Thực trạng, số yếu tố nguy bệnh sâu vĩnh viễn xác định chủng loại vi khuẩn kỹ thuật Realtime PCR học sinh 12 tuổi trường trung học sở nội ngoại thành, Thành phố Hải Dương 2019-2020 MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Sâu (SR) bệnh nhiễm khuẩn tổ chức canxi hóa đặc trưng hủy khống thành phần vô phá hủy thành phần hữu mơ cứng [TLTK] Tổn thương q trình phức tạp bao gồm phản ứng hóa lý liên quan đến di chuyển ion bề mặt mơi trường miệng đồng thời q trình sinh học vi khuẩn có mảng bám với chế bảo vệ người Quá trình diễn tiến liên tục, giai đoạn sớm hồi phục giai đoạn muộn hồi phục [1], [21] Các nghiên cứu giới cho thấy, tỷ lệ sâu vĩnh viễn trẻ em giới dao động khoảng từ 59%- 90% số sâu-mất-trám 1,4-7,1 [27] Tại Việt Nam, tỷ lệ sâu vĩnh viễn dao động giống quốc gia giới, từ 50-80%, theo tỏc gi Trần Văn Trờng CS thông báo tình trạng sâu học sinh 12 tuổi 61,48% [6], [Thắng 2014], SR bệnh có nhiều yếu tố nguy chế độ ăn uống, vệ sinh miệng, thành phần nước bọt, đặc biệt có vai trò loại vi khuẩn [TLTK] Keyes (1960) mô tả chế bệnh sinh sau Fejerskov Manji bổ sung (1990), cho thấy mối liên quan yếu tố bệnh – lớp lắng vi khuẩn yếu tố sinh học quan trọng, ảnh hưởng tới hình thành sang thương bề mặt Ngồi yếu tố trên, có ảnh hưởng yếu tố thuộc hành vi chăm sóc miệng yếu tố kinh tế - xã hội [4], [5] Trên giới có nhiều tác giả nghiên cứu vai trò vi khuẩn đặc hiệu chế gây bệnh chúng Zambon (1990), Chisterson (1989), Noiri (2001), Van Winkelhoff (2005) CẦN TLTK MỚI HƠN …Người ta thấy VI KHUẨN gây bệnh sâu răng, VQR có mặt khoang miệng người bình thường với tỷ lệ khác Một loại VI KHUẨN đặc hiệu thể bệnh phối hợp với hay nhiều loại vi khuẩn khác lại gây thể bệnh khác Ở Việt Nam có 1-2 nghiên cứu Bệnh viện Răng Hàm Mặt Trung ương vi khuẩn gây bệnh viêm quanh ứng dụng điều trị TS Nguyễn Thị Hồng Minh năm 2010[28] Một nghiên cứu khác với tiêu đề định lượng Actinobacilus Actinomycetemcomitans, Porphromonas gingivalis viêm quanh Nguyễn Thị Mai Phương năm 2016 [29] Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu định type loại vi khuẩn gây sâu Việc hiểu biết mối liên quan VI KHUẨN gây bệnh sâu vĩnh viễn trẻ dự phòng sâu hiệu an tồn Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: “ Thực trạng, số yếu tố liên quan bệnh sâu vĩnh viễn xác định chủng loại vi khuẩn kỹ thuật Realtime PCR học sinh 12 tuổi trường trung học sở nội ngoại thành thành phố Hải Dương 2019-2020” với 02 mục tiêu sau: Mô tả thực trạng yếu tố liên quan bệnh sâu học sinh 12 tuổi trường trung học sở nội ngoại thành, thành phố Hải Dương” với năm 2019-2020 Định type đinh lượng vi khuẩn gây sâu mảng bám kỹ thuật Realtime PCR học sinh Giả thuyết nghiên cứu: “Liệu có khác biệt thực trạng mắc