BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HCM KHOA CNSH – TP – MT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA NGUỒN CARBON LÊN SỰ SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN CỦA LAN VŨ NỮ ONCIDIUM KOZUMIT DELIGHT IN VITRO Ngành : Công nghệ sinh học Chuyên ngành: Công nghệ sinh học GVHD : Th.S Trịnh Thị Lan Anh SVTH : Phan Hồng Nhung Lớp 15HSH01 : TP HCM, 08/2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nội dung đồ án tốt nghiệp cơng trình nghiên cứu thực tơi hướng dẫn ThS Trịnh Thị Lan Anh – giảng viên Trường Đại Học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Đề tài thực sở nghiên cứu lý thuyết tiến hành nghiên cứu thực nghiệm phòng thí nghiệm Cơng Nghệ Sinh Học Thực Vật, khoa Công Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường, thuộc Trường Đại Học Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh Các số liệu bảng hồn tồn trung thực Đồ án khơng chép hình thức nào, phát có gian lận tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm TP.HCM, ngày tháng năm 2016 Sinh viên thực Phan Hồng Nhung i LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, em xin gửi đến Quý Thầy Cô Khoa Công Nghệ Sinh Học – Thực Phẩm – Môi Trường trường Đại học Công nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh với tri thức tâm huyết truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho em suốt thời gian học tập trường Với vốn kiến thức tiếp thu q trình học khơng tảng cho q trình nghiên cứu đồ án mà hành trang quí báu để em bước vào đời cách vững tự tin Đặc biệt cho phép em bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ThS Trịnh Thị Lan Anh – người tận tình hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm quý báu cung cấp tư liệu quý giá cho em thực tốt đồ án tốt nghiệp Cảm ơn cô tiếp thêm cho em niềm tin nghị lực để định hướng cho tương lai Qua đồ án này, em xin chân thành cảm ơn ban giám hiệu trường Đại học Cơng nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho em tiếp cận học hỏi nhiều kinh nghiệm trình làm đồ án giúp em nắm vững kiến thức học Bên cạnh đó, em xin cảm ơn thầy Huỳnh Văn Thành thầy Nguyễn Trung Dũng cán phòng thí nghiệm giúp đỡ em suốt thời gian làm đồ án Cảm ơn bạn phòng thí nghiệm ni cấy mơ thực vật giúp đỡ, hỗ trợ suốt q trình làm đồ án Cuối em kính chúc Quý Thầy, Cô dồi sức khỏe thành cơng nghiệp trồng người TP.Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2016 Sinh viên thực đồ án Phan Hồng Nhung ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN……………………………………………………………… i LỜI CÁM ƠN……………………………………………………………………ii MỤC LỤC……………………………………………………………………….iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT……………………………………………… vi DANH MỤC BẢNG……………………………………………………………vii DANH MỤC HÌNH………………………………………………………… ix DANH MỤC BIỂU ĐỒ……………………………………………………… xi MỞ ĐẦU…………………………………………………………………………1 Đặt vấn đề…………………………………………………………………… Mục đích nghiên cứu………………………………………………………….3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu……………………………………… … Phương pháp nghiên cứu…………………………………………………… Kết đạt được…………………………………………………………… Kết cấu đề tài…………………………………………………………… CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU……………………………………… 1.1 Khái niệm nhân giống in vitro……………………………………………… 1.2 Nguồn carbon…………………………………………………………… .5 1.3 Giới thiệu vài nguồn carbon…………………………………………….6 1.3.1 Glucose…………………………………………………………………….6 1.3.2 Fructose……………………………………………………………………8 1.3.3 Lactose……………………………………………………………………9 1.3.4 Manitol………………………………………………………………… 11 1.3.5 Sorbitol………………………………………………………………… 12 1.4 Vai trò nguồn carbon cho tăng trưởng phát triển nuôi cấy in vitro………………………………………………………… 14 1.4.1 Giới thiệu vai trò nguồn carbon ni cấy in vitro………………13 1.4.2 Vai trò nguồn carbon cho tăng trưởng phát triển nuôi cấy in vitro…………………………………………………… 16 1.5 Ảnh hưởng nguồn carbon ni cấy in vitro………………………18 1.6 Tình hình sản xuất, giá trị kinh tế hoa lan giới Việt Nam………20 1.6.1 Tình hình sản xuất lan giới……………………………………….20 6.2 Tình hình sản xuất lan Việt Nam………………………………………21 1.6.3 Tình hình sản xuất lan Vũ nữ…………………………………………… 23 1.7 Giới thiệu lan Vũ nữ…………………………………………………… 23 1.7.1 Phân loại khoa học……………………………………………………… 23 1.7.2 Nguồn gốc phân bố…………………………………………………24 1.7.3 Đặc điểm hình thái sinh học………………………………………………25 1.7.4 Điều kiện sinh thái lan Vũ nữ……………………………………… 27 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP…………………………… 30 2.1 Địa điểm tiến hành đề tài……………………………………………………30 2.2 Vật liệu nghiên cứu…………………………………………………………30 2.2.1 Vật liệu……………………………………………………………………30 2.2.2 Môi trường nuôi cấy………………………………………………………30 2.2.3 Điều kiện thí nghiệm…………………………………………………… 30 2.3 Phương pháp……………………………………………………………… 31 2.3.1 Cách pha môi trường…………………………………………………… 31 2.3.2 Hấp khử trùng…………………………………………………………… 31 2.4 Bố trí thí nghiệm…………………………………………………………….32 2.