + bón phân vơ (49,17%) NT lây nhiễm + khơng bón phân (55,00%) Tỷ lệ P palmivora tái phân lập (%) sau lây nhiễm thấp NT bón phân gà (8,34%) theo sau NT bón phân bò (11,67%), thấp có ý nghĩa so với hai NT lại Như vậy, bón phân gà phân bò giảm bệnh vườn ươm b) Ảnh hưởng bón phân hữu đến bệnh TTCN hại mít điều kiện đồng ruộng Qua xử lý, TLB (%) NT khác biệt khơng có ý nghĩa Tuy nhiên CSB (%) có khác biệt; NT bón phân gà 12 tấn/ha (5,31%) có CSB tương đương NT bón phân bò 16 tấn/ha (7,5%), 20 thấp có ý nghĩa so với đối chứng (11,25%), NT phân gà (16 tấn/ha) NT phân bò (8 tấn/ha) Năng suất (kg/cây/năm) trung bình qua ba năm thay đổi từ 32,85-51,21 kg/cây NT bón phân gà (12 tấn/ha) phân bò (16 tấn/ha) có suất cao có ý nghĩa so đối chứng nghiệm thức lại 3.6.3 Nghiên cứu phòng trừ bệnh tác nhân sinh học Trichoderma Ở năm thứ xử lý, kết cho thấy NT tưới lần + phun lần T harzianum SR18 mùa mưa có TLB CSB thấp (lần lượt 5,00% 2,34%); theo sau NT phun lần/năm (lần lượt 6,67% 4,00%) (Bảng 3.24) Năng suất (kg/cây/năm) đạt cao NT tưới lần + phun lần (51,05 kg), sau NT phun lần (48,95 kg) Bảng 3.24 Ảnh hưởng xử lý chế phẩm T harzianum SR18 đến tỷ lệ bệnh TTCN (%) hại mít giai đoạn kinh doanh Tỷ lệ bệnh (%) Nghiệm thức Chỉ số bệnh (%) Trước Sau Trước Sau XL XL XL XL Phun T harzianum SR18 lần 5,00 11,67b 2,00 7,00b Phun T harzianum SR18 lần 3,34 6,67bc 1,34 4,00c Tưới T harzianum SR18 lần 5,00 11,67b 2,34 8,00a Tưới T harzianum SR18 lần 3,34 9,99bc 1,67 6,67b 6,67 5,00c 3,00 2,34d 6,67 23,34a 2,34 9,33a F ns * Ns * CV (%) 25,38 14,38 27,12 11,47 TT Tưới lần + phun lần T harzianum SR18 Không xử lý (đối chứng) 3.6.4 Nghiên cứu phòng trừ bệnh sử dụng biện pháp hóa học 3.6.4.1 Ảnh hưởng phun số thuốc hóa học đến bệnh TTCN hại mít giai đoạn vườn ươm 21 Kết cho thấy NT phun Fosetyl-Al (có TLB 3,43%) NT phun P phosphite (5,71 %) có TLB thấp có ý nghĩa so đối chứng (13,72%) Tỷ lệ diện (%) P palmivora NT Fosetyl-Al (66,89%) phun P phosphite (63,43%), thấp so đối chứng (78,86%) Như vậy, Fosetyl – Al theo sau P phosphite có hiệu lực cao khống chế bệnh TTCN hại mít vườn ươm 3.6.4.2 Ảnh hưởng áp dụng thuốc hóa học đến bệnh TTCN hại mít giai đoạn kinh doanh Qua hai năm xử lý, TLB (%) NT phun Fosetyl-Al (6,95%) NT P phosphite (8,34%) NT Metalaxyl + Mancozeb (8,34%) thấp có ý nghĩa so đối chứng (23,61%) Tương tự CSB (%) NT phun FosetylAl (2,50%), NT P phosphite (3,89 %) và NT Metalaxyl + Mancozeb (3,61%) thấp đối chứng (12,22%) Năng suất (kg/cây/năm) NT P phosphite (45,94 kg) tương đương NT Fosetyl –Al 800g/kg (40,06 kg)m, cao đối chứng NT lại Kết cho thấy loại thuốc TN làm giảm TLB (%) CSB (%) tăng suất so với đối chứng; hiệu lực cao Fosetyl –Al P phosphite 3.6.4.3 Ảnh hưởng biện pháp áp dụng thuốc Potassium