1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN –––––––––––––––––– PHẠM THỊ THANH NHÀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM MỘT SỐ GEN ĐIỀU HÒA SINH TỔNG HỢP ANTHOCYANIN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN CỦA CÂY NGƠ NẾP ĐỊA PHƯƠNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN –––––––––––––––––– PHẠM THỊ THANH NHÀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM MỘT SỐ GEN ĐIỀU HÒA SINH TỔNG HỢP ANTHOCYANIN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN CỦA CÂY NGƠ NẾP ĐỊA PHƯƠNG Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 62 42 01 21 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS LÊ TRẦN BÌNH THÁI NGUYÊN - 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi số kết cộng tác với tác giả khác Các số liệu, kết nghiên cứu luận án trung thực, phần đăng Tạp chí khoa học chuyên ngành, Kỷ yếu hội nghị Công nghệ sinh học GenBank, với đồng ý cho phép đồng tác giả Phần kết lại chưa cơng bố Tác giả NCS Phạm Thị Thanh Nhàn LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới GS.TS Lê Trần Bình tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ động viên suốt q trình nghiên cứu hồn thiện luận án Tôi xin trân trọng cảm ơn tập thể cán bộ, đặc biệt PGS.TS Chu Hoàng Hà, TS Lê Văn Sơn, ThS Hoàng Hà ThS Lê Hoàng Đức thuộc Phòng Cơng nghệ tế bào thực vật, Phòng Cơng nghệ ADN ứng dụng, Phòng Thí nghiệm trọng điểm cơng nghệ gen thuộc Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện tốt nhất, hướng dẫn kỹ thuật thí nghiệm góp ý chun mơn để tơi hồn thành đề tài Tôi xin cảm ơn giúp đỡ đồng tác giả Tôi xin chân thành cảm ơn Ban chủ nhiệm khoa Sinh- Kỹ thuật nông nghiệp, Trường Đại học Sư phạm- Đại học Thái Nguyên, cán khoa tạo điều kiện, động viên tơi học tập hồn thiện luận án, đặc biệt giúp đỡ Thầy, Cô Bộ mơn Di truyền- SHHĐ GS.TS Chu Hồng Mậu, PGS.TS Nguyễn Thị Tâm, CN Nguyễn Thị Hồng Chuyên (Phòng thí nghiệm Hóa Sinh), CN Nguyễn Ích Chiến (Phòng thí nghiệm Di truyền & Cơng nghệ gen) Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo Trường, Phòng Quản lý đào tạo Sau Đại học, Trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Ban lãnh đạo cán Viện Nghiên cứu Ngô Đan Phượng- Hà Nội tạo điều kiện cung cấp giống ngô nếp địa phương thông tin giống Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè đồng hành, chia sẻ tơi, khuyến khích tơi hoàn thành luận án Tiến sĩ Thái Nguyên, tháng 10 năm 2014 Nghiên cứu sinh Phạm Thị Thanh Nhàn i MỤC LỤC Trang Mục lục i Danh mục kí hiệu chữ viết tắt iv Danh mục bảng vii Danh mục hình ix MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục têu đề tài Nội dung nghiên cứu Những đóng góp luận án Ý nghĩa khoa học thực tễn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Cây ngô 1.1.1 Sơ lược ngô 1.1.2 Giá trị dinh dưỡng kinh tế ngô 1.1.3 Tình hình sản xuất ngô giới Việt Nam …… 1.2 Phản ứng ngô trước tác động hạn 10 1.2.1 Mối liên quan tác động hạn tính chống chịu stress ơxy hóa 10 1.2.1.1 Mối liên quan hạn stress oxy hóa 10 1.2.1.2 Các dạng oxy hoạt hóa 12 1.2.1.3 Hệ thống bảo vệ trồng khỏi tác động oxy hóa 13 1.2.2 Cơ sở sinh lý, sinh hoá sinh học phân tử tính chịu hạn ngơ 14 1.2.2.1 Cơ sở hình thái, sinh lý, hóa sinh tính chịu hạn 14 1.2.2.2 Cơ sở sinh học phân tử tính chịu hạn ngơ 17 1.3 Anthocyanin vai trò chuyển hóa dạng oxy hoạt hóa 20 1.3.1 Vai trò anthocyanin thực vật bị