BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRẦN THU HÀ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN CYP1B1 GÂY BỆNH GLÔCÔM BẨM SINH NGUYÊN PHÁT VÀ PHÁT HIỆN NGƯỜI LÀNH MANG GEN BỆNH LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI TRẦN THU HÀ Nghiªn cứu xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát phát ngời lành mang gen bÖnh Chuyên ngành: Nhãn khoa Mã số : 62720157 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Vân Khánh PGS.TS Vũ Thị Bích Thủy HÀ NỘI – 2019 LỜI CAM ĐOAN Tơi Trần Thu Hà nghiên cứu sinh khoá 33, chuyên ngành nhãn khoa, Trường Đại học Y Hà Nội xin cam đoan: Đây luận án thân trực tiếp thực hướng dẫn PGS.TS Trần Vân Khánh PGS.TS Vũ Thị Bích Thủy Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam đoan Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Người viết cam đoan Trần Thu Hà CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tiếng Việt BN : Bệnh nhân MP : Mắt phải MT : Mắt trái NR : Đa hình gen PCR : Polymerase Chain Reaction SNP : Đa hình gen UD : Đột biến chưa xác định Tiếng Anh Bp : Base pair DNA : Deoxyribonucleic acid EDTA : Ethylene Diamin Tetraacetic Acid MLPA : Multiplex Ligation-Dependent Probe Amplification NTP : Nucleoside Triphosphate OCT : Optical Coherence Tomography OD : Optical Density Bảng viết tắt amino acid MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cương bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát .3 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát .3 1.1.1 Lịch sử nghiên cứu bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.2 Dịch tễ học bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.2 Dịch tễ học bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.4 Chẩn đốn bệnh glơcơm bẩm sinh ngun phát 10 1.1.4 Chẩn đốn bệnh glơcơm bẩm sinh nguyên phát .10 1.1.5 Điều trị bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát .15 1.1.5 Điều trị bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 15 1.2 Đột biến gen CYP1B1 mối liên quan với lâm sàng 16 1.2.1 Đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 16 1.2.1 Đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 16 1.2.2 Các kỹ thuật phát đột biến gen CYP1B1 .23 1.2.2 Các kỹ thuật phát đột biến gen CYP1B1 23 1.2.3 Mối liên quan bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát với đột biến gen 28 1.2.3 Mối liên quan bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát với đột biến gen 28 1.3 Đột biến CYP1B1 phát người lành mang gen bệnh 32 Từ báo cáo năm 2009 Tây Ban Nha đề cập đến đột biến gen CYP1B1 di truyền theo kiểu gen lặn, trạng thái dị hợp tử Trong năm gần đây, ngày có nhiều nghiên cứu phát người lành mang gen bệnh thành viên gia đình có quan hệ huyết thống với bệnh nhân.32 Việc lập phả hệ để xem xét tính chất đột biến gen di truyền giúp ích chẩn đốn trước sinh, đưa cho gia đình bệnh nhân tư vấn di truyền, chẩn đoán bệnh sớm nhằm nâng cao chất lượng dân số nói chung chất lượng điều trị bệnh nói riêng 33 CHƯƠNG 37 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37 2.1 Đối tượng nghiên cứu 37 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 37 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn 37 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ: bệnh nhân có bệnh tồn thân mắt kèm theo, bệnh di truyền khác Bệnh nhân đại diện gia đình khơng tự nguyện tham gia nghiên cứu 37 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ: bệnh nhân có bệnh tồn thân mắt kèm theo, bệnh di truyền khác Bệnh nhân đại diện gia đình khơng tự nguyện tham gia nghiên cứu 37 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 38 2.3 Phương pháp nghiên cứu 38 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu: phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang 38 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu: phương pháp nghiên cứu mô tả cắt ngang .38 2.3.2 Cỡ mẫu chọn mẫu nghiên cứu 38 2.3.2 Cỡ mẫu chọn mẫu nghiên cứu 38 2.3.3 Phương tiện nghiên cứu .38 2.3.3 Phương tiện nghiên cứu .38 2.3.4 Các bước tiến hành nghiên cứu 41 2.3.4 Các bước tiến hành nghiên cứu 41 2.3.4.5 Chỉ số, biến số nghiên cứuvà tiêu chí đánh giá kết 47 2.4 Vấn đề đạo đức nghiên cứu 49 CHƯƠNG 49 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 49 3.1 Đặc điểm bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát 49 3.1.1 Phân bố bệnh nhân theo tuổi phát bệnh .49 3.1.1 Phân bố bệnh nhân theo tuổi phát bệnh 49 Đa số bệnh nhân phát bệnh từ sinh đến tháng tuổi chiếm 58,2% 50 Thời gian phát bệnh trung bình 2,58±3,59 tháng tuổi, sớm sinh ra, muộn 11 tháng Trong số 47,7% bệnh nhân phát bệnh lúc sinh có 51,2% bệnh nhân phát bệnh sớm trước tuần tuổi 50 3.1.2 Phân bố bệnh nhân theo giới 50 3.1.2 Phân bố bệnh nhân theo giới .50 3.1.3 Tiền sử bệnh nhân gia đình 51 3.1.3 Tiền sử bệnh nhân gia đình 51 3.1.4 Tình trạng mắt bị bệnh bệnh nhân 51 3.1.4 Tình trạng mắt bị bệnh bệnh nhân 51 3.1.5 Phân bố giai đoạn bệnh 51 3.1.5 Phân bố giai đoạn bệnh 51 3.1.6 Triệu chứng 52 3.1.6 Triệu chứng 52 3.1.7 Dấu hiệu thực thể 52 3.1.7 Dấu hiệu thực thể .52 3.2 Kết xác định đột biến gen CYP1B1 mối liên quan với lâm sàng .54 3.2.1 Kết tách chiết DNA 54 3.2.1 Kết tách chiết DNA .54 3.2.2 Kết xác định đột biến gen CYP1B1 kỹ thuật giải trình tự .54 3.2.2 Kết xác định đột biến gen CYP1B1 kỹ thuật giải trình tự 54 Kết khuếch đại gen CYP1B1 54 3.2.3 Kết xác định đột biến gen CYP1B1 kỹ thuật MLPA .60 3.2.3 Kết xác định đột biến gen CYP1B1 kỹ thuật MLPA 60 3.2.4 Tỷ lệ đột biến chung gen CYP1B1 61 3.2.4 Tỷ lệ đột biến chung gen CYP1B1 61 3.2.5 Mối liên quan lâm sàng đột biến gen CYP1B1 62 3.2.5 Mối liên quan lâm sàng đột biến gen CYP1B1 62 Phối hợp yếu tố lâm sàng .69 Khi đánh giá mối liên quan tổng hợp yếu tố lâm sàng với tình trạng đột biến gen CYP1B1 thu kết sau: 69 Lâm sàng .70 Tổng 70 p 70 Ngay sau sinh 70 Các trường hợp lại 70 Đột biến 70 n 70 70 44,4%70 10 70 55,6%70 18 70 100% 70 0,503 70 (Test χ2) 70 % 70 25,0%70 18,9%70 21,2%70 Không đột biến 70 n 70 24 70 35,8%70 43 70 64,2%70 67 70 100% 70 % 70 75,0%70 81,1%70 78,8%70 Tổng 70 n 70 32 70 37,6%70 53 70 62,4%70 85 70 100% 70 70 % 70 100,0% 70 100,0% 70 100,0% 70 OR 70 (khoảng tin cậy 95%) .70 1,43 (0,50–4,12) 70 Lâm sàng .71 Tổng 71 p 71 Ngay sau sinh 71 + mắt 71 Các trường hợp lại 71 Đột biến 71 n 71 10 71 55,6%71 71 44,4%71 18 71 100% 71 0,031 71 (Test χ2) 71 % 71 34,5%71 14,3%71 ĐƠN TÌNH NGUYỆN Tơi, xác nhận Tôi đọc thông tin đưa cho nghiên cứu: "xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát" cán nghiên cứu giải thích nghiên cứu thủ tục đăng ký tình nguyện tham gia vào nghiên cứu • Tơi có hội hỏi câu hỏi nghiên cứu hài lòng với câu trả lời giải thích đưa • Tơi có thời gian hội để cân nhắc tham gia vào nghiên cứu • Tơi hiểu tơi có quyền tiếp cận với liệu mà người có trách nhiệm mơ tả tờ thơng tin • Tơi hiểu tơi có quyền rút khỏi nghiên cứu vào thời điểm lý Tơi đồng ý bác sỹ chăm sóc sức khoẻ thơng báo việc tơi tham gia nghiên cứu Đánh dấu vào thích hợp (quyết định không ảnh hưởng khả bạn tham gia vào nghiên cứu): Có Khơng Tơi đồng ý tham gia nghiên cứu Ký tên người tham gia ………………………………………… Nếu cần, Ký tên người làm chứng ………………………………………… Viết tên người làm chứng ………………………………………… Ngày/tháng/năm ……/…… / …… Ngày/tháng/năm ……/…… / …… PHỤ LỤC Trình tự đoạn gen CYP1B1 aaaacccgga ggagcgggat ggcgcgcttt gactctggag tgggagtggg agcgagcgct 61 tctgcgactc cagttgtgag