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)….32 2.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight… 33 2.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng lactose lên khả sinh trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)….33 2.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng manitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…34 2.4.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng sorbitol lên khả sinh trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)….35 2.5 Chỉ tiêu theo dõi…………………………………………………………….36 2.6 Thống kê xử lý số liệu………………………………………………… 36 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN………………………………….37 3.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………….37 3.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………….44 3.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng lactose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………… 51 3.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng manitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………….58 3.5 Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng sorbitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)………….64 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ………………………………….73 4.1 Kết luận…………………………………………………………………… 73 4.2 Kiến nghị……………………………………………………………………73 TÀI LIỆU THAM KHẢO 75 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT EU European Union Tp HCM Thành phố Hồ Chí Minh DNA Deoxyribonucleic acid P Phường Q Quận MS Murashige Skoog (1962) NAA Naphthyl acetic acid BA 6-benzylaminopurine 2,4-D 2,4-dichlopophenoxyacetic acid DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Khảo sát ảnh hưởng glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…… 32 Bảng 2.2 Khảo sát ảnh hưởng fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…… 33 Bảng 2.3 Khảo sát ảnh hưởng lactose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…….34 Bảng 2.4 Khảo sát ảnh hưởng manitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…… 35 Bảng 2.5 Khảo sát ảnh hưởng sorbitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight)…….35 Bảng 3.1 Ảnh hưởng đường glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần nuôi cấy………………………………………………… 38 Bảng 3.2 Ảnh hưởng đường fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần nuôi………………………………………………………45 Bảng 3.3 Ảnh hưởng đường lactose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần nuôi cấy…………………………………………………53 Bảng 3.4 Ảnh hưởng đường manitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần nuôi cấy…………………………………………………59 vii Bảng 3.5 Ảnh hưởng đường sorbitol lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight sau 12 tuần ni cấy………………………………………………… 66 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Lan Vũ nữ…………………………………………………………… 24 Hình 1.2 Rễ lan Vũ nữ…………………………………………………… 25 Hình 1.3 Thân lan Vũ nữ………………………………………………… 26 Hình 1.4 Hoa lan Vũ nữ……………………………………………………… 27 Hình 3.1 Ảnh hưởng đường glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight Sau 12 tuần nuôi cấy (A0; A1; A2; A3; A4; A5 tương ứng với nồng độ đường glucose là: 10; 20; 30; 40; 50 g/l)……………………40 Hình 3.2 Ảnh hưởng đường glucose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight Sau 12 tuần nuôi cấy (A0; A1; A2; A3; A4; A5 tương ứng với nồng độ đường glucose là: 10; 20; 30; 40; 50 g/l)………………… 41 Hình 3.3 Ảnh hưởng đường fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight Sau 12 tuần nuôi cấy (B0; B1; B2; B3; B4; B5 tương ứng với nồng độ đường fructose là: 10; 20; 30; 40; 50 g/l)…………………47 Hình 3.4 Ảnh hưởng đường fructose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight Sau 12 tuần nuôi cấy (B0; B1; B2; B3; B4; B5 tương ứng với nồng độ đường fructose là: 10; 20; 30; 40; 50 g/l)…………………48 Hình 3.5 Ảnh hưởng đường lactose lên khả tăng trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ Oncidium Kozumit Delight Sau 12 tuần nuôi cấy (C0; C1; C2; C3; C4; C5 tương ứng với Erro 12 r Corr ecte 1 9 R-Square Coeff Var 0.407616 Sour ce Chie ucao DF A M n ea 16 0 F V 17.37612 Root MSE Y Mean 3.118048 17.94444 P r The SAS System 09:47 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alph 0.0 a Erro r Erro r Criti cal 17 Leas t Means with the same letter are not signifcantly diferent t Grouping Mean N Chieucaoman A 21.000 D1 A B A 20.333 D4 