ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TỐNG XUÂN HOA NHÂN GIỐNG CÂY SÂM DÂY (Codonopsis javanica (Blume) Hook.f.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thái Nguyên - 2014 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TỐNG XUÂN HOA NHÂN GIỐNG CÂY SÂM DÂY (Codonopsis javanica (Blume) Hook.f.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.01.21 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Thị Tâm Thái Nguyên - 2014 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Tâm tận tình hướng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin cảm ơn TS Nguyễn Thị Thúy Hường, Trại Thực nghiệm Sinh học thuộc Viện Công nghệ Sinh học hướng dẫn, bảo tơi q trình tiến hành thí nghiệm Trong q trình nghiên cứu, tơi nhận giúp đỡ kĩ thuật viên Trần Thị Hồng (Phòng thí nghiệm Ni cấy mơ tế bào thực vật - Khoa Sinh KTNN - Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên) Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ q báu Tơi xin chân thành cảm ơn Bộ môn Di truyền Sinh học đại Trường Đại học sư phạm Thái Nguyên tạo điều kiện thuận lợi để tơi thực q trình nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lời cảm ơn đến gia đình bạn bè động viên, khuyến khích, giúp đỡ tôi, quan tâm chỗ dựa cho suốt q trình học tập hồn thành luận văn Thái nguyên, tháng năm 2014 Tác giả luận văn Tống Xuân Hoa Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Mọi trích dẫn luận văn ghi rõ nguồn gốc Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố Thái nguyên, tháng năm 2014 Tác giả luận văn Tống Xuân Hoa Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt iv Danh mục bảng v Danh mục hình vi MỞ ĐẦU .1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu .2 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Giới thiệu chung Sâm dây .3 1.1.1 Đặc điểm phân loại sinh học Sâm dây 1.2 Kỹ thuật nhân giống in vitro công nghệ tế bào thực vật 1.2.1 Ưu phương thức nhân giống in vitro 1.2.2 Quy trình nhân giống in vitro 12 1.3 Chất điều hòa sinh trưởng thuộc nhóm auxin cytokinin sử dụng nuôi cấy mô thực vật 14 1.3.1 Auxin 15 1.3.2 Cytokinin 16 1.4 Tình hình nhân giống dược liệu phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật nước nước 17 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu .21 2.1.1 Vật liệu 21 2.1.2 Hoá chất, thiết bị 21 2.1.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu .21 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 2.2.1 Phương pháp nuôi cấy in vitro 21 2.2.2 Phương pháp xử lí tính tốn số liệu 24 2.2.3 Điều kiện thí nghiệm 25 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng riêng rẽ chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm Cytokinin đến khả nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây ống nghiệm .26 3.1.1 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây ống nghiệm 26 3.1.2 Ảnh hưởng kinetin đến khả nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây ống nghiệm .29 3.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Sâm dây ống nghiệm 30 3.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kết hợp chất thuộc nhóm Cytokinin với IBA đến hiệu nhân chồi, sinh trưởng chồi khả tạo rễ Sâm dây ống nghiệm 32 3.3.1 Ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến khả nhân chồi, sinh trưởng chồi khả tạo rễ Sâm dây ống nghiệm .32 3.3.2 Ảnh hưởng kết hợp Kinetn IBA đến khả nhân chồi, sinh trưởng chồi khả tạo rễ Sâm dây ống nghiệm 33 3.3.3 Ảnh hưởng kết hợp BAP, kinetin IBA đến khả nhân chồi, sinh trưởng chồi khả tạo rễ Sâm dây ống nghiệm .35 3.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống sinh trưởng vườn ươm .37 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ .39 TÀI LIỆU THAM KHẢO .40 PHỤ LỤC 44 Số hóa Trung tâm Học liệu iv http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT BAP: 6-Benzylaminopurine CS: Cộng CT: Công thức ĐC: Đối chứng IBA: Indole-3-acetic acid Kinetin: 6-furfurylaminopurine MS: Murashige Skoog Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Ảnh hưởng BAP đến khả nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây (sau tuần tuần) 27 Bảng 3.2 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây (sau tuần tuần) 29 Bảng 