agccgcaagg gcatgggaat tgacgccact caccgacccc 121 cagtctcaat ctcaacgctg tgaggaaacc tcgactttgc caggtcccca agggcagcgg 181 ggctcggcga gcgaggcacc cttctccgtc cccatcccaa tccaagcgct cctggcactg 241 acgacgccaa gagactcgag tgggagttaa agcttccagt gagggcagca ggtgtccagg 301 ccgggcctgc gggttcctgt tgacgtcttg ccctaggcaa aggtcccagt tccttctcgg 361 agccggctgt cccgcgccac tggaaaccgc acctccccgc aggtcagtct gtctgccgag 421 gcgctgcccg gcgacctctt cagatggatt attacaggta gcgggtggcg tggtaggtac 481 tttaaaggaa atcaagcgcc accgcctcga tgcccgcagc gttgtcccca gattgcagga 541 accgttacgc gccttgcggg gaggggaagg gtttggcgct gggttacagc gaggtggaaa 601 cacgcccctt ctcttctcca agggagagtg ggttggggat gggaaggggc gtcttcggcc 661 atttctccag agagtcagct ccgacctctc cacccaacgg cactcagtcc ccagaggctg 721 gggtaggggc gtggggcgcc cgctcctgtc tctgcacccc tgagtgtcac gccttctcct 781 ctctgtcccc agcatgggca ccagcctcag cccgaacgac ccttggccgc taaacccgct 841 gtccatccag cagaccacgc tcctgctact cctgtcggtg ctggccactg tgcatgtggg 901 ccagcggctg ctgaggcaac ggaggcggca gctccggtcc gcgcccccgg gcccgtttgc 961 gtggccactg atcggaaacg cggcggcggt gggccaggcg gctcacctct cgttcgctcg 1021 cctggcgcgg cgctacggcg acgttttcca gatccgcctg ggcagctgcc ccatagtggt 1081 gctgaatggc gagcgcgcca tccaccaggc cctggtgcag cagggctcgg ccttcgccga 1141 ccggccggcc ttcgcctcct tccgtgtggt gtccggcggc cgcagcatgg ctttcggcca 1201 ctactcggag cactggaagg tgcagcggcg cgcagcccac agcatgatgc gcaacttctt 1261 cacgcgccag ccgcgcagcc gccaagtcct cgagggccac gtgctgagcg aggcgcgcga 1321 gctggtggcg ctgctggtgc gcggcagcgc ggacggcgcc ttcctcgacc cgaggccgct 1381 gaccgtcgtg gccgtggcca acgtcatgag tgccgtgtgt ttcggctgcc gctacagcca 1441 cgacgacccc gagttccgtg agctgctcag ccacaacgaa gagttcgggc gcacggtggg 1501 cgcgggcagc ctggtggacg tgatgccctg gctgcagtac ttccccaacc cggtgcgcac 1561 cgttttccgc gaattcgagc agctcaaccg caacttcagc aacttcatcc tggacaagtt 1621 cttgaggcac tgcgaaagcc ttcggcccgg ggccgccccc cgcgacatga tggacgcctt 1681 tatcctctct gcggaaaaga aggcggccgg ggactcgcac ggtggtggcg cgcggctgga 1741 tttggagaac gtaccggcca ctatcactga catcttcggc gccagccagg acaccctgtc 1801 caccgcgctg cagtggctgc tcctcctctt caccaggtaa agcctctggg aggcgtgggc 1861 caggtctttt ctcctctgaa aaaggcggag tagagacaga atatgctgag tttgcaagca 1921 gggccccggg tttggggttt cgctccaggt ccccacccct caaaaccaag atcgcgtcgg 1981 taaagggact cacagtgagg gctgcgacac gcgcacgcgc cccacccagc ggtgccccga 2041 cccctccggt ctcctatctt gtctctatcg tcccctcccc tgcttgcgag tgagaacaca 2101 tttgcaaaga cccctccacc ccccggaaaa acaagagttt ttaaatgctt ggagatgagc 2161 cctgatatct ctctccctgg cgcattacaa tcagaactgg aatagttccg aaagaaaagg 2221 taatgtcata aatatgttaa acacagcagc ctctcctagg ctagtcctcg gcgtgcatcc 2281 gaggccgccc agccctggcg ctaaaagcgg gccgcccgtc agggctttgt tccaggccaa 2341 ggaagcccat ggaggccggg ccagccgaca ggtaacccgc acagaaactt tcagaaggcg 2401 gccacaacta gcgggcagcg ctaggtttat aaaacctccg cgctaggagt ttgagaaatg 2461 ccggggtaga agacaagaag cagtcacttt tacgaaagca gagtagcatt cagaaaggca 2521 gatgggatat ccaggaggcg cctgcagacg tttctggccc ctgcgcttgg ctcagttagc 2581 ggaccccctg atgcccacgt tggtctctac taagcacgga ttcaacaggt ccctggtgtc 2641 gggttgccag atttggcaaa agaaaagtaa gttttacacg ggaatactca cactaaaaga 2701 ttagcccttg ttgatctgaa atccatattt aactgggcgg cctgtagtat ttactgtgga 2761 aacactatcc aatcctggtt aggcgccaca gcaatctata cttaaaatgg agaaatcgaa ccataggttt cattagaacc tttggaggtc cgtatgacag gtcatgccca gcagagtagt ctccccacca gaagcgattc tgcaaacaat ttctaatctt taatgtatag catttttaaa taccttaccc caggtagctg cctgttgtgg catggattac attaagattt ctacagtttg agtatgtagc ctgttggaat cgtgggccct aaatttcatg tcttctaact tcatgggccc aagtcagcct ttataatggg agtccatctt attaatttag taatgtgctt acaccaaaca gggagggacc ctttatgaag gccaacacct tggtctgtga ttcttggaca gtgggcaaaa tccatcctgg ttcagttatg tccatggagc gaagcaagag ttcagttttt