TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI Bộ môn Dược lý KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ THỐI HĨA KHỚP GỐI CỦA BÁCH NIÊN TRÊN THỰC NGHIỆM Thời gian nghiên cứu: 09/2016- 6/2017 1 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.1 NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1.1 Thuốc nghiên cứu Viên hồn cứng Bách niên (Bách niên) (gói 5g chứa viên hồn cứng) - Thành phần gói gồm: Sinh địa 1,5g, Tri mẫu 0,65g, Bạch thược 2,3g, Hoàng bá 4,8g, Qui 0,3g, Cao xương hỗn hợp 1,4g, Độc hoạt 0,5g, Đương qui 1,0g, Phục linh 1,0g, Quế chi 0,25g, Cam thảo 0,3g, Đỗ trọng 0,5g, Phòng phong 1,0g, Tang ký sinh 0,5g, Tần giao 0,5g, Tế tân 0,25g, Đảng sâm 1,0g, Xuyên khung 0,25g, Ngưu tất 0,5g, Trần bì 0,65g Tá dược vừa đủ gói - Nơi sản xuất: Công ty Cổ phần Sao Thái Dương, đạt tiêu chuẩn sở - Liều dùng người: uống 10g/ngày (2 gói/ngày) Thuốc pha dung mơi nước cất trước cho động vật thí nghiệm uống 1.1.2 Hóa chất nghiên cứu - Monosodium-iodoacetate (MIA) lọ 25G hãng Sigma Aldrich (Singapore) cung cấp - Nước muối sinh lý - Cồn 70 độ, dung dịch sát khuẩn betadine - KIT định lượng IL1β, TNF α Hãng Invitrogen, Mỹ - Các hoá chất xét nghiệm làm tiêu mô bệnh học 1.1.3 Dụng cụ nghiên cứu - Bơm tiêm 0,3ml, gạc -Thước đo độ dày (Độ xác: 0,02mm): MC 555 hãng Hangzhou tools and measuring tools Co., Ltd (China) -Hệ thống xét nghiệm ELISA -Máy đo phản ứng đau Dynamic Plantar Aesthesiometer 37450 Ugo Basile (Italy) -Máy đo ngưỡng đau Analgesy meter 7200 Ugo Basile (Italy) 1.1.4 Động vật thực nghiệm Chuột cống trắng chủng Wistar giống, khỏe mạnh, trọng lượng 220 250 gam Học viện Quân y cung cấp Động vật nuôi điều kiện đầy đủ thức ăn nước uống phòng thí nghiệm -10 ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu Bộ môn Dược lý - Trường Đại học Y Hà Nội 1.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đánh giá tác dụng Bách niên mơ hình thối hóa khớp thực nghiệm Chuột cống trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 con, Lô (chứng sinh học): tiêm vào khe khớp nước muối sinh lý, uống nước cất 1ml/100g chuột Lơ (mơ hình): gây thối hóa khớp tiêm vào khe khớp MIA 3mg/khớp, uống nước chất 1ml/100g chuột Lơ (chứng dương): gây thối hóa khớp tiêm vào khe khớp MIA 3mg/khớp, uống diclofenac 3mg/kg Lô (thuốc thử): gây thối hóa khớp tiêm vào khe khớp MIA 3mg/khớp, uống Bách niên liều 1,2g/kg/ngày (liều tương đương lâm sàng tính chuột cống hệ số 6) Lơ (thuốc thử): gây thối hóa khớp tiêm vào khe khớp MIA 3mg/khớp, uống Bách niên liều 3,6g/kg/ngày (liều gấp liều lâm sàng) Chuột lơ ni ổn định điều kiện phòng thí nghiệm tuần trước đưa vào nghiên cứu Tại thời điểm bắt đầu nghiên cứu, chuột lơ đến lơ gây mơ hình thối hóa khớp thực nghiệm cách tiêm dung dịch MIA liều 3mg/khớp vào khớp gối phải chuột [1] [2] Riêng chuột lô chứng sinh học tiêm nước muối sinh lý dung môi pha thuốc vào khớp gối phải chuột Thể tích dung dịch