BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI LÊ NGỌC DUNG NGHI£N CøU PHƯƠNG PHáP TốI ƯU CHUẩN Bị TINH TRùNG BảO QUảN LạNH SÂU NHữNG MẫU TINH DịCH THIểU TINH Chuyờn ngnh : Mô phôi thai học Mã số : 60720102 LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Chủ tịch hội đồng Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Bình TS Nguyễn Mạnh Hà HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Trong q trình học tập hồn thành luận văn này, ngồi nỗ lực thân, em hướng dẫn giúp đỡ tận tình thầy cô, anh chị, bạn bè Nhà trường người thân gia đình Trước hết em xin bày tỏ lời cảm ơn tới Ban giám hiệu trường Đại học Y Hà Nội, Phòng quản lý đào tạo sau đại học, Bộ môn Mô học – Phôi thai học tạo điều kiện cho em học tập, nghiên cứu, hoàn thành luận văn Em xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới PGS Nguyễn Thị Bình - người thầy cho em ý kiến quý báu, bảo em nhiều kiến thức chuyên ngành tạo điều kiện thuận giúp đỡ em trình học tập nghiên cứu Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS Nguyễn Khang Sơn – thầy cho em kiến thức chuyên ngành, phương pháp luận quý báu trình học tập nghiên cứu Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Mạnh Hà – người trực tiếp tận tình bảo, hướng dẫn, giúp đỡ em suốt trình làm nghiên cứu Em xin chân thành cảm ơn thầy cô Hội đồng thông qua đề cương Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp đóng góp cho em nhiều ý kiến quý báu, giúp đỡ em sữa chữa thiếu sót luận văn Em xin chân thành cảm ơn thầy cô, anh chị Bộ môn Mô học – Phôi thai học giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em trình nghiên cứu Cuối cùng, em xin bày tỏ biết ơn tới gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành đề tài Hà Nội, ngày tháng Lê Ngọc Dung năm 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Tác giả luận văn Lê Ngọc Dung DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT & THUẬT NGỮ CPA CSF DNA ICSI IM IUI IVF NP PR ROS WHO Cryoprotective Agent / Chất bảo quản lạnh Cryosurvival factor / Chỉ số sống sót sau bảo quản lạnh Desoxyribonucleic acid Intracytoplasmic Sperm Injection / Tiêm tinh trùng vào bào tương nỗn Immotile / khơng di động Intra Uterine Insemination / Bơm tinh trùng vào buồng tử cung In vivo fertilization / Thụ tinh ống nghiệm Non – Progressive Motility / di động không tiến tới Progressive Motility / Di động tiến tới Reactive Oxygen Species / Các gốc oxy phản ứng World Health Organization / Tổ chức Y tế giới MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Khái niệm vơ sinh tình hình vơ sinh nam giới Việt Nam 1.1.1 Khái niệm vô sinh, vô sinh nam 1.1.2 Tình hình vơ sinh vơ sinh nam giới Việt Nam 1.2 Bảo quản lạnh tinh trùng người .6 1.2.1 Lịch sử phát triển .6 1.2.2 Các phương pháp bảo quản lạnh .7 1.2.3 Ảnh hưởng trình bảo quản lạnh lên tinh trùng 1.3 Các phương pháp xử lý mẫu tinh dịch trước bảo quản lạnh .13 1.3.1 Rửa đơn .14 1.3.2 Phương pháp dựa di chuyển tinh trùng 14 1.3.3 Phương pháp ly tâm dựa vào thang nồng độ 17 1.4 Những nghiên cứu bảo quản lạnh sâu mẫu tinh trùng thiểu tinh 19 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.2 Tiêu chuẩn chọn đối tượng nghiên cứu 21 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu .21 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu .22 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu .22 2.2.4 Thời gian địa điểm nghiên cứu 22 2.3 Kỹ thuật tiêu nghiên cứu 22 2.3.1 Kỹ thuật nghiên cứu 22 2.3.2 Các tiêu nghiên cứu 27 2.4 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 27 