hạn 20 1.3.2 Gen điều hồ tổng hợp anthocyanin ngơ … 27 i 1.3.2.1 Nhân tố phiên mã điều hòa biểu gen 27 1.3.2.2 Nhân tố phiên mã tham gia trình tổng hợp anthocyanin 30 ii 1.4 Ứng dụng real- time PCR nghiên cứu mức độ biểu gen tham gia sinh tổng hợp anthocyanin Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Vật liệu nghiên cứu 2.2 Địa điểm nghiên cứu, hoá chất thiết bị 40 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Nhóm phương pháp hố sinh 41 2.3.2 Đánh giá nhanh khả chịu hạn số giống ngô địa phương 45 2.3.3 Nhóm phương pháp sinh học phân tử ……………………………… 47 2.3.3.1 Phương pháp tách RNA tổng số theo kit Trizol (Invitrogen) 47 2.3.3.2 Phương pháp RT- PCR ……………………………………… 47 2.3.3.3 Tạo vector tái tổ hơp ………………………………………… 49 2.3.3.4 Biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào khả biến chủng E.coli DH5 49 2.3.3.5 Kiểm tra sản phẩm chọn dòng ………………………………… 49 2.3.3.6 Tách plasmid …………………………………… 49 2.3.3.7 Xác định trình tự gen …………………………………… 51 2.3.3.8 Phương pháp real- time PCR 51 2.3.4 Phương pháp xử lý kết tính toán số liệu 53 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN………………………………… 54 3.1 Đánh giá khả chịu hạn 10 giống ngô nếp địa phương 54 40 40 41 3.1.1 Khả chịu hạn 10 giống ngô nếp địa phương giai đoạn hạt nảy mầm 54 3.1.1.1 Ảnh hưởng hạn đến hàm lượng đường hoạt độ - amylase 54 3.1.1.2 Ảnh hưởng hạn đến biến đổi hoạt độ protease 57 3.1.2 Đánh giá khả chịu hạn 10 giống ngô giai đoạn non 58 3.1.2.1 Tỷ lệ thiệt hại 10 giống ngô bị hạn ……………………… 58 3.1.2.2 Chỉ số chịu hạn tương đối kiểu gen 10 giống ngô điều kiện hạn nhân tạo 61 3.1.3 Phân nhóm 10 giống ngơ nếp nghiên cứu theo mức độ chịu hạn 63 3.2 Ảnh hưởng hạn nhân tạo đến lượng anthocyanin ngô nếp địa phương 65 3.2.1 đổihạn hàm lượng rễ 10 giống ngô qua ngưỡngSựxửbiến lý nhân tạoanthocyanin 65 3.2.2 Sự biến đổi hàm lượng anthocyanin 10 giống ngô qua ngưỡng xử lý hạn nhân tạo 67 3.2.3 Sự biến đổi hàm lượng anthocyanin thân mầm bẹ 10 giống ngô qua ngưỡng xử lý hạn nhân tạo 70 3.2.4 Sự biến đổi hàm lượng anthocyanin thân bẹ ngô qua ngưỡng xử lý hạn nhân tạo so với đối chứng 73 3.3 Phân tích trình tự đoạn gen B, Lc giống NH BS1 78 3.3.1 Đặc điểm trình tự đoạn gen B giống NH BS1 78 3.3.2 Đặc điểm trình tự đoạn gen Lc giống NH BS1 85 3.3.3 Đặc điểm cấu trúc protein thuộc họ bHLH ngô 91 3.4 Định lượng mức độ biểu gen B Lc phản ứng realtme PCR 3.4.1 Định lượng mức độ biểu gen B giai đoạn 93 3.4.2 Định lượng mức độ biểu gen Lc giai đoạn 97 93 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 103 Kết luận ………………………………………………………… 103 Đề nghị………………………………………………… 103 CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN LUẬN ÁN 104 TÀI LIỆU THAM KHẢO ……………………………………………… 105 PHỤ LỤC 127 PHỤ LỤC 128 PHỤ LỤC 131 PHỤ LỤC 132 NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tên tếng Anh Nghĩa tếng Việt ABA Abscisic acid ANR Anthocyanidin reductase ANS Axit abscisic Enzyme chuyển hóa flavan-3-ol Anthocyanidin synthase Enzyme chuyển hóa tạo anthocyanidin APX Ascorbate peroxidase Enzyme chuyển hoá H2O2 thành H2O bHLH Binding helix- loop- helix Base pair Protein họ bHLH Bp Cặp bazơ nitơ C1 Colored aleurone Gen C1 cDNA Complementary DNA DNA sợi đôi tổng hợp từ mRNA nhờ enzyme phiên mã ngược CHI Chalcon isomerase CHP CHS Enzyme chuyển hóa chalcon Cây hồi phục Chalcone synthase Enzyme xúc tác tổng hợp chalcon CSCHTĐ Chỉ số chịu hạn tương đối CKH Cây không héo DEPC DFR Diethyl pyrocarbonate Chât ức chế enzyme phân huy RNA Dihydroflavonol reductase Enzyme chuyển hóa tạo leucoanthocyanidin DNA DNase Deoxyribonucleic acid Axit deoxyribonucleic (ADN) Deoxyribonuclease Enzyme thủy phân liên kết photphodieste phân tử DNA DRE Dehydraton responsive Yếu tố đáp ứng với hydrat hóa element ĐC Đối chứng %ĐC % so với đối chứng F3‟H Flavonoid 3‟ hydroxylase Enzyme chuyển hóa naringenin F3‟5‟H Flavonoid 3‟,5‟ hydroxylase Enzyme chuyển hóa naringenin HBV Hepatts B virus Virus viêm gan B HCV HP Hepatts C virus Virus viêm gan C KLK KLT Hồi phục KNGN Khối lượng khô LAR Khối lượng tươi Khả giữ nước LEA Leucoanthocyanidin reductase Enzyme xúc tác tổng hợp flavan-3ols Late embryo abundant protein giai đoạn muộn trình hình thành phơi Lc (LC) Leaf colour Gen Lc mRNA Messenger RNA ARN thông tn MGPT chaperon Môi giới phân tử MW Molecular weight Khối lượng phân tử NADP Nicotnamide adenine Coenzym sử dụng phản dinucleotide phosphate ứng đồng hóa Nicotinamide adenine Chất tạo nên khư NADP NADPH dinucleotide phosphate-oxidase PAL Phenylalanine ammonialyase Enzyme chuyển hóa L-phenylalanine Pl Purple Gen Pl Pr1 Red aleurone Protein chuyên trách tổng hợp pelargonidin tạo Aleurone màu đỏ PCR Polymerase chain reaction Phản ứng chuỗi polymerase RNA Ribonucleic acid Axit ribonucleic (ARN) 121 137 Polle A (2001), “Dissecting the superoxide dismutase-ascorbate peroxidase-glutathione pathway in chloroplasts by metabolic modelling Computer simulations as a step towards flux analysis”, Plant Physiol., 126(1), 445– 462 138 Postollec F., Falentin H., Pavan S., Combrisson J., Sohier D (2011), “Recent advances in quantitative PCR (qPCR) applications in food microbiology”, Food Microbiol., 28(5), 848- 861 139 Poustka F., Irani N G., Feller A., Lu Y., Pourcel L., Frame K., Grotewold E (2007), “Trafficking pathway for anthocyanins overlaps with the endoplasmic retculum to vacuole protein sorting route in Arabidopsis and contributes to the formaton of vacuolar inclusions”, Plant Physiol., 145(4), 1323– 1335 140 Radicella J P., Turks D., Chandler V L (2005), “Cloning and nucleott sequence of a cDNA encoding B-Peru, a regulatory protein of the anthocyanin pathway in maize”, Plant Mol Biol., 17(1), 127– 130 141 Ramsay N A., Glover B J (2005), “MYB–bHLH–WD40 protein complex and the evoluton of cellular diversity”, Trends in Plant Sci., 10(2), 63- 70 142 Ramzzoti S., Filippetti I., Intrieri C (2008), “Expression of genes associated with anthocyanin synthesis in red purplish, pink, pinkish green and green grape berries from mutated 'Sangiovese' biotypes: A case study”, Vitis, 47(3), 147– 151 143 Ray H., Yu M., Auser P., Blahut-Beatty L., McKersie B., Bowley S., Westcott N., Coulman B., Lloyd A., Gruber M Y (2003), “Expression of anthocyanins and proanthocyanidins after transformation of alfalfa with maize Lc”, Plant Physiol., 132(3), 1448- 1463 122 144 Reddy A M., Reddy V S., Scheffler B E., Wienand U., Reddy A R (2007), “Novel transgenic rice overexpressing anthocyanidin synthase accumulated a mixture of flavonoids leading to an increased antoxidant potential”, Meta Eng., 9(1), 95- 111 145 Rhodes D (2008), Anthocyanin biosynthesis (maize and Arbidopsis genes), htp://www.hort.purdue.edu/rhodcv/hort640c/secprod/se00013.htm 146 Roby G., Harbertson J F., Adams D