bệnh sâu răng, yếu tố nguy vi khuẩn gây bệnh sâu học sinh 12 tuổi nội ngoại thành, thành phố Hải Dương” Ý nghĩa thực tiễn tính nghiên cứu • Nghiên cứu có tính thực tiễn sâu vĩnh viễn trẻ em lứa tuổi 12 bệnh phổ biến, chiếm tỉ lệ cao cộng đồng tác động lớn đến • sức khoẻ Việc xác định tỷ lệ sâu vĩnh viễn, yếu tố nguy đặc biệt xác định chủng loại vi khuẩn gây sâu có ý nghĩa cơng tác dự phòng cấp I (dự phòng sâu răng), dự phòng cấp II (điều trị theo nguyên) dự phòng cấp III (dự phòng sâu vị trí khác khác) Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số khái niệm 1.1.1 Định nghĩa bệnh sâu sâu giai đoạn sớm 1.1.1.1 Sâu Tại hội nghị quốc tế SR lần thứ 50 năm 2003, tác giả thống nhất: Sâu bệnh nhiễm khuẩn tổ chức canxi hóa đặc trưng hủy khống thành phần vô phá hủy thành phần hữu mô cứng Tổn thương trình phức tạp bao gồm phản ứng hóa lý liên quan đến di chuyển ion bề mặt môi trường miệng đồng thời trình sinh học Vi khuẩn có mảng bám với chế bảo vệ vật chủ Qúa trình diễn tiến liên tục, giai đoạn sớm hồn ngun giai đoạn muộn khơng thể hoàn nguyên [1], [3] 1.1.1.2 Sâu giai đoạn sớm Hiện tượng giảm độ pH dẫn tới khử khoáng làm tăng cường khoảng cách tinh thể Hydroxyapatite, khoáng bắt đầu bề mặt men, tổn thương lâm sàng 10% lượng chất khoáng gọi sâu giai đoạn sớm [85] 1.2 Thực trạng sâu yếu tố nguy sâu Tại Việt Nam tỷ lệ mắc bệnh mức độ cao có chiều hướng tăng lên vùng nông thôn miền núi Theo điều tra miệng năm 2001: Ở trẻ 12 tuổi tồn quốc có 56,6% bị sâu răng, DMFT = 1,87 15 tuổi 67,6%, DMFT =2,16 [6] 1.2.1 Bệnh sâu SR bệnh nhiều yếu tố gây nên Sơ đồ Keyes (1960) chế bệnh sinh Fejerskov Manji bổ sung năm 1990 cho thấy mối liên 10 quan yếu tố bệnh – lớp lắng vi khuẩn yếu tố sinh học quan trọng ảnh hưởng tới hình thành sang thương bề mặt R, ngồi có ảnh hưởng yếu tố thuộc hành vi kinh tế - xã hội [4], [5] Hình 1.1: Sơ đồ chế bệnh sinh SR Nguồn: Fejerskov Manji [5] 1.2.2 Vai trò vi khuẩn mảng bám * Yếu tố vi khuẩn Bệnh sâu khởi đầu hình thành mảng bám (Dental plaque) Hydratcacbon thức ăn chuyển hóa thành Glucose sau polymer hóa thành Dextran enzim dextranaze glucosyltransferase Dextran có tính dính bám nên tạo điều kiện để vi khuẩn khác mảnh thức ăn bám thêm vào[7], [8], [9] Các vi khuẩn tham gia chủ yếu vào trình Streptococcus mutans, Actinomyces viscosus, S sobrinus số chủng Lactobacillus [7], [10], [11] 30 2.2.6 Các kỹ thuật xét nghiệm vi khuẩn 2.2.6.1 Lấy mẫu xét nghiệm từ niêm mạc miệng Mẫu xét nghiệm lấy từ niêm mạc miệng phụ thuộc vào vị trí nhiễm trùng viêm quanh – sâu Căn nguyên vi khuẩn gây bệnh thường phân lập từ bệnh phẩm Streptococcus mutan, Lactobacilli, Actinomyces số trường hợp có ổ viêm gặp Streptococcus beta haemolyticus, Staphylococcus spp, Pseudomonas