U ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI Ph a rm ac y, VN KHOA Y DƢỢC an d MAI DIỄM QUỲNH ine NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT, PHÂN LẬP dic MỘT SỐ HỢP CHẤT TỪ LÁ CÂY GAN HEO of Me (Dicliptera chinensis (L.) Ness) Sc Khóa ho ol KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƢỢC HỌC : QH.2013.Y PGS.TS NGUYỄN QUỐC HUY Co py rig ht @ Ngƣời hƣớng dẫn : TS VŨ ĐỨC LỢI HÀ NỘI – 2018 U LỜI CẢM ƠN VN Lời đầu tiên, xin chân thành cảm ơn sâu sắc đến người thầy hướng dẫn cho TS Vũ Đức Lợi – giảng viên Khoa Y Dược, Đại học y, Quốc gia Hà Nội Thầy tận tình bảo, hướng dẫn, động viên, khích lệ rm ac tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành tốt khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Quốc Huy, đơn vị Ph a Cục Khoa học công nghệ Đào tạo, Bộ Y Tế bảo thêm nhiều kiến thức mới, truyền đạt kinh nghiệm quý báu để tơi hồn thành tốt khóa luận an d Tôi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, kĩ thuật viên Bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền, Bộ môn Bào chế Công nghệ dược ine phẩm, Bộ môn Hóa dược Kiểm nghiệm thuốc Khoa Y Dược, Đại học Quốc gia Hà Nội giúp đỡ nhiều trình học tập thực dic khóa luận Tơi xin gửi lời cảm ơn tới Ban chủ nhiệm Khoa Y Dược, thầy - Me cô dạy dỗ, dìu dắt tơi suốt năm học vừa qua Cảm ơn đề tài khoa học công nghệ cấp Đại học Quốc gia Hà Nội, mã số: QG.17.28 hỗ trợ kinh phí để chúng tơi hồn thành khóa luận of Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè, ol bên cạnh - đồng hành, cổ vũ, tiếp thêm sức mạnh cho trình ho học tập, rèn luyện thực khóa luận Sc Cuối tơi xin kính chúc thầy - cô luôn mạnh khỏe, hạnh phúc thành công công việc nghiệp trồng người Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2018 Sinh viên Co py rig ht @ Xin chân thành cảm ơn! Mai Diễm Quỳnh ALT Aspartate Amino Transferase AST Alanin Amino Tranferase DCP Dicliptera Chinensis polysaccharide DEPT Distortionless Enhancement by Polarization D Doublet Dd Double of doublet ESI-MS Phổ khối EtOH Ethanol 10 EtOAc Ethyl acetate 11 HF Bệnh xơ gan 12 HPLC 13 HSC 14 H&E 15 Hz 16 MeOH 17 ho Dimethyl nitrosamine ine dic Me Sắc ký lỏng hiệu cao Tế bào hình gan of ol Hertz Methanol mass to charge ratio Mp melting point M Multiplet Sc m/z Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR 21 Q Quartet 22 S Singlet rig @ Hematoxylin & Eosin 20 23 T Triplet 24 UV- VIS Phổ tử ngoại- khả kiến 25 v/v Volume to volume ratio ht rm ac Ph a DMN an d 19 y, Kí hiệu, viết tắt 18 py VN Tên đầy đủ STT Transfer Co U DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT VN Tên bảng Trang Bảng 1.1: Kết định tính nhóm chất hữu y, STT rm ac phương pháp hóa học Bảng 1.2: Bảy hợp chất phân lập từ chiết xuất etyl Ph a axetat Bảng 1.3: Ảnh hưởng tới hình thành nang trứng sinh sản chuột Bảng 3.1: Dữ liệu phổ NMR hợp chất C16H22O4 chất an d py rig ht @ Sc ho ol of Me dic ine so sánh L Co U DANH MỤC CÁC BẢNG 10-11 14 25-26 Tên hình Hình 1.2: Tiêu Gan heo Hình 1.3: Một số tiêu bột Gan heo Hình 2.1: Mẫu Gan heo Hình 2.2: Sơ đồ chiết tách phân đoạn 18 Hình 3.1: Sơ đồ chiết xuất phân đoạn lồi Dicliptera Chinensis (L.) Ness 21 Hình 3.2: Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn 24 an d Ph a rm ac y, Hình 1.1: Hình vẽ số phận chi Dicliptera ine 6 16 Hình 3.3: Cấu trúc phân tử 27 Hình 3.4: