BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - LÊ THỊ MAI LINH NGHIÊN CỨU SỰ ĐA DẠNG TUYẾN TRÙNG KÝ SINH GÂY SẦN RỄ Meloidogyne spp Ở TÂY NGUYÊN LUẬN ÁN TIẾN SỸ SINH HỌC HÀ NỘI – 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - LÊ THỊ MAI LINH NGHIÊN CỨU SỰ ĐA DẠNG TUYẾN TRÙNG KÝ SINH GÂY SẦN RỄ Meloidogyne spp Ở TÂY NGUYÊN LUẬN ÁN TIẾN SỸ SINH HỌC Chuyên ngành: Tuyến trùng học Mã số: Thí điểm Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Trịnh Quang Pháp PGS TS Phan Kế Long Hà Nội – 2019 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan : Luận án „NGHIÊN CỨU SỰ ĐA DẠNG TUYẾN TRÙNG KÝ SINH GÂY SẦN RỄ Meloidogyne spp Ở TÂY NGUN‟‟là cơng trình thân tơi thực hướng dẫn khoa học TS Trịnh Quang Pháp PGS.TS Phan Kế Long Các trích dẫn luận án theo nguồn công bố đầy đủ Số liệu, kết nêu Luận án trung thực chưa công bố công bố báo khoa học mà tác giả đồng tác giả Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận án Lê Thị Mai Linh 22 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận án trước tên, tơi xin gửi lời cảm ơn đặc biệt tới TS Trịnh Quang Pháp PGS.TS Phan Kế Long tận tình hướng dẫn giúp đỡ suốt thời gian thực hồn thành luận án Tơi xin gửi lời cảm ơn TS Vũ Thị Thanh Tâm, ThS Nguyễn Thị Duyên, ThS Nguyễn Hữu Tiền, TS Nguyễn Thị Ánh Dương hỗ trợ tơi q trình hồn thiện luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn ban lãnh đạo Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật, phòng Hệ thống học phân tử Di truyền bảo tồn, phòng Tuyến trùng học, Học viện Khoa học Công nghệ đồng nghiệp, Thầy Cô Viện Sinh thái Tài nguyên sinh vật tạo điều kiện thuận lợi cho tơi học tập, nghiên cứu hồn thành luận án Xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè động viên giúp đỡ tơi q trình thực luận án Tơi xin trân trọng cảm ơn Quỹ phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOTED) đề tài mã số:106–NN.03–2013.56; Viện sinh thái Tài nguyên sinh vật (IEBR) đề tài mã số: IEBR.ĐT/04/17-18, IEBR.ĐT/04/G2-18 hỗ trợ kinh phí để thực nội dung nghiên cứu Một lần nữa, xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng năm 2019 Tác giả luận án Lê Thị Mai Linh 33 MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC BẢNG vii DANH MỤC HÌNH ix MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Tình hình nghiên cứu tuyến trùng sần rễ giống Meloidogyne giới 1.1.1 Lịch sử cứu nghiên 1.1.2 Đặc điểm sinh học, vòng đời tuyến trùng sần rễ giống Meloidogyne 1.1.3 Khả gây hại số trồng 1.1.4 Nghiên cứu phân loại loài tuyến trùng sần rễ thuộc giống Meloidogyne 11 1.1.4.1 Phương pháp phân tích hình thái 11 1.1.4.2 Phương pháp phân tích phân tử 13 1.2 Tình hình nghiên cứu tuyến trùng sần rễ giống Meloidogyne Việt Nam 16 1.2.1 Tình hình nghiên cứu 16 chung Việt Nam 1.2.2 Tình hình nghiên cứu tuyến trùng sần rễ Meloidogyne Tây Nguyên 18 1.2.2.1 Tổng quan Tây Nguyên 19 1.2.2.2 Tuyến trùng sần rễ giống