tiêm vào khớp 50µl/khớp Ngay sau gây mơ hình tiêm MIA 3mg/khớp, lô uống nước, lô uống diclofenac liều 5mg/kg, lô uống Bách niên liều 1,2g/kg/ngày 3,6g/kg/ngày tương ứng Các lô chuột uống thuốc nước lần/ngày tuần liên tục Các số đánh giá *Đường kính khớp gối [3] Đường kính khớp gối phải đo thước chuyên dụng Palmer, tính khoảng cách lớn cạnh khớp gối Đường kính khớp gối đo nghiên cứu viên tất thời điểm để đảm bảo thống Đường kính khớp gối đo vào thời điểm: trước nghiên cứu, sau tiêm MIA uống thuốc ngày, ngày, tuần, tuần, tuần, tuần, tuần tuần Chỉ số đánh giá độ tăng đường kính khớp gối thời điểm nghiên cứu so với trước nghiên cứu, đơn vị milimet (mm) * Tác dụng giảm đau viên hoàn cứng Bách niên máy đo ngưỡng đau [4] Đo thời gian phản ứng với đau chuột lực gây đau chuột (sử dụng máy Dynamic Plantar Aesthesiometer 37450 Ugo Basile, thông qua thời gian lực gây đau làm chuột nhấc chân khỏi kim Von Frey) vị trí gan chân sau, bên phải chuộttrước nghiên cứu, sau tiêm MIA uống thuốc tuần, tuần, tuần, tuần, tuần tuần, so sánh lô chuột với Từ đánh giá tác dụng giảm đau khả vận động khớp gối phải chuột * Tác dụng giảm đau viên hoàn cứng Bách niên máy đo ngưỡng đau theo phương pháp Randall Selitto [5] Đo lực gây đau vị trí khớp gối chân sau, bên phải (được tiêm MIA) chuột lô, sử dụng máy Analgesy meter 7200 Ugo Basile, theo phương pháp Randall Selitto thời điểm trước nghiên cứu, sau tiêm MIA uống thuốc tuần, tuần, tuần, tuần, tuần tuần so sánh lô chuột với * Các số cytokin quan trọng viêm thối hóa khớp [1] [6] Các Interleukin 1β TNF α số đặc hiệu, tăng cao thối hóa khớp, giảm số nghĩa làm chậm trình thối hóa, cải thiện cấu trúc sụn khớp Các số định lượng huyết chuột thời điểm sau tuần tiêm MIA * Đánh giá mô bệnh học khớp gối Đánh giá ngẫu nhiên 20% số chuột lô sau tuần tiêm MIA uống thuốc, chuột gây mê phẫu thuật tách khớp gối phải khỏi thể, bảo quản dung dịch formaldehyd 10%, đánh giá mức độ thối hóa dựa tiêu giải phẫu mô bệnh học Kết giải phẫu bệnh đọc Bộ môn Giải phẫu bệnh – Trường Đại học Y Hà Nội 1.3 ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊNCỨU - Địa điểm nghiên cứu: Bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội - Thời gian nghiên cứu: từ tháng 9/2016 đến tháng 6/2017 1.4 XỬ LÝ SỐLIỆU Các số liệu nghiên cứu biểu diễn dạng X ± SD Các số liệu xử lý thống kê theo thuật toán thống kê T-test Studentvà test trước sau (Avant-après) phần mềm Excel 2013 Quy ước: *: p < 0,05; **: p < 0,01; ***: p < 0,001: p so với trước nghiên cứu KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Chỉ số đường kính khớp gối Bảng 3.1 Tác dụng Bách niên lên đường kính khớp gối chuột tiêm MIA Độ tăng đường kính khớp gối theo thời gian (mm) Lơ chuột N Lô (chứng sinh 10 học) Lô Mô hình 10 p so chứng Lơ Diclofenac 3mg/kg 10 10 p so mơ hình p so diclofenac p so liều thấp Sau Sau Sau tuần tuần tuần tuần tuần tuần 0,17 ± 0,15 ± 0,26 ± 0,08 ± 0,21± 0,05 0,08 0,11 0,03 0,99 ± 1,42 ± 1,18 ± 0,95 ± 0,30 0,30 0,32 0,33 0,06 1,23± 0,44 0,06 ± 0,10 ± 0,11 ± 0,02 0,03 0,04 1,08 ± 0,92 ± 0,84 ± 0,34 0,34 0,35 0,66 ± 0,87 ± 0,92 ± 0,88 ± 0,63 ± 0,57 ± 0,62 ± 0,38 ± 0,22 0,31 0,33 0,32 0,31 0,25 0,29 0,16 >0,05 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so diclofenac > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Lô Bách niên 3,6g/kg 10 19,42 ± 15,38 ± 19,88 3,34 3,62* ± 6,47 23,58 ± 5,53* 22,58 ± 2,59 25,55 ± 4,04** 23,01± 4,66* p so chứng > 0,05 < 0,01 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so mơ hình > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 p so diclofenac > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so liều thấp > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Nhận xét: - Ở lô chứng sinh học, lực gây đau làm chuột nhấc chân khỏi kim Von Frey khơng có khác biệt tất thời điểm so với trước nghiên cứu (p>0,05) - Ở lơ mơ hình: + Thời điểm sau tiêm MIA tuần, lực gây đau giảm so với trước nghiên cứu chưa khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05), giảm rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,05), thời điểm này, khớp gối phải chuột giai đoạn viêm đỉnh điểm nên chuột nhạy cảm với lực tác động, cần lực nhỏ đủ để chuột phản ứng + Từ thời điểm sau tuần đến sau tuần tiêm MIA, lực gây đau tăng lên, khơng có khác biệt so với trước nghiên cứu so với lô chứng sinh học (p>0,05) + Ở thời điểm sau tuần tuần tiêm MIA, lực gây đau tăng lên rõ rệt khớp gối chuột bị tổn thương thối hóa, làm chậm hoạt động nhấc chân khỏi kim Von Frey, làm lực tác động tăng lên Lực gây đau thời điểm tăng cao có ý nghĩa thống kê so với trước nghiên cứu (p < 0,01 p < 0,001) so với lô chứng sinh học (p 0,05), lực gây đau tăng so với lơ mơ hình khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) + Từ thời điểm sau tuần đến sau tuần tiêm MIA, lực gây đau tăng lên, khơng có khác biệt so với trước nghiên cứu, so với lô chứng sinh học so với lơ mơ hình (p > 0,05) + Ở thời điểm sau tiêm MIA tuần tuần, lực gây đau không khác biệt so với trước nghiên cứu so với chứng sinh học (p > 0,05), lực gây đau giảm rõ rệt so với lô mơ hình, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) cho thấy hạn chế hoạt động khớp gối chuột giảm đáng kể - Ở lô uống Bách niên liều 1,2g/kg: + Thời điểm sau tiêm MIA tuần, lực gây đau giảm so với trước nghiên cứu, khác biệt có ý nghĩa thống kê(p < 0,05), giảm rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,05), không khác biệt so với lơ mơ hình lơ uống diclofenac 3mg/kg (p > 0,05) + Từ thời điểm sau tuần đến sau tuần tiêm MIA, lực gây đau tăng lên, khơng có khác biệt so với trước nghiên cứu so với lô chứng sinh học (p > 0,05) + Ở thời điểm sau tiêm MIA tuần, lực gây đau tăng so với trước nghiên cứu (p < 0,05) đến sau tuần, lực gây đau giảm, khơng có khác biệt so với trước nghiên cứu (p > 0,05) Ở thời điểm, lực gây đau