BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THUỲ ANH NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI KETOCONAZOL VÀ CLIMBAZOL TRONG DẦU GỘI ĐẦU KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2019 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THUỲ ANH 1401018 NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI KETOCONAZOL VÀ CLIMBAZOL TRONG DẦU GỘI ĐẦU KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn : GS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu TS Lê Thị Hường Hoa Nơi thực hiện: Khoa Mỹ phẩm Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung Ương HÀ NỘI – 2019 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành lòng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu TS Lê Thị Hường Hoa, hai người thầy trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo tạo điều kiện để tơi hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới DS Phùng Thị Hồng với giúp đỡ, hướng dẫn cán bộ, nhân viên thuộc Khoa Mỹ Phẩm – Viện Kiểm Nghiệm Thuốc Trung Ương Tôi xin trân trọng cảm ơn Thầy, Cô giáo Trường Đại học Dược Hà Nội, đặc biệt thầy Bộ mơn Hố Phân tích – Độc chất trang bị cho kiến thức kinh nghiệm quý báu suốt thời gian học tập nghiên cứu trường Cuối tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè động viên, đóng góp ý kiến, hỗ trợ giúp đỡ tơi suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn! Sinh viên Đỗ Thùy Anh MỤC LỤC TRANG DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ KETOCONAZOL 1.1.1 Đặc điểm chung 1.1.2 Ứng dụng ketoconazol 1.1.3 Độc tính ketoconazol 1.1.4 Sự đề kháng vi khuẩn với ketoconazol kháng sinh 1.1.5 Một số nghiên cứu phân tích ketoconazol mỹ phẩm 1.2 TỔNG QUAN VỀ CLIMBAZOL 1.2.1 Đặc điểm chung 1.2.2 Ứng dụng climbazol 1.2.3 Độc tính climbazol 10 1.2.4 Sự đề kháng vi khuẩn với climbazol kháng sinh 11 1.2.5 Một số nghiên cứu phân tích climbazol mỹ phẩm 12 1.3 SƠ LƯỢC VỀ PHƯƠNG PHÁP HPLC 13 1.3.1 Nguyên tắc trình sắc ký sắc ký lỏng hiệu cao 13 1.3.2 Cấu tạo máy HPLC 14 1.3.3 Ứng dụng HPLC 15 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 HỐ CHẤT VÀ THIẾT BỊ 17 2.1.1 Dung mơi hoá chất 17 2.1.2 Thiết bị dụng cụ 17 2.2 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 18 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.5 XỬ LÝ THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 21 CHƯƠNG KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM VÀ BÀN LUẬN 22 3.1 22 KHẢO SÁT LỰA CHỌN CÁCH XỬ LÝ MẪU 3.1.1 Lựa chọn dung mơi hồ tan mẫu 22 3.1.2 Cách chuẩn bị mẫu 22 3.2 23 XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 3.2.1 Lựa chọn điều kiện sắc ký 23 3.2.2 Thẩm định phương pháp 25 3.2.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 34 3.3 ÁP DỤNG PHƯƠNG PHÁP ĐỂ KIỂM TRA MỘT SỐ MẪU DẦU GỘI ĐẦU LƯU HÀNH TRÊN THỊ TRƯỜNG 35 3.4 BÀN LUẬN 37 3.4.1 Về hợp chất nghiên cứu 37 3.4.2 Về phương pháp xử lý mẫu 38 3.4.3 Về xây dựng quy trình phân tích 38 3.4.4 Về thẩm định phương pháp 39 3.4.5 Về kiểm tra mẫu dầu gội đầu lưu hành thị trường 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 41 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT AOAC Hiệp hội Nhà hố học Phân tích Chính thức (Association of Official Analytical Chemists) ASEAN Hiệp hội Quốc gia Đông Nam Á (Association of Southeast Asian Nations) CBZ Climbazol CHMP Hội đồng Chế phẩm Thuốc dùng cho Con người Châu Âu (Committee of Medicinal Products for Human Use) CYP Cytochrom P450 DĐVN V Dược Điển Việt Nam V DPSC Hội đồng Quản lý Thuốc Độc chất (Drugs and Poisons Scheduling Committee) EEC Hiệp hội nước Châu Âu sản phẩm mỹ phẩm (European Commission Cosmetics) EMA Cơ quan Quản lý Thuốc Châu Âu (European Medicines Agency) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High – Performance Liquid Chromatography) ICH Hội nghị Quốc tế hài hồ hố thủ tục đăng ký dược phẩm sử dụng cho người (The International Council for Harmonisation) IN Indigo carmine KCZ Ketoconazol LC Sắc ký lỏng (Liquid Chromatography) LOD Giới hạn phát (Limit of Detection) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of Quantification) MB Xanh Methylen (Methylene Blue) MEC Hội đồng Phê duyệt Thuốc (Medicines Evaluation Committee) MS Phương pháp khối phổ (Mass Spectrometry) PEG Polyethylene Glycol PSC Hội đồng Quản lý Độc chất (Poisons Scheduling Committee) r Hệ số tương quan (Relative coefficient) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) UPLC Sắc ký lỏng siêu hiệu (Ultra Performance Liquid Chromatography) UV Tia tử