Meloidogyne Tây Nguyên 21 1.3 Biện pháp phòng trừ Meloidogyne 22 sinh học tuyến trùng sần rễ CHƢƠNG NỘI DUNG, ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU, THỜI GIAN, ĐỊA ĐIỂM VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Nội dung, đối tƣợng, vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 27 2.1.1 Nội dung nghiên 27 cứu 44 2.1.2 Đối tượng nghiên 27 cứu 2.1.3 Vật liệu nghiên 27 cứu 2.1.4 Thời gian, địa cứu 27 điểm nghiên 2.2 Phƣơng pháp cứu .28 2.2.1 Khảo sát thực địa 28 phương pháp thu mẫu tuyến trùng từ đất trùng từ 2.2.2 Phương pháp tách lọc 29 2.2.3 Phương pháp tách rễ 30 2.2.4 Nhân nuôi tuyến spp 30 lọc trùng nghiên tuyến sần rễ Meloidogyne 2.2.5 Phương pháp xử lý làm làm tiêu tuyến trùng 31 2.2.6 Nghiên cứu hình 33 thái 55 2.2.7 Nghiên cứu đa dạng di truyền 35 2.2.7.1 Tách chiết DNA 35 2.2.7.2 Phản ứng PCR 36 2.2.7.3 Điện di sản phẩm 37 2.2.7.4 Tinh sản phẩm PCR đọc trình tự DNA 38 2.2.7.5 Phân tích trình tự DNA 38 2.2.7.6 Thiết lập phát sinh chủng loại 38 2.2.8 Đánh giá ảnh hưởng số vi sinh vật đối kháng 38 2.2.8.1 Nấm Paecylomyces javanicus 38 2.2.8.2 Vi khuẩn Lysobacter antbiotcus HS124 39 2.2.8.3 Ảnh hưởng hợp chất 4-HydroxyphenylacetcAcid (4-HPAA) đến tuyến trùng M incognita 39 2.2.8.4 Phân tích số liệu 40 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .41 3.1 Tần suất xuất hiện, đặc điểm phân bố, khả gây hại loài tuyến trùng sần rễ giống Meloidogyne .41 3.1.1 Tần suất xuất loài tuyến trùng sần rễ giống Meloidogyne số trồng Tây Nguyên 41 3.1.2 Phân bố, mật độ loài tuyến trùng sần rễ giống Meloidogyne bắt gặp vùng thu mẫu chủ 43 3.2 Đặc điểm hình thái loài tuyến trùng sần rễ Meloidogyne Tây Nguyên .49 3.2.1 Loài Meloidogyne incognita (Kofoid & White, 1919) Chitwood, 1949 49 3.2.1.1 Đặc điểm hình thái hình thái lượng 49 66 3.2.1.2 Đa dạng hình thái đặc điểm chẩn loại 50 3.2.2 Loài Meloidogyne javanica (Treub, 1885) Chitwood, 1949 61 3.2.2.1 Đặc điểm hình thái hình thái lượng 61 3.2.2.2 Đa dạng hình thái đặc điểm chẩn loại 68 3.2.3 Loài Meloidogyne arenaria (Neal, 1889) Chitwood, 1949 69 3.2.3.1 Đặc điểm hình thái hình thái lượng 70 3.2.3.2 Đa dạng hình thái đặc điểm chẩn loại 70 3.2.4 Loài Meloidogyne enterolobii Yang, Eisenback., 1983 80 3.2.4.1 Đặc điểm hình thái hình thái lượng 80 3.2.4.2 Đa dạng hình thái đặc điểm chẩn loại 87 3.2.5 Loài Meloidogyne graminicola Golden & Birchfield 1965 90 3.2.5.1 Đặc điểm hình thái hình thái lượng 90 3.2.5.2 Đa dạng hình thái đặc điểm chẩn loại 91 77 3.2.6 Loài Meloidogyne daklakensis Trinh, Le, Nguyen, Nguyen, Liebanas & Nguyen, 2018 97 3.2.7 Loài Meloidogyne sp 106 3.3 Đa dạng hình thái, hình thái lƣợng lồi Meloidogyne 113 3.3.1 Phân tích đa dạng hình thái lượng loài Meloidogyne 113 3.3.2 So sánh hình thái lồi Meloidogyne spp 118 3.4 Phân tích đa dạng di truyền lồi Meloidogyne spp 127 3.4.1 Phản ứng Multiplex-PCR 127 3.4.2 Phân tích đa dạng di