aruginosa, Klebsiella pneumoniae • Chuẩn bị mơi trường dụng cụ - Môi trường vận chuyển vi khuẩn - Tăm bơng cán cứng vo trùng loại có cán đàn hồi đầu sợi mềm đặc biệt - Đè lưỡi vô trùng - Máy hút dịch bơm tiêm loại - 10 ml - Tube vơ khuẩn có nắp vặn • Các bước thực thu thập mẫu xét nghiệm - Giải thích rõ mục đích thu thập mẫu cho người chuẩn bị cho mẫu kể các kích ứng xuất q trình thu thập mẫu - Ghi đầy đủ thông tin lên dụng cụ chứa mẫu (02 mẫu) - Đè lưỡi dụng cụ chuẩn bị, dùng đèn có nguồn sáng để soi tìm vị trí có viêm xuất tiết có - Dùng tăm chà sát nhẹ thành má, khe chân ổ viêm có Lăn tròn tăm cách nhẹ nhàng xuống khe má chân để yên vị trí khoảng 5-10 giây đảm bảo tăm hút đủ ẩm đưa vào tube đựng mơi trường vận chuyển có nắp vặn có đủ thông tin - Bẻ đoạn tăm bông, phần không chạm vào tube vặn nắp chặt - Dán nhãn mẫu xét nghiệm (mã hóa bệnh nhân để bảo mật thơng tin) 31 • Vận chuyển mẫu xét nghiệm - Mẫu xét nghiệm vận chuyển mơi trường thích hợp cho vi khuẩn - Chuyển nhanh chóng đến phòng thí nghiệm nhanh tốt để giảm tối đa phát triển vi khuẩn - Nếu để tới - giờ, qua trình vận chuyển mẫu xét nghiệm vi khuẩn cần để điều kiện nhiệt độ từ - 8oC/môi trường thích hợp •  Quy trình ni cấy phân lập vi khuẩn Nhuộm soi - Mẫu bệnh phẩm tiến hành phòng ni cấy đảm bảo An tồn Sinh học cấp II - Mẫu vortex 15-30 giây chế độ 1000v/phút để đảm bảo đồng - Dàn bệnh phẩm dịch vortex que cấy vô trùng lên lam kính - Cố định lam khơ tự nhiên nhuộm phương pháp nhuộm gram - Soi nhận định ghi lại kết vi khuẩn gram âm, vi khuản gram dương có  Ni cấy phân lập Cũng từ mẫu vortex tiến hành nuôi cấy phân lập môi trường MRS – Agar pH 5.5 (de Man, Rogosa and Sharpe); Thạch máu (5-7% máu cừu); Muller Hinton Agar MacConkey Agar Ủ ấm: môi trường MRS – Agar pH 5.5,trong điều kiện kỵ khí nhiệt độ ni ủ 35-37oC Điều kiện kỵ khí tạo cách sử dụng túi kỵ khí Anaerocult A®(Merck); mơi trường thạch máu ủ ấm 35 – 37oC/5 -7% khí CO2 hai mơi trường lại để ủ ấm 35 – 37 oC môi trường thông thường  Xác định tác nhân vi khuẩn từ mẫu bệnh phẩm Môi trường nuôi cấy phân lập nhận định dấu hiệu phát triển vi khuẩn hình thể khuẩn lạc mọc đĩa thạch Vi khuẩn xác 32 định hình thể lại lần phương pháp nhuộm soi để đối chiếu kết nhuộm sơ ban đầu từ bệnh phẩm (lam kính lưu) Xác định lại đặc điểm gram phương pháp “String Test” Sử dụng que cấy vô trùng để nghiền khuẩn lạc vi khuẩn 50 – 100µl dung dịch KOH 10% kéo cao đầu que cấy khỏi mặt lam kính Khả kéo màng nhầy lớn từ 5mm trở lên đước xác định chủng vi khuẩn gram âm, trường hợp không tạo màng nhầy kết luận chủng vi khuẩn gram dượng Khi kết hai lần nhuộm soi phù hợp, tiến hành định danh  Phương pháp xác định giống Streptococcus Giống Streptococcus card định