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ .28 3.1 Đặc điểm mẫu tinh dịch nghiên cứu .28 3.1.1 Phân bố mẫu nghiên cứu theo lứa tuổi 28 3.1.2 Đặc điểm chung đại thể 29 3.1.3 Đặc điểm chung vi thể 29 3.2 Chất lượng tinh trùng mẫu tinh dịch thiểu tinh sau lọc rửa đơn thang nồng độ không liên tục .30 3.2.1 Chất lượng tinh trùng mẫu tinh dịch thiểu tinh sau lọc rửa đơn .30 3.2.2 Chất lượng tinh trùng mẫu tinh dịch thiểu tinh sau lọc rửa phương pháp thang nồng độ 31 3.2.3 So sánh hiệu lọc rửa hai phương pháp 32 3.3 Ảnh hưởng việc bảo quản lạnh sâu mẫu tinh trùng .34 3.3.1 Chất lượng mẫu tinh trùng sau bảo quản lạnh 34 3.3.2 Đánh giá mối tương quan số số trước bảo quản đến chất lượng tinh trùng sau bảo quản .35 3.4 So sánh chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu tươi, mẫu lọc rửa đơn thang nồng độ 44 3.4.1 So sánh chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu mẫu tươi với mẫu lọc rửa đơn thang nồng độ .44 3.4.2 So sánh chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu tươi với mẫu lọc rửa đơn thang nồng độ nhóm thiểu tinh với di động bình thường 46 3.4.3 So sánh chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu tươi với mẫu lọc rửa đơn thang nồng độ nhóm thiểu- nhược tinh 47 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 49 4.1 Về quy trình lọc rửa bảo quản lạnh sâu 49 4.1.1 Lọc rửa tinh trùng bảo quản lạnh 49 4.1.2 Bảo quản lạnh tinh trùng .51 4.1.3 Rã đông 53 4.2 Chất lượng tinh trùng mẫu tinh dịch thiểu tinh sau lọc rửa đơn thang nồng độ không liên tục .54 4.3 Chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu mẫu tinh dịch thiểu tinh sau lọc rửa đơn thang nồng độ không liên tục 56 4.3.1 Tỷ lệ sống tinh trùng .56 4.3.2 Tỷ lệ di động tinh trùng 57 4.3.3 Mối tương quan số số trước bảo quản đến chất lượng tinh trùng sau rã đông 58 4.4 So sánh chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu mẫu tươi với mẫu lọc rửa đơn thang nồng độ 61 KẾT LUẬN 67 KHUYẾN NGHỊ VÀ HƯỚNG NGHIÊN CỨU TIẾP THEO 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Chất lượng tinh dịch mẫu nghiên cứu 29 Bảng 3.2 Chất lượng tinh dịch thiểu tinh sau lọc rửa đơn 30 Bảng 3.3 Chất lượng tinh dịch thiểu tinh sau lọc rửa mini thang nồng độ không liên tục .31 Bảng 3.4 Mật độ tinh trùng tỷ lệ sống sau lọc rửa hai phương pháp rửa đơn mini thang nồng độ không liên tục 32 Bảng 3.5 Tổng số tinh trùng di động sau lọc rửa hai phương pháp rửa đơn mini thang nồng độ không liên tục 33 Bảng 3.6 Hình thái tinh trùng bình thường sau lọc rửa hai phương pháp rửa đơn mini thang nồng độ không liên tục 33 Bảng 3.7 Chất lượng tinh trùng nhóm sau bảo quản lạnh .34 Bảng 3.8 So sánh mật độ tỷ lệ sống tinh trùng trước sau bảo quản lạnh 44 Bảng 3.9 So sánh tỷ lệ (%) di động tiến tới tổng số tinh trùng di động (triệu/ml) trước sau bảo quản lạnh .44 Bảng 3.10 So sánh chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu mẫu tinh dịch thiểu tinh lọc rửa đơn thang nồng độ 45 Bảng 3.11: So sánh số chất lượng tinh trùng (%) sau bảo quản lạnh mẫu tươi với mẫu lọc rửa đơn thang nồng độ nhóm thiểu tinh với di động bình thường 46 Bảng 3.12: So sánh số chất lượng tinh trùng (%) sau bảo quản lạnh mẫu tươi với mẫu lọc rửa đơn thang nồng độ nhóm thiểu- nhược tinh .47 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biều đồ 3.1 Phân bố mẫu nghiên cứu theo lứa tuổi 28 Biểu đồ 3.2 Tỷ lệ tinh trùng di động sau lọc rửa hai phương pháp rửa đơn mini thang nồng độ không liên tục 32 Biểu đồ 3.3 Mối tương quan mật độ tinh trùng với chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu tươi .35 Biểu đồ 3.4 Mối tương quan mật độ tinh trùng với chất lượng tinh trùng sau bảo quản mẫu rửa đơn 36 Biểu đồ 3.5 Mối tương quan mật độ tinh trùng với chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu lọc rửa mini thang nồng độ không liên tục 37 Biểu đồ 3.6 Mối tương quan tỷ lệ sống với chất lượng tinh trùng sau bảo quản mẫu tươi 38 Biểu đồ 3.7 Mối tương quan tỷ lệ sống với chất lượng tinh trùng sau bảo quản mẫu rửa đơn 39 Biểu đồ 3.8 Mối tương quan tỷ lệ sống với chất lượng tinh trùng sau bảo quản mẫu lọc rửa mini thang nồng độ không liên tục 40 Biểu đồ 3.9 Mối tương quan tỷ lệ hình thái bình thường với chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu tươi 41 Biểu đồ 3.10: Mối tương quan tỷ lệ hình thái bình thường với chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu rửa đơn .42 Biểu đồ 3.11: Mối tương quan tỷ lệ hình thái bình thường với chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh mẫu lọc rửa mini thang nồng độ không liên tục 43 ĐẶT VẤN ĐỀ Theo WHO 2010, có 8- 10% cặp vợ chồng vơ sinh, vơ sinh nam chiếm 30% mà nguyên nhân hóa trị ung thư, mắc bệnh tự miễn, quai bị… gây giảm sút chất lượng tinh dịch (thiểu tinh, nhược tinh, vơ tinh…) Chính vậy, bảo quản lạnh tinh trùng kỹ thuật quan trọng việc bảo tồn khả sinh sản nam giới, giúp họ thực kỹ thuật hỗ trợ sinh sản, đặc biệt kỹ thuật thụ tinh nhân tạo bơm tinh trùng trực tiếp vào buồng tử cung (Intrauterine insemination- IUI) – kỹ thuật đơn giản có tỷ lệ thành cơng cao [1] Mặc dù bảo quản lạnh tinh trùng có nhiều tiến bộ, chất lượng tinh trùng sau rã đông có tỷ lệ lớn tinh trùng chết khả di động, đặc biệt mẫu tinh dịch bất thường thường Tỷ lệ tinh trùng sống sau bảo quản lạnh mẫu tinh trùng bất thường (29%) so với mẫu tinh trùng bình thường (48%) [2], để tăng hiệu phương pháp IUI cần có tối thiểu triệu tinh trùng di động bơm vào buồng tử cung [3] Việc tăng tỷ lệ sống, khả di động mẫu tinh dịch thiểu tinh giúp tăng hội thành cơng giảm chi phí điều trị vô sinh Các nghiên cứu trước mẫu tinh dịch bình thường tách tinh trùng khỏi tinh tương phương pháp thang nồng độ không liên tục rửa đơn trước đơng lạnh cải thiện đáng kể khả vận động tinh trùng so với phương pháp thang nồng độ Liệu kỹ thuật chuẩn bị tinh trùng có thực cải thiện khả sống di động sau rã đông mẫu tinh dịch thiểu tinh khơng? Chính chúng tơi tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu phương pháp tối ưu chuẩn bị tinh trùng bảo quản lạnh sâu mẫu tinh dịch thiểu tinh” với mục tiêu: 64 mẫu tinh trùng bảo quản lạnh chuẩn bị lọc rửa bơi lên, sau rã đơng khả di động nguyên vẹn cực đầu tốt [61] Năm 2004, Madeleine Counsel tiến hành nghiên cứu chất lượng mẫu tinh dịch thiểu tinh chuẩn bị kỹ thuật bơi lên ly tâm thang nồng độ trước bảo quản lạnh kết luận so sánh tỷ lệ sống sau rã đông với mẫu tinh dịch bảo quản tươi thấy phường pháp ly tâm thang nồng độ cải thiện tỉ lệ sống mẫu tinh dịch thiểu tinh phương pháp bơi lên có lợi cho tinh dịch bình thường [56] Theo Areepan Sophonsritsuk (2005), mẫu thiểu tinh việc lọc rửa thang nồng độ Percoll trước sau bảo quản lạnh số lượng tinh trùng di động cao so với mẫu tinh dịch tươi không lọc rửa [57] Trong nghiên cứu khác Allamaneni (2005) kết phương pháp ly tâm thang nồng độ cho chất lượng tinh trùng sau rã đông tốt so với phương pháp bơi lên, đặc biệt mẫu tinh trùng yếu [55] Một nghiên cứu Brugnon cải thiện chất lượng tinh trùng sau rã đông với mẫu tinh dịch bất thường cho thấy ly tâm thang nồng độ trước đông lạnh lựa chọn mẫu tinh trùng với khả đề kháng tốt trình bảo quản lạnh bổ sung Hypotaurine cải thiện màng tế bào bảo vệ tinh trùng Kết cho thấy chất lượng sau rã đông đông mẫu tinh trùng bất thường tốt so với bảo quản tươi [58] Sự khác biệt giải thích diện tinh trùng chết, mảnh vỡ tế bào, vi khuẩn bạch cầu gây ảnh hưởng xấu đến sống sót tinh trùng khả sinh sản sau rã đơng thơng qua q trình tạo ROS, trường hợp vậy, việc chuẩn bị tinh trùng kỹ thuật thang nồng độ giúp phòng ngừa q trình chết tế bào stress gốc oxy tự Theo nghiên cứu Wang AW cộng (1997) kết luận việc giảm nhiệt độ từ từ trình bảo quản lạnh dẫn tới hình thành 65 ROS đáng kể từ tế bào tinh dịch: tinh trùng chết, bạch cầu ROS đặc biệt tăng lên làm lạnh mẫu tinh dịch có nhiều 0,5 triệu bạch cầu Việc loại bỏ bạch cầu từ mẫu tinh dịch sử dụng chất chống oxy hóa trước bảo quản lạnh cải tiện khả sống chức tinh trùng [24] Mặt khác, nghiên cứu Turk S (2014) qua so sánh nhóm nam giới khỏe mạnh có số lượng chất lượng tinh trùng bình thường với nhóm thiểu tinh cho thấy có giảm nồng độ kẽm, chất chống oxy hóa tỷ lệ chất ức chế di động tinh trùng cao tinh dịch [85] Các chất nguyên nhân gây rối loạn di động tinh trùng sau hóa lỏng tinh dịch cản trở thẩm thấu chất bảo vệ lạnh vào tinh trùng Việc lọc rửa tinh trùng trước bảo quản lạnh giúp loại bỏ phần lớn chất ức chế di động tinh trùng, cải thiện được chất lượng tinh trùng sau rã đông Theo nghiên cứu Nguyễn Thị Minh Tâm “Nghiên cứu đặc điểm tinh dịch đồ theo tiêu chuẩn WHO 2010 nam giới đến khám Trung tâm hỗ trợ sinh sản Bệnh viện Phụ sản Trung ương” năm 2014 cho thấy mẫu tinh dịch thiểu tinh (mật độ < 15 triệu/ml) chiếm 21,9%, có 26% số mẫu xếp loại khả di động (nhược tinh) [86] Trong nghiên cứu này, chúng tơi nhận thấy có khác biệt kết nhóm thiểu tinh với di động bình thường nhóm thiểu nhược tinh kết hợp sau bảo quản lạnh (Bảng 3.11 bảng 3.12) Ở mẫu thiểu tinh với khả di động bình thường (PR 32%), tương tự kết chung toàn mẫu nghiên cứu này, số chất lượng tinh trùng mẫu tươi cao so với mẫu lọc rửa đơn thang nồng độ, khác biệt có ý nghĩa thống kê với p 1triệu/ml lên chất lượng tinh trùng sau rã đông cỡ mẫu lớn hơn, khoảng thời gian (mùa) khác nhau, đủ lớn TÀI LIỆU THAM KHẢO Cooper T.G, Noonan E, S von Eckardstein, et al (2010) World Health Organization reference values for human semen characteristics Hum Reprod Update, 16 (3), 231-45 Hughes R, Zuvela E and Mableson J (1999) The survival of human spermatozoa frozen by three different protocols In Proceedings 11th World Congress on In Vitro Fertilization & Human Reproduction, 349–352 World Health Organization, (2010), WHO laboratory manual for the Examination and processing of human semen, Bệnh viện Phụ sản Từ Dũ, (1999), Hiếm muộn- Vô sinh kỹ thuật hỗ trợ sinh sản, Thành phố Hồ Chí Minh, Sở Y tế thành phố Hồ Chí Minh, Kildea S and Bowden F J (2000) Reproductive health, infertility and sexually transmitted infections in indigenous women in a remote community in the Northern Territory Aust N Z J Public Health, 24 (4), 382-6 Wyshak G (2001) Infertility in American college alumnae Int J Gynaecol Obstet, 73 (3), 237-42 Mittal R D, Singh G, Srivastava A, et al (2004) Y chromosome microdeletions in idiopathic infertility from Northern India Ann Genet, 47 (4), 331-7 Hellani A, Al-Hassan S, Iqbal M A, et al (2006) Y chromosome microdeletions in infertile men with idiopathic oligo- or azoospermia J Exp Clin Assist Reprod, Ceylan G G, Ceylan C and Elyas H (2009) Genetic anomalies in patients with severe oligozoospermia and azoospermia in eastern Turkey: a prospective study Genet Mol Res, (3), 915-22 10 