Thực tập sinh học đại cương bài giảng

25 20 0
  • Loading ...
1/25 trang

Thông tin tài liệu

Ngày đăng: 28/01/2019, 04:01

BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ TP.HCM KHOA MÔI TRƯỜNG & CÔNG NGHỆ SINH HỌC  BÀI GIẢNG THỰC TẬP SINH HỌC ĐẠI CƯƠNG Biên soạn: ThS LÊ THỊ VU LAN KS PHẠM MINH NHỰT - 2008 - NỘI DUNG THỰC HÀNH -Bài số 1: Nguyên tắc cách sử dụng kính hiển vi Khảo sát tế bào thực vật động vật Bài số 2: Hiện tượng thẩm thấu Sự trao đổi nước tế bào thực vật với môi trường Khảo sát hoạt động enzyme Bài số 3: Quan sát thoát nước Sự quang hợp Bài số 4: Khảo sát trình phân chia tế bào Bài số 5: Tách chiết DNA BÀI SỐ 1: NGUYÊN TẮC VÀ CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI KHẢO SÁT TẾ BÀO THỰC VẬT VÀ ĐỘNG VẬT -A NGUYÊN TẮC VÀ CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI I Nguyên tắc kính hiển vi Kính hiển vi cấu tạo hệ thống thấu kính hội tụ Mỗi hệ thống hoạt động kính lúp Kính lúp quay phía vật quan sát gọi vật kính Kính lúp dùng để nhìn gọi thị kính II Các phận kính hiển vi Kính hiển vi gồm có: - Một chân làm kim khí nặng để giữ thăng - Một ống kính chuyển động mang thị kính - Một trục quay có gắn vật kính - Một đinh ốc lớn để vặn cho trục kính chuyển động nhanh - Một đinh ốc cấp để vặn cho trục kính chuyển động chậm - Một bàn kính mang mẫu vật để quan sát Bộ phận cố định - Dưới bàn kính phận ngưng tụ ánh sáng gắn liền với phận chắn sáng dùng để điều chỉnh ánh sáng ngưng tụ vào mẫu vật quan sát Bộ phận chắn sáng miếng kim khí tròn có nhiều lỗ đường kính khơng chắn sáng hình ngừơi - Một gương mặt (mặt phẳng mặt lõm) Khi quan sát vật kính 10X – 40X, sinh viên dùng mặt gương lõm, quan sát vật kính 100X sử dụng gương phẳng Thị kính Trục quay Ốc thứ cấp Vật kính Bàn kính Ốc vi cấp Bộ phận ngưng tụ ánh sáng Bộ phận điều chỉnh ánh sáng III Cách sử dụng giữ gìn kính hiển vi Những lời khun thực tiễn giúp sinh viên tránh trở ngại lúc sử dụng kính hiển vi lần Trước hết dùng miếng vải mềm lau vật kính thị kính Lau nhẹ tay khơng hạt bụi làm xây xát vật kính thị kính Tuyệt đối khơng tháo gỡ vật kính thị kính Khi sử dụng kính hiển vi, sinh viên nên ấn nhẹ cần kính hiển vi để trục kính nghiêng phía góc 10 -15 Khơng nghiêng trục kính nhiều dung dịch dùng để quan sát chảy ướt bàn kính, vật kính mẫu vật bị khơ khó quan sát Kế tiếp, quay vật kính trục ống kính lúc nghe tiếng “kích” nhỏ: trục vật kính nằm thẳng hàng với trục vật kính Sau đó, mở hết chắn sáng để ánh sáng vào cực đại hướng mặt lõm gương phản chiếu quay phía nguồn sáng Để kính hiển vi phía tay trái gần mắt trái nhìn vào thị kính, mắt phải mở lớn, dùng tay di chuyển gương chiếu lúc có độ sáng tối đa ống kính Sau để mẫu vật lên bàn kính, vặn đinh ốc sơ cấp để hạ vật kính xuống cách