Cấu trúc phân tử 28 ht @ Sc ho ol of Me dic rig py Trang ethyl acetat Co VN STT U DANH MỤC CÁC HÌNH VN U MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN y, DANH MỤC TÊN KÍ HIỆU, VIẾT TẮT rm ac DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH Ph a ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN an d 1.1 Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố 1.1.1 Vị trí phân loại chi Dicliptera ine 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Dicliptera 1.1.3 Số lượng, đặc điểm loài thuộc chi Dicliptera dic 1.1.4 Đặc điểm thực vật Gan heo Me 1.1.5 Đặc điểm bột dược liệu vi phẫu Gan heo of 1.2 Thành phần hóa học Gan heo 1.3 Một số tác dụng dược lý nghiên cứu 11 ho ol 1.3.1 Tác dụng chống xơ gan 11 Sc 1.3.2 Tác dụng bảo vệ gan 12 1.3.3 Tác dụng chống oxy hóa 13 @ 1.3.4 Tác dụng chức sinh sản chuột 13 ht 1.4 Tác dụng công dụng theo y học cổ truyền 15 rig CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 Co py Đối tượng nghiên cứu 16 2.1.1 Nguyên vật liệu 16 a ch t v dung i s dụng 17 U 2.1.3 Trang thiết bị, dụng cụ, máy móc 17 VN 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 y, Phương pháp chiết xu t, phân lập hợp ch t 18 rm ac Phương pháp xác định c u trúc hợp ch t 19 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN……………………………… 20 Ph a 3.1 Kết chiết xuất, phân lập hợp chất 23 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ Gan heo 27 an d 3.2.1 Hợp ch t 27 3.2.2 Hợp ch t 30 ine 3.3 Bàn luận 31 dic KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 34 Kết luận 34 Me Kiến nghị 34 of TÀI LIỆU THAM KHẢO Co py rig ht @ Sc ho ol PHỤ LỤC VN U ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam có vị trí địa lý nằm gần vành đai nhiệt đới, cối mà y, có sinh trưởng, phát triển mạnh mẽ Thực vật không dùng làm lương rm ac thực cho người mà kho thuốc điều trị bệnh quý giá Nguồn dược liệu nước ta vô đa dạng, phong phú Hiện giới nói chung Việt Nam nói riêng, xu hướng sử dụng sản phẩm có nguồn Ph a gốc thiên nhiên ngày phát triển Do vậy, nghiên cứu phát triển thuốc sản phẩm chữa bệnh từ thực vật xu hướng quan tâm an d Cây Gan heo có tên khoa học Dicliptera chinensis (L.) Nees thuộc chi Dicliptera họ Acanthaceae thuốc phổ biến sử dụng ine từ lâu đời Trong đời sống, việc sử dụng Gan heo để nhuộm thực phẩm Y học Việt Nam Trung Quốc, dùng để chữa nhọt dic cảm mạo, sốt cao, lên sởi, giảm niệu; dùng ngồi trị lở, sưng, rơm sẩy, mụn [2, 12] Ngày nay, nhà khoa học phát thấy tác dụng hiệu Me điều trị gan bị tổn thương viêm, xơ gan, tác dụng chống oxy [22, 24, 30] Hiện nhà khoa học tiếp tục nghiên cứu lồi hóa of thuộc chi Dicliptera để tìm tác dụng ứng dụng điều trị bệnh ol Việc nghiên cứu Gan heo giúp xác định thành phần hóa học ho tác dụng sinh học thuốc để sử dụng chúng hợp lý, an toàn hiệu Sc Sử dụng phương pháp chiết xuất, phân lập để xác định thành phần hóa học thuốc Tuy nhiên, nghiên cứu Việt Nam giới ít, @ vậy, tơi tiến hành đề tài: “Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ Gan heo (Dicliptera chinensis (L.) Ness)” với mục tiêu: rig ht Chiết xuất, phân lập đƣợc số hợp chất từ Gan heo Xác định đƣợc cấu trúc hóa học hợp chất phân lập Co py U CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN VN Vị trí phân loại, đặc điểm thực vật, phân bố 1.1 y, 1.1.1 Vị trí phân loại chi Dicliptera rm ac