truyền 128 3.4.2.1 Vùng gen ITS 129 3.4.2.2 Vùng gen D2D3 133 3.4.2.3 Vùng gen COI 137 3.4.2.4 Vùng gen COII-16S 141 3.4.2.5 Vùng gen NAD5 146 3.5 Đánh giá ảnh hƣởng số vi sinh vật đối kháng .150 3.5.1 Nấm Paecylomyces javanicus 150 3.5.1.1 Ảnh hưởng dịch bào tử nấm P javanicus đến tỷ lệ nở trứng tuyến trùng M incognita 150 3.5.1.2 Ảnh hưởng dịch bào tử nấm P javanicus đến tỷ lệ chết ấu trùng M incognita 151 3.5.2 Vi khuẩn Lysobacter antibioticus HS124 154 3.5.2.1 Ảnh hưởng dịch bào tử vi khuẩn L antbiotcus HS124 đến nở trứng tuyến trùng M incognita 154 3.5.2.2 Ảnh hưởng dịch bào tử vi khuẩn L antbiotcus HS124 đến ấu trùng M incognita 155 3.5.3 Ảnh hưởng 4-HPAA tới tuyến trùng Meloidogyne incognita 158 CHƢƠNG 161 88 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 161 4.1 KẾT LUẬN .161 4.2 KIẾN NGHỊ 162 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ 163 TÀI LIỆU THAM KHẢO 164 175 174 144.B.O Gints, G Morgan-Jones & R Rodriguez-Kabana, Fungi associated with several developmental stages of Heterodera glycines from an Alabama soybean field soil, Nematropica, 1983, 13(2), 181-200 145.G.J Morgan, J.F White, R.K Rodriguez, Fungal parasites of Meloidogyne incognita in an Alabama soybean field soil, Nematropica, 14(1984), 93-96 177 176 146.S Kiewnick & R.A Sikora, Biological control of the root-knot nematode Meloidogyne incognita by Paecilomyces lilacinus strain 251, Biological control, 2006, 38(2), 179-187 147.C Djian, L Pijarowski, M Ponchet, N Arpin & J Favre-Bonvin, Acetc acid: a selective nematcidal metabolite from culture filtrates of Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson and Trichoderma longibrachiatum Rifai, Nematologica, 1991, 37(1), 101-112 148.A Khan, K Williams, M.P Molloy, & H Nevalainen, Purificaton and characterizaton of a serine protease and chitnases from Paecilomyces lilacinus and detection of chitnase actvity on 2D gels, Protein expression and purificaton, 2003, 32(2), 210-220 149.Trần Thị Kiều Lâm, Khảo sát khả đối kháng số dòng nấm Paecilomyces spp Tricoderma spp với tuyến trùng bướu rễ (Meloidogyne spp.) điều kiện in vitro nhà lưới, Khóa luận tốt nghiệp, ngành Bảo vệ thực vật, Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, 2010 150.J Chen, W.H Moore, G.Y Yuen, D Kobayashi & E.P Caswell-Chen, Influence of Lysobacter enzymogenes strain C3 on nematodes, Journal of Nematology, 2006, 38(2), 233-239 151.H.S Ko, Biocontrol of phytophthora blight (Phytophthora capsici) in Pepper by Lysobacter antbioticus HS124, 2009, A master‟s thesis, College of Agriculture and Life Sciences, Chonnam Natonal University, Gwangju, Republic of Korea 152.J.A López Pérez, M Escuer, M.A Díez Rojo, L Robertson, A Piedra-Buena, J López Cepero & A Bello Pérez, Host range of Meloidogyne arenaria (Neal, 1889) Chitwood, 1949 (Nematoda: Meloidogynidae) in Spain, Nematropica 41, 2011,130140 153.R.S Hussey, K.R