3.3 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ chồi Sâm dây (sau tuần) 31 Bảng 3.4 Ảnh hưởng kết hợp BAP IBA đến khả nhân chồi, sinh trưởng chồi khả tạo rễ Sâm dây (sau tuần) 32 Bảng 3.5 Ảnh hưởng kết hợp Kinetn IBA đến khả nhân chồi, sinh trưởng chồi khả tạo rễ Sâm dây (sau tuần) 34 Bảng 3.6 Ảnh hưởng kết hợp BAP, kinetin IBA đến khả nhân chồi, sinh trưởng chồi khả tạo rễ Sâm dây (sau tuần) 35 Bảng 3.7 Ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống sinh trưởng Sâm dây in vitro vườn ươm (sau tuần) 38 Số hóa Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 19 Nguyễn Quang Thạch, Phí Thị Cẩm Miện (2012), “Nghiên cứu kĩ thuật nhân giống loài Lan Kim Tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) in vitro bảo tồn nguồn dược liệu quý”, Tạp chí khoa học phát triển, Đại học Nông nghiệp Hà Nội, 10(4), tr 597 – 603 20 Nguyễn Thị Kim Thanh, Dương Huyền Trang (2008), “Nghiên cứu kĩ thuật nhân giống vơ tính Lơ hội phương pháp ni cấy in vitro”, Tạp chí khoa học phát triển, Đại học Nông nghiệp Hà Nội, 6(6), tr 514-521 21 Nguyễn Đức Thành (2002), Nuôi cấy mô tế bào thực vật – nghiên cứu ứng dụng, NXB Nông nghiệp 22 Nguyễn Trung Thành, Lê Văn Cần (2007), “Nuôi cấy rễ bất định sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.)”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, NXB Khoa học kĩ thuật, Hà Nội, tr 828 – 831 23 Võ Châu Tuấn, Huỳnh Minh Tư (2010), “Nghiên cứu nhân giống in vitro Ba kích (Morinda oficinalis how)”, Tạp chí khoa học công nghệ, Đại học Đà Nẵng, 5(40), tr 191-196 24 Nguyễn Hải Tuất, Ngơ Kim Khơi (1996), Xử lí thống kê kết nghiên cứu thực nghiệm nông lâm ngư nghiệp máy vi tính, NXB Nơng nghiệp, Hà Nội 25 Nguyễn Thị Kim Uyên, Trần Văn Minh (2007), “Dòng hóa hao (Artemisia annua L.) in vitro”, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống, NXB Khoa học kĩ thuật, Hà Nội, tr 872 - 875 26 Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nông nghiệp 27 Đỗ Năng Vịnh, Ngơ Xn Bình (2008), Giáo trình cơng nghệ sinh học đại cương, NXB Nơng nghiệp Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu 43 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ 28 Viện Dược liệu (2013), Kỹ thuật trồng thuốc, Nhà xuất Nơng nghiệp Số hóa Trung tâm Học liệu 44 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Tài liệu tiếng Anh 29 Peng Jin-huan, Yu Yuan-jie, Zhang Mei-zhen, (2010), ”Study on Tissue Culture and Plantlet Regeneraton of Codonopsis lanceolata”, Acta Botanica Boreali 30 Wojciech Słupski, Bogna Tubek, Adam Matkowski (2011), “Micropropagaton of Codonopsis Pilosula (Franch.) Nannf by Axillary Shoot Multiplication”, Acta Biologica Cracoviensia, 53(2) pp 87-93 Một số trang web 31 http://www.thaythuoccuaban.com/vithuoc/dangsam.htm 32 http: /www.vienduoclieu.org.vn Số hóa Trung tâm Học liệu 45 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ PHỤ LỤC Phụ lục Thành phần môi trường MS Thành phần Nồng độ (mg/l) Thành phần Nồng độ (mg/l) CaCl2.H2O 440,00 CuSO4.5H2O 0,025 KH2PO4 170,00 Na2MoO4.2H2O 0,25 KNO3 1900,00 FeSO4.7H2O 27,80 MgSO4.7H2O 370,00 Na2EDTA.2H2O 37,30 NH4NO3 1650,00 Glycine 2,00 H3BO3 6,20 Thiamine HCl 0,1 KI 0,83 Pyridoxine HCl 0,5 MnSO4.4H2O 22,30 Nicotinic Acid 0,5 ZnSO4.7H2O 8,60 Myo-inositol 100,00 CoCl2.6H2O 0,025 Số hóa Trung tâm Học liệu 46 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Phụ lục Kết xử lí số liệu Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến hệ số nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây Số chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT CT CT Sum Average Variance 3.99 1.33 0.0109 10.5 3.5 0.43 12 2.0371 13.98 4.66 0.2451 8.49 2.83 0.4837 7.5 2.5 6825 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 20.884 Within Groups 7.7786 Total 28.6626 df 12 MS F P-value F crit 4.1768 6.443525 0.003941 3.105875 0.648217 17 Chiều cao chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT CT CT Sum Average Variance 4.23 1.41 0.0193 5.13 1.71 0.1183 7.23 2.41 0.0643 7.05 2.35 0.2425 0.13 19 1.73 0739 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 2.31105 Within Groups 1.2966 Total 3.60765 df 12 MS F P-value F crit 0.46221 4.277742 0.018217 3.105875 0.10805 17 Số