danh API 20 Strep cầu khuẩn gram dương có thử nghiệm Catalase âm tính Kết định danh xác định phần mềm từ nhà sản xuất Bio Merieux qua ApiWeb ID (Indentification Diganostic) đạt 95% Các chủng bảo quản ống thạch nghiêng 4oC dung dịch BHI (Brain Heart Infusion) với 10% glycerol – 35oC  Phương pháp xác định giống Lactobacillus Để xác định chủng vi khuẩn thuộc giống Lactobacillus, số thử nghiệm thực sau: quan sát hình thái tế bào kính hiển vi; xác định mối quan hệ với oxy cách cấy môi trường thạch sâu; xác định khả tạo axít lactic dựa vào phân giải CaCO3 môi trường Carbonate – Agar đổi màu thuốc thử Uphenmen; thử nghiệm Catalase thực nghiệm cách sử dụng dung dịch H2O2 3%; xác định khả lên men glucose cách nuôi cấy chủng môi trường chứa glucose thị đỏ phenol Sau đó, chủng vi khuẩn có đặc điểm giống Lactobacillus xác định xác giống Lactobacillus phương pháp PCR DNA vi khuẩn tách khỏi tế bào DNAzol® Direct (Molecular Research Center, Inc.) mồi Lac1 Lac2 đặc hiệu cho 33 giống Lactobacillus sử dụng Thiết lập chương trình phản ứng PCR cho máy luân nhiệt (Eppendorf – Gene Amp, Biosystem, PCR system 9700) sau: bước – 95oC phút; bước – lặp lại 30 chu kỳ (mỗi chu kỳ gồm: 95oC phút, 55oC phút, 72oC phút); bước – 72oC phút Sản phẩm PCR mong đợi đoạn DNA có kích thước 340 bp 2.2.7 Các biến số nghiên cứu nên xây dựng bảng * Biến số độc lập -Tuổi - Giới - Nhóm can thiệp - Nhóm chứng * Biến số phụ thuộc - Tỷ lệ học sinh sâu vĩnh viễn chung gồm tất mức độ tổn thương sâu răng: D1, D2, D3 - Tỷ lệ học sinh sâu vĩnh viễn giai đoạn sớm tính từ mức D1 - Tỷ lệ học sinh sâu vĩnh viễn giai đoạn sớm tính từ mức D2 - Tỷ lệ học sinh sâu vĩnh viễn giai đoạn muộn tính từ mức D3 - Giá trị DD đo bề mặt máy Diagnodent 2190 - Các số : DMFT, DMFS, DT, MT, FT, DS, MS, FS, D1T, D2T, D3T, D1S, D2S, D3S - Tỷ lệ loại vi khuẩn thường gặp trẻ 12 tuổi bị sâu vĩnh viễn - Số lượng vi khuẩn thường gặp gây sâu vĩnh viễn trẻ em 12 tuổi 2.2.8 Phân tích số liệu Số liệu thu thập phân tích phương pháp thống kê y học, sử dụng phần mềm SPSS 16.0, phần mềm R số thuật toán thống kê Thống kê mô tả bao gồm tỷ lệ phần trăm dùng để tính đặc tính bệnh nhân mẫu biến danh định (phân loại) trung bình, độ lệch chuẩn dùng để tóm tắt biến số liên tục 34 Mối quan hệ tỷ lệ trước sau can thiệp dùng kiểm định χ2 kiểm định Exact Fisher thích hợp - Các kết xét nghiệm sinh học phân tử qPCR ghi lại theo mã Nhập số liệu Excel xử lý số liệu phần mềm SPSS 2.2.9 Hạn chế sai số nghiên cứu Số liệu thu thập được, làm thơ sau nhập chương trình Epi info 6.04 có sử dụng bước nhảy phần mềm CHECK để hạn chế sai số nhập số liệu Nhóm nghiên cứu gồm bác sỹ có trình độ chun mơn cao, tập huấn kỹ cách khám, kỹ thuật đo máy Diagnodent cách ghi phiếu 