Barker, Comparison of methods for collecting inocula of Meloidogyne spp., including a new technique, Plant Disease Reporter, 1973, 57, 1025-1028 154.W.D Courtney, D Polley & V.L Miller, TAF, an improved fixatve in nematode technique, Plant Disease Reporter, 1955, 39(7), 570-571 177 176 155.K.M Hartman & J.N Sasser, Identfication of Meloidogyne species on the basis of diferental host test and perineal-patern morphology, An Advanced Treatise on Meloidogyne Volume II: Methodology In: Barker KR, Carter CC, Sasser JN, editors, North Carolina State University Graphics, 1985, 69-77 156.T.E Hewlett, & A.C Tarjan, Monographs: Synopsis of the Genus Meloidogyne Goeldi, 1887, Nematropica, 13(1), 79-102 177 176 157.I.P Kazachenko and T.I Mukhina, Root-knot nematodes of genus Meloidogyne Goeldi (Tylenchida: Meloidogynidae) of the world, Vladivostok, Russia, Institute of Biology and Soil Sciences, 2013, 306 pp 158.R.W Payne, D.A Murray, S.A Harding, D.B Baird and D.M Soutar, GenStat for Windows, 12th Edition, VSN International, Hemel Hempstead, 2009 159.P De Ley, M.A Felix, L.M Frisse, S.A Nadler, P.W Sternberg & W.K Thomas, Molecular and morphological characterisaton of two reproductively isolated species with mirror-image anatomy (Nematoda: Cephalobidae), Nematology, 1999, 1(6), 591612 160.Lê Thị Mai Linh, 2015 Phân tích mối quan hệ di truyền số loài tuyến trùng ký sinh gây sần rễ Meloidogyne spp hồ têu Quảng Tri, Báo cáo kết nghiên cứu đề cán trẻ, Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật, 2015, 161.T Janssen, G Karssen, M Verhaeven, D Coyne & W Bert, Mitochondrial coding genome analysis of tropical root-knot nematodes (Meloidogyne) supports haplotype based diagnostcs and reveals evidence of recent retculate evoluton, Scientific, 2016 162.T.A Hall, BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT, In Nucleic acids symposium series, 1999, 41 (41), 9598 163.K Tamura, G Stecher, D Peterson, A Filipski & S Kumar, MEGA6: molecular evolutionary genetics analysis version 6.0, Molecular biology and evoluton, 2013, 30(12), 2725-2729 164.Lê Đức Khánh, Lê Quang Khải, Đào Thị Hằng, Phùng Sinh Hoạt, Trần Thị Thúy Hằng, Trần Thanh Tồn, Nguyễn Đức Việt, Đặng Đình Thắng, Trịnh Quang Pháp, Nguyễn Văn Vấn, Đào Thị Lan Hoa, Cù Thị Dần, Nguyễn Hồng Phong, Diễn biến mật độ Pratylenchus spp Và Meloidogyen spp đất rễ cà phê Đăk lăk Gia Lai năm 2013, Tạp chí bảo vệ thực vật số 6, 2014, 6-13 165.C.P Madamba, Distributon and identfication of Meloidogyne spp in the Philippines and five other Asian countries, Philippine Agriculturist, 1981, 64(1), 2139 177 176 166.Y Zeng, W Ye & J Kerns, First report and morphological and molecular characterizaton of Meloidogyne incognita from Radermachera sinica in China, Nematropica, 2014, 44(2), 118-129 167.A Rammah, & H Hirschmann, Morphological comparison of three host races of Meloidogyne javanica, Journal of