aaatcaactg gctatgcagg attatataca ctaggggcaa ttgtgtcatt gaaaggtgtt tttccttaga ctttttagta taaagaaaag ttgtgcatcc acaatagttc actttcaatt ggcttggcaa ttcatttata gcaacaaaga tacatgtttc taaaaataac cagttacttg ttaatattta ttatatataa atttttattt aggctggtcc gggctacagg ttacatattt tgggtttaaa tgttttttaa taccataatt tttatccatc tgtccaggga gggtgctttt actaccctga aaaagtgagt ctaaaaagtg tatctactat aaagacagca gtaatttagt tcactgagct tctagatgaa ggtatcctga gtctgccttg ccatgcgctt ctgtcttggg atcatgaccc aggatggcct ggcggtgcat ctcaccagtg gtctaaccat tccttgatag gcaagctgaa ttccagttcc tccatcaggt agcttctggg tactgcatct atgtttcgca tcttggagca tggaaggcag tactgtacag ttaaaatcat tcaaccagag gcagataggc tccgagtact caatatgctg attacacgat cattgtcgat gggtttggtc tatgaaaaaa tccacttcat ttttttgact ttttggtaat tcatttattg taattttatg caaactcctg cgtgtaccac ttgtatctct atgaggcggg aaagattgta ttatgaacat aggacaccaa aatgagggag gcctttgtag tataaagatg ttttttaggt ttgtgagccc tgtgcttttt ttagtcatgc gagaaattag agatagccta ataagaattt tgtgcagact tatgggtgac ctccagcttt ctaccacatt actgaagtgg catcaacaag tggcgaagaa cgatttcagg taaacccaag tgctgtccaa attttagaaa tcttttgtgc gaggtgtgct agattttttt tggttatttc aggcaaattt caagtgagca agaatgactc ctaccttcac agaaacaccc atcagggaaa attttaactt ccaattaggc atactttttt ctgtttttgt ggctgcgttc cacaaagtct gttggcagac cacatacgtg tctaacactt ttttgatggc aactttaatg tatttactta ggctcaagca catgcctggc taaattattt aagaggttac tcagtttgta tgggtatttg ttatctttgt aaaaaaaatt attccttata aatgcattaa ctgaagattg taggcactgt gaggctggga aaggcctatt gaagctgttt tttaagaaaa tgctcacttg cgagtgcagg cagcccaacc gtgcctgtca cccaaggaca cctaacccgg gacctgacca ctttctaaga gccaacccaa tcatttaaag aatttacaag tattcacatc tgcttctcaa ccatacccag gagtcaaaga tgaaggtagc tgattgccga gttggagatg tttccttatt aaattaaaag atggtgggtg aggaaatccc ttgaaacggc ggcaaaaaga tttccttttt atatacgttt actctacaac aaaatagata tcctgcaata tatacatttt tgactcaagg tatatagtat ttggtcattg ccttagagac gttctcccgc taatttttag tctgaaaata cttcatgtct tcatcaacag ctttcaaatt ataaaatgag tactttcaca ctataaaaaa aatgatgtat taaaagacgt ccctgcggta aaacttaaga acaggaaata tagatttttt agtggaatta cttttctctc cagaattgga tgccctatgt ctattcctca ctgtggtttt agaactttga gcagagtgat tgcagctttt atgagcctgc tcaatgtcac ccaaggaaac ttcggagatg ttagcgttta cggttcttca cttaaagggc attctttgga agagaccaga ctgaatctgc aaaatccact tttctgtata agggagaggc ggaataggtt ctttgttttt aataaaacaa agtgaaaaga tattgacgca acaaggcaga ctctctggct taatgttgaa ttttcggagt tagtggacat tttgctatga gccttgattg agggtctcac cgctgtctgg aattttaggt catttctagg cttgcctcgt tgaataagta taaaaaatac aacagcatgt ttgtaacttt attaaaaatt gaaaatattt aaaaatattt cccaatggaa gttttttgac taattcttaa tcccagaaat aaataaatta tccacattaa tcaggtcgtg cctggccttc tgccaccact tgtcaaccag tccagctcga gattttttca tctcttcatc gaaaatgaat tctcagagag ttgccaataa aggagtaaaa aggtgagcat tgagtagtgg ccaatgaatt gttaaaatgc 2821 2881 2941 3001 3061 3121 3181 3241 3301 3361 3421 3481 3541 3601 3661 3721 3781 3841 3901 3961 4021 4081 4141 4201 4261 4321 4381 4441 4501 4561 4621 4681 4741 4801 4861 4921 4981 5041 5101 5161 5221 5281 5341 5401 5461 5521 5581 5641 5701 5761 acatatagac acatacaccc aaacacttac accaaactac tgaatgaagc agtattttgg 5821 taaccaggcc atttttggtg ggaatccaag attggtctcc catatgcaga aatagacaaa 5881 aagtatatta aacaaagttt cagagtatat tgttgaagag acagagacaa gtaatttcag 5941 tgtaaagtgt gtgattgaag gtgataaggg aaaagataaa gaccagaaat tcccttttca 6001 ccttttcagg aaaataactt agactctagt atttatgggt ggatttatcc ttttgccttc 6061 tggtatactt ccttactttt aaggataaat cataaagtca gttgctcaaa aagaaatcaa 6121 tagttgaatt agtgagtata gtggggttcc atgagttatc atgaatttta aagtatgcat 6181 tattaaattg taaaactcca aggtgatgtt gtacctcttt tgcttgccaa agtacagaat 6241 ttgaattatc agcaaagaaa aaaaaaaaag ccagccaagc tttaaattat gtgaccataa 