BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HỒ THU TRANG NGHIÊN CỨU PHÂN BIỆT CÁC LOÀI THUỘC HỌ DÓ ĐẤT (BALANOPHORACEAE RICH.) Ở VIỆT NAM BẰNG ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ SẮC KÝ LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2019 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HỒ THU TRANG 1401621 NGHIÊN CỨU PHÂN BIỆT CÁC LỒI THUỘC HỌ DĨ ĐẤT (BALANOPHORACEAE RICH.) Ở VIỆT NAM BẰNG ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ SẮC KÝ LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: DS.NCS Nguyễn Thanh Tùng Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Trong trình thực hồn thành khóa luận này, tơi nhận nhiều quan tâm, động viên giúp đỡ tận tình từ thầy cơ, gia đình bạn bè Nhân dịp này, tơi xin bày tỏ kính trọng lòng biết ơn sâu sắc đến: DS.NCS Nguyễn Thanh Tùng người thầy tận tụy, nhiệt tình trực tiếp hướng dẫn, bảo để tơi hồn thành khóa luận Cảm ơn bạn Nơng Phương Anh bạn Nguyễn Văn Quân hỗ trợ nhiệt tình động viên suốt thời gian thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu - Trường Đại học Dược Hà Nội, tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ tồn thời gian thực khố luận Xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo, tồn thể thầy giáo, cán Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện để tơi lĩnh hội kiến thức quý giá ngành Dược suốt năm học Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành, sâu sắc tới bố mẹ, gia đình, bạn bè, người thân bên cạnh, động viên, ủng hộ suốt thời gian học tập hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày 17 tháng năm 2019 Sinh viên Hồ Thu Trang MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Vị trí phân loại họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) 1.2 Đặc điểm thực vật họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) 1.2.1 Đặc điểm hình thái họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) 1.2.2 Đặc điểm hạt phấn họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) 1.2.3 Các lồi thuộc họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) Việt Nam 1.3 Thành phần hóa học họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) 1.3.1 Trên giới 1.3.2 Tại Việt Nam 12 1.3.3 Một số nghiên cứu phân biệt lồi thuộc họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) 14 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Nguyên vật liệu, hóa chất, thiết bị nghiên cứu 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Kết nghiên cứu thực vật 23 3.1.1 Đặc điểm thực vật chi Balanophora J.R.&G.Forst 23 3.1.2 Đặc điểm thực vật chi Rhopalocnemis Jungh 33 3.2 Kết nghiên cứu hóa học 34 3.2.1 Định tính sơ nhóm chất hữu phản ứng hóa học 34 3.2.2 Sắc ký lớp mỏng 35 3.3 Bàn luận 42 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Nội dung EtOH Ethanol HPLC High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) HPTLC High performance thin layer chromatography (Sắc ký lớp mỏng hiệu cao) KH Kí hiệu MeOH Methanol MS Mass spectrometry (Khối phổ) NP/PEG Natural products/ Polyethylenglycol P/ư Phản ứng STT Số thứ tự TT Thuốc thử DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Các loài thuộc họ Balanophoraceae Rich ghi nhận Việt Nam 2.1 Mẫu loài thuộc họ Balanophoraceae Rich sử dụng nghiên cứu 15 3.1 So sánh số đặc điểm hình thái lồi thuộc chi Balanophora J.R.