Theo Hệ thống phân loại ngành Ngọc Lan (Magnoliophyta tác giả Takhtajan, chi Dicliptera có vị trí phân loại sau [30]: Ngành Ngọc Lan: Magnolipphyta Ph a Giới thực vật: Plantae Lớp ỏ Tháp út: Equisetopsida C Agardh an d Phân lớp Mộc Lan: Magnoliidae Novák ex Takht ộ Hoa Môi: Lamiales Họ Rô: Acanthaceae ine Chi: Dicliptera dic 1.1.2 Đặc điểm thực vật chi Dicliptera Me - Dạng sống: dạng thân thảo - Lá: đơn mọc cách, hình trứng Lá bắc hình bầu dục, có lơng of hình trứng ngược - Cụm hoa: dạng xim, dạng chùy hay chùm nách hay ho ol đỉnh cành, có thân Đơi hoa đơn độc nách đỉnh cành Sc - Hoa: Tất chi có hoa lưỡng tính Hoa mẫu mẫu - Tràng: Tràng dạng ống, môi khía, mơi ngun @ - Bao phấn : thường ơ, bao phấn hình thn, gần tròn ht hình đường; bao phấn đính lưng, mở dọc; gốc bao phấn thường có phần Co py rig phụ dạng móc lơng Bao phấn đính nhị lệch - Bộ nhụy: Tất có bầu thượng Bầu hình tròn, gần tròn, bầu dục; bầu phủ lông mịn nhẵn - Quả: Việt Nam có dạng nang, mở mảnh, có lơng, giá nỗn dựng đứng gốc rm ac y, VN U - Hạt ép dẹt, bề mặt nhiều điểm nốt, bề mặt hạt thường có lơng [9] Ph a Hình 1.1 Một số hình vẽ phận chi Dicliptera [9] Hạt an d Lá hình trứng ine Quả nang dic 1.1.3 Số lượng, đặc điểm loài thuộc chi Dicliptera - Trên giới Me Chi Dicliptera họ Acanthaceae) bao gồm 150 loài vùng nhiệt đới cận nhiệt đới hi phân bố hâu : Trung Quốc, Lào, ampuchia, Việt Nam ol - of Thái Lan, Indonesia, Malaysia, hâu Phi, hâu c Mỹ [2, 4, 10] ho Chi Dicliptera gồm loài [4 ; [8]:  Loài D bupleuroides Nees in all Lưỡng thiệt : Sc ây cỏ cứng cao 30cm; thân vuông, thường đen khô, có nâu đậm, khơng có lơng, lóng dài 3-4cm Lá mọc đối, phiến hình trái xoan, mặt @ nâu đen, mặt nâu Hoa hình mơi mọc thành chùm hoa mọc nách  Lồi D.chinensis Nees in D ửu : ây cỏ thân có bốn cạnh, có lơng mịn Lá mọc đối hình bầu dục thon, py rig ht lá; đài 6-8mm; vành cao 1,5mm Co có lơng mịn Hoa hình mơi bẹt, mơi ngun Quả nang, hạt có lơng U Phân đoạn ethyl acetat từ Gan heo phân lập thô cột  VN silica gel sau: Giai đoạn phân lập rm ac y, Sử dụng phương pháp sắc kí cột - Chuẩn bị cột: + Cặn chiết ethyl acetat (50,0 g triển khai sắc ký cột silica Ph a gel pha thường, trộn cặn với lượng tối thiểu silicagel, sấy khô nghiền mịn + Cột rửa sạch, đáy cột lót lớp bơng mỏng Đổ vào cột an d 40ml chloroform mở khóa cho dung mơi chảy từ từ để đẩy hết bọt khí lớp bơng ngồi Khi lớp dung mơi khoảng cm khóa ine cột + Cột nhồi phương pháp nhồi cột ướt: trộn silica gel với dic lượng vừa đủ dung môi chloroform thành hỗn dịch đổ lên cột, Me vừa đổ vừa gõ nhẹ quanh cột để hạt nén, hết bọt khí cột phân bố đều, mặt, rửa thành cột chloroform of + Ổn định cột: Sau luyện cột, ta kiểm tra cột xem có thẳng, ol khơng bọt khí ta đậy nắp cột ổn định cột vòng 24h - Tiến hành sắc kí cột hấp thụ ho + Mở khóa cột cho dung mơi chloroform chảy đến sát bề mặt silica Sc gel, khóa cột lại + Đưa chất lên cột: Đổ phần cặn trộn với silica gel lên trên, @ vừa dội vừa gõ nhẹ để phần cặn sát bề mặt silica gel, lót lớp bơng ht mỏng lên bề mặt silica gel rửa giải chloroform/methanol, tỉ lệ thay đổi từ 30:1 đến 1:1 + Điều chỉnh tốc độ rửa giải 1ml/1 phút Co py rig + Sau rửa giải dung môi bắt đầu chạy cột Hệ dung môi 25 U + Mỗi ống nghiệm hứng khoảng 10ml dung dịch Kiểm tra dịch VN rửa giải sắc kí lớp mỏng thu phân đoạn giống Thu phân đoạn E1 (6,0 