mẫu vật chừng 1cm Nếu kính hiển vi có cản an tồn ngừng vặn đinh ốc mắc cứng Nhìn vào thị kính, vặn đinh ốc lớn nâng từ từ ống kính lên lúc thấy ảnh kính Sau dùng đinh ốc vi cấp điều chỉnh cho ảnh rõ Lúc ảnh rõ, sinh viên đóng bớt chắn sáng lại thấy mẫu sáng Đinh ốc vi cấp chuyển động chiều, chiều có vòng Nếu đinh ốc vi cấp bị kẹt cứng chưa quay đủ vòng, sinh viên phải quay đinh ốc vi cấp vòng hướng Tuyệt đối khơng ráng sức vặn đinh ốc kẹt Chú ý: thận trọng theo dõi lời chì dẫn mà khơng tìm thấy ảnh kính, sinh viên đặt lệch mẫu thị trường Trong trường hợp dùng tay dịch chuyển mẫu vật vào thị trường Muốn quan sát phần mẫu vật, sinh viên dùng vật kính lớn (40X, 100X) Trước hết để vật kính 10X, đưa phần muốn quan sát vào trung tâm thị trường Sau nhìn bên ngồi dùng tay quay từ từ để thay vật kính nhỏ vật kính lớn Muốn điều chỉnh thật rõ, sinh viên nên dùng đinh ốc vi cấp Với đinh ốc lớn, xê dịch lố ống kính đủ để ảnh chạy vô cực hẳn Không sinh viên đặt lamelle lên lame mặt lamelle phải khô Sau hết, sinh viên nên tập quan sát mắt trái, mắt phải mở lớn nhìn xuống giấy vẽ đặt bên phải kính hiển vi, quan sát vẽ hình mà khơng cần di chuyển thân Sau vài cố gắng, sinh viên thấy lợi ích thói quen B KHẢO SÁT TẾ BÀO THỰC VẬT VÀ ĐỘNG VẬT Tế bào đơn vị cấu tạo nhỏ mang chức thể sinh vật Muốn hiểu cấu tạo chức thể động vật, thực vật cần phải khảo sát tế bào I Tế bào thực vật 1.1 Tế bào vảy hành tây Dùng dao lam rạch ô vuông khoảng 0,5 cm/cạnh mặt vảy củ hành tươi Dùng kim mũi giáo, lột nhẹ lớp mỏng biểu bì cho vào giọt nước sẵn lame Đậy lamelle lại cách nghiêng 45 0, hạ từ từ xuống để tránh có bọt khí kính Quan sát vật kính có độ phóng đại nhỏ tế bào dài, vách mỏng Chuyển sang vật kính có độ phóng đại lớn hơn, vẽ – tế bào với đầy đủ thành phần tế bào (màng sinh chất, tế bào chất nhân) Dùng lại miếng biểu bì trên, bóc miếng biểu bì củ hành khác cho vào giọt Iod có sẵn lame Các thành phần tế bào quan sát rõ Quan sát vẽ hình 1.2 Hạt tinh bột Cạo nhẹ lên miếng khoai tây, hạt đậu xanh Cho phần bột vừa cạo vào giọt nước sẵn lame đậy lamelle Quan sát vật kính nhỏ thấy hạt tinh bột bọt nước chuyển động Chuyển sang vật kính lớn để thấy rõ vân tăng trưởng tâm II Tế bào động vật Ở tế bào động vật, ta quan sát tế bào xoang miệng Các tế bào xoang miệng thuộc biểu bì mơ phủ, bao phủ mặt xoang miệng Thực hành Dùng đầu tăm cạo nhẹ mặt xoang miệng Phết vết cạo mặt lame có sẵn giọt Iod Đậy lamelle quan sát kính hiển vi Vẽ hình tế bào xoang miệng tế bào lát đơn, dẹt có nhân BÀI NỘP Chú thích đầy đủ phận kính hiển vi theo hình vẽ Vẽ hình tế bào biểu bì củ hành quan sát giọt Iod vật kính có độ phóng lớn Vẽ hình hạt tinh bột khoai tây hạt đậu xanh Vẽ hình tế bào xoang miệng quan sát giọt Iod BÀI SỐ 2: HIỆN