A., Matthews M A (2004), “Berry size and vine water deficits as factors in winegrape compositon: Anthocyanins and tarinins”, Aust J Grape Wine Res., 10(2), 100- 107 147 Sharma S., Villamor J G., Verslues P E (2011), “Essential role of tissue specific proline synthesis and catabolism in growth and redox balance at low water potential”, Plant Physiol., 157(1), 292- 304 148 Schemske D W., Bierzychudek P (2001), “Evolution of flower color in the desert annual Linanthus parryae”, Evolution, 55(1), 1269- 1282 149 Schmitgen T D., Zakrajsek B A., Mills A G., Gorn V., Singer M J., Reed M W (2000), “Quantitative reverse transcripton polymerase chain reaction to study mRNA decay: comparison of end oint and real-time methods”, Anal Biochem., 285(2), 194- 204 150 Seki M., Narusaka M., Abe H., Kasuga M., Yamaguchi-Shinozaki K., Carninci P., Hayashizaki Y., Shinozaki K (2001), “Monitoring the expression patern of Arabidopsis genes under drought DNA cold stresses by using a full length cDNA microarray”, Plant Cell, 13 (1), 61- 72 151 Selinger D A., Chandler V L (2001), “B-Bolivia, an allele of the maize b1 gene retrotransposon with variable related Physiol., 125(3), 1363- 1379 expression, sequence contains a high copy immediately upstream”, Plant 123 152 Selma M V., Martínez-Culebras P V., Aznar R (2008), “Real-tme PCR based procedures for detecton and quantfication of Aspergillus carbonarius in wine grapes”, Int J Food Microbiol., 122(1-2), 126- 134 153 Smirnoff N (2005), Antioxidants and Reactive Oxygen Species in Plants, Blackwell Publishing Ltd, UK 154 Solfanelli C., Poggi A., Loreti E., Alpi A., Perata P (2006), “Sucrose specific inducton of the anthocyanin biosynthetic pathway in Arabidopsis”, Plant Physiol., 140(2), 637– 646 155 Spackman E and Suarez D L (2008), “Type A influenza virus detecton and quantitation by real-tme RT-PCR”, Methods Mol Biol., 436, 19– 26 156 Springob K., Nakajima J., Yamazaki M., Saito K (2003), “Recent advances in the biosynthesis and accumulation of anthocyanins”, Nat Prod Rep., 20(3), 288- 303 157 Srivalli B., Sharma G., Khanna-Chopra R (2003), “Antioxidatve defense system in an upland rice cultivar subjected to increasing intensity of water stress followed by recovery”, Physiol Plant., 119(4), 503- 512 158 Stintzing F C., Carle R (2004), “Functional properties of anthocyanins and betalains in plants, food, and in human nutrition”, Trends in Food Science & Technology, 15(1), 19– 38 159 Strnimann C U., Petsalaki E., Russell R B., Müller C W (2010), “WD40 proteins propel cellular networks”., Trends Biochem Sci., 35 (10), 565– 574 160 Strader D B., Wright T., Thomas D L., Seeff L B (2004), “Diagnosis, management, and treatment of hepatitis C”, Hepatology, 1147– 1171 39(4), 124 161 Su J., Wu R (2004), “Stress inducible synthesis of proline in transgenic rice confers faster growth under stress conditions than that with constitutive synthesis”, Plant Science, 166(4), 941- 948 162 Swigoňová Z., Bennetzen J L., Messing J (2005), “Structure and evoluton of the r/b chromosomal regions in rice, maize and sorghum”, Genetics, 169(2), 891- 906 163 Szankowski I, Li H., Flachowsky H., Fischer T C., Hanke M V, Forkmann G., Treutter D., Schwab W., Hoffmann T (2007), “Maize Lc transcripton factor enhances biosynthesis of anthocyanins, distnct proanthocyanidins and phenylpropanoids in apple (Malus domestica Borkh), Planta, 226(5), 1243- 1254 164 Tanyolaỗ D., Ekmekỗi Y., ĩnalan (2007), Changes in photochemical and antioxidant enzyme activities in maize (Zea mays L.) leaves exposed to excess copper”, Chemosphere, 67(1), 89– 98 165 Teif V B., Rippe K (2009), “Predicting nucleosome positions on the DNA: combining intrinsic sequence preferences and remodeler activities”, Nucleic Acids Res., 37 (17), 5641- 5655 166 Teif V B., Rippe K (2010), “Statistical mechanical lattice models for protein-DNA binding in chromatn”, J Phys Condens Mater., 22 (41), 4105- 4124 167 VanGuilder H D., Vrana K E., Freeman W M (2008), “Twenty-five years of quantitative PCR for gene expression analysis”, Biotechniques, 44(5), 619- 626 168 van Nimwegen E (2003), “Scaling laws in the functonal content of genomes”, Trends Genet., 19 (9), 479- 484 169 Vanacker H., Sandalio L M., Jiménez A., Palma J M., Corpas F J., Mesequer V., Gómez M., Sevilla F., Leterrier M., Foyer C H., del Río L 125 A (2006), “Roles for redox regulaton in leaf senescence of pea plants grown on different sources of nitrogen nutrition”, J Exp Bot., 57(8), 17351745 170 Vernimmen D., De Gobbi M., Sloane-Stanley J A., Wood W G., Higgs D R (2007), “Long-range chromosomal interactions regulate the tming of the transition between poised and active gene expression”, EMBO J., 26(8), 2041- 2051 171 Wärnmark A., Treuter E., Wright A P., Gustafsson J Å (2003), "Actvation functions and of nuclear receptors: molecular strategies for transcriptonal activation", Mol Endocrinol., 17 (10), 1901- 1909 172 Wilkinson S., Davies W J (2002), “ABA based chemical signalling: the co-ordination of responses to stress in plants”, Plant Cell Environ., 25(2), 195- 210 173 Winkel-Shirley B (2001),” Flavonoid biosynthesis: a colorful model for genetics, biochemistry, cell biology, and biotechnology”, Plant Physiol., 126(2), 485- 493 174 Winkel-Shirley B (2002), “Biosynthesis of flavonoids and effects of stress”, Curr Opin Plant Biol., 5(3), 218- 223 175 Wong M L., Medrano J F (2005), “Real-time PCR for mRNA quantitation”, Biotechniques, 39(1), 75- 85 176 Xu C., Min J (2011), “Structure and functon of WD40 domain proteins, Protein Cell, 2(3), 202- 214 177 Yamada M., Morishita H., Urano K., Shiozaki N., Yamaguchi Shinozaki K., Shinozaki K., Yoshiba Y (2005), “Effects of free proline accumulation in petunias under drought stress”, J Exp Bot., 56(417), 1975- 1981 126 178 Zimmermann I M., Heim M A., Weisshaar B., Uhrig J F (2004), “Comprehensive identfication of Arabidopsis thaliana MYB transcription factors interacting with R/B-like BHLH proteins”, Plant J., 40(1), 22- 34 Tài liệu mạng 179 http://www.angelfire.com/un/giantcrops/maize.html 180 Kirste Saltsman (2013), htp://www.biologyreference.com/Ce- Co/Control-of-Gene-Expression.htm, Copyright © 2013 Advameg, Inc 181 http://www.ces.ncsu.edu/nreos/forest/topics/leafco~1.html 182 http://www.gene-quantification.de/real-tme-pcr-guide-biorad.pdf 183 Fao Statistical Yearbook (2013), http://www.fao.org/docrep/018/i3107e/i3107e00.htm, 159161 184 http://www.maizegenetics.net/drought-tolerance 185 http://www.maizegdb.org/ 186 The Oxford English Dictionary (2007), http://www.websters-online- dictionary.org/definitions/maize?cx 187 http://www.nal.usda.gov/fnic/foodcomp/search 188 Trung tâm nghiên cứu ngô Bắc Kinh (2005), http://petikam.tripod.com/id11.html 