g), E2 (14,2 g), E3 (6,3 g), E4 (8,4 g)  y, Giai đoạn phân lập rm ac + Phân đoạn E4 tiếp tục phân tách sắc ký cột silica gel pha thường, rửa giải hỗn hợp chloroform/ aceton/ nước (3:4:0,1), thu Ph a phân đoạn nhỏ E4.1 (1,6 g), E4.2 (1,4 g) E4.3 (1,2 g), E4.4 (0,8 g) E4.5 (0,6 g) + Tinh chế phân đoạn E4.1 cột sắc ký pha đảo RP-18 với hệ an d dung môi rửa giải aceton/nước 3:2, v/v thu hợp chất (23 mg) Phân tách phân đoạn E4.3 sắc ký cột silica gel với hệ dung môi Co py rig ht @ Sc ho ol of Me dic ine hexan/ aceton 7:3, v/v thu hợp chất (11 mg) 26 U VN Cao Ethyl acetat 50 g E2 (14,2 g) E3 (6,3 g) E4 (8,4 g) Ph a E1 (6 g) rm ac Cloroform/ methanol (30:1 đến 1:1) y, Silica gel pha thuận Silica gel pha thuận an d Cloroform/aceton/H₂O (3:4:0.1) Pha đảo RP18 E4.3(1,2 g) ine E4.2 (1,4 g) dic E4.1 (1,6 g) E4.5 ( 0,6 g) Silica gel pha thuận Hexan/ aceton ( tỉ lệ 7:3) Me Aceton/H₂O ( tỉ lệ 3:2) E4.4 (0,8 g) Hợp chất (11 mg) of Hợp chất (23 mg) ho ol Hình 3.2 Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat Sc 3.2 Xác định cấu trúc số hợp chất từ Gan heo 3.2.1 Hợp ch t @ Tính chất: Chất bột màu trắng, vơ định hình ht Độ quay cực: [α 25D = -64,2(c =0,1, MeOH) Khối lượng phân tử: 276 Công thức phân tử: C16H22O4 Phổ NMR trình bày Bảng 3.1 Co py rig Phổ ESI-MS: m/z 277,0 [M+H]+ 27 Vị trí DEPT 𝛿 C(L) C(1) H (1) ppm J: Hz 50,6 C 168,9 168,9 CH 118,7 118,7 3a C 171,0 171,0 C 38,6 38,6 an d 4a CH 47,1 47,1 2,25(dt; J=4,6; 2,26(dt, 4,15Hz) J = 4,5;14,5 Hz) 2,06 (dd, J=14,5, 2,05 (dd, J = 17,5Hz); 2,45 (dd, 14,5, 17,5 Hz); J=14,5, 17,5Hz) 2,46 (dd,J = Ph a dic ine 5,91s 35,0 C 198,0 198,0 135,8 135,8 146,5 146,5 ho C Sc ol of Me 35,0 CH₂ ht @ CH 3,2s rm ac 50,6 5,92s 14,5, 17,5 Hz) 6,75 (d,J=6,5Hz) 6,74(d, J = 6,5Hz) CH 31,0 31,0 3,06m 3,08m CH₂ 37,6 37,7 1,65 1,64 (dd, J=13,5, (dd, J = 13,5, rig 8a Co py J:Hz OCH₃ 3,21s H(L)ppm y, C VN U Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR hợp ch t C16H22O4 ch t so sánh L 28 13,5Hz) 2,48m 2,48 m 10 CH₃ 24,9 25,0 1,41s 11 CH₃ 27,1 27,1 1,23s 12 CH₃ 15,6 15,6 1,78s VN 106,9 y, 106,8 1,4s rm ac C 1,22s 1,77s an d Ph a 9a U 13,5Hz) Hợp chất thu dạng bột màu trắng Phổ ESI-MS hợp ine chất xuất pic ion phân tử m/z 277,0 [M+H]+, tương ứng với M= 276 có công thức phân tử C16H20O4 Phổ 1H-NMR hợp chất thấy dic có tín hiệu proton olefin ; nhóm methoxy nhóm methyl Phổ 13C- Me NMR DEPT hợp chất xuất 16 carbon có: carbonyl, carbon khơng liên kết với hydro, carbon methin, carbon methylen of carbon methyl Trên phổ HMBC hợp chất xuất tương tác HM H-10 δH 1,41)/H-11 δH 1,23) với C-3a δC 171,0)/C-4 δC 38,6)/C-4a ol δC 47,1); H-3 δH 5,912) với C-2 δC168,9)/C-3a δC 171,0)/C-9a δC ho 106,8 xác định vị trí nhóm methyl C-4, liên kết đơi C-3/C-3a Sc Tương tác HM nhóm methoxy δH 3,20) C-9a δC 106,8 xác định vị trí nhóm methoxy gắn trực tiếp C-9a Dựa vào liệu phổ hợp @ chất so sánh với số liệu công bố hợp chất O-methyl-6- Co py rig ht oxofurodysinin lacton [22] thấy trùng khớp vị trí tương ứng 29 Ph a rm ac y, VN U Vì vậy, xác định hợp chất O-methyl-6-oxofurodysinin lacton Hình 3.3 C u trúc phân t an d 3.2.2 Hợp ch t Tính chất: Hợp chất có dạng tinh thể khơng màu, tan CHCl3 ine Phổ 1H-NMR (500MHz, CDCl3 δ ppm có kết sau: 7,59 (1H, d, J = 15,8 Hz, H-3′ , 7,09 1H, dd, J = 8,1, 1,8 Hz, H-9′ , 7,05 1H, d, J = 1,8 dic Hz, H-5′ , 6,93 1H, d, J = 