2.2.10 Đạo đức nghiên cứu Tất học sinh tham gia nghiên cứu giải thích có đồng ý bố, mẹ nhà trường Quy trình khám, vấn đề vơ khuẩn đảm bảo không gây ảnh hưởng xấu cho trẻ Trong q trình nghiên cứu khơng tiến hành thử nghiệm Toàn học sinh tham gia vào nghiên cứu khám tư vấn miệng giúp dự phòng bệnh miệng Tư vấn chăm sóc miệng cách Thông qua HDDĐ Viện VSDTTW 35 CHƯƠNG DỰ KIẾN KẾT QUẢ 3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu Bảng 3.1 Đặc trưng cá nhân Giới Nam Số Tỷ lệ lượng Tuổi % Nữ Số Tỷ lệ lượng % Tổng Số Tỷ lệ lượng p % Tổng 3.2 Tình trạng sâu vĩnh viễn Bảng 3.2 Tỷ lệ sâu vĩnh viễn bao gồm sâu giai đoạn sớm (D1, D2) D3 theo giới Tình trạng Giới Nam Nữ Tổng (n) Nhận xét: Sâu Số lượng Không sâu Tỷ lệ Số Tỷ lệ % lượng % P 36 Bảng 3.3 Tỷ lệ sâu vĩnh viễn theo ngưỡng chẩn đoán tổn thương phát Tình trạng Sâu Số lượng Tỷ lệ % Ngưỡng chẩn đoán Từ mức D1 – D3 Từ mức D2 –D3 Từ mức D3 Nhận xét: Không sâu Tỷ lệ Số lượng % P Bảng 3.4 Tỷ lệ sâu vĩnh viễn theo mức độ tổn thương Tình trạng Sâu Số lượng Khơng sâu Tỷ lệ % Số lượng Tỷ lệ % P Mức tổn thương Sâu giai đoạn sớm D1 Sâu giai đoạn sớm D2 Sâu giai đoạn muộn D3 Nhận xét: Biểu đồ 3.1 Tỷ lệ sâu vĩnh viễn theo mức độ tổn thương theo giới Bảng 3.5 Chỉ số DMFT theo giới D1T Giới D2T D3T Chỉ số DT P MT FT DMFT (Mean (Mean (Mean (Mean (Mean (Mean (Mean ±SD) ±SD) ±SD) ±SD) ±SD) ±SD) ±SD) Nam Nữ Tổng Bảng 3.6 Chỉ số DMFS theo giới D1S D2S D3S Chỉ số DS (Mean (Mean (Mean (Mean P MS FS (Mean (Mean DMFS (Mean 37 ±SD) ±SD) ±SD) ±SD) ±SD) ±SD) ±SD) Nam Nữ Tổng Bảng 3.7 Chỉ số lazer huỳnh quang trung bình bề mặt vĩnh viễn tương ứng với mức độ tổn thương quan sát lâm sàng Chẩn đoán Tổng lâm sàng Răng lành D0 Sâu mức D1 Sâu mức D2 Sâu mức D3 bề mặt Chỉ số Lazer huỳnh quang Mean ± SD Min Max thiếu bảng mối liên quan cần bổ xung 38 Bảng 3.8 Số loại Vi Khuẩn miệng trẻ 12 tuổi nuôi cấy phân lập Ty Mean ± SD Min Max Streptococcus mutan Lactobacilli Actinomyces Tổng Bảng 3.9 Tỷ lệ phát vi khuẩn mẫu mảng bám Streptococcus mutan Dương tính Âm tính Lactobacilli Dương tính Âm tính Actinomyces Dương tính Âm tính Tổng số Nhóm bệnh Nhóm chứng (N = ) (N = ) (N = ) n (%) n (%) n (%) Giá trị p 39 Bểu đồ 3.2 Tỷ lệ phát Streptococcusmutan,Lactobacilli,Actinomyces mẫu mảng bám Bảng 3.10 Tỷ lệ sâu với loại Vi khuẩn Có sâu n % Streptococcus mutan Lactobacilli Actinomyces Nhận xét: Không sâu n % 40 Bảng 3.11 Tỷ lệ phát vi khuẩn mẫu mảng bám theo giới Tổng số (N = ) Nam Nữ n (%) Streptococcus mutan Dương tính Âm tính Lactobacilli Dương tính Âm tính Actinomyces Dương tính Âm tính Nhận xét: Bảng 3.12 Tỷ lệ phát vi khuẩntrong mẫu mảng bám răngtheo độ sâu Tổng số (N = ) n (%) D1 Streptococcus mutan Dương tính Âm tính Lactobacilli Dương tính Âm