&G.Forst 26 3.2 Kết quan sát hạt phấn loài thuộc chi Balanophora J.R.&G.Forst 32 3.3 Kết định tính thành phần hóa học lồi thuộc họ Balanophoraceae Rich 34 3.4 So sánh đặc điểm thực vật hai chi Balanophora J.R.&G.Forst Rhopalocnemis Jungh 42 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Tên hình Trang 3.1 Ảnh chụp hình thái thực vật lồi thuộc chi Balanophora J.R.&G.Forst 28 Ảnh chụp bề mặt “củ” loài thuộc chi Balanophora J.R.&G.Forst Ảnh chụp hoa đực loài thuộc chi Balanophora J.R.&G.Forst 29 3.4 Ảnh chụp hoa loài thuộc chi Balanophora J.R.&G.Forst 30 3.5 Ảnh chụp hạt phấn loài thuộc chi Balanophora J.R.&G.Forst 31 3.6 Ảnh chụp đặc điểm hình thái lồi Rhopalocnemis phalloides 33 3.7 Ảnh chụp sắc ký đồ dịch chiết MeOH dược liệu khai triển hệ dung môi Cloroform – Ether dầu hỏa (3:2) 37 3.8 Ảnh chụp sắc ký đồ dịch chiết MeOH dược liệu khai triển hệ dung môi Ethyl acetat – Acid formic – Nước (8:1:1) 38 39 3.9 Ảnh chụp sắc ký đồ dịch chiết MeOH dược liệu chất đối chiếu khai triển hệ dung môi Cloroform – Ethyl acetat – Acid formic (5:5:1) 3.2 3.3 30 ĐẶT VẤN ĐỀ Họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) họ thực vật nhỏ với khoảng 16 chi 40 loài toàn giới Ở Việt Nam họ Dó đất có chi bao gồm Balanophora J.R.&G.Forst với khoảng 10 lồi tính tới thời điểm chi Rhopalocnemis Jungh với lồi Tại Việt Nam, lồi thuộc họ Dó đất khai thác sử dụng với mục đích chủ yếu để làm thuốc bổ máu, kích thích ăn ngon miệng, hồi phục sức khỏe dùng thuốc để điều trị đau bụng, đau toàn thân, làm thuốc ngâm rượu uống bổ tinh, cường tráng, mạnh gân cốt [3], [4], [8] Tuy nhiên, thực tế thường có nhầm lẫn lồi sử dụng loài lẫn lộn với loài họ Balanophoraceae Rich có hình thái tương đồng, dạng dược liệu khơ khó phân biệt Điều ảnh hưởng đến tác dụng sử dụng dược liệu tổng quan tài liệu cho thấy thành phần hóa học hai chi có khác biệt rõ rệt Quá trình nghiên cứu, thu thập mẫu loài thuộc họ Balanophoraceae Rich Việt Nam phát thêm số loài thuộc chi Balanophora J.R.&G.Forst ghi nhận loài bổ sung cho hệ thực vật Việt Nam bên cạnh số loài ghi nhận tài liệu trước Những nghiên cứu mang tính hệ thống đặc điểm thực vật, thành phần hóa học tác dụng sinh học loài thuộc họ Balanophoraceae Rich Việt Nam cần thiết giúp cho việc nhận biết, phân biệt sử dụng loài thuộc họ Balanophoraceae Rich Việt Nam Nhằm mục tiêu cung cấp thêm thơng tin đặc điểm hình thái thực vật, thành phần hóa học với mục đích bổ sung sở liệu để phân biệt loài thuộc họ Balanophoraceae Rich thu Việt Nam, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu phân biệt lồi thuộc họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) Việt Nam đặc điểm thực vật sắc ký lớp mỏng” với nội dung sau: 1 Mơ tả đặc điểm hình thái, giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu, so sánh đặc điểm thực vật hình thái hạt phấn mẫu loài thuộc họ Balanophorace Rich Việt Nam Định tính sơ thành phần hóa học có