189 US Grains Council, Value Enhanced Grains Quality Report (2001), http://www.vegrains.org/english/varieties-waxycorn.htm 190 College of Agriculture (2003), http://web.aces.uiue.edu/value/factsheets/cor/faet-waxycorn.htm 191 Wise M J (2003), A computational reanalysis of late embryogenesis abundant proteins and their possible roles BMC Bioinformatcs 4:52, http://www.biomedcentral.com/1471- 2105/4/52 127 PHỤ LỤC Bảng 1.1 Hình thái kích thước hạt 10 giống ngô nếp địa phương TT Giống Chiều cao Màu (cm) sắc thân Màu Khối lượng vỏ hạt 1000 hạt (g) Kích thước hạt (mm) Dài Rộng Dày BN 5,10±0,03 190,11±0,76 Xanh Trắng 250,60± 1,14 9,60±0,11 10,00±0,06 BS1 4,30±0,01 166,71±1,10 Xanh Trắng 187,70± 1,51 9,90±0,23 DG2 5,10±0,05 168,41±0,80 Xanh Trắng 242,30± 0,92 ĐX2 4,80±0,10 156,88±1,16 Xanh Trắng 231,50± 1,10 10,00±0,06 9,30±0,22 KL 5,50±0,06 182,84±0,38 Xanh Trắng 206,30± 0,80 9,20±0,15 9,00±0,08 8,50±0,10 9,70±0,09 9,00±0,18 Mo 4,40±0,05 117,91±0,40 Xanh Trắng 222,10± 0,86 9,70±0,21 8,10±0,11 NH 4,40±0,09 160,08±1,23 Xanh Trắng 200,40± 0,98 9,30±0,05 8,40±0,15 PT 4,90±0,05 179,28±0,78 Xanh Trắng 213,40± 1,08 9,70±0,12 9,00±0,21 TB 4,80±0,08 173,17±0,38 Xanh Trắng 212,20± 1,16 9,50±0,16 8,80±0,05 10 VK2 4,60±0,09 138,64±0,98 Xanh Trắng 212,90± 0,68 9,50±0,19 8,40±0,10 Bảng 1.2 Chất lượng hạt 10 giống ngô STT Giống Hàm lượng lipit Hàm lượng protein Hàm lượng đường BN 3,53±0,03 9,37± 0,01 2,64± 0,01 BS1 3,47±0,03 8,94± 0,08 2,62± 0,01 DG2 3,54±0,02 9,46± 0,01 2,82± 0,01 ĐX2 3,73±0,12 9,13± 0,01 2,79± 0,01 KL 5,00±0,01 6,88± 0,01 2,69± 0,01 Mo 3,47±0,03 8,92± 0,01 2,52± 0,01 NH 3,37±0,03 8,10± 0,01 2,66± 0,01 128 PT 3,83±0,09 9,13± 0,01 2,59± 0,01 TB 4,98±0,03 8,66± 0,01 2,53± 0,01 10 VK2 3,31±0,02 9,41± 0,01 2,72± 0,01 (Đơn vi tính: %KLK, n=3; mức độ tn cậy 95%) 128 PHỤ LỤC Bảng 2.1 Hoạt độ amylase qua tuổi mầm xử lý sorbitol 5% ngày TM Lô BN BS1 DG2 ĐX2 KL Mo NH PT TB VK2 ĐC 0,020±0,001 0,016±0,001 0,024±0,001 0,025±0,001 0,021±0,001 0,024±0,001 0,022±0,001 0,024±0,001 0,022±0,001 0,022±0,001 Hạn 0,026±0,001 0,02±0,001 0,029±0,001 0,031±0,001 0,026±0,001 0,030±0,001 0,029±0,001 0,030±0,001 0,027±0,001 0,026±0,001 ĐC 0,028±0,001 0,023±0,001 0,028±0,001 0,024±0,001 0,02±0,001 0,025±0,001 0,032±0,001 0,027±0,001 0,025±0,001 0,025±0,001 Hạn 0,035±0,001 0,028±0,001 0,035±0,001 0,031±0,001 0,025±0,001 0,034±0,001 0,043±0,001 0,035±0,001 0,034±0,001 0,031±0,001 ngày %ĐC 125,33±1,16 121,67±0,58 124,01±1,15 130,5±1,73 125±0,58 125,04±2,31 134,03±1,76 133,13±1,78 126,67±0,98 135,00±1,15 ĐC 0,456±0,004 0,38!±0,134 0,638±0,003 0,471±0,007 0,456±0,004 0,636±0,004 0,536±0,003 0,558±0,006 0,623±0,007 0,316±0,134 Hạn 0,603±0,001 0,475±0,006 0,802±0,001 0,595±0,002 0,513±0,002 0,873±0,002 0,804±0,002 0,743±0,002 0,862±0,001 0,590±0,003 ngày %ĐC 132,37±1,16 125,01±2,89 125,66±0,58 126,37±2,31 112,44±1,29 137,19±1,16 150,09±1,16 133,04±1,73 138,35±1,73 131,18±1,18 ĐC 1,441±0,01 1,584±0,006 1,277±0,009 1,35±0,019 1,486±0,004 1,425±0,029 1,457±0,01 1,452±0,015 1,312±0,015 1,502±0,016 Hạn 1,965±0,003 1,931±0,002 2,015±0,002 1,891±0,003 1,738±0,002 2,233±0,004 2,274±0,003 2,022±0,002 1,993±0,002 1,851±0,002 128 ngày %ĐC 129,09±2,31 120,03±0,83 123,33±1,73 125,0±2,89 123,66±1,76 124,0±2,31 130,01±0,58 125,34±1,34 125,00±2,31 124,33±2,12 129 ngày %ĐC 136,34±1,16 121,91±0,58 157,79±1,27 140,02±2,08 116,93±0,5 