không khác biệt so với chứng sinh học có xu hướng giảm so với lơ mơ hìnhnhưng khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Ở lô uống Bách niên liều 3,6g/kg: + Thời điểm sau tiêm MIA tuần, lực gây đau giảm so với trước nghiên cứu, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05), giảm rõ rệt so với lô chứng sinh học (p 0,05) Thời điểm sau tuần, lực gây đau tăng so với trước nghiên cứu (p0,05) + Ở thời điểm sau tiêm MIA tuần tuần, lực gây đau tăng so với trước nghiên cứu (p < 0,05 p < 0,01) không khác biệt so với chứng sinh học (p > 0,05), lực gây đau giảm rõ so với lô mô hình, đặc biệt thời điểm sau tuần (p < 0,05) cho thấy hạn chế hoạt động khớp gối chuột dần khắc phục.Tác dụng thời điểm tương đương diclofenac 3mg/kg Bảng 3.3 Ảnh hưởng Bách niên lên thời gian phản ứng với đau Thời gian phản ứng với đau (s) Lô chuột Lô (chứng sinh học) N 10 Lô (MIA 10 3mg/khớp) p so chứng Lô Diclofenac 3mg/kg Trước Sau Sau Sau Sau Sau Sau tuần tuần tuần tuần tuần tuần 11,33 ± 12,96 12,08 ± 13,83 12,28 ± 13,45 ± 13,74 ± 2,73 ± 3,57 3,23 ± 3,02 4,08 2,15 11,55 ± 9,96 ± 11,47 ± 14,19 13,47 ± 16,43 ± 16,86 ± 3,16 2,06 2,08 ± 5,21 2,34 > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 10 2,59 2,58** 3,74** < 0,05 < 0,05 11,38 ± 10,65 11,20 ± 14,13 13,63 ± 13,26± 13,09 ± 1,74 ± 1,73 3,05 ± 4,45 2,41 2,73 3,38 p so chứng > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so mơ hình > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 < 0,05 Lô Bách niên 1,2g/kg 10 11,72 ± 9,31 ± 12,11 ± 13,53 12,70 ± 15,49 ± 14,07 ± 2,96 2,55* 4,05 ± 4,20 3,72 4,97 3,58 p so chứng > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so mơ hình > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so diclofenac > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Lô Bách niên 3,6g/kg 10 11,50 ± 9,08 ± 11,76 ± 2,02 2,13* 3,93 14,10 ± 3,37* 13,39 ± 15,72 ± 13,64 ± 1,57 2,82** 2,83* p so chứng > 0,05 < 0,01 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so mơ hình > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 p so diclofenac > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so liều thấp > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Nhận xét: - Ở lô chứng sinh học, thời gian chuột nhấc chân khỏi kim Von Frey khơng có khác biệt tất thời điểm so với trước nghiên cứu (p > 0,05) - Ở lơ mơ hình: 10 + Thời điểm sau tiêm MIA tuần, thời gian phản ứng với đau giảm so với trước nghiên cứu chưa khác biệt có ý nghĩa thống kê (p > 0,05), giảm rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,05), thời điểm này, khớp gối phải chuột giai đoạn viêm đỉnh điểm nên chuột nhạy cảm với lực tác động, cần lực nhỏ đủ để chuột phản ứng, thời gian phản ứng nhanh + Từ thời điểm sau tuần đến sau tuần tiêm MIA, thời gian phản ứng với đau tăng lên, khơng có khác biệt so với trước nghiên cứu so với lô chứng sinh học (p>0,05) + Ở thời điểm sau tuần tuần