TƯỢNG THẨM THẤU SỰ TRAO ĐỔI NƯỚC GIỮA TẾ BÀO THỰC VẬT VỚI MÔI TRƯỜNG KHẢO SÁT HOẠT ĐỘNG CỦA ENZYME I HIỆN TƯỢNG THẨM THẤU CỦA MÀNG TẾ BÀO Lý thuyết Các màng sinh học tế bào màng sinh chất màng không bào cấu trúc sống, lớp đôi phospholipid với đầu ưa nước quay bên ngồi đầu kỵ nước quay vào bên Trên màng có chứa loại protein tạo nên cấu trúc thể khảm lỏng với thành phần linh động chứng minh nhờ vào tính dẻo chúng Các màng sinh học có vai trò quan trọng q trình trao đổi tế bào mơi trường Các trao đổi liên quan đến lượng nước hay vào tế bào tượng thẩm thấu đặc tính ion hay xuyên qua màng Hiện tượng thẩm thấu tế bào là khuếch tán phân tử nước qua màng có tính thấm chọn lọc Khi tế bào đặt dung dịch ưu trương, tế bào bị nước co lại Khi đó, màng tế bào tách khỏi vách tế bào trạng thái co nguyên sinh Khi đặt lại tế bào dung dịch nhược trương, nước di chuyển vào tế bào, thể tích khơng bào tăng dần, tế bào chất giãn ra, màng tế bào trở nên căng cứng ép sát vách Khi tế bào trạng thái hồi nguyên sinh (phản co nguyên sinh) Dụng cụ - Hóa chất – Nguyên liệu a Dụng cụ – Hóa chất - KNO3 1M - Lame - Pipet Pasteur - Lamelle - Kim mũi giáo - Kính hiển vi - Becher b Nguyên liệu - Củ hành tím Thực hành - Dùng dao lam tách lớp mỏng biểu bì củ hành tím đặt mảnh biểu bì vảy hành lên lame nhỏ sẵn giọt nước, đậy lamelle lại quan sát vật kính 4X, 10X Vẽ hình - Sau đó, dùng giấy thấm thấm khô nước mẫu vật vừa quan sát nhỏ vào giọt KNO3 1M, đậy lamelle lại quan sát vật kính 4X, 10X Vẽ hình, nhận xét giải thích tế bào vẩy hành quan sát giọt nước giọt KNO3 1M II SỰ TRAO ĐỔI NƯỚC GIỮA TẾ BÀO THỰC VẬT VỚI MƠI TRƯỜNG NGỒI Lý thuyết Nước mơi trường bên ngồi vào bên tế bào khỏi tế bào cách thụ động Hướng tốc độ di chuyển nước qua màng xác định khuynh độ nước Thế nước  tế bào tùy thuộc vào áp suất thẩm thấu  áp suất thủy tĩnh P theo công thức:  = - + P - Trong dung dịch đẳng trương, nước hay vào tế bào với tốc độ nước bên tế bào nước bên tế bào - Trong dung dịch nhược trương, nước môi trường cao nước bên tế bào nên nước di chuyển vào tế bào Khi nước bên tế bào tăng  áp suất thẩm thấu giảm áp suất thủy tĩnh tăng  tế bào căng phồng Do đó, tế bào thực vật ngâm dung dịch nhược trương khoảng thời gian định có khối lượng tăng so với ban đầu - Trong dung dịch ưu trương, nước bên tế bào cao bên ngồi nên nước có xu hướng bên Khi nước bên tế bào giảm  áp suất thẩm thấu tăng P giảm  vách tế bào bị lõm vào Do đó, tế bào thực vật ngâm dung dịch ưu trương khoảng thời gian định có khối lượng giảm so với ban đầu Dụng cụ - Hóa chất – Nguyên liệu a Dụng cụ - Hóa chất - Dung dịch Saccharose 1M - Ống hút 10 ml - Bóp cao su - Ống nghiệm - Cân phân tích - Đĩa petri b Nguyên liệu - Khoai tây Thực hành - Pha dung dịch Saccharose 