hóa Trung tâm Học liệu 47 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Số chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT CT CT Sum Average Variance 4.74 1.58 0.0589 12.99 4.33 0.5932 13.5 4.5 0.4123 15.99 5.33 0.5239 9.48 3.16 0.1191 99 33 0.2964 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 25.84965 Within Groups 4.0076 Total df 12 29.85725 MS F P-value F crit 5.16993 15.48038 7.14E-05 3.105875 0.333967 17 Chiều cao chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT CT CT Sum Average Variance 4.23 1.41 0.0193 5.13 1.71 0.1183 7.23 2.41 0.0643 7.05 2.35 0.2425 0.13 19 1.73 0739 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 2.31105 Within Groups 1.2966 Total 3.60765 df 12 MS F P-value F crit 0.46221 4.277742 0.018217 3.105875 0.10805 17 Số hóa Trung tâm Học liệu 48 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin đến hệ số nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây Số chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT CT CT Sum Average Variance 3.99 1.33 0.0109 9.48 3.16 0.0831 11.49 3.83 0.0709 13.5 4.5 0.2299 8.49 2.83 0.1372 48 16 0.3871 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 19.44565 Within Groups 1.8382 Total df 12 21.28385 MS F P-value F crit 3.88913 25.38873 5.42E-06 3.105875 0.153183 17 Chiều cao chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT CT CT Sum Average Variance 4.23 1.41 0.0193 7.98 2.66 0.3724 8.49 2.83 0.5107 10.74 3.58 0.1197 6.48 2.16 0.0831 5.7 1.9 1359 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 8.788 Within Groups 2.4822 Total 11.2702 df 12 MS F P-value F crit 1.7576 8.496978 0.001223 3.105875 0.20685 17 Số hóa Trung tâm Học liệu 49 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Số chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT CT CT Sum Average Variance 4.74 1.58 0.0589 10.98 3.66 1.0881 12.48 4.16 0.1159 13.98 4.66 0.1423 8.49 2.83 0.0679 98 2.66 0.1843 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 18.89185 Within Groups 3.3148 Total df 12 22.20665 MS F P-value F crit 3.77837 13.67818 0.000132 3.105875 0.276233 17 Chiều cao chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT CT CT Sum Average Variance 5.85 1.95 0.0525 12.75 4.25 0.31 13.23 4.41 0.3253 19.98 6.66 0.9967 11.49 3.83 0.3148 98 66 1332 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 39.9708 Within Groups 4.265 Total 44.2358 df 12 MS F P-value F crit 7.99416 22.49236 1.03E-05 3.105875 0.355417 17 Số hóa Trung tâm Học liệu 50 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả rễ chồi Sâm dây Tỉ lệ chồi Sâm dây rễ sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT 3 CT CT ANOVA Source of Variation SS Between Groups 575 Within Groups 316.6667 Total 891.6667 Sum 205 230 260 215 df Average 68.33333 76.66667 86.66667 71.66667 Variance 58.33333 58.33333 8.333333 33.33333 MS F P-value F crit 191.6667 4.842105 0.033096 4.066181 39.58333 11 Số rễ chồi Sâm dây sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT 3 CT CT ANOVA Source of Variation SS Between Groups 14.7625 Within Groups 12.74667 Total 27.50917 Số hóa Trung tâm Học liệu Sum Average Variance 13.5 4.5 0.79 17.2 5.733333 2.403333 21.9 7.3 0.39 14.1 4.7 2.79 df MS F P-value F crit 4.920833 3.088389 0.089839 4.066181 1.593333 11 51 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BAP IBA đến hệ số nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây Số chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT4 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 0.755025 Within Groups 3.2328 Total 3.987825 Sum Average Variance 15.99 5.33 0.5239 15.99 5.33 0.1119 16.5 5.5 0.3439 14.49 4.83 0.6367 df MS F P-value F crit 0.251675 0.622804 0.619916 4.066181 0.4041 11 Chiều cao chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT4 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 0.440025 Within Groups 1.419 Total 1.859025 Số hóa Trung tâm Học liệu Sum Average Variance 12.24 4.08 0.0427 12.99 4.33 0.1812 12.75 4.25 0.3439 11.49 3.83 0.1417 df MS F P-value F crit 0.146675 0.82692 0.515165 4.066181 0.177375 11 52 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Số rễ sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT2 