Lee J.Y, Dada R, Sabanegh E, et al (2011) Role of genetics in azoospermia Urology, 77 (3), 598-601 11 Jungwirth A, Giwercman A, Tournaye H et al (2012) European Association of Urology guidelines on Male Infertility: the 2012 update Eur Urol, 62 (2), 324-32 12 Trần Thị Trung Chiến, Trần Văn Hanh cs (2002) Nghiên cứu số vấn đề vô sinh nam giới kỹ thuật lọc rửa, lưu trữ tinh trùng để điều trị vô sinh Đề tài cấp nhà nước, 13 Nguyễn Khắc Liêu (2003) Đại cương vơ sinh: Chẩn đốn điều trị thiểu sinh sản Viện bảo vệ bà mẹ trẻ sơ sinh, Bộ Y tế, 7- 14 Trần Thị Phương Mai, Nguyễn Ngọc Phượng and CS, (2007), Hiếm muộn-vô sinh kỹ thuật hỗ trợ sinh sản, NXB Y học, Hà Nội 15 Nguyễn Viết Tiến and cs, (2009), Phân bố tỷ lệ mắc vô sinh yếu tố ảnh hưởng đến vô sinh Việt Nam năm 2009, Hội thảo Việt Pháp 2011, Hà Nội 3/2011 16 Gianaroli L, Magli M C, Stanghellini MM, et al (2012) DNA integrity is maintained after freeze-drying of human spermatozoa Fertil Steril, 97 (5), 1067-1073 e1 17 Ward F, Rizos D, Boland M P, et al (2003) Effect of reducing sperm concentration during IVF on the ability to distinguish between bulls of high and low field fertility: work in progress Theriogenology, 59 (7), 1575-84 18 Cavalcante M P, Rocha Mde P, Dias M L, et al (2008) Interference of age on semen quality Rev Bras Ginecol Obstet, 30 (11), 561-5 19 Patrik Stanic, Marijan Tandara, Zdenko Sonicki, et al (2000) Comparison of protective media and freezing techniques for cryopreservation of human semen European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology, 91 (1), 65-70 20 Said T M, Gaglani A and Agarwal A (2010) Implication of apoptosis in sperm cryoinjury Reprod Biomed Online, 21 (4), 456-62 21 P Mazur, WF Rall and N Rigopoulos (1981) Relative contributions of the fraction of unfrozen water and of salt concentration to the survival of slowly frozen human erythrocytes Biophysical Journal, 36 (3), 653-675 22 Roy H Hammerstedt and James K Graham (1992) Cryopreservation of poultry sperm: the enigma of glycerol Cryobiology, 29 (1), 26-38 23 Y Chen and R Z Liu (2007) Cryopreservation of spermatozoa Zhonghua Nan Ke Xue, 13 (8), 734-8 24 Ai Wei Wang, Hua Zhang, Isao Ikemoto, et al (1997) Reactive oxygen species generation by seminal cells during cryopreservation Urology, 49 (6), 921-925 25 D LLannou (1999) Influence of seminal plasma on cryopreservation of human spermatozoa in a biological material‐free medium: study of normal and low‐quality semen International journal of andrology, 22 (3), 190-196 26 S C Esteves, D M Spaine and A P Cedenho (2007) Effects of pentoxifylline treatment before freezing on motility, viability and acrosome status of poor quality human spermatozoa cryopreserved by the liquid nitrogen vapor method Braz J Med Biol Res, 40 (7), 985-92 27 Nguyễn Phương Thảo Tiên, (2007), Đánh giá chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu mẫu tinh trùng người lọc rửa, Luận văn Thạc sỹ Y học, Trường Đại học Y Hà Nội 28 K Terai, K Yoshida, M Yoshiike, et al (2010) Association of seminal plasma motility inhibitors/semenogelins with sperm in asthenozoospermiainfertile men Urologia internationalis, 85 (2), 209-215 29 Zhiling Li, Qionglin Lin, Rongju Liu, et al (2010) Protective effects of ascorbate and catalase on human spermatozoa during cryopreservation Journal of andrology, 31 (5), 437-444 30 S Verza Jr, C M Feijo and S C Esteves (2009) Resistance of human spermatozoa to cryoinjury in repeated cycles of thaw-refreezing Int Braz J Urol, 35 (5), 581-90; discussion 591 31 Leah Yogev, Sandra