156,78±3,64 156,16±1,21 139,37±1,50 151,87±1,73 136,34±1,44 ĐC 0,368±0,008 0,396±0,001 0,375±0,002 0,397±0,001 0,399±0,004 0,400±0,001 0,384±0,002 0,386±0,003 0,397±0,002 0,415±0,002 Hạn 0,421±0,006 0,416±0,002 0,423±0,002 0,425±0,003 0,421±0,005 0,454±0,002 0,433±0,002 0,421±0,006 0,434±0,005 0,436±0,002 %ĐC 114,37±1,16 105,03±0,57 112,7±1,04 107,07±0,57 105,36±0,17 113,33±0,46 112,67±1,16 109,09±0,59 109,33±0,56 105,16±0,06 (Đơn vi tính: ĐVHĐ/mg; TM: tuổi mầm; ĐC: đối chứng; %ĐC: % so đối chứng; n=3; mức độ tin cậy 95%) 130 Bảng 2.2 Hàm lượng đường qua tuổi mầm xử lý sorbitol 5% TM Lô BN ĐC 2,12±0,001 2,039±0,003 BS1 DG2 ĐX2 KL Mo NH PT TB VK2 2,076±0,015 2,06±0,016 2,108±0,003 1,956±0,007 2,069±0,005 2,042±0,005 2,082±0,002 2,17±0,008 Hạn 2,249±0,011 2,205±0,006 2,175±0,012 2,191±0,008 2,021±0,004 2,184±0,017 2,164±0,017 2,338±0,017 2,411±0,004 2,155±0,014 106,25±0,58 105,61±0,23 103,96±0,54 103,32±0,58 105,55±0,58 105,95±0,57 112,33±1,16 111,15±0,58 ĐC 2,19±0,019 2,19±0,03 2,083±0,005 2,096±0,004 2,180±0,008 2,06±0,031 2,103±0,011 2,197±0,012 2,106±0,01 2,289±0,011 Hạn 2,4±0,028 2,411±0,058 2,171±0,012 2,166±0,01 2,336±0,017 2,1±0,028 2,521±0,012 2,535±0,020 2,48±0,011 2,539±0,017 ngày %ĐC 109,57±0,35 104,23±0,29 103,36±0,29 107,14±0,40 101,98±0,23 119,91±1,16 115,40±0,27 117,77±1,04 110,92±1,03 116,78±1,09 ĐC 2,236±0,016 2,122±0,004 2,201±0,008 2,178±0,014 2,07±0,002 2,307±0,016 2,262±0,012 2,289±0,01 2,391±0,009 2,266±0,01 Hạn 2,516±0,007 2,275±0,013 2,512±0,006 2,415±0,008 2,361±0,017 2,786±0,015 2,664±0,009 2,698±0,017 2,682±0,017 2,451±0,017 ngày Y= 1,58X53,15 (R= 0,86) %ĐC 112,54±1,16 107,22±0,46 114,12±0,64 110,94±1,02 114,08±0,92 120,75±1,42 117,76±0,95 117,9±0,98 112,15±1,16 108,18±0,95 ĐC 2,431±0,022 2,157±0,003 2,336±0,003 2,392±0,003 2,333±0,025 2,509±0,026 2,494±0,006 2,356±0,007 2,514±0,006 2,33±0,018 Hạn 3,028±0,012 2,825±0,013 2,60±0,029 2,862±0,019 2,893±0,025 2,822±0,01 3,092±0,01 3,099±0,012 2,962±0,017 2,841±0,023 %ĐC 124,58±1,40 120,55±1,16 122,52±0,98 120,92±1,16 121,0±1,52 123,29±1,67 124,26±0,75 125,74±1,10 113,02±1,16 121,25±1,42 129 %ĐC 106,1±0,58 106,1±0,52 131 ngày ĐC 2,269±0,006 2,181±0,008 2,219±0,012 2,14±0,019 2,236±0,006 2,073±0,01 2,17±0,004 2,181±0,013 2,164±0,014 2,133±0,022 Hạn 2,347±0,024 2,347±0,012 2,347±0,012 2,347±0,023 2,347±0,023 2,347±0,013 2,347±0,016 2,347±0,017 2,347±0,025 2,347±0,009 %ĐC 103,42±0,81 101,39±0,17 102,63±0,11 105,43±0,44 103,76±0,12 109,40±0,40 104,63±0,12 104,48±0,11 105,65±0,10 103,42±0,16 Y= 1,64X59,20 (R= 0,86) Y= 0,84X+ 2,49 (R= 0,72) Y= 1,71X59,37 (R= 0,78) Y= 1,37X- độ amylase 25,82 (R= 0,86) hoạt Y=2,17X102,48 (R= 0,85) quan Y=1,32X23,30 (R= 0,82) Tương đường (Đơn vi tính: %KLT; TM: tuổi mầm; ĐC: đối chứng; %ĐC: % so đối chứng; n=3; mức độ tin cậy 95%) Y= 6,82X21,58 (R= 0,91) Y= 1,75X75,43 (R= 0,91) Y= 1,54X51,38 (R= 0,72) 130 Bảng 2.3 Hoạt độ protease qua tuổi mầm xử lý sorbitol 5% TM Lô BN BS1 DG2 ĐX2 KL Mo NH PT TB VK2 ngày ĐC Hạn %ĐC ngày ĐC Hạn %ĐC Hạn %ĐC ngày ĐC 0,051±0,004 0,088±0,004 0,158±0,015 0,102±0,008 0,041±0,002 0,104±0,007 0,201±0,004 0,068±0,006 0,139±0,008 0,131±0,012 147,99±1,16 125,18±0,58 141,25±1,16 129,68±0,46 115,32±0,58 129,68±1,10 126,22±0,46 132,02±1,16 110,97±0,69 123,31±1,73 0,077±0,003 0,051±0,009 0,293±0,014 0,111±0,008 0,117±0,01 0,103±0,004 0,216±0,015 0,199±0,007 0,106±0,013 0,119±0,009 