TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Bộ môn Dược lý KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ BÁN TRƯỜNG DIỄN CỦA TD.WK TRÊN THỰC NGHIỆM A ĐỘC TÍNH CẤP I NGUYÊN LIỆU VÀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 1.1 Nguyên liệu nghiên cứu Viên nang cứng TD.WK Công thức sản phẩm viên nang cứng TD.WK Chiết xuất: Đương qui 90 mg; Curcumin 70 mg; Chiết xuất Tam thất 70 mg; Chiết xuất Thất diệp chi hoa 70 mg; Chiết xuất Đậu mèo rừng 70 mg; Chiết xuất Dừa nước 70 mg; Nattokinase 33,4 mg; Chiết xuất Thạch tùng 25 mg; Chiết xuất Bạch hoa xà thiệt thảo 10 mg; Chiết xuất Bán chi liên 10 mg; Chiết xuất Sâm ngọc linh mg, Phụ liệu (Talc, Mg Stearate) vừa đủ viên Viên nang cứng TD.WK đạt tiêu chuẩn sở công ty Cổ phần Sao Thái Dương sản xuất Liều uống dự kiến người: viên/ngày Lấy 35 viên, bỏ nang, nghiền cối sứ, thêm nước cất thành 60 ml vừa đủ Đây dung dịch cho chuột nhắt trắng uống kim chuyên dụng dùng để nghiên cứu độc tính cấp tính xác định LD50 1.1.2 Đối tượng nghiên cứu Chuột nhắt trắng chủng Swiss, giống, khoẻ mạnh, trọng lượng 18 – 22g Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp Chuột ni phòng thí nghiệm Bộ môn Dược lý 5-7 ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu thức ăn chuẩn dành riêng cho chuột (do Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp), uống nước tự 1.2 Máy móc phục vụ nghiên cứu - Cân điện tử Nhật, độ xác 0,001 gam - Kim đầu tù cho chuột uống - Cốc chia vạch, bơm kim tiêm 1ml 1.3 Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu độc tính cấp thuốc thử TD.WK theo đường uống chuột nhắt trắng Nghiên cứu độc tính cấp xác định LD50 thuốc thử TD.WK chuột nhắt trắng theo đường uống [1], [2], [3] Trước tiến hành thí nghiệm, cho chuột nhịn ăn qua đêm Chuột chia thành lô khác nhau, lô 10 Cho chuột uống thuốc thử TD.WKvới liều tăng dần thể tích để xác định liều thấp gây chết 100% chuột liều cao không gây chết chuột (gây chết 0% chuột) Theo dõi tình trạng chung chuột, trình diễn biến bắt đầu có dấu hiệu nhiễm độc (như nơn, co giật, kích động, tiết…) số lượng chuột chết vòng 72 sau uống thuốc Tất chuột chết mổ để đánh giá tổn thương đại thể Từ xây dựng đồ thị tuyến tính để xác định LD 50 thuốc thử Sau tiếp tục theo dõi tình trạng chuột đến hết ngày thứ sau uống thuốc thử TD.WK 1.4 Xử lý số liệu Các số liệu xử lý thống kê theo thuật toán thống kê T-test Student phần mềm Microsoft Excel Kết nghiên cứu Chuột nhắt trắng uống thuốc thử TD.WK từ liều thấp viên/kg đến liều cao 35 viên/kg Lô chuột uống đến liều 0,20 ml/10 g, lần 24 dung dịch tương đương 35 viên/kg, chuột chết 100 % Theo dõi thấy liều thấp TD.WK từ viên/kg trở xuống khơng có biểu gì, khơng xuất triệu chứng bất thường 72 sau uống thuốc thử Chuột trước chết thấy xuất tím tái, co giật Tỷ lệ chuột chết trình bày bảng Bảng 1: Kết nghiên cứu độc tính cấp Thuốc thử TD.WK Lơ chuột n Lô Lô Lô Lô Lô Lô Lô Lô 10 10 10 10 10 10 10 10 Liều (viên/kg thể trọng) 7,5 10 15 20 25 30 35 Tỷ lệ chết (%) 10 20 70 80 80 90 100 Dấu hiệu bất thường khác Không Không Không Không Không Không Không Không Kết bảng cho thấy: lô chuột uống TD.WK mức liều từ viên/kg trở xuống khơng có biểu độc tính cấp Các lơ chuột uống TD.WKở mức liều từ 7,5 viên/kg đến 35 viên/kg có biểu độc tính cấp Tỷ lệ chuột chết biểu độc cấp tím tái, co giật tỷ lệ thuận với liềuTD.WK Từ kết bảng 1, vẽ đồ thị tuyến tính liều dùng tỷ lệ chuột chết sau Đồ thị 1: Đồ thị tuyến tính liều dùng TD.WK tỷ lệ chuột chết Từ đồ thị tính