8,1 Hz, H-8′ , 6,30 1H, d, J = 16,1 Hz, H-2′ , 5,85 Me (1H, br s, OH-7′ , 4,72 1H, d, J = 8,8 Hz, H-3), 5,10 (1H, br t, J = 6,6 Hz, H24), 3,94 (3H, s, OCH3-6′ , 1,68 3H, s, H3-26), 1,62 (3H, s, CH3-27), 0,98 of (3H, s, CH3-29), 0,97 (3H, s, CH3-18), 0,91 (3H, s, CH3-30), 0,90 (3H, s, CH3-28), 0,89 (3H, d, J = 6,2 Hz, CH3-21), 0,60 (1H, d, J = 4,0 Hz, CH2-19), ol 0,38 (1H, d, J = 4,4 Hz, CH2-19) ho Phổ 1H-NMR hợp chất cho thấy hợp chất triterpenoid có Sc dạng khung cycloartane Các tín hiệu cyclopropane methylene δH 0,38 (1H, d, J =4,4 Hz, CH2-19) 0,60 (1H, d, J = 4,0 Hz, CH2-19); bốn nhóm @ methyl bậc ba δH 0,98 (3H, s, CH3-29), 0,97 (3H, s, CH3-18), 0,91 (3H, s, ht CH3-30), 0,90 (3H, s, CH3-28); nhóm methyl bậc hai δH 0,89 (3H, d, rig J = 6,2 Hz, CH3-21); nhóm methylene δH 5,10 (1H, br t, J = 6,6 Hz, H-24) Một nhóm feruloyl xác định dựa tín hiệu proton [δH 7,59 Co py (1H, d, J =15,8 Hz, H-3′ , 7,08 1H, dd, J = 8,1, 1,8 Hz, H-9′ , 7,04 1H, d, J = 1,8 Hz, H-5′ , 6,92 1H, d, J = 8,1 Hz, H-8′ , 6,30 1H, d, J = 16,1 Hz, H-2′ , 5,85 (1H, br s, OH-7′ ; 3,94 3H, s, O H3-6′ liên kết với C-3 xác 30 U định dựa vào độ chuyển dịch hóa học trường thấp H-3 δH 4,72 so VN sánh với cycloartenol δH-3 4,72) tài liệu [29] Nhóm feruloyl xác định định hướng β dựa số ghép cặp proton-proton H-2ax H- y, 3ax (J = 8,8 Hz) Dựa vào liệu phổ hợp chất so sánh với liệu rm ac phổ công bố hợp chất cycloartanyl ferulat [37 , xác định hợp chất Me dic ine an d Ph a Cycloartenyl ferulat 3.3 Bàn luận of Hình 3.4 C u trúc phân t ol Đề tài chiết xuất cao toàn phần từ phần mặt đất Gan heo ho phương pháp ngâm nhiệt độ 50oC với dung mơi cồn 96° Phương pháp có ưu điểm đơn giản, dễ thực hiện, thiết bị đơn giản, rẻ tiền thu Sc khối lượng cắn toàn phần đạt 9,69% so với lượng dược liệu ban đầu Cắn toàn @ phần sau chiết lỏng – lỏng với dung mơi có độ phân cực tăng dần nhexan, ethyl acetat , thu cắn phân đoạn với khối lượng rig ht đạt 0,48% ; 0,86% ; so với nguyên liệu khô ban đầu Đề tài phân lập 02 hợp chất từ phân đoạn ethyl acetat mẫu py nghiên cứu Dựa theo đặc điểm lý hóa (cảm quan, nhiệt độ nóng chảy), phổ Co khối (APCI-MS, ESI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR (1H-NMR, 13CNMR, D PT qua đối chiếu với tài liệu công bố, hợp chất 31 U xác định là: O-methyl-6-oxofurodysinin lacton (1) VN Cycloartenyl ferulat (2) Cả hợp chất chưa công bố công trình khoa học trước Gan heo Vì vậy, đóng Gan heo Hợp chất o-methyl-6-oxofurodysinin lacton rm ac y, góp đề tài, làm phong phú tri thức thành phần hóa học Ph a Hợp chất o-methyl-6-oxofurodysinin lacton tìm thấy hai loài Hải miên Dysidea Fragilis Haliclona Oculata [5] da loài an d Cadlina Luteomarginata [23] Hợp chất o-methyl-6-oxofurodysinin lacton chứng minh có tác dụng : chống hoạt tính gây độc tế bào ung thư ác hợp chất phân lập từ loài ine hải miên Dysidea fragilis đánh giá sàng lọc sơ nồng độ 100 g/mL dic có hoạt tính gây độc tế bào dòng tế bào ung thư KB, LU-1, HL-60, Me LnCaP, SK-MeI2, HepG2, MCF-7, PC-3 Kết cho thấy, hợp chất có khả ức chế >50% phát triển tế of bào ung thư [5] ol Hợp chất cycloartenyl ferulat ho Hợp chất cycloartenyl ferulat tìm thấy dầu cám Là loại -Oryzanol, hợp chất tạo thành từ : este axit ferulic rượu Sc triterpene với phytosterols Chúng có nhiều lợi ích sức khoẻ khảo sát từ gạo sản phẩm gạo Nhóm chất chứng minh