6301 tgtactgatt tcagtaagtc tcataggtta aaaaaaaaag tcaccaaata gtgtgaaata 6361 tattacttaa ctgtccgtaa gcagtatatt agtattatct tgttcaggaa aaggttgaat 6421 aatatatgcc ttgtataata ttgaaaattg aaaagtacaa ctaacgcaac caagtgtgct 6481 aaaaatgagc ttgattaaat caaccaccta tttttgacat ggaaatgaag cagggtttct 6541 tttcttcact caaattttgg cgaatctcaa aattagatcc taagatgtgt tcttattttt 6601 ataacatctt tattgaaatt ctatttataa tacagaatct tgttttgaaa ataacctaat 6661 taatatatta aaattccaaa ttcatggcat gcttaaattt taactaaatt ttaaagccat 6721 tctgattatt gagttccagt tgaagttagt ggaaatctga acattctcct gtggaaggca 6781 gagaaatcta agctgtgtct gcccaatgaa taatggaaaa tgccatgaat tacctggatg 6841 ttctttttac gaggtgacaa gagttgggga cagaactccc attacaactg accaagtttc 6901 tcttctagat gattttttga aagttaacat taatgcctgc tttttggaaa gtcagaatca 6961 gaagatagtc ttggaagctg tttggaaaag acagtggaga tgaggtcagt tgtgtttttt 7021 aagatggcaa ttactttggt agctgggaaa gcataaagct caaatgaaat gtatgcattc 7081 acatttagaa aagtgaattg aagtttcaag ttttaaagtt cattgcaatt aaacttccaa 7141 agaaagttct acagtgtcct aagtgctaag tgcttattac attttattaa gctttttgga 7201 atctttgtac caaaatttta aaaaagggag tttttgatag ttgtgtgtat gtgtgtgtgg 7261 ggtgggggga tggtaagaga aaagagagaa acactgaaaa gaaggaaaga tggttaaaca 7321 ttttcccact cattctgaat taattaattt ggagcacaaa attcaaagca tggacattta 7381 gaagaaagat gtttggcgta gcagagttaa atctcaaata ggctattaaa aaagtctaca 7441 acatagcaga tctgttttgt ggtttggaat attaaaaaac ttcatgtaat tttattttaa 7501 aatttcatag ctgtacttct tgaatataaa aaatcatgcc agtattttta aaggcattag 7561 agtcaactac acaaagcagg cttgcccagt acatttaaat tttttggcac ttgccattcc 7621 aaaatattat gccccaccaa ggctgagaca gtgaatttgg gctgctgtag cctatttttt 7681 tagattgaga aatgtgtagc tgcaaaaata atcatgaacc aatctggatg cctcattatg 7741 tcaaccaggt ccagatgtgc tataatctgt ttttacgtat gtaggcccag tcgtcatcag 7801 atgcttgcgg caaaaggaaa gctgtgttta tatggaagaa agtaaggtgc ttggagttta 7861 cctggcttat ttaatatgct tataacctag ttaaagaaag gaaaagaaaa caaaaaacga 7921 atgaaaataa ctgaatttgg aggctggagt aatcagatta ctgctttaat cagaaaccct 7981 cattgtgttt ctaccggaga gagaatgtat ttgctgacaa ccattaaagt cagaagtttt 8041 actccaggtt attgcaataa agtataatgt ttattaaatg cttcatttgt atgtcaaagc 8101 tttgactcta taagcaaatt gcttttttcc aaaacaaaaa gatgtctcag gtttgttttg 8161 tgaattttct aaaagctttc atgtcccaga acttagcctt tacctgtgaa gtgttactac 8221 agccttaata ttttcctagt agatctatat tagatcaaat agttgcatag cagtatatgt 8281 taatttgtgt gtttttagct gtgacacaac tgtgtgatta aaaggtatac tttagtagac 8341 atttataact caaggatacc ttcttattta atcttttctt atttttgtac tttatcatga 8401 atgcttttag tgtgtgcata atagctacag tgcatagttg tagacaaagt acattctggg 8461 gaaacaacat ttatatgtag cctttactgt ttgatatacc aaattaaaaa aaaattgtat 8521 ctcattactt atactgggac accattacca aaataataaa aatcactttc ataatcttg PHỤ LỤC Các nghiên cứu đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát nước khác tính đến năm 2010 Tác giả Stoilovetal, 1997 Stoilovetal, 1998 Các nước Thổ Nhĩ Kỳ Tây Ban Nha, Mỹ, Pháp, Canada, Anh, Bejjanietal, 1998 Plasilovaetal, 1999 Martinetal, 2000 Bejjanietal, 2000 Michels-Rautenstraussetal, 2001 Mashimaetal, 2001 Kakiuchi-Matsumotoetal, 2001 Belmoudenetal, 2002 Stoilovetal, 2002 Reddyetal, 2003 Chakrabartietal, 2003 Colombetal, 2003 Sitorusetal, 2003 Reddyetal, 2004 Curryetal, 2004 Panickeretal, 2004 Senaetal, 2004 Messina-Baasetal, 2007 Hollanderetal, 2006 Strometal, 2006 Chavarria-Soleyetal, 2006 Thổ Nhĩ Kỳ Ả rập Slovakia Canada Ả rập Thổ Nhĩ Kỳ, Đức, Cộng hòa Libang Nhật Bản Nhật Bản Maroc Braxin Ấn độ Ấn độ Angieri, Pháp, Bồ Đào Nha Indonesia-Sudan, Thổ Nhĩ Kỳ, Ý Ấn độ Ecuado Ấn độ Braxin, Mỹ Mexico Asian, Tây Ban Nha, Trung Đông Mỹ CostaRica, Nga, Thổ Nhĩ Kỳ, Đức, 24 20 10 13 11 26 37 15 24 4 Alfadhlietal, 2006 Brinkmannetal, 