E Kleiman, Esther Shabtai, et al (2010) Long-term cryostorage of sperm in a human sperm bank does not damage progressive motility concentration Human reproduction, deq041 32 Phạm Thị Thu Thủy, (2011), Đánh giá chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu mẫu nhược tinh lọc rửa, Luận văn Thạc sỹ Y học, Trường Đại học Y Hà Nội 33 J Auger, N Sermondade and F Eustache (2016) Semen quality of 4480 young cancer and systemic disease patients: baseline data and clinical considerations Basic Clin Androl, 26 34 C Di Bisceglie, A Bertagna, E R Composto, et al (2013) Effects of oncological treatments on semen quality in patients with testicular neoplasia or lymphoproliferative disorders Asian J Androl, 15 (3), 425-9 35 X W Nie, Y Qian, C Y Liu, et al (2010) [Semen cryopreservation applied to intrauterine insemination cycles for oligospermia and asthenospermia in infertile men] Zhonghua Nan Ke Xue, 16 (3), 232-5 36 A Botchan, R Hauser, R Gamzu, et al (1997) Sperm quality in Hodgkin's disease versus non-Hodgkin's lymphoma Hum Reprod, 12 (1), 73-6 37 R K Sharma, T Said and A Agarwal (2004) Sperm DNA damage and its clinical relevance in assessing reproductive outcome Asian J Androl, (2), 139-48 38 L K Thomson, S D Fleming, R J Aitken, et al (2009) Cryopreservation-induced human sperm DNA damage is predominantly mediated by oxidative stress rather than apoptosis Hum Reprod, 24 (9), 2061-70 39 T Justice and G Christensen (2013) Sperm cryopreservation methods Methods Mol Biol, 927 209-15 40 K Terai, K Yoshida, M Yoshiike, et al (2010) Association of seminal plasma motility inhibitors/semenogelins with sperm in asthenozoospermia-infertile men Urol Int, 85 (2), 209-15 41 Fleming SD, Meniru Gl, Hall JA, et al., (1997), Semen analysis and sperm preparation: A handbook of intrauterine insemination, Cambridge, Cambrige University Press 42 J D Nicopoullos, P Almeida, M Vourliotis, et al (2010) A decade of sperm washing: clinical correlates of successful insemination outcome Hum Reprod, 25 (8), 1869-76 43 R Henkel, E Kierspel, T Stalf, et al (2005) Effect of reactive oxygen species produced by spermatozoa and leukocytes on sperm functions in non-leukocytospermic patients Fertil Steril, 83 (3), 635-42 44 G Fabozzi, M F Starita, E Rega, et al (2016) Evaluation of the Efficiency of Two Different Freezing Media and Two Different Protocols to Preserve Human Spermatozoa from Cryoinjury Int J Reprod Med, 2016 6059757 45 Tahir Beydola, Rakesh K Sharma and Ashok Agarwal, (2014), Medical & Surgical Management of Male Infertility, Jaypee Brothers Medical Publishing, 46 D E Marchesi, H Biederman, S Ferrara, et al (2010) The effect of semen processing on sperm DNA integrity: comparison of two techniques using the novel Toluidine Blue Assay Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 151 (2), 176-80 47 Hồ Mạnh Tường, (2002), Chuẩn bị tinh trùng Thụ tinh nhân tạo, Nhà xuất Y học, 48 S C Esteves, R K Sharma, A J Thomas, Jr., et al (2000) Improvement in motion characteristics and acrosome status in cryopreserved human spermatozoa by swim-up processing before freezing Hum Reprod, 15 (10), 2173-9 49 S Petyim, C Neungton, I Thanaboonyawat, et al (2014) Sperm preparation before freezing improves sperm motility and reduces apoptosis in post-freezing-thawing sperm compared with post-thawing sperm preparation J Assist Reprod Genet, 31 (12), 1673-80 50 K R Saritha and A Bongso (2001) Comparative evaluation of fresh and washed human sperm cryopreserved in vapor and liquid phases of liquid nitrogen