phosphite (P phosphit) đến bệnh TTCN hại mít giai đoạn kinh doanh Các nghiệm thức có xử lý thuốc có TLB thấp có ý nghĩa so đối chứng Ở năm thứ sau xử lý, TLB (%) NT Phun tán + tưới đất (5,56%) NT Tưới đất (6,95%) thấp có ý nghĩa so với đối chứng (25%) áp dụng Metalaxy + Mancozeb (5,56%) Tương tự, CSB (%)t NT Phun tán + tưới đất (2,50%) NT Tưới đất (3,05%) (Bảng 3.31) thấp so với đối chứng (12,73%) NT Metalaxy + Mancozeb (5,28%) Năng suất (kg/cây/năm) NT Phun tán + tưới đất với P phosphite (49,52 kg/cây/năm) tưới đất với P phosphite (48,46 kg/cây/năm) cao có ý nghĩa so với đối chứng (31,86 kg/cây/năm) hai NT xử lý thuốc lại 22 Như vậy, phun thuốc giúp giảm bệnh thay phần việc sử dụng Metalaxyl P phosphite đối phó với bệnh TTCN nhằm đảm bảo cho việc sử dụng luân phiên thuốc Bảng 3.31 Ảnh hưởng biện pháp áp dụng Potassium phosphite đến TLB (%) CSB (%) TTCN hại mít giai đoạn kinh doanh Tỷ lệ bệnh (%) Chỉ số bệnh (%) Nghiệm thức Trước Sau Trước Sau XL XL XL XL 5,56 12,50b 1,94 5,28b Phun tán với P phosphite 1% 5,56 9,72bc 2,20 3,61c Phun tán + Tưới P phosphite 1% 6,95 5,56d 2,22 2,50d Tưới đất với P phosphite 6,95 6,95cd 1,94 3,05cd Phun nước (Đối chứng) 5,56 25,00a 1,67 12,73a F ns * Ns * CV (%) 23,27 11,46 17,55 12,28 TT Phun tán Metalaxyl M 40 g/kg + Mancozeb 640 g/kg; 0,3% 3.6.5 Kết thực mơ hình phòng trừ tổng hợp bệnh TTCN Kết cho thấy TLB (%) trung bình lơ MH thấp so đối chứng; hiệu lực phòng trừ bệnh MH đạt cao 90%, MH đạt 92,10%; MH đạt 93,86% MH đạt 90,00% Năng suất trung bình qua năm thực MH cao 31,71 kg/cây; MH cao 41,23 kg/cây MH cao 41,66 kg/cây/năm so đối chứng Chi phí cho lô MH 81,80 triệu đồng/ha cao đối chứng 14,25% tăng chhi phí đầu tư phân hữu cơ, chế phẩm sinh học công lao động Năng suất trung bình MH cao 16,94% (7,79 tấn/ha) giá bán cao 15,69% so đối chứng nên lợi nhuận cao so với đối chứng Tỷ suất lợi nhuận lô MH (là 6,76 lần) cao lô đối chứng (5,55 lần), chênh lệch lô MH lô đối chứng 21,74% 23 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận - Dựa vào đặc điểm hình thái, sinh học, lây nhiễm nhân tạo, tái phân lập theo nguyên tắc Koch phân tích chuỗi gen RNA ribosome (ITS), loài Phytophthora palmivora xác định tác nhân gây bệnh TTCN hại mít miền ĐN lần đầu xác định Việt Nam - P palmivora sinh trưởng hình thành bào tử nang thích hợp nhiệt độ 27oC Mức pH thích hợp cho phát triển từ 5-7 -Bệnh thối thân chảy nhựa hại mít xuất chủ yếu tháng mùa mưa (tháng 5-10), bệnh bắt đầu tăng nhanh từ tháng (khi có mưa đều) đến tháng 7, tiếp tục tăng trì mức cao tháng 10 (cuối mùa mưa) Từ tháng 12 bệnh giảm nhanh xuất không đáng kể từ tháng đến tháng - Kết điều tra đồng ruộng cho thấy bệnh phát sinh gây hại nặng vườn có điều kiện nước kém; vườn trồng mật độ cao, giống Siêu