liều chết 50% TD.WK là: LD50 = 16,59 viên/kg TI= [(16,59/3)x 50]:12 = 23,04 (Chú ý: Tính người trưởng thành 50kg, hệ số ngoại suy chuột nhắt 12, liều người tối đa viên/ngày) Chỉ số điều trị (TI: therapeutic index) (còn gọi cửa sổ cửa sổ điều trị an toàn, TI =LD50/ED50 (Trong nghiên cứu động vật thực nghiệm) Kết luận: Thuốc thử TD.WK khơng có biểu độc tính cấp liều viên/kg Xác định LD50 chuột nhắt trắng thuốc thử TD.WKtrên đường uống g/kg Chỉ số TI= 23,04 Vậy theo Tổ chức Y tế giới, thuốc thử TD.WK thuốc dược liệu có độc tính cấp mức an tồn, chấp nhận [3] TÀI LIỆU THAM KHẢO Gerhard Vogel H (2008), Drug discovery and evaluation Pharmacological assays, Springer OECD (2001), Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation, acute oral toxicity, Environmental Health and Safety Monograph Series on Testing and Assesment No 19 World Health Organization (2000), Working group on the safety and efficacy of herbal medicine, Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization B ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN 03 THÁNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU: 1.1 Đối tượng nghiên cứu: 1.1.1 Thuốc hoá chất nghiên cứu: 1.1.1.1 Thuốc nghiên cứu: Viên nang cứng TD.WK Công thức sản phẩm viên nang cứng TD.WK Chiết xuất: Đương qui 90 mg; Curcumin 70 mg; Chiết xuất Tam thất 70 mg; Chiết xuất Thất diệp chi hoa 70 mg; Chiết xuất Đậu mèo rừng 70 mg; Chiết xuất Dừa nước 70 mg; Nattokinase 33,4 mg; Chiết xuất Thạch tùng 25 mg; Chiết xuất Bạch hoa xà thiệt thảo 10 mg; Chiết xuất Bán chi liên 10 mg; Chiết xuất Sâm ngọc linh mg, Phụ liệu (Talc, Mg Stearate) vừa đủ viên Viên nang cứng TD.WK đạt tiêu chuẩn sở công ty Cổ phần Sao Thái Dương sản xuất Liều uống dự kiến người: viên/ngày 1.1.1.2.Hoá chất: - Kit định lượng enzym chất chuyển hoá máu : ALT (alanin aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), bilirubin toàn phần, albumin, cholesterol toàn phần, creatinin hãng Hospitex Diagnostics (Italy) hãng DIALAB GmbH (Áo), định lượng máy sinh hóa bán tự động Erba Ấn Độ - Các dung dịch xét nghiệm máu hãng Exigo, định lượng máy Exigo – Boule Medical AB Thụy Điển - Các hoá chất xét nghiệm làm tiêu mô bệnh học 1.1.2 Động vật thực nghiệm: hai giống, khoẻ mạnh Chuột cống trắng chủng Wistar, lông trắng, trọng lượng 180-220 g Trung tâm cung cấp động vật thí nghiệm Đan Phượng – Hà Tây cung cấp Động vật ni phòng thí nghiệm -10 ngày trước nghiên cứu thức ăn chuẩn dành riêng (do Công ty liên doanh Guyomarc’h-VCN sản xuất), uống nước tự 1.2 Phương pháp nghiên cứu: Nghiên cứu độc tính bán trường diễn chuột cống trắng theo đường uống theo hướng dẫn Tổ chức y tế giới thuốc có nguồn gốc dược liệu [4]: Chuột cống trắng chia làm lô, lô 10 con, nhốt riêng chuồng - Lô chứng: uống nước cất 1ml/kg/ngày - Lô trị 1: uống TD.WK liều 0,36 viên/kg (liều có tác dụng tương đương người, tính theo hệ số 6) - Lơ trị 2: uống TD.WK liều 1,08 viên /kg (gấp lần lô trị 1) Chuột cống trắng uống nước thuốc thử 90 ngày liên tục, ngày lần vào buổi sáng Các tiêu theo dõi trước trình nghiên cứu: - Tình trạng chung, thể trọng chuột cống trắng - Đánh giá chức phận tạo máu thông qua số lượng hồng cầu, thể tích trung bình hồng cầu, hàm lượng hemoglobin, hematocrit, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu số lượng tiểu cầu - Đánh giá chức gan thông qua định lượng chất chuyển hố máu: bilirubin tồn phần, albumin cholesterol - Đánh giá mức độ hủy hoại tế bào gan thông qua định lượng hoạt độ enzym máu: ALT, AST - Đánh giá chức thận thông qua định lượng nồng độ creatinin huyết Các thông số theo dõi kiểm tra vào trước lúc uống thuốc, sau 30 ngày, sau 60 ngày sau 90 ngày uống thuốc - Mô bệnh học: Sau 90 ngày uống thuốc, chuột cống trắng mổ để quan sát đại thể toàn quan Kiểm tra ngẫu nhiên cấu trúc vi thể gan, thận 30% số chuột cống trắng lô Các xét nghiệm vi thể thực Trung tâm Nghiên cứu phát sớm ung thư (do PGS.TS Lê Đình Roanh đọc kết vi thể) 1.3 Xử lý số liệu: Các số liệu nghiên cứu xử lý thống kê theo phương pháp t-test Student Số liệu biểu diễn dạng: X ± SD Sự khác biệt có ý nghĩa p < 0,05 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 2.1 Tình trạng chung thay đổi thể trọng chuột cống trắng: 2.1.1 Tình trạng chung: Trong thời gian thí nghiệm, chuột cống trắng lơ chứng sinh học hoạt động bình thường, nhanh nhẹn, mắt sáng, lông mượt, ăn uống tốt, phân khô Trong tuần đầu uống thuốc, chuột lô uống TD.WK liều có tượng phân nát, ăn, sau phân khơ trở lại, chuột ăn uống bình thường hoạt động trước, lơng xù không mượt 2.1.2 Sự thay đổi thể trọng chuột cống trắng: Bảng 2.1 Ảnh hưởng TD.WK đến thể trọng chuột cống trắng Lô chứng Thời gian Trọng lượng (kg) Trước uống thuốc 180,00 ± 30,09 Sau 30 ngày uống thuốc 198,00 ± 40,22 P trước – sau < 0,05 Sau 60 ngày uống thuốc 208,00 ± 37,06 P trước – sau < 0,05 Sau 90 ngày uống thuốc 232,50 ± 31,64 P trước – sau < 0,05 % tăng trọng lượng Lô trị Trọng lượng (kg) % tăng trọng lượng 181,50 ± 21,35 10,0 215,00 ± 23,69 225,00 ± 38,66 18,5 213,00 ± 37,43 < 0,05 % tăng trọng lượng 191,00 ± 34,46 P (t-test Student) > 0,05 8,8 > 0,05 10,0 > 0,05 10,3 < 0,05 > 0,05 24,0 < 0,05 29,2 Trọng lượng (kg) 175,50 ± 22,29 < 0,05 15,6 Lô trị 193,00 ± 34,09 > 0,05 17,4 193,50 ± 35,90 > 0,05 Kết bảng 2.1 cho thấy: sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống TD.WK, trọng lượng chuột cống trắng lô (lô chứng lô trị) tăng so với trước nghiên cứu Ở thời điểm sau 90 ngày, chuột lô uống TD.WK liều tương đương lâm sàng có mức tăng trọng lượng so với lô chứng sinh học khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê Chuột lơ uống TD.WK liều gấp lần liều lâm sàng có trọng lượng tăng lơ chứng sinh học thời điểm nghiên cứu, đặc biệt sau 90 ngày, mức tăng thấp rõ rệt với p < 0,05 2.2 Đánh giá chức tạo máu: Bảng 2.2 Ảnh hưởng TD.WK đến số lượng hồng cầu máu chuột cống trắng Số lượng hồng cầu ( T/l ) Thời gian Lô chứng Lô trị P Lô trị (t- test Student) Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 90 ngày uống thuốc p (trước - sau) 8,30 ± 0,23 8,31 ± 0,58 8,36 ± 0,60 > 0,05 8,44 ± 0,74 7,88 ± 1,31 8,04 ± 0,69 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 8,77 ± 0,68 8,49 ± 0,59 8,46 ± 0,78 > 0,05 > 0,05 > 0,05 8,58 ± 0,85 8,66 ± 1,03 8,84 ± 0,52 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0.05 > 0,05 Kết bảng 2.2 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày, 90 ngày uống TD.WK, xét nghiệm đánh giá chức tạo máu số lượng hồng cầu lô trị (uống TD.WK liều tương đương lâm sàng 0,36 viên/kg/ngày) lô trị (uống TD.WK liều gấp lần lâm sàng 1,08 viên/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lơ chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) Bảng 2.3 Ảnh hưởng TD.WK đến hàm lượng huyết sắc tố máu chuột cống trắng Thời gian Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc Hàm lượng huyết sắc tố (g/dl ) Lô chứng Lô trị Lô trị (t- test Student) 12,31 ± 0,44 12,59 ± 1,05 12,50 ± 0,86 > 0,05 12,08 ± 2,88 12,22 ± 2,05 12,55 ± 1,28 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 13,23 ± 1,27 13,26 ± 1,15 13,27 ± 1,19 > 0,05 > 0,05 > 0,05 13,00 ± 1,49 13,40 ± 1,38 13,13 ± 1,14 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước – sau) Sau 90 ngày uống thuốc p p (trước - sau) > 0,05 > 0,05 Kết bảng 2.3 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống TD.WK, xét nghiệm đánh giá chức tạo hàm lượng huyết sắc tố lô trị (uống TD.WK liều tương đương lâm sàng 0,36 viên/kg/ngày) lô trị (uống TD.WK liều gấp lần lâm sàng 1,08 viên/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) 10 2.4 Đánh giá chức gan: Bảng 2.11 Ảnh hưởng TD.WK đến nồng độ bilirubin toàn phần máu chuột cống trắng Thời gian Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 90 ngày uống thuốc p (trước - sau) Bilirubin tồn phần(mmol/l) p Lơ chứng Lô trị Lô trị (t- test Student) 13,50 ± 0,33 13,60 ± 0,43 13,58 ± 0,40 > 0,05 13,62 ± 0,46 13,52 ± 0,51 13,51 ± 0,47 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 13,52 ± 0,45 13,59 ± 0,36 13,48 ± 0,43 > 0,05 > 0,05 > 0,05 13,32 ± 0,51 13,59 ± 0,27 13,41 ± 0,49 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Kết bảng 2.11 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống TD.WK, xét nghiệm đánh giá chức gan nồng độ bilirubin toàn phần, máu chuột cống trắng lô trị (uống TD.WK liều tương đương lâm sàng 0,36 viên/kg/ngày) lô trị (uống TD.WK liều gấp lâm sàng 1,08 viên/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) 18 Bảng 2.12 Ảnh hưởng TD.WK đến nồng độ albumin máu chuột cống trắng Thời gian Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 90 ngày uống thuốc p (trước - sau) p Albumin (g/dl) Lô chứng Lô trị Lô trị (t- test Student) 2,92 ± 0,13 2,87 ± 0,36 2,87 ± 0,26 > 0,05 2,78 ± 0,25 2,58 ± 0,32 2,56 ± 0,26 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 2,98 ± 0,49 2,91 ± 0,41 3,08 ± 0,40 > 0,05 > 0,05 > 0,05 3,05 ± 0,39 2,85 ± 0,39 2,98 ± 0,40 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Kết bảng 2.12 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống TD.WK, xét nghiệm đánh giá chức gan nồng độ albumin máu chuột cống trắng lô trị (uống TD.WK liều tương đương lâm sàng 0,36 viên/kg/ngày) lô trị (uống TD.WK liều gấp lâm sàng 1,08 viên/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) 19 Bảng 2.13 Ảnh hưởng TD.WK đến nồng độ cholesterol toàn phần máu chuột cống trắng Cholesterol toàn phần (mmol/l) Thời gian Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 90 ngày uống thuốc p (trước - sau) p (t- test Student) Lô chứng Lô trị Lô trị 1,42 ± 0,15 1,57 ± 0,38 1,53 ± 0,29 > 0,05 1,60 ± 0,26 1,44 ± 0,28 1,36 ± 0,27 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 1,57 ± 0,22 1,56 ± 0,35 1,62 ± 0,20 > 0,05 > 0,05 > 0,05 1,66 ± 0,31 1,59 ± 0,21 1,49 ± 0,22 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Kết bảng 2.13 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống TD.WK, xét nghiệm đánh giá chức gan nồng độ cholesterol toàn phần máu chuột cống trắng lô trị (uống TD.WK liều tương đương lâm sàng 0,36 viên/kg/ngày) lô trị (uống TD.WK liều gấp lâm sàng 1,08 viên/kg/ngày) khơng có khác biệt có ý nghĩa so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) 20 2.5 Đánh giá chức thận: Bảng 2.14 Ảnh hưởng TD.WK đến nồng độ creatinin máu chuột cống trắng Creatinin (mg/dl) Thời gian Trước uống thuốc Sau 30 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 60 ngày uống thuốc p (trước - sau) Sau 90 ngày uống thuốc p (trước - sau) P (t- test Student) Lô chứng Lô trị Lô trị 1,07 ± 0,07 1,04 ± 0,05 1,05 ± 0,07 > 0,05 1,07 ± 0,09 1,04 ± 0,10 1,08 ± 0,11 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 1,07 ± 0,05 1,04 ± 0,05 1,05 ± 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 1,07 ± 0,12 1,06 ± 0,05 1,06 ± 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Kết bảng 2.14 cho thấy: Sau 30 ngày, 60 ngày 90 ngày uống TD.WK, lô trị (uống TD.WK liều 0,36 viên/kg/ngày) lô trị (uống TD.WK liều 1,08 viên/kg/ngày), nồng độ creatinin máu chuột cống trắng khơng có thay đổi khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô chứng so sánh hai thời điểm trước sau uống thuốc thử (p>0,05) 21 2.6 Thay đổi mô bệnh học: Sau 90 ngày uống thuốc 2.6.1 Đại thể: Trên tất chuột cống trắng thực nghiệm (cả lô chứng lơ trị), khơng quan sát thấy có thay đổi bệnh lý mặt đại thể quan tim, phổi, gan, lách, tuỵ, thận hệ thống tiêu hoá chuột cống trắng 2.6.2 Vi thể: - Hình thái vi thể gan: + Lơ chứng: 2/3 mẫu bệnh phẩm gan có kết bình thường 1/3 mẫu bệnh phẩm gan có thối hóa nhẹ tế bào gan + Lô trị (uống TD.WK 0,36 viên/kg/ngày): 2/3 mẫu bệnh phẩm gan có kết bình thường 1/3 mẫu bệnh phẩm gan có thối hóa nhẹ tế bào gan + Lô trị (uống TD.WK 1,08 viên/kg/ngày): 2/3 mẫu bệnh phẩm gan có kết bình thường 1/3 mẫu bệnh phẩm có thối hóa nhẹ tế bào gan Ảnh 1: Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô chứng (chuột cống trắng số 102) (HE x 400) Tế bào gan thối hóa nhẹ (HE x 400: Nhuộm Hematoxylin - Eosin, độ phóng đại 400 lần) 22 Ảnh 2: Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô chứng (chuột cống trắng số 103) (HE x 400) Tế bào gan bình thường Ảnh 3: Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô chứng (chuột cống trắng số 105) (HE x 400) Tế bào gan bình thường (HE x 400: Nhuộm Hematoxylin - Eosin, độ phóng đại 400 lần) 23 Ảnh 4: Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 135) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan thối hóa nhẹ Ảnh 5: Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 129) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan bình thường 24 Ảnh 6: Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lơ trị (chuột cống trắng số 136) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan bình thường Ảnh 7: Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 114) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan thối hóa nhẹ 25 Ảnh 8: Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 118) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan bình thường Ảnh 9: Hình thái vi thể gan chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 124) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Tế bào gan bình thường 26 - Hình thái vi thể thận: + Lơ chứng: 3/3 mẫu thận bình thường + Lơ trị (uống TD.WK liều 0,36 viên/kg/ngày): 3/3 mẫu thận bình thường + Lơ trị (uống TD.WK liều 1,08 viên/kg/ngày): 3/3 mẫu thận bình thường Ảnh 10: Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lô chứng (chuột cống trắng số 102) (HE x 400) Thận bình thường Ảnh 11: Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lô chứng (chuột cống trắng số 103) (HE x 400) Thận bình thường 27 Ảnh 12: Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lơ trị (chuột cống trắng số 129) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Thận bình thường Ảnh 13: Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lơ trị (chuột cống trắng số 135) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Thận