2006a Nirmaladevietal, 2006a Brinkmannetal, 2006b Nirmaladevietal, 2006b Jiangetal, 2007 El-Ashryetal, 2007 Ramprasadetal, 2007 Chitsazianetal, 2007 Dimasietal, 2007 Bagiyevaetal, 2007 Huangetal, 2007 Thụy Sỹ, Mỹ, Ả rập Kuwait Hà Lan Ấn độ Hà Lan Ấn độ Trung Quốc Ả rập Ấn độ Iran Anh, Ý, Ấn độ Thổ Nhĩ Kỳ Trung Quốc 26 12 1 1 72 15 Số BN 17 Chenetal, 2008 Firasatetal, 2008 Zentenoetal, 2008 Sivadoraietal, 2008 Campos-Molloetal, 2009 Yangetal, 2009 Tanwaretal, 2009a El-Gayaretal, 2009 López-Garridoetal, 2009 Tanwaretal, 2009b Weisschuhetal, 2009 DellaPaoleraetal, 2010 Huangetal, 2009 Surietal, 2009 Fuseetal, 2010 Hilaletal, 2010 Bar-Yosefetal, 2010 Trung Quốc Pakistan Mexico Di-gan Tây Ban Nha Trung Quốc Ấn độ Oman Tây Ban Nha Ấn độ Đức Braxin Trung Quốc Iran Nhật Bản Maroc Israel 20 14 23 9 13 19 PHỤ LỤC Các vị trí đột biến gen CYP1B1 bệnh nhân glôcôm bẩm sinh nguyên phát (UD: Đột biến chưa xác định ;NR:SNPmới) Vị trí Vị trí DNA N % Protein Vùng không Loại đột biến Vùng khơng Exon 3130C>T 0,18 mã hóa Lệch khung mã hóa Exon 3834insA 11 1,00 Exon 3860C>T 0,18 Exon 3876T>G 0,18 Exon 3905del23 0,18 Exon 3913C>T 0,09 Exon 3929C>T 0,09 Exon 3956insC 0,09 Exon 3960C>T 0,09 Exon 3964delC 0,09 Exon 3972delC 0,18 Exon 3976G>A 0,55 Exon 3976G>C 0,09 Exon 3979delA 0,09 Exon 3985C>G 0,09 Exon 3987G>A 207 18,85 Exon 3988delA 0,18 Exon 4004del8 0,09 Exon 4035T>C 0,18 dịch mã L77P Exon 4046T>A 0,18 Exon 4048C>A 0,18 dbSNP NR Thêm Nu NR Tạo mã kết thúc NR Sai nghĩa NR Xóa đoạn NR Tạo mã kết thúc NR Tạo mã kết thúc NR Thêm Nu NR Sai nghĩa NR Xóa đoạn NR Xóa đoạn NR Tạo mã kết thúc NR Sai nghĩa NR Xóa đoạn NR Sai nghĩa NR Sai nghĩa rs28936700 Xóa đoạn NR Xóa đoạn NR Sai nghĩa NR Y81N Sai nghĩa rs9282671 Y81X Tạo mã kết thúc NR dịch mã Q19X L24R Không thay đổi dịch mã Q37X Q42X Lệch khung dịch mã P52L Lệch khung dịch mã Lệch khung dịch mã W57X W57C Lệch khung dịch mã I60M G61E Lệch khung dịch mã Lệch khung Vị trí Vị trí DNA N % Protein Lệch khung Loại đột biến dbSNP Exon 4052delG 0,18 Xóa đoạn NR Exon 4081delC 0,18 Exon 4089T>C 0,09 dịch mã V95A Xóa đoạn NR Sai nghĩa NR Exon 4122C>A 0,09 A106D Sai nghĩa NR Exon 4124C>G 0,36 L107V Sai nghĩa NR Exon 4133C>T 12 1,09 Q110X Tạo mã kết thúc NR Exon 4148G>C 0,18 A115P Sai nghĩa NR Exon 4154C>T 0,09 R117W Sai nghĩa NR Exon 4155G>C 0,09 R117P Sai nghĩa NR Exon 4157C>T 0,18 Sai nghĩa NR Exon 4168ins18a 0,09 P118S Lệch khung Thêm Nu NR Exon 4196del5 0,09 Xóa đoạn NR Exon 4200T>G 0,36 dịch mã M132R Sai nghĩa NR Exon 4206T>C 0,09 F134S Sai nghĩa NR Exon 4236A>C 0,09 Q144P Sai nghĩa NR Exon 4236A>G 0,09 Sai nghĩa NR Exon 4238del10 0,36 Q144R Lệch khung Xóa đoạn NR Exon 4259delAT 0,09 Xóa đoạn NR Exon 4280C>T 0,09 Tạo mã kết thúc NR Exon 4292C>T 0,09 Sai nghĩa NR Exon 4306insT 0,18 Thêm Nu NR Exon 4322G>A 0,73 Sai nghĩa NR Exon 4322G>T 0,09 Tạo mã kết thúc NR Exon 4330delTG 0,27 Xóa đoạn NR Exon 4335T>G 0,18 dịch mã L177R Sai nghĩa NR Exon 4335T>C 0,09 L177P Sai nghĩa NR dịch mã Lệch khung dịch mã Lệch khung dịch mã Lệch khung dịch mã Q159X R163C Lệch khung dịch mã E173K E173X Lệch khung Vị trí Vị trí DNA N % Protein Lệch khung Loại đột biến dbSNP Exon 4339delG 24 2,19 Xóa đoạn NR Exon 4340delG 34 3,10 Xóa đoạn NR Exon 4342delG 0,09 Exon 4373T>C 0,09 dịch mã F190L Xóa đoạn NR Sai nghĩa NR Exon 4375C>A 0,18 F190L Sai nghĩa NR Exon 4379G>T 0,09 D192Y Sai nghĩa NR Exon 4380A>T 0,36 D192V Sai nghĩa NR Exon 4383C>T 0,36 P193L Sai nghĩa NR Exon 4397G>A 0,18 V198I Sai nghĩa rs59472972 Exon 4410C>A 0,09 A202D Sai nghĩa NR Exon 4413A>G 0,09 N203S Sai nghĩa NR Exon 4430T>C 0,09 C209R Sai nghĩa NR Exon 4449G>T 0,27 S215I Sai nghĩa NR Exon 4490G>A 29 2,64 E229K Sai nghĩa rs57865060 Exon 4499G>C 0,09 