Sớm nhiễm bệnh nặng giống Lá Lớn; trồng xen với dứa, sầu riêng bệnh nặng trồng - Giống mít Lá Lớn có khả chống chịu bệnh cao so với giống Siêu Sớm qua đánh giá phương pháp lây nhiễm mơ rời phòng thí nghiệm qua khảo sát đồng ruộng - Cây giống nguồn lây lan bệnh với tỷ lệ diện nguồn bệnh P palmivora giá thể trồng từ 7,04-17,16% tỷ lệ vườn ươm có nguồn bệnh khơng 80% - Các biện pháp có khả làm giảm bệnh thối thân chảy nhựa (i) sử dụng giống mít Lá Lớn chống chịu bệnh (ii) làm rãnh tạo điều kiện thoát nước vườn, (iii) bón phân gà 12 tấn/ha phân bò 16 tấn/ha năm, (iv) sử dụng nấm đối kháng T harzianum SR18 tưới đất lần hay tưới đất vào tháng và phun tán vào tháng 6; 8; 10; (v) sử dụng 24 Potassium phosphite 200 g/lít, lượng lít/ha, nồng độ 1%; phun tán (tháng 8) tưới đất (tháng 9) - Mơ hình phòng trừ bệnh tổng hợp sử dụng số biện pháp phòng trừ từ kết nghiên cứu giúp giảm tỷ lệ bệnh, hiệu phòng trừ trung bình cao 90%, làm tăng suất trung bình 16,94% (tương đương 7,79 tấn/ha) so đối chứng; thu nhập tăng trung bình 35,29% lợi nhuận tăng 39,08%, tỷ suất lợi nhuận tăng 21,74% điểm mơ hình Đề nghị -Một số biện pháp có khả làm giảm bệnh thối thân chảy nhựa từ kết nghiên cứu nên khuyến cáo cho sản xuất mít miền ĐN - Nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng tổ hợp gốc ghép - Lá Lớn /mắt ghép - Siêu Sớm đến sinh trưởng, suất, chất lượng khả chống chịu bệnh thối thân chảy nhựa - Nghiên cứu phổ ký chủ P palmivora gây bệnh thối TTCN hại mít miền ĐN DANH MỤC LIỆT KÊ CÁC BÀI BÁO ĐÃ CÔNG BỐ Tri, Mai Van., Hoa, NV., Chau, NM., Pane A., Faedda, R., Patrizio, AD., Schena, L., Olsson, CHB., Wright, SA., Ramstedt, M., Cacciolo, SO., (2015), ‘Decline of jackfruit (Artocarpus heterophyllus) incited by Phytophthora palmivora in Vietnam’, Phytopathologia Mediterranea 54, 2, pp 275−280 Mai Văn Trị, Nguyễn Thị Nguyên Vân, Nguyễn Văn Hòa, Nguyễn Văn Tuất (2016), Đánh giá nhanh tính chống chịu nấm Phytophthora palmivora gây bệnh thối vỏ chảy nhựa mít miền Đơng Nam Tạp chí KHCN Nơng nghiệp Việt Nam, 5, 66, pp.11-15 ... chưa có nghiên cứu xác nhận Phytophthora tác nhân gây bệnh chưa có nghiên cứu phòng trừ bệnh TTCN hại mít Việt Nam Do đó, nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh phát triển biện pháp phòng trừ giúp... vực Ở nước ta, chưa có nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh biện pháp kiểm sốt bệnh TTCN hại mít Do đó, việc nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh phát triển biện pháp nhằm đối phó với bệnh TTCN... hại mít cấp thiết 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Xác định tác nhân gây bệnh số biện pháp nhằm giảm bệnh thối thân chảy nhựa (TTCN) mít miền ĐN 1.3 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu Đối tượng nghiên