ngoại (UltraViolet) VIS Bức xạ khả kiến (Visible) DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1 Tính chất ketoconazol Bảng 1.2 Tính chất climbazol Bảng 2.1 Các mẫu sử dụng để xây dựng phương pháp phân tích 18 Bảng 2.2 Giá trị độ xác độ thu hồi yêu cầu theo AOAC 21 Bảng 3.1 Độ thích hợp hệ thống sắc ký 26 Bảng 3.2 Thời gian lưu hệ số phân giải chất nghiên cứu mẫu khác 27 Bảng 3.3 Chuẩn bị dung dịch chuẩn hỗn hợp 28 Bảng 3.4 Kết khảo sát độ tuyến tính CBZ KCZ 28 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Bảng 3.7 Bảng 3.8 Bảng 3.9 Bảng 3.10 Kết khảo sát độ phương pháp KCZ CBZ mẫu placebo (P1) Kết khảo sát độ phương pháp KCZ CBZ mẫu placebo (P2) Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp KCZ CBZ mẫu thử M1 thêm chuẩn KCZ (M1K) Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp KCZ CBZ mẫu thử M2 thêm chuẩn KCZ (M2K) Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp KCZ CBZ mẫu thử M1 thêm chuẩn KCZ (M1K) Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp KCZ CBZ mẫu thử M2 thêm chuẩn KCZ (M2K) 30 31 32 32 33 34 Bảng 3.11 LOD LOQ climbazol ketoconazol 34 Bảng 3.12 Kết kiểm tra mẫu thử thu thập thị trường 35 DANH MỤC CÁC HÌNH, ĐỒ THỊ Tên hình, đồ thị Hình 2.1 Các mẫu dầu gội đầu lưu hành thị trường sử dụng để kiểm tra phương pháp xây dựng Trang 18 a) Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn với hệ pha động methanol – dung dịch amoni acetat 0,5% tỷ lệ 80:20 (v/v) Hình 3.1 b) Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn với hệ pha động methanol – dung dịch amoni acetat 0,5% tỷ lệ 75:25 (v/v) 24 c) Sắc ký đồ hỗn hợp chuẩn với hệ pha động methanol – dung dịch amoni acetat 0,5% tỷ lệ 70:30 (v/v) Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Sắc ký đồ độ đặc hiệu với KCZ, CBZ dầu gội đầu Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ climbazol Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ ketoconazol Sắc ký đồ thu phân tích mẫu dầu gội đầu 27 29 29 36 ĐẶT VẤN ĐỀ Kinh tế phát triển, chất lượng sống người dân nâng cao nên mỹ phẩm trở thành mặt hàng tiêu dùng quen thuộc Mỹ phẩm loại hàng hóa có lợi nhuận cao nên khó tránh khỏi việc sản xuất, kinh doanh, buôn bán sản phẩm chất lượng, khơng đảm bảo độ an tồn lợi nhuận Do đó, việc đảm bảo chất lượng sản phẩm mỹ phẩm cần quan tâm trọng nhiều hơn, đặc biệt với quan quản lý Trong số sản phẩm tẩy rửa chăm sóc cá nhân, dầu gội đầu (shampoo) thuộc lĩnh vực lớn ngành dược học nói chung ngành mỹ phẩm nói riêng Thực tế, dựa cơng dụng đa dạng khai thác loại sản phẩm này, loạt mặt hàng dầu gội đầu thuộc nhiều dạng bào chế khác đưa thị trường chưa thực quản lý đánh giá chất lượng cách phù hợp Ketoconazol (KCZ) climbazol (CBZ) hai hợp chất thuộc dẫn xuất imidazol có hoạt tính chống nấm, tác dụng nhiều loại nấm da, niêm mạc nội tạng (KCZ) Hai hợp chất thường lựa chọn đưa vào sản phẩm dầu gội đầu nhằm tăng khả sát khuẩn điều trị số bệnh lý da đầu, đồng thời CBZ đóng vai trò chất bảo quản (CBZ) Đã có nghiên cứu ghi nhận khả chống nấm CBZ đơn độc dạng phối hợp với hoạt chất chống nấm khác số tác dụng khơng mong muốn đến sản phẩm dầu gội đầu chứa thành phần CBZ dùng với vai trò chất bảo quản mỹ phẩm không 0,5% Theo cập nhật Uỷ ban Khoa học Mỹ phẩm ASEAN vào năm 2018, KCZ liệt kê vào danh mục chất bị cấm sử dụng mỹ phẩm (với Số tham chiếu 1380 Phụ lục II, phần 1) CBZ liệt kê vào danh sách chất bảo quản phép sử dụng mỹ phẩm với mức giới hạn hàm lượng 0,5% (Số tham chiếu 32 Phụ lục VI, phần 1) [14] Do dầu gội đầu có chứa thành phần KCZ mà sản phẩm khơng đăng kí dạng thuốc khơng phép lưu hành Với mục đích đảm bảo an tồn cho người sử dụng, đồng thời cung cấp thơng tin cơng cụ giúp quan có biện pháp quản lý phù hợp nhóm mặt hàng dầu gội, đề -1- Phụ lục – Sắc ký đồ xác định LOD, LOQ Phụ lục – Một số sắc ký đồ mẫu Mẫu placebo, mẫu thêm chuẩn số mẫu thị trường ... dụng, đồng thời cung cấp thông tin công cụ giúp quan có biện pháp quản lý phù hợp nhóm mặt hàng dầu gội, đề -1- tài: Nghiên cứu định tính, định lượng đồng thời ketoconazol climbazol dầu gội đầu ...BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ THUỲ ANH 1401018 NGHIÊN CỨU ĐỊNH TÍNH, ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI KETOCONAZOL VÀ CLIMBAZOL TRONG DẦU GỘI ĐẦU KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn : GS.TS... 2,45%  Định lượng climbazol đọng lại da đầu từ chế phẩm dầu gội trị gàu UPLC – MS/MS [15]: Với mục đích đánh giá đồng thời độ nhạy cảm hàm lượng thành phần kẽm pyrithion climbazol đọng lại da đầu