bình thường 28 Ảnh 14 : Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 114) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Thận bình thường Ảnh 15: Hình thái vi thể thận chuột cống trắng lô trị (chuột cống trắng số 118) sau 90 ngày uống thuốc thử (HE x 400) Thận bình thường 29 NHẬN XÉT: Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn TD.WK cho thấy: Trên hai lô chuột cống trắng, lô uống TD.WK liều tương đương lâm sàng 0,36 viên/kg/ngày lô uống liều cao gấp lần lâm sàng (1,08 viên/kg/ngày) liên tục 90 ngày, kết cho thấy: + Cả hai liều thuốc thử làm ảnh hưởng không rõ rệt đến tình trạng chung chuột lơng xù, ăn so với lô chứng TD.WK liều cao gấp dự kiến lâm sàng (1,08 viên/kg/ngày) có mức tăng trọng lượng thấp so với lô chứng không làm giảm trọng lượng uống kéo dài 90 ngày liên tục Điều chấp nhận [3] + Không làm thay đổi kết xét nghiệm đánh giá chức tạo máu (số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu, công thức bạch cầu) so với lô chứng + Không làm thay đổi kết xét nghiệm đánh giá chức gan (nồng độ bilirubin toàn phần, albumin cholesterol toàn phần máu chuột cống trắng) so với lô chứng + Không gây hủy hoại tế bào gan (hoạt độ AST, ALT máu chuột cống trắng) so với lô chứng + Không làm thay đổi kết xét nghiệm creatinin máu chuột cống trắng sau 90 ngày uống thuốc thử liên tục so với lô chứng + Không gây tổn thương mặt hình thái quan sát đại thể quan chuột cống trắng so với lô chứng + Cấu trúc vi thể gan, thận chuột cống trắng: khơng có tổn thương cấu trúc vi thể gan, thận chuột cống trắng sau 90 ngày uống thuốc so với lô chứng 30 KẾT LUẬN Mẫu TD.WK công ty Thái Dương sản xuất giao cho Bộ môn Dược lý, trường Đại học Y Hà Nội yêu cầu thử độc tính bán trường diễn súc vật theo đường uống, kết cho thấy: Mẫu thuốc thử TD.WK khơng gây độc tính bán trường diễn chuột cống trắng cho chuột cống trắng uống liều 0,36 viên/kg/ngày (liều có tác dụng tương đương liều dùng người) liều cao gấp lần (1,08 viên/kg/ngày) 90 ngày liên tục [4] Tất số theo dõi chức tạo máu, chức gan, mức độ hủy hoại tế bào gan, chức thận mô bệnh học gan, thận nằm giới hạn bình thường, khơng có khác biệt rõ rệt so với lô chứng [1], [2], [3], [4] 31 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thế Khánh, Phạm Tử Dương (2001), Xét nghiệm sử dụng lâm sàng, Nhà xuất Y học Vũ Đình Vinh (2001), Hướng dẫn sử dụng xét nghiệm sinh hoá, Nhà xuất Y học, tr 115-287 Gerhard Vogel H (2008), Drug discovery and evaluation Pharmacological assays, Springer World Health Organization (2000), Working group on the safety and efficacy of herbal medicine, Report of regional office for the western pacific of the World Health Organization Hà Nội, ngày 11 tháng 03 năm 2018 Trưởng Bộ môn Dược lý PGS.TS Phạm Thị Vân Anh Trường Đại học Y Hà Nội xác nhận chữ ký PGS.TS Phạm Thị Vân Anh Trưởng phòng Tổ chức Cán 32 ... Organization B ĐỘC TÍNH BÁN TRƯỜNG DIỄN 03 THÁNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU: 1.1 Đối tượng nghiên cứu: 1.1.1 Thuốc hoá chất nghiên cứu: 1.1.1.1 Thuốc nghiên cứu: Viên nang cứng TD.WK Công... toàn, TI =LD50/ED50 (Trong nghiên cứu động vật thực nghiệm) Kết luận: Thuốc thử TD.WK khơng có biểu độc tính cấp liều viên/kg Xác định LD50 chuột nhắt trắng thuốc thử TD.WKtrên đường uống g/kg Chỉ... thuốc thử (HE x 400) Thận bình thường 29 NHẬN XÉT: Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn TD.WK cho thấy: Trên hai lô chuột cống trắng, lô uống TD.WK liều tương đương lâm sàng 0,36 viên/kg/ngày