khoa học có chất @ chống oxy hố, chống viêm, chống khối u, làm giảm kali máu, ht chấp thuận để điều trị cân thần kinh rối loạn mãn kinh [37] rig Cụ thể hơn, hợp chất cycloartenyl ferulate, thành phần gamma- oryzanol có nguồn gốc từ dầu cám gạo làm suy giảm phân huỷ tế bào Co py Mast Trong nghiên cứu này, nhà khoa học kiểm tra ảnh hưởng cycloartenyl ferulate (cycloartenolferulic axit este; CAF) phản ứng dị ứng Khi CAF gamma-oryzanol tiêm da với DNP (phức DNA 32 F gamma-oryzanol VN thụ thể kháng nguyên DNP-HSA giảm U protein) chống lại IgE vào da lưng chuột, phản ứng mẫn da da ức chế giải phóng hạt tế bào Mast IgE kết hợp với CAF không y, thể phát kháng thể chống lại IgE phân tích ELISA Mặc rm ac dù ủ IgE với CAF khơng làm giảm lượng Ig , kết tủa IgE cách ly tâm Kết chứng minh CAF bắt giữ Ig , ngăn cản gắn kết với FcepsilonRI, giảm giải phóng hạt tế bào Mast Ph a Chính thế, chúng có tác dụng điều trị viêm dị ứng [27] Một nghiên cứu khác chứng minh tác dụng đa dạng hợp chất an d cycloartenyl ferulate Chiết xuất methanol cám gạo gamma-oryzanol ngăn chặn tình trạng gây viêm 12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) chuột Các thành phần hoạt tính cám gạo, sitosterol ferulate , 24- ine methylcholesterol ferulate , cycloartenyl ferulate 24- metylenecycloartanol ferulate ức chế rõ ràng viêm TPA gây chuột Liều ức chế 50% dic hợp chất viêm TPA gây 0,2-0,3 mg / Hơn nữa, Me cycloartenyl ferulate ức chế đáng kể tác dụng thúc đẩy khối u TPA chuột nhắt Như vậy, chất khẳng định có hoạt tính chống viêm of chống phát triển khối u chuột [33] Nhận xét: hợp chất phân lập được chứng minh có tác ol dụng sinh học, đồng thời giúp ta định hướng việc nghiên cứu thêm Co py rig ht @ Sc ho thành phần hóa học tác dụng sinh học Gan heo 33 VN U KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ y, Kết luận rm ac Qua q trình hồn thành thực nghiệm, luận văn thu đươc kết sau đây: Ph a - Đã phân lập 02 chất phương pháp chiết dung môi ethanol sắc ký từ phân đoạn ethylacetat dịch chiết Gan heo - Đã xác định cấu trúc hóa học o-methyl-6- an d oxofurodysinin lacton (1) cycloartenyl ferulat (2) dựa theo liệu phổ thực nghiệm so sánh với tài liều công bố Cả hợp chất ine lần phân lập từ Gan heo dic Kiến nghị o Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học Gan heo thành Me phần phần mặt đất o Dựa kết nghiên cứu thành phần hóa học , tiến hành Co py rig ht @ Sc ho ol of nghiên cứu tác dụng sinh học Gan heo người 34 VN U TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt điển ách h a thực vật h c iệt Nam, NX y, 2014 , rm ac Nguyễn Giáo dục Việt Nam, tr 393 Đỗ Huy ích, Đặng Quang hung, ùi Xuân hương, Nguyễn Thượng Ph a Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2011), Cây thuốc v động vật làm thuốc Việt Nam, tập III, Nhà xuất Khoa an d học kỹ thuật, Hà Nội, tr 479-480 Võ Văn hi, Trần Hợp 1999 , Câ c c ine Giáo dục, tr 214-215 ch iệt Nam,tập I, NX Võ Văn hi 2003 , điển thực vật th ng dụng, tập I, NX Khoa học dic kỹ thuật, tr 957 hoạt tính diệt tế Me Nguyễn Thị Cúc (2017) Luận văn Nghiên cứu thành phần hóa h c ung thư hai loài hải miên Dysidea fragilis of alicl na culata (tt)”, luận án Tiến sĩ hóa học, học viện Khoa học Cơng nghệ Việt Nam ol Lưu Đàm (2005), “Nghiên cứu chiết tách nhuộm màu thực phẩm t ho kinh nghiệm s dụng thực vật đồng bào dân tộc thiểu