Nematology, 1990, 22(1), 56-68 179 178 168.N.K Sahoo & G Sudershan, Morphological characterisation of five Indian populations of root-knot nematode, Meloidogyne javanica (Treub, 1885) Chitwood, 1949, Indian Journal of Nematology, 2000, 30(1), 7185 169.F Akyazi, S Joseph, A.F Felek & T Mekete, Mitochondrial haplotype-based identfication of root-knot nematodes, Meloidogyne arenaria and Meloidogyne hapla, infecting kiwifruit in Turkey, Nematropica, 2017, 47(1), 34-48 170.L.E Garcia & M.V Sánchez-Puerta, Characterization of a root-knot nematode population of Meloidogyne arenaria from Tupungato (Mendoza, Argentina), Journal of nematology, (2012) 44(3), 291-301 171.B Yang, & J.D Eisenback, Meloidogyne enterolobii n sp.(Meloidogynidae), a rootknot nematode parasitizing pacara earpod tree in China, Journal of Nematology, 1983, 15(3), 381-391 172.A Rammah & H Hirschmann, Meloidogyne mayaguensis n sp.(Meloidogynidae), a root-knot nematode from Puerto Rico, Journal of Nematology, 1988, 20(1), 58-69 173.P Castagnone-Sereno, Meloidogyne enterolobii (= M mayaguensis): profile of an emerging, highly pathogenic, root-knot nematode species, Nematology, 2012, 14(2), 133-138 174.G Karssen, J Liao, Z Kan, E.Y van Heese & L.J den Nijs, On the species status of the root-knot nematode Meloidogyne mayaguensis Rammah & Hirschmann, 1988, ZooKeys, 2012 (181), 67-77 175.A.M Golden, W Birchfield, Meloidogyne graminicola (Heteroderidae), a new species of root-knot nematode from grass, Proceedings of the Helminthological Society of Washington, 1965, 32(2), 228-231 176.R Salalia, R K Walia, V S Somvanshi, P Kumar & A Kumar, Morphological, Morphometric, and Molecular Characterization of Intraspecific Variatons within Indian Populations of Meloidogyne graminicola, Journal of nematology, 2017, 49(3), 254 177.H Han, M.R Cho, H.Y Jeon, C.K Lim & H.I Jang, PCR-RFLP identficaton of three major Meloidogyne species in Korea, Journal of Asia-Pacific Entomology, 2004, 179 178 7(2), 171-175 178.J.O Park, J.R Hargreaves, E.J McConville, G R Strling, E L Ghisalberti & K Sivasithamparam, Producton of leucinostatins and nematcidal actvity of Australian isolates of Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson, Letters in Applied Microbiology, 2004, 38(4), 271-276 179 178 179.Y Kanai, T Fujimaki, S I Kochi, H Konno, S Kanazawa, S Tokumasu, Paeciloxazine, a noval nematcidal antibiotic from Paecilomyces sp, The J Antbiotics 57, 2004, 24-28 180.S.J Kwon, W.S Lim, S.H Park, M.R Park, and K.H Kim, Molecular characterizaton of a dsRNA mycovirus, Fusarium graminearum virus-DK21, which is phylogenetcally related to hypoviruses but has a genome organization and gene expression strategy resembling those of plant potex-like viruses, Mol Cells, 23, 2007, 304-315 181.Y.L Chan, D Cai, P.W.J Taylor, M.T Chan & K.W Yeh, Adverse efect of the chitnolytic enzyme PjCHI‐1 in transgenic tomato on egg mass production and embryonic development of Meloidogyne incognita, Plant pathology, 2010, 59(5), 922930 182.M.T Islam, Potentials for biological control of plant diseases by Lysobacter spp., with special reference to strain SB-K88, In Bacteria in agrobiology: plant growth responses, 2011, 335-363 183.Y.S Lee, M Anees, H.N Hyun & K.Y Kim, Biocontrol potential of Lysobacter antbiotcus HS124 against the root-knot nematode, Meloidogyne incognita, causing disease in tomato, Nematology, 2013, 15(5), 545-555 PHỤ LỤC II Phụ lục 1.1 So sánh đặc điểm hình thái lượng loài Meloidogyne daklakensis với loài gần gũi Đặc điểm L Chiều dài cổ Tỷ lệ dài thể/ chiều dài cổ W Stl DGO Khoảng cách Vulvaanus Chiều dài vulva M daklakensis 4555 M daklakensis 645±54 (548-709) 147±21 (118-172) 4,5±1 (3,4-6) 401±41 (354-461) 14,5±0,5 (14-15) 5±0,2 (4,5-5,5) 15±4 (10-21) 21±3 (16-25) 687,9±97,2 (548,3-912,9) 182,6±38,1 (118,3-254,4) 3,9±0,8 (2,8-6,0) 408,6±54,0 (316,4-521,6) 14,1±0,9 (12,3-14,9) 5,3±0,3 (4,9-5,8) 14,4±2,8 (10,4-20,8) 17,6±3,6 (11,8-25,0) 333 ±27 (280-373) 12± (11,4-14,6) 369±35 (292-430) 13,1±1,1 (11,4-15,5) M lopezi Con 833±80 (717-956) 212±20,3 (171-253) 521± 68,2 (368-598) 18±1,9 (15,4-23) 4,5±0,9 (2,9-6,2) 20,1±2,0 (16,6-24,9) 26 ± 2,5 (21,4-30,8) M baetica M marylandi (Jepson & Golden, 1987) M mali (Itoh et al , 1969) 911± 163 (775-1263) 747,4±110,6 (525,1-923,2) - - 848 ± 93,4 (684-1044) 166 ± 43,7 (90-252) - - 5,1 297 ± 46,8 (207,7-421,2) 14,4 ± 0,3 (14,2-14,8) 23,9 ± 0,4 (3,5-4,7) 12,8 ± 1,1 (11,8-15,3) 25,1 ± 2,8 (20,7-29,5) 660 ± 95,8 (540-864) 15 (13-17) 5,5 (4-7) 17 ± 1,8 (14-22) 22 ± 3,5 (17-29) 424,6 ± 20,5 (384,8-488,5) 14,6 ± 0,6 (13,6-17,1) 418 (390-450) 14,5 (14-16) 523 ±88 (469559) 17,5± 0,8 (17-19) 21 ±1,6 (19-25) 20± 2,7 (17-24) Ấu trùng L W 532 ± 23,5 (478-574) 18 ± 2,0 (15-22) 403±136 (394-422) 13,5±0,5 (13-14) Stl DGO a b b‟ c c‟ T 14±1 (11,4-15,6) 3,7±0,8 (2,1-5,2) 26,9± 2,4 (23,3-31,5) 4,5±0,5 (3,4-5,4) 2,9±0,3 (2,2-3,4) 7,4±1 (5,8-10,8) 4,8±0,6 (3,9-6,2) 50 ± 23 (32-54) 12,3±2,4 (8,4-15,6) 3,8±0,8 (2,1-5,2) 28,3±3,1 (23,3-38) 5,0±0,6 (3,5-6,2) 3,0±0,3 (2,3-3,6) 9,0±1,8 (6,1-13,9) 4,4±0,6 (3,0-5,4) 42,3±6,0 (28,4-54,1) 1228±98 (1085-1365) 19±1,2 (17-20) 5,3±1 (4,1-7,2) 30,6±4,8 (25,1-38,5) 11,6±1,2 (10,0-13,5) 1228±98 (1085-1365) 19±1 (17-20) 5,3±1 (4,1-7,2) 38,8±8,1 (25,1-52,0) 11,1±1,0 (9,8-13,5) 11,3 ± 0,9 (9,1-12,9) 30,2 ± 3,7 (24,4-36,7) 13,5±0,5 (13- 14) 4,0 ±0,7 (3-5) 29 ±1,2 (28-32) 11,4 ± 0,3 (10,8-11,8) 2,4 ± 0,2 (2,4-3,0) 28,8 ± 1,5 (25,2-33,) 2,2 ± 0,2 (19-2,7) 14 (12-15) 4,7 (4-6) 28,5 27-31 7,2 (6- 8) - - 9,1 ± 0,6 (8,4-10,5) 7,9±0,4 (7,3-8,4) 7,0 ± 0,3 (6,6-7,7) 13,3 (12-15) 3,7 (3-5) 31 (30-34) - - - 58,5 (53,2-62,3) 50 ±2,3 (47-54) 60,6 ± 3,4 (52,5-68,4) 1963 (1616-2340) 23,4 ±0,97 (21,6-24,4) 2,5±0,4 (1,9-3,4) 46,2±2,8 (42,2-50) 1811 ± 406 (1545 2205) 17 ± 1,6 (16-19) 4,0 ±0,5 (3,5-5,5) 62±7,0 (58-75) 12,4±2,2 (9,8-15,7) Con đực L Stl DGO a b - - 1447 (1270-1630) 20 (18-22) (6-13) 38 (31-44) 15 (11-21) c Chiều dài gai giao cấu TES 103,7±15,5 (84,1-124,3) 24±3,5 (18-29) 712±98 (537-827) 98,8±13,5 (81,3-124,3) 31±2,1 (10-15) 665,6±88,3 (512,1-860,5) - - - 33,9 ± 2,8 (28,7-38,3) 903 ± 170 (517-1133) 27±4,0 (24-36) - - - 40 (32-58) 32 (28-35) 788 (540-970) Phụ lục 1.2 So sánh đặc điểm hình thái lượng loài Meloidogyne sp với loài gần gũi Đặc điểm Meloidogyne sp 5229 Meloidogyne sp 588±133 (500-751) 200±52 (140-267) 2,94±2,5 (2,8-3,5) 287±73 (218-367) 16±1,4 (14,3-19,1) 6,0±1,0 (4,6-7,8) 12,2±2,6 (8,7-16,2) 643±88 (500-779) 212±49 (140-286) 2,4±0,6 (1,4-3,7) 326±50 (218-418) 14,4±2,3 (11-19,2) 5,4±0,9 (4,6-7,8) 11,7±2,3 (8,3-16,3) M mali (Itoh et al , 1969) M africana (Janssen et al., 2017) M marylandi (Jepson & Golden, 1987) M ichinohei (Araki M, 1992) 848 ± 93,4 (684–1044) 166 ± 43,7 (90–252) 615 ± 95 (400–700) 217 ± 48,1 (120–300) 2,9 ± 0,4 (2,3–3,8) 375 ± 59 (300–540) 14,3 ± 0,8 (13,0–15,5) 5,7 ± 0,8 (4,5–7,0) 747,4 ± 110,6 (525,1–923,2) 796,1 ± 114,48 (618,8–1018,8) 195,7 ± 45,2 (135–246) Con L Chiều dài cổ Tỷ lệ dài thể/ chiều dài cổ W Stl DGO Khoảng cách Vulvaanus 5,1 660 ± 95,8 (540–864) 15 (13–17) 5,5(4–7) 17 ± 1,8 (14–22) – – – – 297 ± 46,8 (207,7–421,2) 14,4 ± 0,3 (14,2–14,8) 3,9 ± 0,4 (3,5–4,7) 12,8 ± 1,1 (11,8–15,3) 393,2 ± 93,27 (300–575) 12,3+0,77 (11–13,6) 5,4 ± 0,88 (3,8–6,8) 25,1 ± 4,53 (14,1–29,6) Chiều dài vulva 18,8±2,2 (16-24,4) 16,7±3,3 (9,5-22,4) 25,1 ± 2,8 (20,7–29,5) 34,2 ± 6,2 (25,5–46,1) 464±21 (428-449) 12,3±0,6 11,5-13,7 10,4±0,7 (9,0-12) 3,6±0,4 (2,9-4,1) 37,6±1,8 (35-42) 6±0,5 (5,6-7,6) 3,2±0,2 (3,0-3,6) 12,3±1,7 (9,4-15,1) 4,4±0,5 (3,6-5,4) 38,2±5,0 (32,2-48,8) 424,6 ± 20,5 (384,8–488,5) 14,6 ± 0,6 (13,6–17,1) 11,4 ± 0,3 (10,8–11,8) 2,4 ± 0,2 (2,4–3,0) 28,8 ± 1,5 (25,2–33,1) 2,2 ± 0,2 (19–2,7) 469 ± 20 (413,1–524,3) 15 ± 0,45 (14,1–16) 11,3 ± 0,68 (9,7–12,9) 5,2 ± 0,6 (3,6–6,4) 31,3 ± 1,7 (27,1–34,9) 9,2 ± 0,68 (7,4–9,3) – – – 13,3 (12–15) 3,7 (3–5) 31 (30–34) 10,1 ± (7,8–12,7) 4,1 ± 0,3 (3,5–4,7) 42,1 ± 1,9 (39–46) 7,0 ± 0,3 (6,6–7,7) 8,8 ± 0,82 (7,0–12,1) 5,3 ± 0,68 (3,7–6,8) 54,2 ± 5,98 (37,5–69,6) 1198±57 (1102-1266) 1447 (1270–1630) 1285 ± 245 (816–1750) – 1516 (1450,8–1581) 15,4±0,7 20 15,7 ± 1,1 – 17 22 ± 3,5(17–29) – 421±46 (349-499) 12,6±0,9 (10,7-15,9) 10,2±0,9 (8,2-11,9) 3,8±0,5 (2,9-4,8) 33,7±4,3 (24,5-42) 5,6±0,7 (4,4-7,7) 3,1±0,3 (2,5-3,8) 12,2±1,8 (8,3-15,1) 4,0±0,7 (2,8-5,4) 35,3±5,7 (25,5-48,9) 418 (390–450) 14,5 (14–16) 14 (12–15) 4,7 (4–6) 28,5 (27–31) 7,2 (6– 8) 422 ± 39 (352–536) 16,8 ± 2,3 (14,0–22,0) 11,5 ± 0,5 (10,5–12,5) ± 0,6 (3–5,5) 25,5 ± 3,1 (19,5–31,1) – 1198±57 (1103-1266) 15,4±0,7 Ấu trùng L W Stl DGO a b b‟ c c‟ T – 60,6 ± 3,4 (52,5-68,4) Con đực L Stl DGO a b c Chiều dài gai giao cấu TES (14-16,2) (14-16,2) (18–22) (14,0–18,0) (16,6–17,4) 