0,104±0,005 0,064±0,012 0,345±0,017 0,135±0,012 0,155±0,015 0,134±0,006 0,294±0,023 0,273±0,012 0,134±0,017 0,145±0,012 135,62±1,04 125,23±0,58 117,69±0,46 121,08±1,54 131,91±1,14 130,27±1,04 136,02±1,81 137,12±0,92 125,96±0,58 121,38±0,46 0,707±0,003 0,648±0,004 0,702±0,001 0,622±0,003 0,620±0,001 0,749±0,006 0,781±0,001 0,731±0,002 0,716±0,008 0,682±0,001 1,026±0,012 0,865±0,006 1,112±0,006 0,869±0,012 0,828±0,012 1,031±0,017 1,104±0,006 1,072±0,012 0,998±0,023 0,911±0,012 145,19±2,31 145,19±1,73 145,19±1,16 145,19±2,49 145,19±1,73 145,19±1,16 145,19±0,58 145,19±1,16 145,19±1,73 145,19±1,73 0,865±0,008 1,03±0,005 0,888±0,001 0,978±0,004 1,022±0,009 1,302±0,002 1,323±0,002 1,233±0,003 1,202±0,001 0,865±0,007 Hạn 1,445±0,023 1,436±0,017 1,577±0,012 1,428±0,012 1,419±0,017 2,123±0,012 2,144±0,012 1,941±0,017 1,923±0,012 1,415±0,007 %ĐC 167,06±1,16 139,47±2,31 177,53±1,16 146,04±1,73 138,83±1,73 163,08±0,58 162,12±1,16 157,48±1,73 160±0,87 139,58±1,73 ngày ĐC 0,391±0,005 0,286±0,007 0,446±0,003 0,351±0,009 0,309±0,009 0,542±0,004 0,503±0,005 0,512±0,015 0,454±0,003 0,304±0,004 Hạn 0,404±0,006 0,404±0,012 0,404±0,006 0,404±0,017 0,404±0,017 0,404±0,012 0,404±0,012 0,404±0,017 0,404±0,009 0,404±0,01 %ĐC 103,22±0,12 113,79±1,16 111,11±0,57 122,86±1,73 119,15±2,31 114,77±1,86 114,02±1,16 103,73±0,40 115,38±1,16 123,37±1,73 (Đơn vi tính: ĐVHĐ/mg; TM: tuổi mầm; ĐC: đối chứng; %ĐC: % so đối chứng; n=3; mức độ tin cậy 95%) 130 ngày ĐC 0,034±0,002 0,071±0,003 0,112±0,009 0,079±0,006 0,036±0,005 0,080±0,005 0,159±0,002 0,051±0,004 0,125±0,006 0,106±0,008 i 131 PHỤ LỤC Bảng 3.1 Tỉ lệ tương đồng trình tự nucleotit đoạn gen B giống NH BS1 với số trình tự họ bHLH Bảng 3.2 Tỉ lệ tương đồng trình tự nucleotit đoạn gen Lc giống NH BS1 với số trình tự họ bHLH ii 132 PHỤ LỤC 1130 1140 1150 1160 | | | | | | | | ACT- mRNA (NM001155179) AGTGTGATGT TGATATCAGG AAGGATTTGT ATGGTAACGT ACT- NH 1170 1180 1190 1200 | | | | | | | | ACT- mRNA (NM001155179) TGTCCTCAG TGGGGGATCT ACCATGTTCC CTGGGATTGC ACT- NH T 1210 1220 1230 1240 | | | | | | | | ACT- mRNA (NM001155179) CGATCGTATG AGCAAGGAGA TCACGTCCCT GGCTCCTAGC ACT- NH 1250 1260 1270 1280 | | | | | | | | ACT- mRNA (NM001155179) AGCATGAAGG TTAAAGTGAT TGCGCCACCT GAAAGGAAGT ACT- NH 1290 1300 1310 1320 | | | | | | | | ACT- mRNA (NM001155179) ACAGTGTCTG GATCGGTGGC TCTATTTTGG CTTCTCTCAG ACT- NH 1330 1340 1350 1360 | | | | | | | | ACT- mRNA (NM001155179) CACTTTTCAG CAGATGTGGA TCTCCAAGGG AGAGTATGAC ACT- NH 1370 1380 1390 | | | | | | | ACT- mRNA (NM001155179) GAAACTGGTC CGGGCATTGT CCACATGAAG TGCTTCTAA ACT- NH .C Hình 4.1 So sánh trình tự nucleotit đoạn gen Act giống NH với trình tự GenBank ... NHÀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM MỘT SỐ GEN ĐIỀU HÒA SINH TỔNG HỢP ANTHOCYANIN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN CỦA CÂY NGƠ NẾP ĐỊA PHƯƠNG Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 62 42 01 21 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH. .. quan đến tính chịu hạn ngô nếp địa phương Mục têu đề tài Xác định mối tương quan anthocyanin khả chịu hạn ngô nếp địa phương Xác định phân lập số gen điều hòa (gen TF) quan trọng liên quan đến. .. hướng nghiên cứu xác định thị cho đặc tính chịu hạn trồng quan tâm, có thị sắc tố anthocyanin Xuất phát từ lý trên, lựa chọn đề tài Nghiên cứu đặc điểm số gen điều hồ sinh tổng hợp anthocyanin liên