BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM MAI VĂN TRỊ NGHIÊN CỨU TÁC NHÂN GÂY BỆNH VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỪ TỔNG HỢP BỆNH THỐI THÂN CHẢY NHỰA TRÊN CÂY MÍT Ở MIỀN ĐÔNG NAM BỘ LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP TP Hồ Chí Minh - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM MAI VĂN TRỊ NGHIÊN CỨU TÁC NHÂN GÂY BỆNH VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỪ TỔNG HỢP BỆNH THỐI THÂN CHẢY NHỰA TRÊN CÂY MÍT Ở MIỀN ĐƠNG NAM BỘ Chuyên ngành: Bảo vệ thực vật Mã số: 962112 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS Nguyễn Văn Tuất TS Nguyễn Văn Hòa TP Hồ Chí Minh - 2018 i LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Tồn số liệu kết nghiên cứu luận án trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu khác Tác giả luận án Mai Văn Trị ii LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến tập thể hướng dẫn khoa học GS.TS Nguyễn Văn Tuất, TS Nguyễn Văn Hòa dành nhiều thời gian để góp ý, cho ý tưởng, nội dung nghiên cứu, định hướng phương pháp luận, chỉnh sửa văn phong số vấn đề gặp phải trình thực Xin chân thành cảm ơn đồng ý, hỗ trợ, tạo điều kiện chia sẻ kiến thức lãnh đạo Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Ban Đào tạo Sau ĐH cán tham gia công tác đào tạo; lãnh đạo Viện KHKT Nơng nghiệp miền Nam Phòng QLKH HTQT cán tham gia công tác đào tạo; chân thành cảm ơn đồng ý, động viên hỗ trợ lãnh đạo Viện ăn miền Nam Xin chân thành cảm ơn TS Santa Olga Cacciola, BM Nông nghiệp, Thực phẩm Môi trường, ĐH Catania, Italia; GS Gaetano Magnano di San Lio (ĐH Reggio Calabria Địa Trung Hải, Italia) số đồng nghiệp khác tài trợ giúp đỡ vật liệu, phương tiện cho việc thực số thí nghiệm Xin chân thành cám ơn đồng nghiệp Phòng Bảo vệ thực vật Phòng CN Sau thu hoạch thuộc Viện ăn miền Nam, BM Di truyền SH phân tử thuộc ĐH Cần Thơ, đồng nghiệp Trung tâm Kiểm dịch sau nhập khẩu, TS André Drenth (ĐH Queensland), PGS.TS Nguyễn Minh Châu TS Đinh Thị Yến Phương Chân thành cảm ơn lãnh đạo ngành chun mơn nơng dân trồng mít tỉnh miền Đông Nam động viên, giúp đỡ, hỗ trợ suốt q trình điều tra, thực thí nghiệm hoàn chỉnh luận văn Cuối xin cám ơn anh chị, cháu, gia đình, người thân, tất đồng nghiệp bạn bè động viên, giúp đỡ trình thực luận án Tác giả iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vii DANH MỤC THUẬT NGỮ ĐỐI CHIẾU VỚI TIẾNG ANH viii DANH MỤC CÁC BẢNG ix DANH MỤC CÁC HÌNH xii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài .1 Mục tiêu, yêu cầu đề tài Những đóng góp luận án Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 1.2.3 Một số đặc điểm canh tác .3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Cơ sở khoa học đề tài 1.2 Một số thông tin mít 1.2.1 Nguồn gốc, đặc điểm thực vật học, sản xuất sử dụng 1.2.2 Một số giống mít miền Đông Nam 11 1.2.4 Một số sâu bệnh hại mít 13 1.3 Bệnh thối thân chảy nhựa (TTCN) hại mít 15 1.4 Một số đặc điểm hình thái sinh học Phytophthora 16 1.4.1 Chi Phytophthora 16 1.4.2 Phân lập Phytophthora 17 1.4.3 Chu kỳ sống (life cycle) Phytophthora 19 iv 1.4.4 Loài Phytophthora palmivora 21 1.4.5 Xác định loài Phytophthora gây bệnh trồng 24 1.4.6 Một số yếu tố sinh thái ảnh hưởng phát triển Phytophthora 26 1.5 Chu kỳ bệnh (disease cycle) Phytophthora 27 1.6 Một số biện pháp phòng trừ bệnh gây Phytophthora 31 1.6.1 Biện pháp canh tác 31 1.6.1.1 Ngăn ngừa nguồn bệnh xâm nhập, lây lan sử dụng giống bệnh .31 1.6.1.2 Thoát nước vườn 32 1.6.1.3 Bón phân hữu 33 1.6.2 Biện pháp giống chống chịu bệnh 34 1.6.3 Biện