tiêm MIA, thời gian phản ứng với đau tăng lên rõ rệt khớp gối chuột bị tổn thương thối hóa, làm chậm hoạt động nhấc chân khỏi kim Von Frey Lực gây đau thời điểm tăng cao có ý nghĩa thống kê so với trước nghiên cứu (p < 0,01) so với lô chứng sinh học (p 0,05), thời gian tăng so với lơ mơ hình khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p>0,05) + Từ thời điểm sau tuần đến sau tuần tiêm MIA, thời gian phản ứng với đau tăng lên, khơng có khác biệt so với trước nghiên cứu, so với lô chứng sinh học so với lơ mơ hình (p > 0,05) + Ở thời điểm sau tiêm MIA tuần tuần, thời gian phản ứng với đau không khác biệt so với trước nghiên cứu so với chứng sinh học (p > 0,05), thời gian giảm rõ rệt so với lô mơ hình, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p 0,05) + Từ thời điểm sau tuần đến sau tuần tiêm MIA, thời gian phản ứng với đau tăng lên, khơng có khác biệt so với trước nghiên cứu so với lô chứng 11 sinh học (p > 0,05), có xu hướng giảm so với lơ mơ hình khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Ở lô uống Bách niên liều 3,6g/kg: + Thời điểm sau tiêm MIA tuần, thời gian phản ứng với đau giảm so với trước nghiên cứu, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05), giảm rõ rệt so với lô chứng sinh học (p < 0,01), không khác biệt so với lơ mơ hình lơ uống diclofenac 3mg/kg (p > 0,05) + Thời điểm sau tuần sau tuần tiêm MIA, thời gian phản ứng với đau tăng lên, khơng có khác biệt so với trước nghiên cứu so với lô chứng sinh học (p > 0,05) Thời điểm sau tuần, thời gian tăng so với trước nghiên cứu (p < 0,05) không khác biệt so với chứng sinh học mơ hình (p>0,05) + Ở thời điểm sau tiêm MIA tuần tuần, thời gian phản ứng với đau tăng so với trước nghiên cứu (p < 0,05 p < 0,01) không khác biệt so với chứng sinh học (p > 0,05), thời gian giảm so với lơ mơ hình, đặc biệt thời điểm sau tuần (p < 0,05) cho thấy hạn chế hoạt động khớp gối chuột dần khắc phục Tác dụng thời điểm tương đương diclofenac 3mg/kg 12 3.3 Tác dụng giảm đau Bách niên mơ hình sử dụng máy đo ngưỡng đau theo phương pháp Randall Selitto Bảng 3.4 Ảnh hưởng Bách niên lên lực gây đau khớp gối Lực gây đau khớp gối (g) Lô chuột N Lô (chứng sinh 10 học) Lô (MIA 10 Sau Sau Sau Sau Sau Sau 275,00 tuần 257,00 tuần 255,60 tuần 333,00 tuần 312,00 tuần 316,00 tuần 315,00 ± ± ± ± ± ± ± 65,19 295,00 59,64 185,00 92,41 179,50 100,01 245,00 90,28 276,00 98,23 268,00 56,22 233,00 ± ± ± ± ± ± ± Trước 3mg/khớp) 97,10 44,03** 67,60* 83,30 58,73 95,78 81,11 p so chứng > 0,05 < 0,01 < 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 Lô 286,80 322,00 328,00 331,00 341,00 351,20 ± ± ± ± ± ± 84,46 > 0,05 86,26 > 0,05 134,06 > 0,05 > 0,05 68,22 > 0,05 52,38 > 0,05 107,03 > 0,05 > 0,05 < 0,001 0,05 299,00 < 0,05 273,00 < 0,05 289,00 Diclofenac 10 3mg/kg p so chứng p so mô hình Lơ Bách 109,93 ± ± ± ± ± ± ± 58,69 62,73 62,37 78,63 84,39 77,47 74,15 