1M Từ dung dịch pha thành dung dịch có nồng độ sau: STT ống nghiệm Số ml dd đường Số ml nước 10 Nồng độ dd (M) Cắt mô khoai tây 0,1 thành 0,2 0,3 11 có 6 0,4 0,5 0,6 kích thước tương 10 11 10 0,7 0,8 0,9 đối đặt lọt vào ống nghiệm Cân ghi lại trọng lượng (P đầu) theo thứ tự cho vào 11 ống nghiệm chuẩn bị - Sau 60 phút, dùng kẹp gắp mô ra, lau sơ nước dính mặt ngồi cân lại (Psau) - Tính sai biệt trọng lượng P = Psau – Pđầu Sai biệt (+) Psau > Pđầu Sai biệt (-) Psau < Pđầu - Ghi kết vào bảng sau: Nồng độ dd ngâm (M) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 P trước (g) P sau (g) P (g) Vẽ biểu đồ thể sai biệt trọng lượng thay đổi theo nồng độ dung dịch ngâm Đường biểu diễn cắt trục hoành điểm C s ứng với nồng độ dung dịch đường không gây thay đổi trọng lượng mô III HOẠT ĐỘNG CỦA ENZYME Lý thuyết Enzyme chất xúc tác sinh học có nhiệm vụ xúc tác cho phản ứng sinh hóa tế bào, làm tăng vận tốc phản ứng Do enzyme có chất protein nên điều kiện ngoại cảnh nhiệt độ, pH, ion kim loại … làm biến tính protein làm hoạt tính enzyme Tiến hành khảo sát loại enzyme bromelin amylase Bromelin enzyme thủy phân protein có nhiều trái thơm Amylase enzyme xúc tác phản ứng thủy phân tinh bột thành glucose Dụng cụ - Hóa chất – Nguyên liệu a Dụng cụ - Hóa chất - Ống nghiệm - Toluen - Becher - Dung dịch lugol - Bếp điện bếp từ - Tinh bột tan - Máy ly tâm - Nhiệt kế rượu b Nguyên liệu - Thơm chín (dứa) - Trứng gà luộc chín - Đậu xanh nẩy mầm Thực hành 3.1 Khảo sát hoạt tính enzyme Bromelin - Thơm chín (dứa) gọt vỏ, cắt nhỏ nghiền nát cối Vắt thật kỹ qua vải lọc (giấy lọc) để thu khoảng 30 ml nước thơm có chứa Bromelin Đem ly tâm 15 phút để làm dung dịch - Chuẩn bị ống nghiệm, cho vào ống khoảng 10 ml dung dịch Một ống đem đun sôi cách thủy 15 phút xong để nguội - Cho vào ống lòng trắng trứng luộc chín, thêm vài giọt toluen vào ống Đậy kín, lắc nhẹ, Xem kết sau ngày Giải thích 3.2 Khảo sát hoạt tính enzyme Amylase ảnh hưởng nhiệt độ - Nghiền nát 10 hạt đậu xanh lên mầm, thêm vào 10 ml nước, vắt thật kỹ qua vải lọc thu lấy nước lọc có chứa amylase 10 - Chuẩn bị ống nghiệm đánh số 1, 2, 3, Cho vào ống nghiệm ml dung dịch tinh bột - Đặt tất ống theo thứ tự nhiệt độ phòng, nước nóng 50 0C, 1000C nước đá 40C 10 phút - Thêm vào ống ml dung dịch amylase từ dịch lọc đậu xanh Để tiếp 15 phút nhiệt độ Lấy ống nghiệm để vào giá (trừ ống đặt vào ly nước nguội) Nhỏ vào ống – giọt dung dịch Lugol xem màu tạo thành - Chú ý: Chỉ nhỏ dung dịch Lugol vào ống nguội BÀI NỘP Vẽ hình tế bào vảy hành tím quan sát giọt nước dung dịch KNO3 1M Giải thích hình dáng tế bào quan sát giọt nước dung dịch KNO3 1M? Vẽ biểu đồ theo dõi tăng giảm khối lượng khoai tây nồng độ đường xác định nồng độ đường mà khối lượng khoai