số”, Trung Sc tâm hỗ trợ nghiên cứu hâu , Đại học Quốc gia Hà Nội Nguyễn Thượng Dong (2006), Nghiên cứu thuốc t thả dược, NXB @ Khoa học Kỹ thuật ht Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1990), Phương pháp nghiên cứu Co py rig hóa h c thuốc, NXB y học chi nhánh thành phố Hồ Chí Minh, Khoa Dược Đỗ Văn Hải, Dương Đức Huyến (2011 , Đặc điểm hình thái chi thuộc họ Ơ Rơ ( Acanthaceae Juss) Việt Nam Hội nghị khoa h c U toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 4,Viện Sinh thái VN Tài nguyên sinh vật, tr 104-108 10 Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây c Việt Nam, tập III, Nhà xuất trẻ, y, tr.73-74 học, tr.518-520 hí Tơn 2015 , Đ ng Na ược- vị thuốc chữa ệnh, Ph a 12 Nguyễn rm ac 11 Đỗ Tất Lợi (2001), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y tập I, NX Y học, tr 542 13 Viện Dược liệu (2004), Cây thuốc v động vật làm thuốc Việt Nam, an d NXB Khoa học Kỹ thuật, tr.432-438 14 Viện Dược liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý ine thuốc t thả dược, NXB Khoa học kỹ thuật, tr 139-141 15 Phạm Kim Thoa (2017) Khóa luận “ Nghiên cứu đặc điểm thực vật dic thành phần hóa h c Lá Diễn”, khoa Y Dược, Đại học Quốc Me Gia Hà Nội 16.Nguyễn Văn Thu Trần Hùng (2011), ược liệu h c, I, NXB Y học 17 Nguyễn Tiến Vững, Vũ Đức Lợi (2017), Một số hợp chất phân lập từ of Gan Heo (Dicliptera chinensis (L.) Nees) Tạp ch ược h c, T ol 57, Số 7, trang 54-57 ho Tài liệu Tiếng Anh Sc 18 Abdullahi, S.M, Musa, A.M, Abdullahi, M.I, Sule M.Iand Sani, Y.M 2013 , Isolation of Lupeol from the Stem-bark of Lonchocarpus @ sericeus Papilionaceae , Scholars Academic Journal of Biosciences (SAJB), 1(1):18-19 Co py rig ht 19 hmad 1, Khan MR, Shah N , Khan R 2013 In vitro antioxidant potential of Dicliptera roxburghiana BMC Complement Altern Med, 13:140 U 20 Ankita Wal, Pranary Wal, A.K Rai, Kanwal raj (2010), Isolation and VN modification of pseudohybrid plant Lupeol , J.Pharm Sci & Res Vol.2(1),13-25 y, 21 Bibhu Prasad Sahu, Panchanan Gouda and Chakrapani Patnaik (2016), rm ac Pandanus Odaritissimus Linn Prasad Sahu, Panchanan Gouda and Chakrapani Patnaik (2016), Pandanus Odaritissimus Linn: Isolation of Ph a Stigmast-5, 22-dien-3-β-ol from ethanolic extra of stem bark and study of antimicrobial activity , Journal of Chemistry and chemical Sciences, Vol.6(6), 574-585 an d 22 Charoenchai P, Vajrodaya S, Somprasong W, Mahidol C, Ruchirawat S, Kittakoop P (2010), “Antiplasmodial, cytotoxic, radical scavenging ine and antioxidant activities of Thai plants in the family Acanthaceae , Planta Medical, 76(16), 1940-1943 dic 23 Eric J Dumdei, Julia Kubanek, John E Coleman, Jana Pika, Raymond Me J Andersen, Jorge Rios Steiner and Jon Clardy (1997), New terpenoid metabolits from the skin extracts, an egg mass, and dietary sponges of of the Northeastern Pacific dorid nudibranch Cadlina luteomarginata", Canadian Journal of Chemistry, 75 (6):773-789 ol 24 Gao Ya, Zhong Mingli, Zhong Jialiang, Zhang Kefeng (2014) ho Oestrogenicity and effect on hepatic metabolism of the aqueous Sc extract of the leaf mixture of Aloe buettneri, Dicliptera verticillata, Hibiscus macranthus and Justicia insularis , Journal of Guangzhou @ University of Traditional Chinese Medicine, 6, 953-956 i TM 2006 , Studies on the chemical ht 25 Gao YT, Yang X , Co py rig