J Androl, 22 (5), 857-62 51 R Perez-Pe, T Muino-Blanco and J A Cebrian-Perez (2001) Sperm washing method alters the ability of seminal plasma proteins to revert the cold-shock damage on ram sperm membrane Int J Androl, 24 (6), 352-9 52 Tahir Beydola, Rakesh K Sharma, W Lee, et al (2013) Sperm preparation and selection techniques Male Infertility Practice, 244-251 53 Eilish T Donnelly, E Kristine Steele, Neil McClure, et al (2001) Assessment of DNA integrity and morphology of ejaculated spermatozoa from fertile and infertile men before and after cryopreservation Human reproduction, 16 (6), 1191-1199 54 Đào Thị Thúy Phượng, (2004), Nghiên cứu đánh giá hai phương pháp lọc rửa tinh trùng: bơi lên bậc thang nồng độ, Trường Đại học Y Hà Nội, Hà Nội 55 S S Allamaneni, A Agarwal, S Rama, et al (2005) Comparative study on density gradients and swim-up preparation techniques utilizing neat and cryopreserved spermatozoa Asian J Androl, (1), 86-92 56 M Counsel, R Bellinge and P Burton (2004) Vitality of oligozoospermic semen samples is improved by both swim-up and density gradient centrifugation before cryopreservation J Assist Reprod Genet, 21 (5), 137-42 57 Areepan Sophonsritsuk, Wicharn Choktanasiri and Sawaek Weerakiet (2005) The optimal human sperm cryopreservation for small volume semen J Med Assos Thai, 82 (2), 58 F Brugnon, L Ouchchane, H Pons-Rejraji, et al (2013) Density gradient centrifugation prior to cryopreservation and hypotaurine supplementation improve post-thaw quality of sperm from infertile men with oligoasthenoteratozoospermia Hum Reprod, 28 (8), 2045-57 59 A Gloria, A Carluccio, L Wegher, et al (2016) Single and double layer centrifugation improve the quality of cryopreserved bovine sperm from poor quality ejaculates J Anim Sci Biotechnol, 30 60 E T Donnelly, N McClure and S E Lewis (2001) Cryopreservation of human semen and prepared sperm: effects on motility parameters and DNA integrity Fertil Steril, 76 (5), 892-900 61 S C Esteves, R K Sharma, A J Thomas, Jr., et al (2000) Effect of swim-up sperm washing and subsequent capacitation on acrosome status and functional membrane integrity of normal sperm Int J Fertil Womens Med, 45 (5), 335-41 62 D Mortimer (1994) Sperm recovery techniques to maximize fertilizing capacity Reprod Fertil Dev, (1), 25-31 63 Gábor Vajta and Zsolt Péter Nagy (2006) Are programmable freezers still needed in the embryo laboratory? Review on vitrification Reproductive biomedicine online, 12 (6), 779-796 64 JK Sherman (1990) Cryopreservation of human semen CRC Handbook of the Laboratory Diagnosis and Treatment of Infertility CRC Press, Boca Raton, 229-259 65 Trịnh Sinh Tiên, (2002), Nghiên cứu áp dụng qui trình bảo quản tinh trùng người lạnh sâu môi trường Glycerol GEYC, Sperm Freeze, Luận văn Thạc sỹ Y học, Trường đại học Y Hà Nội 67 Marcelo B.C, Ana Beatriz G.D, Danielle O.A, et al (2006) Cryopreservation of human semen-comparison between methods of freezing and types of storage Rev Bras Ginecol Obstet, 28(12) 708-714 68 Vladimir Isachenko, Eugenia Isachenko, Igor I Katkov, et al (2004) Cryoprotectant-free cryopreservation of human spermatozoa by vitrification and freezing in vapor: effect on motility, DNA integrity, and fertilization ability Biology of Reproduction, 71 (4), 1167-1173 69 E Isachenko, V Isachenko, Katkov, II, et al (2003) Vitrification of mammalian spermatozoa in the absence of cryoprotectants: from past practical difficulties to present success Reprod Biomed Online, (2), 191-200 70 Tahmineh P, Gholamhossein F, Jafar