tây khơng đổi Tình trạng mẫu lòng trắng trứng óng nghiệm, giải thích tượng Ảnh hưởng nhiệt độ khác hoạt tính Amylase nào? 11 BÀI SỐ 3: QUAN SÁT SỰ THOÁT HƠI NƯỚC SỰ QUANG HỢP I QUAN SÁT SỰ THOÁT HƠI NƯỚC Lý thuyết Dùng đổi màu giấy tẩm Chlorua Cobalt (màu xanh khô màu hồng ướt) để khảo sát thoát nước bề mặt Thời gian đổi màu cho ước lượng vận tốc thoát nước Dụng cụ - Hóa chất – Nguyên liệu a Dụng cụ - Hóa chất - Giấy thấm - Lò sấy - Kẹp - Băng keo - CoCl2 3% b Nguyên liệu - Lá Thực hành - Cắt nhiều mảnh giấy thấm tròn hay vng có kích thước (có kích thước nhỏ chiều ngang băng keo trong) - Ngâm mảnh giấy thấm vào dung dịch CoCl 3% phút Sau đem sấy khơ 800C (lò sấy) giấy có màu xanh đều, dùng kẹp gắp mảnh đặt lên đầu đoạn băng keo dài cm - Dán nhanh vào mặt miếng Ép thật kín miếng băng keo bao quanh mảnh giấy vào để tránh khơng khí ẩm lọt qua - Tính thời gian đổi màu giấy Nếu 30 phút, thoát nước xem không đáng kể Chú ý: - Nên để đoạn băng keo có dán giấy vào lọ đựng chất hút ẩm đậy kín phải mang khỏi phòng thí nghiệm 12 - Thực loại tươi cành Thường dùng loại đơn, vừa nhỏ, khơng có lơng, khơng dày khơng cứng So sánh nhận xát tốc độ thoát nước loại thực II SỰ QUANG HỢP Lý thuyết Trong điều kiện có ánh sáng mặt trời, xanh thực quang hợp Quang hợp trình tổng hợp chất hữu (glucid) từ chất vô (CO H2O) theo công thức tổng quát sau: 6CO2 + 6H2O C6H12O6 + 6O2 Dụng cụ - Hóa chất – Nguyên liệu a Dụng cụ - Hóa chất - Becher - Cồn 700 - Phễu thủy tinh - Dung dịch Lugol - Ống nghiệm - Diêm quẹt - Đĩa petri - Bếp điện b Nguyên liệu - Rong chó - Lá che tối phần Thực hành III.1 Sự thải oxy quang hợp - Đặt số cành rong chó vào phễu (tất mặt cắt cành rong hướng cuống phễu), sau úp phễu vào cốc thủy tinh chứa đầy nước, úp lên cuống phễu ống nghiệm chứa đầy nước - Đặt cốc thí nghiệm nắng hay ánh sáng mạnh đèn điện - Quan sát ống nghiệm bọt khí từ cuống cành rong Sau 30 phút, lấy ngón tay bịt ống nghiệm dốc ngược lên Dùng que diêm gần tắt đưa vào miệng ống nghiệm Ghi nhận tượng, giải thích 13 - Sau đó, đưa cốc thí nghiệm vào tối, sau 30 phút lấy ra, thực tương tự thí nghiệm dùng que diêm gần tắt đưa vào miệng ống nghiệm Ghi nhận tương xảy giải thích III.2 Sự tạo thành tinh bột quang hợp - Lá che tối phần (trong ngày) Đặt vào cốc thủy tinh nước sơi vòng phút - Dùng kẹp chuyển vào ống nghiệm có chứa cồn 700C, đặt ống nghiệm vào cốc chứa nước sôi đun màu xanh - Rửa nước trải lên đĩa petri - Cho dung dịch lugol vào đĩa petri lắc để nhuộm màu trải Trải lên giấy thấm Ghi nhận tượng giải thích BÀI NỘP Ghi nhận thời gian đổi màu giấy mặt mặt Thực với loại Ghi nhận tượng giải thích q trình giải phóng oxy quang hợp Ghi nhận tượng, giải thích tạo thành tinh bột quang hợp 14 BÀI SỐ 4: KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH PHÂN CHIA TẾ BÀO - A PHÂN CHIA NGUYÊN NHIỄM (Mitose) I LÝ THUYẾT Mitose kiểu di truyền giống tất tế bào sinh dưỡng Có chế Mitose nhiễm sắc thể ổn định từ hệ sang hệ khác Tìm hiểu Mitose tìm hiểu phân chia diễn biến trình phân chia xảy Mitose tiến hành qua giai đoạn: - Interphase: kỳ trung gian - Prophase: kỳ đầu - Metaphase: kỳ - Anaphase: kỳ sau - Telophase: kỳ cuối Qua giai đoạn trên, tế bào nhờ vào hồn tất sinh trưởng thực vật động vật Trong thực tập này, quan sát nguyên phân tế bào rễ hành Ở tế bào này, quan sát định vị giai đoạn sau: Interphase Đây thời kỳ dinh dưỡng, kỳ nằm giai đoạn phân chia Trong kỳ quan sát: - Hình thái, kích thước xuất tổng quát nhân - Màng nhân - Số lượng, vị trí, kích thước hạch nhân Prophase Trong giai đoạn xuất sợi nhỏ nằm rải rác, hình thành nhiễm sắc thể riêng biệt Chúng ta quan sát: 15 - Nhiễm sắc chất xuất thành nhừng chấm ăn màu sậm thời gian đầu tiền kỳ - Các nhiễm sắc chất co ngắn tạo thành dạng sợi rõ rệt, vài sợi - Quan sát màng nhân, hạch nhân giai đoan cuối tiền kỳ chập đơi Metaphase Các NST đóng xoắn cực đại tập trung thành hàng mặt phẳng xích đạo Chúng ta quan sát: - Trục thoi vơ sắc - Vị trí nhiễm sắc thể thoi vơ sắc - Hình thái NST Anaphase Các NST di chuyển cực tế bào Chúng ta quan sát: - Sự di chuyển NST cực tế bào - Thoi vô sắc biến Telophase 16 Kết thúc trình phân chia Co hình thành tế bào Chúng ta quan sát: - Sự tụ tập NST cực kỳ đầu chung kỳ - Sự xuất nhân, màng nhân, hạch nhân II THỰC HÀNH Dụng cụ - Hóa chất a Dụng cụ - Lame, lamelle - Mặt kính đồng hồ - Kẹp gắp - Kim mũi giáo - Dao lam - Kính hiển vi - Rễ củ hành tím b Hóa chất - Dung dịch cố định Carnur (1V acid acetic : 3V cồn tuyệt đối) - Cồn 700 - HCl 1N - Thuốc nhuộm Schiff - Thuốc nhuộm Acetocarmin Thực hành Chọn rễ thời kỳ kỳ phân chia khác nhau, tế bào thực trình phân chia mạnh khoảng từ 9h đến 11h sáng Cách thực tiêu bản: - Rửa rễ nước đem ngâm dung dịch Carnur từ – 24 - Ngâm rễ cồn 700 Có thể giữ mẫu lâu cồn - Vớt mẫu cho lên lame 17 - Cho giọt HCl lên mẫu vật ngâm 15 phút để làm mềm rễ - Thấm khô HCl, nhỏ vào giọt dung dich Schiff để n 10 – 15 phút Sau thấm khơ - Nhỏ vào mẫu vật giọt carmin Để yên từ – phút - Đậy lamelle lại dùng tăm gõ nhẹ lên lamelle khoảng 40 – 50 lần - Lau phẩm nhuộm tràn - Quan sát vật kính 10X, 40X B PHÂN CHIA GIẢM NHIỄM (Meiose) I LÝ THUYẾT Ở thực vật có hoa, giao tử tạo qua tiến trình Meiose gồm lần phân chia liên tiếp Kết số lượng NST giao tử giảm nửa so với tế bào mẹ Mỗi giai đoạn Meiose xác định dựa vào xuất định hương NST Trong nụ hoa, tiến trình Meiose tạo giao tử đực xảy tế bào mẹ hạt phấn túi phấn gọi phát sinh bào tử Kết tạo bào tử có NST đơn bội, bào tử có vị trí sát nhau, bao bọc mang