BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ TP HỒ CHÍ MINH ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG CỦA NẤM Trichoderma spp VỚI CÁC NẤM GÂY BỆNH PHỔ BIẾN TRÊN CÂY HỒ TIÊU Ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giảng viên hướng dẫn : TS NGUYỄN THỊ HAI Sinh viên thực TRẦN HÀ PHƯƠNG : HẢO MSSV: 1211100073 TP Hồ Chí Minh, 2016 Lớp: 12DSH02 LỜI CAM ĐOAN Tôi tên: TRẦN HÀ PHƢƠNG HẢO Sinh ngày 26 tháng 10 năm 1994 tỉnh Tiền Giang Quê quán: Xã Tân Lập – huyện Tân Phước – tỉnh Tiền Giang MSSV: 1211100073 Lớp: 12DSH02 Trường Đại học Công Nghệ Thành phố Hồ Chí Minh Tơi xin cam đoan: - Đồ án tốt nghiệp thành từ nghiên cứu hoàn toàn thực tế sở số liệu thực tế thực theo hướng dẫn giáo viên hướng dẫn - Đồ án thực hoàn toàn mới, thành riêng tôi, không chép theo đồ án tương tự - Mọi tham khảo sử dụng đồ án trích dẫn nguồn tài liệu báo cáo danh mục tài liệu tham khảo - Mọi chép không hợp lệ, vi phạm quy chế nhà trường, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Tp.HCM, ngày 30 tháng 07 năm 2016 Sinh viên TRẦN HÀ PHƢƠNG HẢO LỜI CẢM ƠN Qua năm học tập rèn luyện trường Trường Đại học Công Nghệ TP.HCM, bảo giảng dạy nhiệt tình q thầy cơ, đặc biệt q thầy cô khoa Môi Trường – Công Nghệ Sinh Học truyền đạt cho kiến thức lý thuyết thực hành suốt thời gian học tập Và thời gian thực đồ án Công Ty TNHH Điền Trang, tơi có nhiều hội áp dụng kiến thức học trường vào môi trường thực tế công ty, đồng thời học hỏi nhiều kinh nghiệm làm việc anh chị công ty Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc Công ty TNHH Điền Trang tạo điều kiện thuận lợi cho để tơi thực đề tài tốt nghiệp công ty Em cảm ơn anh, chị phòng Nghiên cứu Phát triển Công ty TNHH Điền Trang hỗ trợ, chia giúp đỡ cho em thời gian thực đề tài Em xin chân thành cám ơn Tiến sĩ Nguyễn Thị Hai, người hết lòng hướng dẫn, bảo tận tình giúp đỡ suốt trình thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, nơi chỗ dựa vững cho suốt thời gian học tập Trong trình viết luận văn báo cáo, kiến thức hạn hẹp nên khơng tránh khỏi thiếu sót cách hiểu lỗi trình bày, tơi mong nhận ý kiến đóng góp quý thầy cô Ban lãnh đạo nhà trường, anh chị công ty để giúp báo cáo tốt nghiệp đạt kết tốt Tp.HCM, ngày 30 tháng 07 năm 2016 Sinh viên TRẦN HÀ PHƢƠNG HẢO Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC TỪ v DANH VIẾT MỤC TẮT CÁC B ẢNG vi DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ vii DANH MỤC HÌNH ẢNH viii MỞ ĐẦU 1 Tí nh cấp t hi ết đề t ài 2 Tì nh hì nh nghi ên cứu Mục đí ch nghi ên cứu Nhi ệm vụ nghi ên cứu Phƣơng pháp ng hi ên cứu Các kết đạt đƣợc đề t ài Kết c ấu Đồ án Tốt nghi ệp Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổ ng quan hồ ti 1.1.1 Nguồn g ốc phân bố hồ tiêu 1.1.2 Phâ n bố địa lý 1.1.3 Tình hình sản xuất tiêu thụ hồ tiêu 1.1.3.1 Tình hình sản xuất 1.1.3.2 Tình hình tiêu thụ 1.1.4 Tình hình nghiên cứu dịch hại hồ tiêu Thế giới Việt Nam .11 i 1.1.4.1 Đồ án tốt nghiệp Thế Giới .11 1.1.4.2 Ở Việt Nam 12 1.2 Một số nấm bệnh phổ bi ến hồ ti .14 1.2.1 Nấm Phytop hthora