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so mơ hình > 0,05 < 0,001 < 0,01 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so diclofenac > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 285,00 322,00 268,40 305,00 293,00 274,00 286,00 ± ± ± ± ± ± ± 64,51 82,03 98,65 108,96 79,59 93,59 85,53 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so mơ hình > 0,05 < 0,001 < 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so diclofenac > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 p so liều thấp > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 < 0,05 > 0,05 > 0,05 niên 1,2g/kg 10 348,00 ± p so chứng Lô Bách niên 3,6g/kg p so chứng 10 Nhận xét: 13 - Ở lô chứng sinh học, lực gây đau khớp gối chuột khơng có khác biệt tất thời điểm so với trước nghiên cứu (p > 0,05) - Ở lơ mơ hình, tất thời điểm sau tiêm MIA, lực gây đau khớp gối chuột giảm so với trước nghiên cứu, rõ rệt vào thời điểm sau tuần tuần tiêm MIA (p < 0,05 p < 0,01) Lực gây đau khớp gối tất thời điểm sau tiêm MIA giảm so với lô chứng sinh học, thể rõ thời điểm sau tuần, tuần, tuần tuần tiêm MIA (p < 0,05 p 0,05), tăng rõ so với lô mô hình, đặc biệt thời điểm sau tuần, tuần, tuần, tuần tuần (p < 0,05, p < 0,01 p < 0,001) - Ở lô uống Bách niên liều 1,2g/kg, lực gây đau khớp gối tất thời điểm sau tiêm MIA không khác biệt so với trước nghiên cứu so với lô chứng sinh học (p > 0,05), tăng so với lơ mơ hình, đặc biệt thời điểm sau tuần tuần (p < 0,01 p < 0,001) Tác dụng không mạnh diclofenac 3mg/kg khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p>0,05) - Ở lô uống Bách niên liều 3,6g/kg, lực gây đau khớp gối tất thời điểm sau tiêm MIA không khác biệt so với trước nghiên cứu so với lô chứng sinh học (p > 0,05), tăng so với lô mô hình, đặc biệt thời điểm sau tuần, tuần (p < 0,05, p < 0,001) Tác dụng tương đương với diclofenac 3mg/kg liều 1,2g/kg (p > 0,05) 14 3.4 Các số cytokin Bảng 3.5 Nồng độ Interleukin-1β Lơ thí nghiệm Lơ1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình (MIA 3mg/khớp) Interleukin-1β p so (pg/ml) chứng p so p so p so mô diclofena liều hình c thấp 142,85 ± 44,39 185,33 ± 45,13 < 0,05 Lô Diclofenac 3mg/kg 152,56 ± 19,44 > 0,05 < 0,05 Lô Bách niên 1,2g/kg 153,49 ± 39,61 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Lô Bách niên 3,6g/kg > 0,05 < 0,05 > 0,05 150,37±22,03 > 0,05 Nhận xét: - Sau tuần tiêm MIA: + Ở lơ mơ hình, nồng độ interleukin-1β tăng cao rõ rệt so với chứng sinh học (p < 0,05) - Ở lô uống diclofenac 3mg/kg, nồng độ interleukin-1β giảm so với lơ mơ hình (p < 0,05), có xu hướng tăng nhẹ so với chứng sinh học khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Ở lô uống Bách niên liều 1,2g/kg, nồng độ interleukin-1β có xu hướng giảm so với lơ mơ hình khác biệt chưa có ý nghĩa thống kê (p > 0,05), có xu hướng tăng so với chứng sinh học khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) - Ở lô uống Bách niên liều 