tính Actinomyces Dương tính Âm tính CHƯƠNG DỰ KIẾN BÀN LUẬN D2 D3 Giá trị p 41 DỰ KIẾN KẾT LUẬN DỰ KIẾN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO 1Huỳnh Anh Lan (2005), “Tóm tắt buổi thảo luận hội thảo ORCA lần thứ 50” (tài liệu dịch), Cập nhật Nha Khoa, Số 1/2005 Nhà xuất Y học tr 94-98 5Nguyễn Văn Cát, Nguyễn Dương Hồng (1979), Răng hàm mặt tập I, Tổ chức học răng, Nhà xuất Y học, tr 90-102 78 78Ismail AI & cs (2007), The international caries detection and assessment system (ICDAS): an intergrateed system for measuring dental caries Community Dent Oral Epidemiol 35; pp.170-178 8Nguyễn Mạnh Hà (2010), Sâu biến chứng, Nhà xuất Giáo Dục Việt Nam, tr 5-18 65 65Fejerskov O (2004), “Changing Paradigms in Concepts on Dental Caries: Consequences for Oral Health Care”, Caries Res 2004; 38, pp.182191 33Trần Văn Trường, Lâm Ngọc Ấn, Trịnh Đình Hải, Spencer J.A, Thompson R.K, (2002), Điều tra sức khỏe miệng toàn quốc Việt Nam năm 1999-2000, Nhà xuất Y học Hà Nội 37Nguyễn Bích Vân (2007), “Tổng quan màng sinh học răng” Cập nhật Nha Khoa 2007 Nhà xuất Y học Tr 101-103 38ADA Council on Scientific Affairs (2006), “Professionally Applied Topical Fluoride Executive Summary of Evidence-Based Recommendations”, JADA Vol 137, August 2006, pp 1151-1159 Clinical 54Dashper S.G and Reynolds E.C (1992), “pH regulation by Streptococcus mutans”, J Dent Res, 7, pp 1159-1165 10 44Bender G.R, Marquis R.E (1987), “Membrane ATPases and acid to lerance of Antinomyces viscosus and Lactobacillus casei” Appl Environ Micrbiol, 53, pp 2124-2128 11 71Hamilton I.R, Buckley N.D (1991), “Adaptation of Streptococcus mutans to acid tolerance”, Oral Microbiol Inmunol, 6, pp 65-71 12 94Marsh P., Martin M.V (2000), “Antimicrobial therapy and prophylaxis for oral infections”, Oral microbiology, 4th edition Reed Educational and Professional Publishing Ltd USA pp 170-177 13 95Marsh P.D (1999), “Microbiologic aspects of dental plaque and dental caries”, Dent Clin North Am Oct; 43(4),pp 599-614 14 96Marsh P.D (2005), “Dental plaque: biogical significance of biofilm and community life-style”, J Clin Periodontol 32(suppl.6), pp 7-15 15 52Cury JA, Rebelo MA, Del Bel Cury AA, Derbyshire MT, Tabchoury CP (2000), “Biochemical composition and cariogenicity of dental plaque formed in the presence of sucrose or glucose and fructose”, Caries Res, 2000 Nov-Dec;34(6), pp 491-497 16 62Eisenmann D (1998), Enamel structure Mosby; St Louis 17 22Võ Thế Quang (1985), Phòng bệnh sâu Fluor Nhà xuất Y học Tp HCM, tr 28-43 18 12Trịnh Đình Hải (2004), Giáo trình sử dụng Fluor chăm sóc miệng Nhà xuất Y học Hà Nội, tr 7-8 19 87Liu (2012), “Effect of silver and fluoride ions on enamel demineralization: a quantitative