chung gọi tứ tử Sau màng chung tiêu biến, tiểu bào tử hình thành màng riêng gọi hạt phấn Ở loại thực vật, hạt phấn có cấu tạo màng ngồi khác nhau, trơn, nhăn có gai … Tiến trình giảm phân xảy qua lần phân chia liên tiếp sau: Lần phân chia thứ Prophase I - Mô sinh bào tử bao phấn non Quan sát kết hợp chặt chẽ tế bào với thành phần nhiễm sắc thường kết hợp với - Nhiễm sắc chất tạo thành điểm đậm chiếm phần nhân - Trong giai đoạn đầu tiền kỳ như: Leptonema, Zygonema, Pachynema Diplonema khó quan sát - Sợi nhiễm sắc tử tự nhân đơi Khi NST 4n Metaphase I 18 - Màng nhân biến mất, thoi vô sắc xuất - Các NST kép tập trung xếp thành hàng mặt phẳng xích đạo thoi vơ sắc - Bộ NST giai đoạn 4n Anaphase I - Các NST kép phân ly cực tế bào - Bộ NST cực tế bào 2n Telophase I - Các NST kép tập trung cực tế bào thoi vơ sắc biến - Hình thành nhân, tạo thành màng tế bào - Bộ NST tế bào sau Telophase I 2n Lần phân chia thứ hai: Prophase II Giai đoạn xảy nhanh, số loại đơi khơng tìm thấy - Màng nhân hạch nhân biến 19 - Có hình thành thoi vơ sắc Metaphase II - Các NST tập trung mặt phẳng xích đạo thoi vơ sắc theo hướng vng góc với mặt phẳng xích đạo lần phân chia thứ Anaphase II Các NST tách tâm động di chuyển cực tế bào Telophase II - Màng tế bào màng nhân hình thành phần tế bào tứ - Hình thành nên giao tử mang NST 1n tử 20 II THỰC HÀNH Dụng cụ - Hóa chất a Dụng cụ - Lame, lamelle - Mặt kính đồng hồ - Kẹp gắp - Kim mũi giáo - Dao lam - Kính hiển vi - Bơng hẹ b Hóa chất - Dung dịch cố đinh Carnur - Cồn 700 - HCl 1N - Thuốc nhuộm Schiff - Thuốc nhuộm Acetocarmin Thực hành Chọn bao phấn hẹ thời kỳ phân chia khác nhau, tế bào thực trình phân chia mạnh khoảng từ 9h đến 11h sáng Cách thực tiêu bản: - Rửa bao phấn hẹ nước đem ngâm dung dịch Carnur từ – 24 - Ngâm rễ cồn 700 Có thể giữ mẫu lâu cồn - Tách lấy hạt phấn chọn mẫu hạt phấn cho lên lame - Cho giọt HCl lên mẫu vật ngâm 15 phút để làm mềm hạt phấn - Thấm khơ HCl, nhỏ vào giọt dung dich Schiff để yên 10 – 15 phút Sau thấm khơ - Nhỏ vào mẫu vật giọt carmin Để yên từ – phút - Đậy lamelle lại dùng tăm gõ nhẹ lên lamelle khoảng 40 – 50 lần - Lau phẩm nhuộm tràn ngồi quan sát vật kính 10X 40X 21 BÀI NỘP Nêu vắn tắt tiến trình nguyên phân giảm phân Vẽ lại kỳ quan sát thực tế kính hiểu vi tiến trình nguyên phân giảm phân 22 BÀI SỐ 5: TÁCH CHIẾT DNA -I LÝ THUYẾT DNA vật chất mang thông tin di truyền thể DNA polymer tạo thành từ monomer nucleotide Năm 1953, Watson Crick khám phá DNA cấu trúc xoắn kép, hai sợi đơn nối với thông qua cầu nối hydrogen Nguyên tắc để tách chiết DNA: phân tử DNA nằm bên nhân tế bào eukaryote Do đó, muốn tách DNA khỏi tế bào, phải phá vỡ màng tế bào màng nhân để giải phóng phân tử DNA Sau đó, tiến hành loại bỏ phân tử protein