3,6g/kg, nồng độ interleukin-1β giảm rõ so với lơ mơ hình (p < 0,05), có xu hướng tăng so với chứng sinh học khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05), tương đương lô uống diclofenac 3mg/kg (p > 0,05) Bảng 3.6 Nồng độ TNF-α 15 Lơ thí nghiệm Lơ1: Chứng sinh học Lơ 2: Mơ hình (MIA 3mg/khớp) Lơ Diclofenac 3mg/kg Lô Bách niên 1,2g/kg Lô Bách niên 3,6g/kg TNF-α p so (pg/ml) chứng p so mô hình p so p so liều diclofenac thấp 5,83 ± 1,67 8,70 ± 2,83 < 0,05 6,03 ± 1,93 > 0,05 < 0,05 8,73±2,59 < 0,01 > 0,05 < 0,05 6,47±1,74 > 0,05 < 0,05 > 0,05 < 0,05 Nhận xét: - Sau tuần tiêm MIA: + Ở lô mơ hình, nồng độ TNF-α tăng cao rõ rệt so với chứng sinh học (p 0,05), tăng cao so với chứng sinh học, khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,01) - Ở lô uống Bách niên liều 3,6g/kg, nồng độ TNF-α giảm rõ so với lô mô hình (p < 0,05), có xu hướng tăng so với lơ chứng sinh học diclofenacnhưng khác biệt khơng có ý nghĩa (p > 0,05) Tác dụng mạnh liều Bách niên 1,2g/kg (p < 0,05) 16 3.5 Ảnh hưởng Bách niên lên mô bệnh học khớp gối Lô nghiên cứu Lô 1: Chứng sinh học Lô 2: Mơ hình (MIA 3mg/khớp) Lơ 3: Diclofenac 3mg/kg Đặc điểm mơ bệnh học Hình ảnh sụn khớp bình thường: Khơng có tổn thương sụn, khơng lớp nhuộm proteoglycan, lớp tế bào màng hoạt dịch khơng có tượng thối hóa Hình ảnh sụn khớp thối hóa mức độ vừa: Tổn thương xương sụn mức độ nhẹ đến trung bình, nhẹ đến trung bình lớp nhuộm proteoglycan, tế bào màng hoạt dịch thối hóa vừa Hình ảnh sụn khớp thối hóa mức độ nhẹ: Tổn thương xương sụn mức độ nhẹ đến trung bình, nhẹ đến trung bình lớp nhuộm proteoglycan, tế bào màng hoạt dịch thối hóa nhẹ Hình ảnh sụn khớp thối hóa mức độ nhẹ đến vừa: Tổn Lơ 4: Bách thương xương sụn mức độ nhẹ trung bình, nhẹ niên 1,2g/kg đến vừalớp nhuộm proteoglycan, tế bào màng hoạt dịch thối hóa nhẹ Lơ 5: Bách niên 3,6g/kg Hình ảnh sụn khớp thối hóa mức độ nhẹ: Tổn thương xương sụn mức độ tối thiểu đến nhẹ, tối thiểu lớp nhuộm proteoglycan, tế bào màng hoạt dịch thối hóa nhẹ 17 Hình Lô chứng sinh học (HE x 40) (chuột số 1) Sụn khớp có cấu trúc bình thường Hình Lơ chứng sinh học (chuột số 2) Sụn khớp có cấu trúc bình thường 18 Hình Lơ mơ hình (chuột số 11) Sụn khớp thối hóa mức độ vừa Hình Lơ mơ hình (chuột số 12) Sụn khớp thối hóa mức độ vừa 19 Hình Lơ uống diclofenac 3mg/kg tuần (chuột số 21) Sụn khớp thối hóa mức độ nhẹ Hình Lơ uống diclofenac 3mg/kg tuần (chuột số 22) Sụn khớp thoái hóa mức độ nhẹ 20 Hình Lơ uống Bách niên 1,2g/kg tuần (chuột số 61) Sụn khớp thối hóa mức độ nhẹ Hình Lơ uống Bách niên 1,2g/kg tuần (chuột số 62) Sụn khớp thối hóa mức độ nhẹ 21 Hình Lơ uống Bách niên 3,6g/kg tuần (chuột số 51) Sụn khớp thối hóa mức độ nhẹ Hình 10 Lơ uống Bách niên 3,6g/kg tuần (chuột số 52) Sụn khớp thối hóa mức độ nhẹ 22 KẾT LUẬN Mẫu thử Bách niên công ty Cổ phần Sao Thái Dương giao cho Bộ môn Dược lý Trường Đại học Y Hà Nội, yêu cầu đánh giá tác dụng điều trị thối