spp 14 1.2.1.1 Đặc điểm sinh học nấm Phytophthora spp .14 i Đồ án tốt nghiệp 1.2.1.2 Vòng đời 15 1.2.1.3 Phytophthora gây bệnh hồ tiêu .16 1.2.2 Nấm Fusarium spp .18 1.2.2.1 Đặc điểm sinh học nấm Fusarium spp .18 1.2.2.2 Vòng đời 20 1.2.2.3 Fusarium gây bệnh hồ tiêu .21 1.2.3 Nấm Colletotrichum s pp 23 1.2.3.1 Đặc điểm sinh học nấm Colletotrichum spp 23 1.2.3.2 Vòng đời 25 1.2.3.3 Colletotrichum gây bệnh hồ tiêu 26 1.3 Bi ện pháp si nh học quản l ý bệnh hại trồng 27 1.3.1 Lịch sử biện pháp sinh học .27 1.3.1.1 Thế giới .27 1.3.1.2 Việt Nam .28 1.3.2 Khái niệm 28 1.3.3 Ưu nhược điểm biện pháp sinh học nông nghiệp .28 1.3.3.1 Ưu điểm 28 1.3.3.2 Nhược điểm 29 1.3.4 Các ứng d ụng sinh học quản lý bệnh hại hồ tiêu 29 1.4 Nấm Trichoderma spp quản l ý bệnh c ây trồng 31 1.4.1 Nấm Trichoderma spp 31 1.4.1.1 Phân loại 31 1.4.1.2 Sự phân bố nấm Trichoderma spp 31 1.4.1.3 Đặc điểm hình thái 32 1.4.1.4 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa, sinh học .33 1.4.1.5 Cơ chế đối kháng nấm gây bệnh trồng 34 1.4.2 Ứng dụng nông nghiệp nấ m Trichoderma 38 ii Đồ án tốt nghiệp 1.4.2.1 Khả kiểm soát bệnh 38 1.4.2.2 Kích thích tăng trưởng trồng 39 1.4.2.3 Khả phân huỷ cellulose, phân giải lân chậm tan 40 Chƣơng 2: VẬT LIỆU VÀ P HƢƠNG PHÁP 41 2.1 Thời gi an đị a ểm thực hi ện đề tài 41 2.2 Vật l i ệu 41 2.2.1 Nguồn g ốc nấm đối kháng, nấm gây bệnh 41 2.2.1.1 Nấm đối kháng 41 2.2.1.2 Nấm gây bệnh 41 2.2.2 Trang thiết bị hóa chất sử d ụng .41 2.2.3 Môi trường nuôi cấy 41 2.3 Phƣơng pháp ng hi ên cứu 42 2.3.1 Phương pháp thu mẫu 42 2.3.1.1 Thu mẫu đất (Theo TCVN 4046 – 85) 42 2.3.1.2 Thu mẫu bệnh 42 2.3.2 Phâ n lậpTrichoderma spp nấm bệnh p hổ biến hồ tiêu .44 2.3.2.1 Phân lập nấm Trichoderma spp đất 44 2.3.2.2 Phân lập nấm Phytophthora gây bệnh chết nhanh hồ tiêu 45 2.3.2.3 Phân lập nấm Fusarium gây bệnh chết chậm hồ tiêu 46 2.3.2.4 Phân lập nấm Colletotrichum gây bệnh thán thư hồ tiêu .47 2.3.3 Phương pháp quan sát hình t hái s ợi nấ m 48 2.3.4 Xác định hoạt tính cellulose: Phương pháp khuếch tá n t hạch .49 2.3.5 Xác định k nă ng đối ng 49 Đồ án tốt nghiệp 2.3.6 Đánh giá khả đối kháng nấm Trichoderma spp nấm bệnh phổ biến hồ tiêu 50 2.3.6.1 Đánh giá tính đối kháng nấm Trichoderma spp nấm Phytophthora sp (phân lập mẫu đất trồng tiêu) 50 Đồ án tốt nghiệp 2.3.6.2 Đánh giá tính đối kháng nấm Trichoderma spp nấm Fusarium sp (phân lập từ rễ tiêu bị bệnh chết chậm) 51 2.3.6.3 Đánh giá tính đối kháng nấm Trichoderma spp nấm Colletotrichum sp (phân lập từ hồ tiêu bị bệnh thán thư) 51 2.3.7 Phương pháp phân tích số liệu 51 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .52 3.1 Kết phân l ập nấm Trichoderma spp 52 3.2 Kết phân l ập nấm bệnh .55 3.2.1 Kết phân lập nấm Phyt opht hora sp .55 3.2.2 Kết phân lập nấm Fusarium sp 56 3.2.3 Kết phân lập nấm Colletotrichum sp .57 3.3 Khảo sát khả si nh enzyme cell ul ase c ác chủng Trichoderma .61 3.4 Đánh gi khả đối kháng Trichoderma spp với nấm bệnh đƣợc phân l ập .63 3.4.1 Khả o sát khả nă ng sinh trưởng chủng Trichoderma spp .63 3.4.2 