G232R Sai nghĩa NR Exon 4520A>C 0,36 Sai nghĩa NR Exon 4523delC 0,09 S239R Lệch khung Xóa đoạn NR Exon 4530dup16/del6 0,09 Lặp/Mất Nu NR Exon 4531del22 0,09 Exon 4547C>T Exon 4578C>A Exon dịch mã Lệch khung dịch mã Lệch khung dịch mã Lệch khung dịch mã Lệch khung Xóa đoạn NR 0,09 dịch mã Q248X Tạo mã kết thúc NR 0,27 F261L Sai nghĩa NR 4589G>T 0,09 Exon 4602del9 0,36 Exon 4611dup9 0,18 Exon 4633delC 0,18 E262X Tạo mã kết thúc Khơng thay đổi Xóa đoạn dịch mã Lệch khung Duplication dịch mã Lệch khung Xóa đoạn dịch mã NR NR NR NR Vị trí Vị trí DNA N % Loại đột biến dbSNP Exon 4635delT 0,46 Exon 4640C>G 0,09 dịch mã H279D Xóa đoạn NR Sai nghĩa NR Exon 4645C>A 0,27 C280X Tạo mã kết thúc NR Exon 4646G>T 0,27 E281X Tạo mã kết thúc NR Exon 4650G>A 0,09 S282N Sai nghĩa NR Exon 4664G>A 0,09 Sai nghĩa NR Exon 4668insC 0,55 A287S Lệch khung Thêm Nu NR Exon 4673insC 0,36 Thêm Nu NR Exon 4677A>G 0,55 dịch mã D291G Sai nghĩa NR Exon 4680e4681TG>AA 0,09 M292K Sai nghĩa NR Exon 4761A>G 0,09 N319S Sai nghĩa NR Exon 4763G>T 0,18 Sai nghĩa NR Exon 4776insAT 0,36 V320L Lệch khung Thêm Nu NR Exon 4791G>T 0,46 dịch mã G329V Sai nghĩa NR Exon 4791G>A 0,18 G329D Sai nghĩa NR Exon 4793e4794GC>TT 0,09 A330F Sai nghĩa NR Exon 4812C>A 0,09 S336Y Sai nghĩa NR Exon 4825G>T 0,09 Q340H Sai nghĩa NR Exon 4828G>A 0,09 Exon 4838delCTC 0,09 4849del 0,18 Exon 7899del12 0,09 Exon 7900C>T 0,18 Exon 7900delCG 0,36 Exon 7901del13 30 2,73 Intron 2/Exon Protein Lệch khung dịch mã Lệch khung W341X Tạo mã kết thúc Khơng thay đổi Xóa đoạn khung dịch mã Lệch khung Xóa đoạn dịch mã Khơng thay đổi Xóa đoạn khung dịch mã R355X Tạo mã kết thúc Lệch khung Xóa đoạn dịch mã Lệch khung Xóa đoạn dịch mã NR NR NR NR NR NR NR Vị trí Vị trí DNA N % Protein Loại đột biến dbSNP Exon 7925T>A 0,18 V363D Sai nghĩa NR Exon 7927G>A 17 1,55 V364M Sai nghĩa NR Exon 7930G>T 0,18 Sai nghĩa rs55771538 Exon 7934delG 0,18 G365W Lệch khung Xóa đoạn NR Exon 7939C>T 0,27 dịch mã R368C Sai nghĩa NR Exon 7940G>A 87 7,92 R368H Sai nghĩa rs28936414 Exon 7940G>T 0,18 Sai nghĩa NR Exon 7945delC 0,18 R368L Lệch khung Xóa đoạn NR Exon 7957G>A 0,73 dịch mã D374N Sai nghĩa rs28936413 Exon 7959C>G 0,18 D374E Sai nghĩa NR Exon 7970T>A 0,09 L378Q Sai nghĩa NR Exon 7990C>T 14 1,28 L385F Sai nghĩa NR Exon 7996G>A 65 5,92 E387K Sai nghĩa rs55989760 Exon 7999G>A 0,27 A388T Sai nghĩa NR Exon 8005C>T 23 2,09 R390C Sai nghĩa NR Exon 8005C>A 0,36 R390S Sai nghĩa NR Exon 8006G>A 74 6,74 R390H Sai nghĩa rs56010818 Exon 8033T>G 0,09 I399S Sai nghĩa NR Exon 8035C>T 0,27 Sai nghĩa NR Exon 8037dup10 39 3,55 P400S Lệch khung Lặp đoạn NR Exon 8047dup10 0,09 Lặp đoạn NR Exon 8104A>T 0,09 Sai nghĩa NR Exon 8111insG 0,18 Thêm Nu NR Exon 8127C>G 0,09 dịch mã D430E Sai nghĩa NR Exon 8131C>G 0,09 L432V Sai nghĩa rs1056836 Exon 8139G>A 0,09 W434X Tạo mã kết thúc NR Exon 8147C>T 0,64 P437L Sai nghĩa rs56175199 Exon 8162C>G 0,09 P442R Sai nghĩa NR dịch mã Lệch khung dịch mã N423Y Lệch khung Vị trí Vị trí DNA N % Protein Loại đột biến dbSNP Exon 8165C>G 0,27 A443G Sai nghĩa rs4986888 Exon 8167C>T 0,09 R444X Tạo mã kết thúc NR Exon 8168G>A 0,82 R444Q Sai nghĩa NR Exon 8170T>A 0,18 F445I Sai nghĩa NR Exon 8171T>G 0,09 F445C Sai nghĩa NR Exon 8171T>C 0,18 Sai nghĩa NR Exon 8182delG 11 1,00 F445S Lệch khung Xóa đoạn NR Exon 8209del5ins11 0,09 Mất/Thêm Nu NR Exon 8214dup27 0,27 Lặp đoạn NR Exon 8214delAG 0,18 Xóa đoạn NR Exon 8234G>A 0,18 Sai nghĩa NR Exon 8240dup27 0,18 Lặp đoạn NR Exon 8242C>T 53 4,83 dịch mã R469W Sai nghĩa rs28936701 Exon 8246G>A 0,18 C470Y Sai nghĩa NR Exon 8249T>G 0,18 I471S Sai nghĩa NR Exon 8297T>C 0,18 L487P Sai nghĩa NR Exon 8329A>G 0,09 N498D Sai nghĩa NR Exon 8333A>G 0,09 Sai nghĩa NR