17.667 D3 17.333 D5 16.333 D2 D0 B A B A B A B A B A B A B B 15.000 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng sorbitol lên khả sinh trưởng tạo hoàn chỉnh từ chồi lan Vũ nữ (Oncidium Kozumit Delight) ❖ Trong lượng tuoi The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Trongluongtuoisor The SAS System Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y Sou DF rce Mod el Erro 12 r Corr 17 ecte d S u m M ea 83 0 0 R S q u Sour DF ce Tron gluo A n C o ef f V M e F Ro ot M SE P r < Y M e a n F P r < The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 Alph 0.0 a Erro r Erro r Criti cal 05 Leas t Means with the same letter are not signifcantly diferent t Gro upi ng M N e a n Tron gluo ngtu oisor B 0.7 143 C 0.4 260 C0 C E0 C ❖ C 0.3 57 C E5 C 32 E1 Trọng lượng khô The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Trongluongkhosor The SAS System Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 Sour DF ce Mod el Erro 12 r Corr 17 ecte S u S M q e 0 0 RSqu 0.98 467 Sour DF ce Tron gluo A n F C o M e P r < R o F Y M P r < The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alph 0.0 a Erro r Erro r Criti cal 05 Leas t Means with the same letter are not signifcantly diferent t Grouping Mean N Trongluongkhosor A 0.154667 E2 B 0.066333 E3 C 0.046000 E4 0.044333 E0 0.035333 E5 C C C D C D D ❖ 0.023000 E1 Số chồi The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Sochoisor Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 The SAS System Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y Sum of Source DF Model 12 Error Corrected Total Source Sochoisor 17 DF Squares Mean Square F Value 49.61111111 9.92222222 8.12 14.66666667 1.22222222 Pr > F 0.0015 64.27777778 R-Square Coeff Var Root MSE Y Mean 0.771824 19.70272 1.105542 5.611111 Anova SS Mean Square 49.61111111 F Value 9.92222222 The SAS System Pr > F 8.12 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y 0.0015 NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alph a Erro r Erro r Criti cal Leas t 0.0 1 22 3.0 54 75 Means with the same letter are not signifcantly diferent t Grouping A A Mean N Sochoisor 0 E2 6 E 0 E4 E3 A BB A B A E B BB B E5 ❖ Số The SAS System 11:17 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class solasor Levels Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 The SAS System 11:17 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 Dependent Variable: Y Sour DF ce Mod el Erro 12 r Corr 17 ecte Sou rce sola sor D F S u m M of e 0 A n M e F 1 F 1 P r R-Square Coeff Var Root MSE Y Mean 0.824084 20.89012 7.125853 34.11111 P r The SAS System 11:17 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alph a Erro r Erro r Criti cal Leas t 0.0 1 50 3.0 54 17 Means with the same leter are not signifcantly diferent t Grouping A Mean N solasor 58.333 E2 42.000 E3 29.667 E0 27.667 E1 A B A B B C B C B C B C B C E4 3 E5 C ❖ Số rễ The SAS System 11:17 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels soresor The SAS System Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 11:17 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y Sour DF ce Mod el Erro 12 r Corr 17 ecte S u M ea F V 6 P r < RSqua 0.9 651 Sour ce sore sor D F A n M e F 6 C o R o Y P r < The SAS System 11:17 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alph 0.0 a Erro r Erro r Criti 3.0 cal 54 Leas t Means with the same letter are not signifcantly different t Gro upi ng ❖ M N sore e sor a n E B 10 E0 00 B B 33 B E1 B B E3 B 3 66 B E4 B 3 66 E5 Đường kính The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Dklasor Levels Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Dependent Variable: Y S Sou rce Mo del Erro r Corr ecte DF S u 4 12 M e F P r RSqu 0.77 342 Sour ce Dkla sor D F A n M e F C o R o Y P r The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedur t Tests (LSD) for Y NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alph a Erro r Erro r Criti cal Leas t 0.0 1 36 3.0 54 49 Means with the same letter are not signifcantly diferent t Grouping A Mean N Dklasor 4.6667 E2 4.1667 E3 A A A B A B 3 3 E0 6 E5 E1 BB B E4 B B ❖ Dài The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Class Level Information Class Levels Dailasor Values E0 E1 E2 E3 E4 E5 The SAS System 10:28 Thursday, July 26, 2016 The ANOVA Procedure Dependent Variable Sour DF ce Mod el Erro 12 r Corr 17 ecte S u S q M e F P r < RSqu 0.86 969 Source DF C o 1 Anova SS R o Y Mean Square F Value Pr > F Number of Observations Read 18 Number of Observations Used 18 Dailasor 240.2777778 48.0555556 The SAS System 16.02