CT3 CT4 Sum 20.85 23.4 13.71 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 16.8198 Within Groups 6.517 Total 23.3368 Average Variance 6.95 0.5859 7.8 1.3825 4.57 1.2901 df MS F P-value F crit 8.4099 7.742734 0.021778 5.143253 1.086167 Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp Kinetin IBA đến hệ số nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây Số chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups CT1 CT CT CT4 Count 3 3 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 0.718425 Within Groups 1.3404 Total 2.058825 Số hóa Trung tâm Học liệu Sum Average Variance 13.98 4.66 0.1423 14.49 4.83 0.0709 15.48 5.16 0.0873 13.5 4.5 0.3697 df MS F P-value F crit 0.239475 1.429275 0.304311 4.066181 0.16755 11 53 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Chiều cao chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT4 Sum Average Variance 19.98 6.66 0.9967 20.73 6.91 0.0973 19.5 6.5 0.8125 19.23 6.41 1.2693 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 0.4326 Within Groups 6.3516 Total df 6.7842 MS F P-value F crit 0.1442 0.181624 0.905915 4.066181 0.79395 11 Số rễ sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT3 CT4 Sum Average Variance 19.71 6.57 0.6388 21.75 7.25 0.6379 14.49 4.83 3.0901 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 9.3464 Within Groups 8.7336 Total 18.08 Số hóa Trung tâm Học liệu df MS F P-value F crit 4.6732 3.210497 0.112716 5.143253 1.4556 54 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BAP, kinetin IBA đến hệ số nhân chồi sinh trưởng chồi Sâm dây Số chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT4 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 3.558767 Within Groups 2.079733 Total 5.6385 Sum Average Variance 15.48 5.16 0.0873 17.9 5.966667 0.543333 15.9 5.3 0.21 13.3 4.433333 0.199233 df MS F P-value F crit 1.186256 4.563106 0.038209 4.066181 0.259967 11 Chiều cao chồi sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT4 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 1.703692 Within Groups 3.780133 Total 5.483825 Số hóa Trung tâm Học liệu Sum Average Variance 19.5 6.5 0.8125 19.7 6.566667 0.530833 17.29 5.763333 0.379233 17.4 5.8 0.1675 df MS F crit F P-value 0.567897 1.201856 0.36943 4.066181 0.472517 11 55 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Số rễ/cây sau tuần nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT CT CT 3 CT Sum 21.75 23.25 22.35 16.29 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 9.8664 Within Groups 9.8802 Total 19.7466 df Average Variance 7.25 0.6379 7.75 2.0244 7.45 0.9631 5.43 1.3147 MS F P-value F crit 3.2888 2.662942 0.119183 4.066181 1.235025 11 Nghiên cứu ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống sinh trưởng Tỉ lệ Sâm dây sống sau tuần chăm sóc Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count CT1 CT2 CT3 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 1448.222 Within Groups 898.6667 Total 2346.889 Số hóa Trung tâm Học liệu Sum Average Variance 180 60 400 232 77.33333 6.333333 273 91 43 df MS F P-value F crit 724.1111 4.83457 0.056146 5.143253 149.7778 56 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ Chiều cao Sâm dây sau tuần chăm sóc Anova: Single Factor SUMMARY Groups CT CT CT Count Sum Average Variance 34.08 11.36 1.9171 38.98 12.99333 6.890633 54.18 18.06 1093 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 73.22889 Within Groups 33.83407 Total 107.063 Số hóa Trung tâm Học liệu df MS F P-value F crit 36.61444 6.493061 0.031561 5.143253 5.639011 57 http://www.lrc-tnu.edu.vn/ ... THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TỐNG XUÂN HOA NHÂN GIỐNG CÂY SÂM DÂY (Codonopsis javanica (Blume) Hook. f. ) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 60.42.01.21... Sâm dây đưa mơi trường tự nhiên (sau tuần) 38 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật kỹ thuật quan trọng Công nghệ sinh học thực vật Những thành tựu kỹ thuật nuôi cấy mô tế... Sâm dây .3 1.1.1 Đặc điểm phân loại sinh học Sâm dây 1.2 Kỹ thuật nhân giống in vitro công nghệ tế bào thực vật 1.2.1 Ưu phương thức nhân giống in vitro 1.2.2 Quy trình nhân giống