Soleimani Rad, et al (2007) Vitrification induced apoptosis in spermatozoa from fertile and subfertile men Iranian Journal of Rep Med, 5(3) 117-120 71 Nguyễn Xuân Bái, (2010), Nghiên cứu mối liên quan hình thái tinh trùng với số thông số tinh dịch đồ FSH, LH, Testosteron huyết người có tinh dịch đồ bất thường., Trường Đại học Y Hà Nội, Hà Nội 72 Z Li, Q Lin, R Liu, et al (2010) Protective effects of ascorbate and catalase on human spermatozoa during cryopreservation J Androl, 31 (5), 437-44 73 KR Saritha and ARIFF BONGSO (2001) Comparative evaluation of fresh and washed human sperm cryopreserved in vapor and liquid phases of liquid nitrogen Journal of andrology, 22 (5), 857-862 75 Ricardo Lozano-Hernandez, Javier Gualdron, Daniel Nava, et al (2016) Effect of seminal hyperviscosity on acrosomal integrity and sperm motility before and after cryopreservation Investigacion clinica, 57 (3), 267-279 76 Joseph Feldschuh, James Brassel, Nancy Durso, et al (2005) Successful sperm storage for 28 years Fertility and sterility, 84 (4), 1017 e3-1017 e4 77 RF Harrison and BL Sheppard (1980) A comparative study in methods of cryoprotection for human semen Cryobiology, 17 (1), 25-32 78 J Dorado, M Hidalgo, A Muñoz, et al (2009) Assessment of goat semen freezability according to the spermatozoa characteristics from fresh and frozen samples Animal reproduction science, 112 (1), 150-157 79 C‐Y Lee, C‐T Lee, C‐H Wu, et al (2012) Kruger strict morphology and post‐thaw progressive motility in cryopreserved human spermatozoa Andrologia, 44 (s1), 81-86 80 X Zhang, Y Zhou, W Xia, et al (2012) Effect of pre‐freezing conditions on the progressive motility recovery rate of human frozen spermatozoa Andrologia, 44 (5), 343-348 81 N Zabludovsky, R Yehuda, A Carmely, et al (2005) Effects of Cryopreservation on Apoptotic Manifestation In Human Sperm Fertility and Sterility, 84 S416 82 M O'connell, N McClure and SEM Lewis (2002) The effects of cryopreservation on sperm morphology, motility and mitochondrial function Human Reproduction, 17 (3), 704-709 83 Eilish T Donnelly, Neil McClure and Sheena EM Lewis (2001) Cryopreservation of human semen and prepared sperm: effects on motility parameters and DNA integrity Fertility and sterility, 76 (5), 892-900 84 Edson Borges, Lia Mara Rossi, Christiany Victor Locambo de Freitas, et al (2007) Fertilization and pregnancy outcome after intracytoplasmic injection with fresh or cryopreserved ejaculated spermatozoa Fertility and sterility, 87 (2), 316-320 85 S Turk, R Mandar, R Mahlapuu, et al (2014) Male infertility: decreased levels of selenium, zinc and antioxidants J Trace Elem Med Biol, 28 (2), 179-85 86 Nguyễn Thị Minh Tâm, (2014), Nghiên cứu đặc điểm tinh dịch đồ theo tiêu chuẩn WHO 2010 nam giới đến khám Trung tâm hỗ trợ sinh sản Bệnh viện Phụ sản Trung ương, Đại học Y Hà Nội, Hà Nội 87 K Gopalkrishnan, V Padwal and D Balaiah (2000) Does seminal fluid viscosity influence sperm chromatin integrity? Archives of andrology, 45 (2), 99-103 ... pháp tối ưu chuẩn bị tinh trùng bảo quản lạnh sâu mẫu tinh dịch thiểu tinh với mục tiêu: Đánh giá chất lượng tinh trùng trước bảo quản mẫu tinh dịch thiểu tinh tươi, sau rửa đơn lọc rửa phương pháp. .. độ ưu tiên sử dụng so với phương pháp bơi lên [3] 1.4 Những nghiên cứu bảo quản lạnh sâu mẫu tinh trùng thiểu tinh Năm 2004, Madeleine Counsel tiến hành nghiên cứu chất lượng mẫu tinh dịch thiểu. .. nghiên cứu bảo quản lạnh sâu mẫu tinh trùng thiểu tinh 19 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.2 Tiêu chuẩn