Exon 8341delA 0,18 E499G Lệch khung Xóa đoạn NR Exon 8354del20 0,18 Xóa đoạn NR Exon 8373del6 0,18 Xóa đoạn NR Exon 8405G>A 0,36 khung dịch mã R523K Sai nghĩa NR UD UD 89 8,11 UD UD UD dịch mã Lệch khung dịch mã Lệch khung dịch mã Lệch khung dịch mã G466D Lệch khung dịch mã Lệch khung dịch mã Không thay đổi PHỤ LỤC Vị trí Vị trí DNA Protein Loại đột biến Exon 3987G > A p.Gly61Glu Sai nghĩa Exon 958G > T p.Val320Leu Sai nghĩa Exon 8242C > T p.Arg469Trp Sai nghĩa Exon 182G > A p.Gly61Glu Sai nghĩa Exon 4322G > A p.Glu173Lys Sai nghĩa Exon 7927G > A p.Val364Met Sai nghĩa Exon 7940G > A p.Arg368His Sai nghĩa Exon 8147C > T p.Pro437Leu Sai nghĩa Exon 8165C > G p.Ala443Gly Sai nghĩa Đột biến 8263 T > C p.Ser476Pro Đột biến 8037_8046dup10 p.Thr404fsX30 Đột biến 8214_8215delAG p.Val460fs Đột biến Đột biến Đột biến Exon 317C > A p.Ala106Asp Sai nghĩa Exon 1159G > A p.Glu387Lys Sai nghĩa Exon 8006G > A p.Arg390His Sai nghĩa Exon Exon 4490G > A 685 g > A p.Glu229Lys p.Glu229Lys Sai nghĩa Sai nghĩa Exon 8168G > A p.Arg444Gln Sai nghĩa Exon 535delG p.Ala179fs Exon 7996G > A p.Glu387Lys Lệch khung dịch mã Sai nghĩa Quốc gia Lebanon Morocco Tunisia Saudi Arabia Vietnam South Korea Lebanon Morocco Saudi Arabia Iran Portugal Saudi Arabia China Morocco South Korea Morocco Brazil India Morocco South Korea India Brazil Saudi Arabia India Brazil Saudi Arabia India Brazil India Brazil India Brazil Portugal United States Portugal United States Pakistan Saudi Arabia Korea Lebanon Pakistan Saudi Arabia Iran Korea Lebanon Portugal Tunisia Europe Hungary PHỤ LỤC Bảng nồng độ độ tinh mẫu DNA tách chiết từ mẫu máu bệnh nhân nghiên cứu G01 Nồng độ DNA(ng/µL) 171,6 Độ tinh (A260/280) 1,89 G44 Nồng độ DNA (ng/µL) 151,6 Độ tinh (A260/280) 1,80 G02 153,4 1,8 G45 147,3 1,96 G03 145,7 1,91 G46 132,2 1,75 G04 124,7 1,85 G47 122,6 1,86 G05 117,4 1,87 G48 157,8 1,80 G06 110,0 1,97 G49 140,6 1,83 G07 137,1 1,99 G50 150,4 1,75 G08 140,7 1,9 G51 153,6 1,80 G09 123,0 1,91 G52 140,6 1,91 G10 167,5 1,88 G53 180,5 1,93 G11 203,3 1,9 G54 170,8 1,75 G12 201,5 1,86 G55 151,6 1,85 G13 233,2 1,89 G56 133,7 1,81 G14 101,0 1,93 G57 146,9 1,92 G15 136,2 1,9 G58 146,5 1,83 G16 125,6 1,91 G59 132,4 1,76 G17 112,4 1,84 G60 166,7 1,81 G18 132,2 1,86 G61 180,6 1,92 G19 122,6 1,76 G62 106,8 1,75 G20 157,8 1,81 G63 192,1 1,80 G21 140,6 1,92 G64 153,6 1,91 G22 150,4 1,83 G65 140,6 1,86 G23 146,5 1,75 G66 180,5 1,93 G24 132,4 1,86 G67 160,2 1,75 Mã số Mã số G25 166,7 1,80 G68 142,9 1,93 G26 135,5 1,83 G69 151,6 1,75 G27 112,6 1,86 G70 133,7 1,83 G28 135,7 1,90 G71 146,9 1,75 G29 142,9 1,73 G72 157,6 1,80 G30 151,6 1,88 G73 140,5 1,91 G31 180,8 1,90 G74 135,7 1,93 G32 200,4 1,96 G75 142,9 1,75 G33 147,3 1,78 G76 151,6 1,83 G34 114,6 1,93 G77 146,5 1,81 G35 106,8 1,75 G78 132,4 1,92 G36 192,1 1,80 G79 166,7 1,83 G37 153,6 1,91 G80 201,5 1,9 G38 140,6 1,93 G81 233,2 1,86 G39 180,5 1,75 G82 101,0 1,89 G40 160,2 1,83 G83 142,9 1,78 G41 152,4 1,86 G84 151,6 1,93 G42 135,7 1,93 G85 180,8 1,75 G43 142,9 1,75 G86 153,6 1,80 ... tài "Nghiên cứu xác định đột biến gen CYP1B1 gây bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát phát người lành mang gen bệnh" thực với hai mục tiêu: Xác định đột biến gen CYP1B1 mối liên quan với lâm sàng bệnh. .. quan bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát với đột biến gen 28 1.2.3 Mối liên quan bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát với đột biến gen 28 1.3 Đột biến CYP1B1 phát người lành mang gen bệnh 32... học bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.2 Dịch tễ học bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh bệnh glôcôm bẩm sinh nguyên phát 1.1.3 Cơ chế bệnh sinh bệnh glôcôm