Trichoderma spp đối kháng với nấm Phytophthora sp gây bệnh chết nha nh hồ tiêu 67 3.4.3 Trichoderma spp đối kháng với nấm Fusarium sp gây bệnh chết chậm hồ tiêu 72 3.4.4 Trichoderma spp đối kháng với nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư tiêu 77 3.4.5 Tổng hợp khả đối kháng Trichoderma spp với nấm bệnh phổ biến hồ tiêu .83 KẾT LUẬN 85 Đồ án tốt nghiệp KIẾN NGHỊ 86 TÀI LIỆU THAM KHẢO 87 PHỤ LỤC PHỤ LỤC 10 Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Hì nh thái đại thể hì nh thái vi thể chủng Tri choderma spp phân l ập đất Bì nh Phƣớc H H t t B P _ B P _ B P _ Đồ án tốt nghiệp B P _ B P _ B P _ B P _ B Đồ án tốt nghiệp B P _ B P _ 3 B P _ B P _ Đồ án tốt nghiệp B P _ B P _ B P _ 4 B P _ B Đồ án tốt nghiệp B P _ B B P _ B P _ B P _ Đồ án tốt nghiệp B P _ B P _ B P _ B P _ Đồ án tốt nghiệp B P _ B P _ 3 B P _ B P _ Đồ án tốt nghiệp B P _ B P _ B P _ B B P _ B Đồ án tốt nghiệp B P _ 1 B P _ B P _ B Đồ án tốt nghiệp PHỤ LỤC Các chủng Trichoderma có khả đối kháng cao với nấm Phytophthora sp sau ngày theo dõi 10 Đồ án tốt nghiệp Các chủng nấm Trichoderma có khả đối kháng cao với Colletotrichum sp sau 11 ngày theo dõi 11 Đồ án tốt nghiệp 12 Đồ án tốt nghiệp Bán kí nh tản nấm Tri choderma sau ngày nuôi cấy NGAY NUOI CAY 09:50 Thursday, August 17, 2016 The GLM Procedure t Tests (LSD) for D NOTE: This test controls the Type I comparisonwise error rate, not the experimentwise error rate Alpha 0.01 Error Degrees of Freedom 66 Error Mean Square 6.078134 Critical Value of t 2.65239 Least Significant Difference 5.3392 Means with the same letter are not signifcantly different t Gr ou pi ng A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A M N a 8 8 8 8 8 8 T B P B P B P B P B P B P B P B P B P B P B P B P B P B P 13 Đồ án tốt nghiệp A B B B D D D D D A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A A C C C C C C C C C E E E 8 8 8 8 8 8 7 7 5 5 B P B P B P B P B P 3 B P B P B P 3 B P 3 B P B P B P B P 3 B P B P B P B P B P B P B P 14 Đồ án tốt nghiệp Môi trƣờng trƣờng Di chl oran Rose Bengal Chl orampheni col G lu P e K T S Đ h ƣ M g D ic R os C hl A g N Môi trƣờng PDA (Potato Dextrose Agar) Thành phần: Dịch chiết khoai tây: 250 g Dextrose: 20 g Agar: 20 g Nước cất: 1000 ml Môi trƣờng CMC (Carboxy methyl cel l ul ose) Thành phần: NaNO3 : 0,4 g K2 HPO4 : 0,2 g MgSO4 : 0,1 g KCl: 0,1 g CMC: 1% Agar: 2% Nước cất: 1000 ml Môi trƣờng WA (Water Agar) Thành phần: Agar: 20 g Nước cất: 15 1000 ml ... chậm hồ tiêu 72 3.4.4 Trichoderma spp đối kháng với nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thư tiêu 77 3.4.5 Tổng hợp khả đối kháng Trichoderma spp với nấm bệnh phổ biến hồ. .. chọn đề tài: Khảo sát khả đối kháng nấm Trichoderma spp với nấm gây bệnh phổ biến hồ tiêu Tì nh hì nh nghi ên cứu  Trong nước Nguyễn Ngọc Phúc năm 2005, tiến hành khảo sát mật độ Trichoderma. .. k nă ng đối ng 49 Đồ án tốt nghiệp 2.3.6 Đánh giá khả đối kháng nấm Trichoderma spp nấm bệnh phổ biến hồ tiêu 50 2.3.6.1 Đánh giá tính đối kháng nấm Trichoderma spp nấm Phytophthora