3,9±0,7 (3-4,8) 35,7±6,8 (26,8-44,8) 11,7±0,8 (10,4-13) 113,6±46,5 (74,4-205) 23, ±2,6 (21,1-28,0) 664±789 (538-747) 3,9±0,7 (3-4,8) 35,7±6,8 (26,8-44,8) 11,7±0,8 (10,4-13) 113,6±46,5 (74,4-205) 23,8±2,6 (21-28) 664±79 (538-747) (6–13) 38 (31–44) 15 (11–21) 40 (32–58) 32 (28–35) 788 (540–970) ± 0,4 (4–6) 26.0 ± (19.2–34.3) – – – – – 113.9 (113.3–114.5) 33.3 (32.9–33.7) – – 26.5 ± 2.3 (24–31) – – – 6,2 (6,1–6,9) 35.5 (32.7–38.3) – PHỤ LỤC Mã số Genbank quần thể Meloidogyne nghiên cứu STT Tên loài M arenaria M enterollobi Ký hiệu mẫu ITS D2D3 COI COII-16S NADH5 4331 4346 4564 PQ9 PQ20 5342 MG773556 MG773546 MK018123 KU356190 MK018121 MG773549 MH332655 MH332656 MH332657 MK026622 MK026624 MK026626 MH332666 MH332667 MG816469 MH332685 MK033428 MK033427 MG816466 MH332674 MH332675 MH332676 MK038893 5349 MG773550 MK026629 MG816470 MG816467 MK038895 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 M graminicola M incognita 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 M javanica MG773551 MG773552 MG773553 KU356192 MG773558 MG773559 MG773560 MG773562 MG773561 MG773567 MG773554 MK026625 MH332658 MH332660 MK026610 MH332651 MK026614 MH332664 MK026613 MK026620 MK026616 MK026617 MG816471 MH332671 MH332672 MH332663 4345 MG773564 MK026618 MH332668 4631 4533 4548 4565 5053 4485 V7 V12 V9 3936 3660 MK018127 MK018128 MG773565 MG773566 MK018130 MK018126 MK018122 MK018125 MK018124 MG773568 KU356191 MG773569 MG773570 - MH332653 MK026621 MK026623 MK026619 MK026612 MK026615 MG825448 MG825447 MG825449 MG825445 - MH332669 MH332670 MG825434 MG825438 MG825437 MG825436 - 5352 4177 4972 3788 3833 3846 3843 4053 4000 CMRKT44 4337 4063 4096 4285 MH332664 - MG816468 MH332684 KY084499 MK033430 MK033429 MK033431 MK033433 MK038894 MK038885 MK038888 MH332673 MH332677 MH332678 MH332679 MH332680 MK033434 MK033435 MK033432 MK033436 MK033437 MK033438 MK033440 MK038887 MH332682 MH332683 MK038886 MK038889 MG825443 MG825444 MG825440 MK038890 MK038891 MH332681 34 4477 MG773573 - - - MK038892 35 36 37 38 39 40 41 4494 4343 4555 5057 5226 5055 5229 MG773574 MG266059 KU243339 MG773547 MG266058 - MG825450 MH332662 KU243338 MF429805 MG266060 MF429805 MG825431 MG825435 MG431339 MG431339 MG825432 MG431340 MG825430 MG825432 MK033441 MF429807 MG431339 MF429806 MF429804 MG825441 - M daklakensis Meloidogyne sp ... sần rễ khả gây hại, thực đề tài: Nghiên cứu đa dạng tuyến trùng ký sinh gây sần rễ Meloidogyne spp Tây Nguyên ’ Mục tiêu nghiên cứu  Xác định loài tuyến trùng sần rễ Meloidogyne gây hại trồng... 4-HPAA gây chết trứng ấu trùng Meloidogyne incognita 160 1x MỞ ĐẦU Tuyến trùng sần rễ thuộc giống Meloidogyne nhóm tuyến trùng nội ký sinh cố định gây sần rễ [1] Sau xâm nhập vào rễ, ấu trùng. .. - LÊ THỊ MAI LINH NGHIÊN CỨU SỰ ĐA DẠNG TUYẾN TRÙNG KÝ SINH GÂY SẦN RỄ Meloidogyne spp Ở TÂY NGUYÊN LUẬN ÁN TIẾN SỸ SINH HỌC Chuyên ngành: Tuyến trùng học Mã số: Thí điểm Ngƣời