pháp sinh học 35 1.6.4 Phòng trừ thuốc hóa học 37 1.6.5 Phòng trừ tổng hợp bệnh Phytophthora 41 1.7 Nhận xét chung tình hình nghiên cứu bệnh thối thân chảy nhựa hại mít 42 CHƯƠNG VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .44 2.1 Vật liệu nghiên cứu 44 2.1.1 Môi trường ni cấy, hóa chất, trang thiết bị dụng cụ sử dụng chung .44 2.1.2 Nguồn Phytophthora 45 2.1.3 Các giống ăn 46 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 46 2.2.1 Thời gian thực 46 2.2.2 Địa điểm thực 46 2.3 Nội dung nghiên cứu 47 2.4 Phương pháp phương tiện nghiên cứu 47 2.4.1 Phương pháp điều tra tình hình bệnh thối thân chảy nhựa 47 2.4.2 Phương pháp thu thập phân lập mẫu 48 2.4.3 Phương pháp xác định loài Phytophthora gây bệnh 53 v 2.4.4 Nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh thái loài P palmivora 56 2.4.5 Nghiên cứu đặc điểm phát sinh- phát triển bệnh TTCN đồng 60 2.4.6 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ bệnh thối thân chảy nhựa 63 2.4.6.1 Nghiên cứu tuyển chọn giống mít có khả chống chịu bệnh TTCN 63 2.4.6.2 Nghiên cứu ảnh hưởng số biện pháp canh tác bệnh TTCN 66 2.4.6.3 Nghiên cứu khả giảm bệnh TTCN hại mít T harzianum điều kiện đồng ruộng 72 2.4.6.4 Nghiên cứu phòng trừ bệnh TTCN hại mít sử dụng thuốc hóa học 74 2.4.7 Xây dựng mơ hình phòng trừ tổng hợp bệnh TTCN hại mít 77 2.5 Phương pháp xử lý, chuyển đổi số liệu cho thí nghiệm 79 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 81 3.1 Triệu chứng bệnh thối thân chảy nhựa mít Đông Nam .81 3.2 Phân lập, xác định tác nhân gây bệnh TTCN hại mít Đông Nam 86 3.2.1 Phân lập tác nhân gây bệnh TTCN hại mít Đơng Nam 86 3.2.2 Kết lây nhiễm nhân tạo tái phân lập ký sinh gây bệnh 87 3.2.3 Xác định loài Phytophthora biện pháp hình thái 91 3.2.4 Xác định loài Phytophthora gây bệnh phương pháp sinh học phân tử 95 3.3 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học, sinh thái mẫu Phytophthora phân lập mít miền Đơng Nam 99 3.3.1 Xác định kiểu ghép cặp (mating type, kiểu lai) mẫu phân lập 99 3.3.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển tản nấm P palmivora 100 3.3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả tạo bào tử nang P palmivora 102 3.3.4 Ảnh hưởng mức pH môi trường đến tăng trưởng P palmivora .103 3.3.5 Khả gây bệnh P palmivora số loài ăn 105 3.4 Nghiên cứu đặc điểm phát sinh, phát triển bệnh TTCN hại mít 107 3.4.2 Diễn biến năm bệnh TTCN hại mít khu vực miền Đông Nam 109 3.4.3 Điều tra ảnh hưởng số yếu tố kỹ thuật canh tác sinh thái đến bệnh TTCN hại mít .113 vi 3.4.3.1 Ảnh hưởng giống trồng đến bệnh TTCN 113 3.4.3.3 Ảnh hưởng độ tuổi vườn đến bệnh TTCN 116 3.4.3.4 Ảnh hưởng địa hình vườn đến bệnh TTCN 117 3.4.3.5 Ảnh hưởng trồng trồng xen đến bệnh TTCN hại mít 118 3.5 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ bệnh TTCN hại mít 120 3.5.1 Nghiên cứu tuyển chọn giống mít chống chịu bệnh TTCN 120 3.5.2 Nghiên cứu phòng trừ bệnh TTCN hại mít biện pháp canh tác 129 3.5.3 Nghiên cứu ảnh hưởng xử lý T harzianum đến bệnh TTCN hại mít điều kiện đồng ruộng 143 3.5.4 Nghiên cứu phòng trừ bệnh thuốc hóa học 148 3.5.5 Kết thực mơ hình phòng trừ tổng hợp bệnh TTCN hại mít 161 4.1 Kết luận 167 4.2 Đề nghị 168 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 169 TÀI LIỆU THAM KHẢO 170 -Tài liệu tham khảo tiếng Việt 170 -Tài liệu tham khảo tiếng Anh 172 PHỤ LỤC 189 vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT BLAST Basic Local Alignment Search Tool BRVT Bà Rịa Vũng Tàu BVTV Bảo vệ Thực vật CRA Môi trường nuôi cấy CRA (cà rốt agar) CSB Chỉ số bệnh CV Coefficient of variation DNA Deoxyribonucleic Acid Dntp Deoxynucleotide FAO Food and Agriculture Organization of United Nations ITS Internal transcribed spacer NCBI National Center for Biotechnology Information NN&PTNT Nông nghiệp Phát triển Nông thôn Nxb Nhà xuất PCR Polymerase Chain Reaction PDA Môi trường nuôi cấy PDA (Potato Dextrose Agar) PSM Môi trường chọn lọc Phytophthora RCBD Randomized Complete Block Design RNA Ribonucleic acid SXL Sau xử lý TLB Tỷ lệ bệnh TTCN Thối thân chảy nhựa TXL Trước xử lý UK United Kingdom UV Untra-violet viii DANH MỤC THUẬT NGỮ ĐỐI CHIẾU VỚI TIẾNG ANH Tiếng Vi ệt Tiếng Anh Bào tử động/động bào tử Zoospores Bào tử hậu/hậu bào tử Chlamydospores Bào tử nang Sporangia Bào tử noãn Oospore Bộ Order Cấu trúc cái/túi noãn Oogonium Cấu trúc đực/ bao đực Antheridium Chi Genus Cuống (của bào tử nang) Pedicel Giới Kingdom Họ Family Khuẩn ty/sợi nấm Mycelium Kiểu dị tản Heterothallic Kiểu đồng tản Homothallic Kiểu ghép đơi/kiểu lai Mating types Lồi Species Lông roi Flagella Mẫu phân lập Isolate Mốc nước Water moulds Nang Cyst Ngành Phylum Núm (của bào tử nang) Papillate Túi giao tử Gametangia 203 Phụ lục Tóm tắt kết thống kê kết thí nghiệm 6.1 Nghiên cứu đặc điểm sinh học loài Phytophthora - Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển đường kính tản nấm P palmivora Nguồn biến động (1) ngày (2) ngày (3) ngày Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 0,92% - Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh sản bào tử nang P palmivora Nguồn biến động Số bào từ nang Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 1,25% 6.2 Ảnh hưởng pH đến phát triển đường kính tản nấm P palmivora Nguồn biến động (1) ngày (4) ngày Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 1,22% 204 6.4 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ 6.4.1 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ sử dụng tính kháng -Diện tích vết bệnh trung bình (cm ) giống/dòng mít sau lây nhiễm Nguồn biến động (1) DTVB 4N (2) DTVB 5N (3) DTVB 6N (4) DTVB 7N Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 7,80% - Chiều dài vết bệnh trung bình (mm) đoạn cành sau lây nhiễm P palmivora Nguồn biến động (1) CDVB 4N (2) CDVB 5N (3) CDVB 6N (4) CDVB 7N CV(1) = 10,67 % Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng 205 -TLB (%) từ hạt bảy giống mít trồng lây bệnh P palmivora Nguồn biến động (1) tháng SLN (2) tháng SLN Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 16,82% 6.4.2 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ sử dụng biện pháp canh tác -Ảnh hưởng biện pháp tiêu nước đến TLB (%) qua năm (2013-2015) Nguồn biến động (1) Jan-2013 (2) Oct-2013 (3) Oct-2014 (4) Oct-2015 CV(1) = 25,60% Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng 206 -Ảnh hưởng biện pháp tiêu thoát nước đến CSB loét thân qua năm (2013-2015) Nguồn biến động (1) Jan-2013 (2) Oct-2013 (3) Oct-2014 (4) Oct-2015 Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 21,46% + Thí nghiệm ảnh hưởng bón số phân hữu đến bệnh -Ảnh hưởng bón phân hữu đến tỷ lệ bệnh điều kiện nhà lưới Nguồn biến động (1) Tỷ lệ sau lây nhiễm (2) Tỷ lệ tái phân lập CV(1) = 7,91% Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng 207 -Ảnh hưởng bón số phân hữu đến tỷ lệ bệnh thối thân chảy nhựa Nguồn biến động (1) Jan-2013 (2) Oct-2013 (3) Oct-2014 (4) Oct-2015 Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 24,34% -Ảnh hưởng bón số phân hữu đến số bệnh Nguồn biến động (1) Jan-2013 (2) Oct-2013 (3) Oct-2014 (4) Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Oct-2015 CV(1) = 20,97% Sai số Tổng cộng 208 -Ảnh hưởng bón số phân hữu đến trung bình suất Nguồn biến động Nghiệm thức NS PHC Sai số Tổng cộng CV = 9,49% 6.4.3 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ sử dụng phương pháp sinh học + Ảnh hưởng áp dụng Trichoderma đến TLB (%), CSB(%) TB suất -Ảnh hưởng áp dụng Trichoderma đến tỷ lệ bệnh thối thân chảy nhựa hại mít Nguồn biến động (1) TLB TXL (2) TLB Năm 2015 (3) TLB Năm 2016 Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 25,38% -Ảnh hưởng áp dụng Trichoderma đến số bệnh thối thân chảy nhựa hại mít Nguồn biến động (1) CSB TXL (2) CSB 1N STN (3) CSB 2N STN Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 27,12% 209 -Mật độ quần thể Trichoderma spp đất trước sau thí nghiệm Nguồn biến động (1) TLB TXL (2) TLB Năm 2015 (3) TLB Nghiệm thứ Sai số Tổng cộng Nghiệm thứ Sai số Tổng cộng Nghiệm thứ Sai số Năm 2016 Tổng cộng CV(1) = 15,88% Ảnh hưởng xử lý nấm Trichoderma SR18 đến trung bình suất (kg/cây) Nguồn biến động TB NS vụ Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 11,29% 6.4.4 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ sử dụng biện pháp hóa học -Ảnh hưởng thuốc hóa học đến TLB (%) tỷ lệ diện (%) P palmivora giá thể giai đoạn vườn ươm Nguồn biến động (1) Triệu chứng (2) TLHD nấm CV(1) = 12,10% Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng 210 + Ảnh hưởng số thuốc hóa học đến TLB CSB trước xử lý, năm SXL -Ảnh hưởng số loại thuốc hóa học đến TLB mít giai đoạn kinh doanh Nguồn biến động (1) TLB TXL (2) TLB Năm (3) TLB Năm Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 10,44% -Ảnh hưởng số thuốc hóa học đến CSB mít giai đoạn kinh doanh Nguồn biến động (1) CSB TXL (2) CSB 1N STN (3) CSB 2N STN Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 11,89% -Ảnh hưởng áp dụng số thuốc hóa học đến TB suất Nguồn biến động TB NS Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV = 10,44% 211 + Ảnh hưởng cách xử lý Potassium phosphite đến TLB, CSB NS -Ảnh hưởng cách xử lý Potassium phosphite đến tỷ lệ bệnh Nguồn biến động (1) TLB TXL (2) TLB Năm (3) TLB Năm Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 23,27% -Ảnh hưởng cách xử lý Potassium phosphite đến số bệnh Nguồn biến động (1) CSB TXL (2) CSB 1N STN (3) CSB 2N STN Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng Nghiệm thức Sai số Tổng cộng CV(1) = 17,55 % -Ảnh hưởng biện pháp xử lý Potassium phosphite đến trung bình suất Nguồn biến động Nghiệm thức Năng suất Sai số Tổng cộng CV = 11,07% 212 6.4.5 Thống kê t-test trung bình khối lượng trung bình suất mơ hình ứng dụng tổng hợp biện pháp phòng trừ bệnh Nguồn biến động TL Điểm NS TL Điểm NS TL Điểm NS Phụ lục 7: Đặc điểm số loại thuốc/hoạt chất trừ bệnh TT Hoạt chất Copper oxychloride 850g/kg (0,3%) Metalaxyl 40g/kg + Mancozeb 640 g/kg (0,3%) FosetylAl800g/kg 213 (0,25%) Potassium phosphite 400 400 g/l monopotassium phosphonate dipotassium phosphonate ... [134] Đề tài Nghiên cứu tác nhân gây bệnh biện pháp phòng trừ tổng hợp bệnh thối thân chảy nhựa mít miền Đơng Nam bộ thực nhằm xác định tác nhân gây bệnh phát triển biện pháp nhằm giảm bệnh góp...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM MAI VĂN TRỊ NGHIÊN CỨU TÁC NHÂN GÂY BỆNH VÀ BIỆN PHÁP PHÒNG TRỪ TỔNG HỢP BỆNH THỐI THÂN CHẢY NHỰA TRÊN CÂY MÍT... phục bệnh thối thân chảy nhựa hại mít miền Đơng Nam Mục tiêu, yêu cầu đề tài 2.1 Mục tiêu đề tài Nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh số biện pháp nhằm giảm bệnh thối thân chảy nhựa (TTCN) hại mít