constituents in herbs of ethanolic extract from herbs of Dicliptera chinensis , Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 31(12), 985-987 26 Gao YT1, Yang X , i TM 2007 Dicliptercerebroside, a novel cerebroside from Dicliptera chinensis.” Journal of Asian Natural Products Research, page 763-770 ycloartenyl ferulate, a U 27 Oka T, Fujimoto M, Nagaska R 2010 , VN component of rice bran oil-derived gamma-oryzanol, attenuates mast cell degranulation , Phytomedicine, 17(2):152-6 y, 28 P.S Jain, S ari 2010 , Isolation of lupeol, stigmatsterol and rm ac campesteron from petrolium ether extract of woody stem of Wrightia tinctoria , Asian Journal of plant Sciences, 9(3): 1-5 Ph a 29 Rita Aquino, Isabella Behar, Francesco de Simone, Cosimo Pizza,Mario d'Agostino (1985), "Dioscin and Gracillin from Tamus communis", Journal of Natural Products, 48 (3): 502–502 an d 30 Takhtajan A.L (1997), Diversity and Classification of Flowering Plants, Columbia University Press, New York, USA Mbiapo FT 1998 , ine 31 Telefo PB1, Moundipa PF, Tchana AN, Tchouanguep Dzickotze C, ffects of an aqueous extract of Aloe buettneri, dic Justicia insularis, Hibiscus macranthus, Dicliptera verticillata on some Me physiological and biochemical parameters of reproduction in immature female rats , J Ethnopharmacol, 63(3):193-200 of 32.Telefo P 1, Moundipa PF, Tchouanguep FM 2002 , Oestrogenicity and effect on hepatic metabolism of the aqueous extract of the leaf ol mixture of Aloe buettneri, Dicliptera verticillata, Hibiscus macranthus ho and Justicia insularis , Fitoterapia, 73(6):472-8 1998 , Inhibitory effect of Sc 33.Yasukawa K, Akihisa, Kimura Y cycloartenol ferulate, a component of rice bran, on tumor promotion in @ two-stage carcinogenesis in mouse skin , Biological & Pharmaceutical ht Bulletin, 21(10):1072-6 Co py rig 34 Zhang K, Gao Y, Zhong M, Xu Y, Li J, Chen Y, Duan X, Zhu H(2016), Hepatoprotective effects of Dicliptera chinensis polysaccharides on dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis rats and its underlying mechanism , Journal of Ethnopharmacol, 179, 38-44 Research on active extracts of U 35.ZhangK, ZhuH, GaoY 2010 , VN Dicliptera chinensis on liver protection , ZhongguoZhong Yao ZaZhi, 35(4): 497-498 y, 36.Zhang X1, Zhang J2, Jia L3, Xiao S4 2016 , Dicliptera chinensis rm ac polysaccharides target TGF-β/Smad pathway and inhibit stellate cells activation in rats with dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis Ph a Cell Mol Biol, ; 62(1):99-103 37.Zhimin Xu, J Samuel Godber (1999), "Purification and identification of components of gamma-oryzanol in rice bran oil , Journal of Co py rig ht @ Sc ho ol of Me dic ine an d Agricultural Food Chemistry, 47(7): 2724-8 ... nhiên, nghiên cứu Việt Nam giới ít, @ vậy, tiến hành đề tài: Chiết xuất, phân lập số hợp chất từ Gan heo (Dicliptera chinensis (L. ) Ness) với mục tiêu: rig ht Chiết xuất, phân lập đƣợc số hợp chất. .. LUẬN……………………………… 20 Ph a 3.1 Kết chiết xuất, phân lập hợp chất 23 3.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ Gan heo 27 an d 3.2.1 Hợp ch t 27 3.2.2 Hợp ch t 30 ine 3.3... heo Hình 2.1: Mẫu Gan heo Hình 2.2: Sơ đồ chiết tách phân đoạn 18 Hình 3.1: Sơ đồ chiết xuất phân đoạn lồi Dicliptera Chinensis (L. ) Ness 21 Hình 3.2: Sơ đồ phân lập hợp chất từ phân đoạn 24 an