lồi nghiên cứu phản ứng hóa học triển khai sắc ký lớp mỏng mẫu loài thuộc họ Balanophorace Rich Việt Nam 2a Lá mọc vòng liên kết thành vỏ bọc dạng ống; tế bào đỉnh vảy bảo vệ có đường biểu bì riêng biệt…………………………… B involucrata 2b Lá mọc xen kẽ; tế bào đỉnh vảy bảo vệ mịn…………………B harlandii 1b Vảy bảo vệ thn dài, hình đầu; hoa gốc cuống vảy bảo vệ trục cụm hoa 3a Đỉnh vảy bảo vệ có nhú…………………………………………… B dioica 3b Đỉnh vảy bảo vệ khơng có nhú 4a Lá đỉnh lớn gốc; cụm hoa có hình elip rộng, hình trứng gần cầu 5a Thân rễ thường tụ lại thành khối; cụm hoa mọc không bị che khuất lá; vảy bảo vệ ngắn có tế bào đỉnh bề mặt xù xì, khơng phức tạp……………………………………………………………… ……B indica 5b Thân rễ có nhánh hình trụ thn dài; hoa nở phần bị che giấu phía lá; vảy bảo vệ có tế bào đỉnh bề mặt xù xì, phức tạp………………………………………………………………… B elongata 4b Tất thường kích thước; hoa hình elip, hình thn, hình trứng 6a Vảy bảo vệ đến 2,3 mm ……………………………………… B polyandra 6b Vảy bảo vệ nhỏ 1,5 mm …………………………………… B laxiflora PHỤ LỤC Cơng thức hóa học hợp chất phân lập từ họ Dó đất (Balanophoraceae Rich ) Việt Nam OH CH3 O H O O pinoresinol (1) H O H 3C HO daucosterol (2) Glc O lupeol (3) HO β-amyrin (4) HO β-sitosterol (5) HO OH (21β)-22-hydroxyhopan-3on (6) O OH (21α)-22-hydroxyhopan-3on (7) O HO epoxyconiferyl alcohol (8) O O OH O O salicifoliol (9) O O HO 5-(hydroxymethyl)-2furaldehyd (10) O HO O O HO HO O ethyl caffeat (11) H3CO CH2OH O CH2OH O HO OH isolariciresinol 4-O-β-Dglucopyranosid (12) OH OH OCH3 OH HO HO OCH3 H3CO HO O OH O O lariciresinol-4-O-β-Dglucopyranosid (13) OH OH CH2OH HO O HO OCH3 OH O OH OH secoisolariciresinol-9′-O-βD-glucopyranosid (14) OCH3 OH CH2OH HO O O CH2OH OCH3 OH OH OH secoisolariciresinol -4-O-βD-glucopyranosid (15) OCH3 OH OH HO OH OH O O OH OH 1-O-E-caffeoyl-β-Dglucopyranose (16) O H3CO HO OH OH O O CH2OH OH coniferin (17) OH 1-hexacosanoylglycerol (18) OH (CH2)22 CH3 O O HO O HO C O methyl gallat (19) CH3 HO H 3C O O HO 4-hydroxy-3methoxycinnamaldehyd (20) H O HO methyl 4-hydroxy cinnamat (21) O H3C HO O HO methyl caffeat (22) O H3C OH HO OH Balanochalcon (23) OH OH HO O O OH OH βhydroxydihydrochalcon(24) OH O OH O OCH3 OCH3 HO O dimethyl-6,9,10trihydroxybenzo[kl]xanthen1,2-dicarboxylat (25) O OH OH HO p-coumaric acid (26) COOH OH HO O OH Quercetin (27) OH OH O H3CO Scopoletin (28) HO O O PHỤ LỤC Biên giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu ... sở liệu để phân biệt loài thuộc họ Balanophoraceae Rich thu Việt Nam, tiến hành đề tài: Nghiên cứu phân biệt loài thuộc họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) Việt Nam đặc điểm thực vật sắc ký lớp. .. phân loại họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) 1.2 Đặc điểm thực vật họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) 1.2.1 Đặc điểm hình thái họ Dó đất (Balanophoraceae Rich.) 1.2.2 Đặc điểm hạt phấn họ. ..BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HỒ THU TRANG 1401621 NGHIÊN CỨU PHÂN BIỆT CÁC LOÀI THUỘC HỌ DÓ ĐẤT (BALANOPHORACEAE RICH.) Ở VIỆT NAM BẰNG ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ SẮC KÝ LỚP MỎNG KHÓA LUẬN TỐT