hóa khớp chuột cốngở liều 1,2g/kg liều 3,6g/kg uống liên tục tuần, kết nghiên cứu sau: - Bách niên liều 1,2g/kg có tác dụng điều trị thối hóa khớp gối chuột cống thể qua: + Tác dụng giảm độ sưng khớp gối, có tác dụng số thời điểm nghiên cứu + Tác dụng giảm đau khớp gối mơ hình sử dụng máy đo ngưỡng đau theo phương pháp Randall Selitto, có tác dụng số thời điểm nghiên cứu + Tác dụng cải thiện cấu trúc sụn khớp thể mô bệnh học cấu trúc khớp gối - Bách niên liều 3,6g/kg có tác dụng điều trị thối hóa khớp gối chuột cống thể qua: + Tác dụng giảm đau cải thiện hoạt động khớp gối mơ hình sử dụng máy đo ngưỡng đau, có tác dụng số thời điểm nghiên cứu + Tác dụng giảm đau chỗ khớp gối mô hình sử dụng máy đo ngưỡng đau theo phương pháp Randall Selitto, có tác dụng số thời điểm nghiên cứu + Tác dụng giảm số interleukin-1β TNF-α số đặc hiệu thối hóa khớp + Tác dụng cải thiện cấu trúc sụn khớp thể mô bệnh học cấu trúc khớp gối + Các tác dụng mạnh liều 1,2g/kg 23 TÀI LIỆU THAM KHẢO Joon-Ki Kim, Sang-Won Park, Jung-Woo Kang et al (2012) Effects of GSCB-5, a Herbal Forrmulation, on Monosodium Iodoacetate-Induced Osteoarthritis in Rats Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine, Vol2012, doi: 10.1155/2012/730907 F.J Al-Safar, S Ganabadi, H Yaakub et al (2009), “Collagenase and Sodium Iodoacetate – Induced experimental Osteoarthritis Model in Sprague Dawley Rats”, Asian Journal of Scientific Research 2(4): 167-179 Calado GP., Lopes AJ., Costa J et al (2015), “Chenopodium ambrosioside L reduces synovial inflammation and pain in experimental osteoarthritis”, Plos One 10(11):e0141886 doi: 10.1371/journal.pone.0141886 Neugebauer V, Han JS, Adwanikar Het al (2007) Techniques for assessing knee joint pain in arthritis Mol Pain, 3(8) Vogel HG (2008), Chapter H: Analgesic, Anti-Inflammatory, and AntiPyretic Activity, Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays, 3rd edition, Springer, 983-1116 Yassin NZ., El-Shenawy., Abdel Rahman et al (2015), “Effect of a topical copper indomethacin gel on inflammatory parameters in a rat model of osteoarthritis”, Drug Des Devel Ther 12;9:1491-8 doi: 10.2147/DDDT.S79957 Hà Nội, ngày 28 tháng năm 2017 Trưởng môn TS Phạm Thị Vân Anh Trường Đại học Y Hà Nội xác nhận chữ ký TS Phạm Thị Vân Anh Trưởng phòng Tổ chức Cán 24 ... cầu đánh giá tác dụng điều trị thối hóa khớp chuột cốngở liều 1,2g/kg liều 3,6g/kg uống liên tục tuần, kết nghiên cứu sau: - Bách niên liều 1,2g/kg có tác dụng điều trị thối hóa khớp gối chuột cống... điểm nghiên cứu + Tác dụng cải thiện cấu trúc sụn khớp thể mô bệnh học cấu trúc khớp gối - Bách niên liều 3,6g/kg có tác dụng điều trị thối hóa khớp gối chuột cống thể qua: + Tác dụng giảm đau... Tác dụng giảm độ sưng khớp gối, có tác dụng số thời điểm nghiên cứu + Tác dụng giảm đau khớp gối mô hình sử dụng máy đo ngưỡng đau theo phương pháp Randall Selitto, có tác dụng số thời điểm nghiên