phân tử RNA có tế bào Cuối cùng, sử dụng cồn tuyệt đối để kết tủ DNA  thu phân tử DNA II THỰC HÀNH Mục tiêu Tách chiết DNA khỏi tế bào hóa chất dụng cụ đơn giản theo quy trình cho Dụng cụ - Hóa chất – Nguyên liệu 2.1 Nguyên liệu - Dứa tươi (không tươi hay chín): quả: tiến hành gọt vỏ, thái nhỏ vắt nước  lọc qua giấy lọc cho vào cốc - Gan gà tươi gan lợn - Đậu xanh - Giá 2.2 Dụng cụ hóa chất - Ống nghiệm - Ethanol 900 lạnh - Becher - Nước rửa chén - Cối, chày sứ - Nước cất - Phễu thủy tinh - Giấy lọc - Ống đong - Đũa thủy tinh 23 - Dao, thớt Thực hành Để tiến hành thí nghiệm tách chiết DNA từ tế bào gan ta thực bước: Bước 1: Nghiền mẫu vật - Trước hết, ta tiến hành loại bỏ lớp màng bao bọc gan thái nhỏ gan, cân xác g cho vào cối nghiền để tách rời phá vỡ tế bào gan Sau nghiền nát mẫu gan, cho thêm nước khuấy Lượng nước sử dụng gấp đơi với lượng gan - Sau tiến hành lọc dịch nghiền qua giấy lọc để loại bỏ phần xơ giữ lại phần nước lọc Bước 2: Tách DNA khỏi tế bào nhân tế bào - Lấy lượng dịch lọc cho vào ống nghiệm Sau cho thêm vào dịch lọc lượng nước rửa chén 1/6 thể tích dịch lọc khuấy nhẹ để n vòng 15 phút Khơng nên khuấy q mạnh làm xuất bọt ống nghiệm - Sau cho tiếp vào ống nghiệm lượng nước cốt dứa 1/6 thể tích dịch lọc có ống nghiệm khuấy thật nhẹ Để yên ống nghiệm – 10 phút Bước 3: Kết tủa DNA - Nghiêng ống nghiệm rót cồn ethanol 900 dọc theo thành ống nghiệm cách nhẹ nhàng cẩn thận cho cồn tạo thành lớp bề mặt Thể tích cồn sử dụng với thể tích dịch có ống nghiệm - Để ống nghiệm giá khoảng 10 phút quan sát lớp cồn ống nghiệm Chúng ta quan sát phân tử DNA kết tủa lơ lửng cồn dạng sợi trắng đục Bước 4: Dùng đũa thủy tinh đưa vào lớp cồn, khuấy nhẹ cho phân tử DNA bám vào đũa thủy tinh vớt quan sát Lưu ý: phân tử DNA dễ gãy nên vớt khỏi cồn phai thực cẩn thận nhẹ nhàng BÀI NỘP 24 Xác định vai trò nước rửa chén nước cốt dứa quy trình tách chiết DNA Mơ tả giải thích bước thực tách chiết DNA 25 ...NỘI DUNG THỰC HÀNH -Bài số 1: Nguyên tắc cách sử dụng kính hiển vi Khảo sát tế bào thực vật động vật Bài số 2: Hiện tượng thẩm thấu Sự trao đổi nước tế bào thực vật với môi... enzyme Bài số 3: Quan sát thoát nước Sự quang hợp Bài số 4: Khảo sát trình phân chia tế bào Bài số 5: Tách chiết DNA BÀI SỐ 1: NGUYÊN TẮC VÀ CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI KHẢO SÁT TẾ BÀO THỰC VẬT... thật rõ, sinh viên nên dùng đinh ốc vi cấp Với đinh ốc lớn, xê dịch lố ống kính đủ để ảnh chạy vô cực hẳn Không sinh viên đặt lamelle lên lame mặt lamelle phải khô Sau hết, sinh viên nên tập quan
- Xem thêm -

Xem thêm: Thực tập sinh học đại cương bài giảng , Thực tập sinh học đại cương bài giảng

Gợi ý tài liệu liên quan cho bạn

Nhận lời giải ngay chưa đến 10 phút Đăng bài tập ngay