study using micro-computed tomography”, Australian Dental Journal.Volume 57, Issue 1, pp.65–70, March 2012 20 88Loesche W.J (1986), “Role of streptococcus mutans in human dental decay”, Microbiol Rev, 50, pp 353-380 21 78Ismail AI & cs (2007), The international caries detection and assessment system (ICDAS): an intergrateed system for measuring dental caries Community Dent Oral Epidemiol 35; pp.170-178 22 79Jan Kuhnisch, Susanne Berger, Inka Goddon, et al (2008), Occlusal caries detection permanent molar according to WHO basic methods, ICDAS II and laser fluorescence measurements, Community Dentistry and Oral Epidemiology, 36: pp 475-484 Baron 23 22 Baron A., Sbordone L., Ramaglia L., Ciaglia R.N (1999), “Microbiotical associated with refractory reriodontitis Prevalence and antibiotic susceptibility”, Minerva Stomatol, Vol 48, No (5), pp 191-201 24 41Georg C., Thomas F., Ilse S., et al (1999), “Simultaneous detection of Bacteroides forsythus and Prevotella intermedia by 16S rRNA Gen-Directed multiplex PCR”, J Clin Microbiol, 37(5), pp 1621-1624 25 66Nieminen A., Asikainen S., Tokko H., et al (1996), “Value of some laboratory measurements in the treatment plan for advanced periodontitis”, J Clin Periodontol, 23, pp 572-581 26 6Huỳnh Anh Lan, Lê Thị Hiếu (1993), “Vi khuẩn yếm khí sang thương quanh chóp gốc (khảo sát 75 mẫu nghiệm)”, Kỷ yếu cơng trình nghiên cứu khoa học Răng Hàm mặt 1978-1992, Khoa Răng Hàm Mặt, Đại học Y dược thành phố Hồ Chí Minh, tr 65-70 27 99Reifur KD*, De Oliveira Piorunneck CM, Moyses SJ Dental Caries and Treatment Needs in Adolescents Aged 15 to 19 Years Old and their Relationship with Dental Services: A Systematic Review Dent Health Curr Res 2017, 3:2 DOI: 10.4172/2470-0886.1000129 28 100Nguyễn Thị Hồng Minh ( 2010),”Nghiên cứu vi khuẩn gây bệnh viêm quanh ứng dụng điều trị lâm sàng”Luận văn tiến Sĩ 29 101Nguyễn Thị Mai Phương(2016)” định lượng Actinobacilus Actinomycetemcomitans, Porphromonas gingivalis viêm quanh viêm quanh Realtime PCR đánh giá hiệu phương pháp điều trị viêm quanh không phẫu thuật” Luận án tiến sỹ KẾ HOẠCH NGHIÊN CỨU ... kỹ thuật Realtime PCR học sinh 12 tuổi trường trung học sở nội ngoại thành thành phố Hải Dương 20 19 -20 20” với 02 mục tiêu sau: Mô tả thực trạng yếu tố liên quan bệnh sâu học sinh 12 tuổi trường. .. liên quan VI KHUẨN gây bệnh sâu vĩnh vi n trẻ dự phòng sâu hiệu an tồn Vì vậy, tiến hành nghiên cứu đề tài: “ Thực trạng, số yếu tố liên quan bệnh sâu vĩnh vi n xác định chủng loại vi khuẩn kỹ. .. trường trung học sở nội ngoại thành, thành phố Hải Dương với năm 20 19 -20 20 Định type đinh lượng vi khuẩn gây sâu mảng bám kỹ thuật Realtime PCR học sinh Giả thuyết nghiên cứu: “Liệu có khác biệt thực