Trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp MỞ ĐẦU Cùng với phát triển khoa học công nghệ ô nhiễm môi trường nảy sinh vấn đề khác, ví dụ bệnh nguy hiểm (ung thư, kháng sinh, cúm H1N1, H7N9,…) Nguyên nhân bệnh đến từ nhiều nguồn khác nhau, nhiễm mơi trường, kháng sinh Trước tình trạng đó, nhiều quốc gia giới tiến hành chương trình nghiên cứu tìm kiếm hoạt chất từ thiên nhiên, với hy vọng dược phẩm có nguồn gốc thực - động vật giúp giảm thiểu bệnh nguy hiểm nêu trên, tăng cường công tác chăm sóc sức khỏe kéo dài tuổi thọ người Những nghiên cứu tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học cao để ứng dụng y học, nơng nghiệp mục đích khác đời sống người trở thành nhiệm vụ quan trọng quốc gia giới Là quốc gia nằm khu vực nhiệt đới gió mùa, lượng mưa tương đối lớn, độ ẩm cao (khoảng 80%), nhiệt độ trung bình khoảng từ 15 270C, Việt Nam có điều kiện thuận lợi cho sinh vật phát triển tạo phong phú nhiều loài động thực vật nhiều hệ sinh thái khác Điều có ý nghĩa quan trọng tới phát triển y học cổ truyền Việt Nam Trong số loài thực vật Việt Nam, loài thực vật thuộc họ Thầu dầu thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học Ví dụ như: Me rừng (Phyllanthus emblica), thuộc họ Thầu dầu, loài sử dụng làm thuốc chữa bệnh từ lâu y học dân gian chữa huyết áp cao, viêm ruột, viêm da, đau họng, đau răng, rắn cắn, Tuy nhiên, để có sở khoa học nhằm phát triển ứng dụng cụ thể lồi này, cần có nghiên cứu cụ thể hóa học, hoạt tính sinh học Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa Học Trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp nghiên cứu sâu dược lý để giải thích tác dụng y học cổ truyền lồi này, qua tạo sở để tìm kiếm phương thuốc điều trị bệnh Xuất phát từ ý nghĩa thực tiễn chọn đề tài cho khoá luận tốt nghiệp là: “Nghiên cứu phân lập thành phần flavonoit từ Me rừng” Khóa luận tập trung nghiên cứu thành phần flavonoit từ Me rừng bao gồm nội dung là: Thu mẫu Me rừng (Phyllanthus emblica), xử lý mẫu tạo dịch chiết Phân lập hợp chất flavonoit Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa Học Trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu chung Me rừng 1.1.1 Thực vật học me rừng Cây Me rừng (Hình 1.1) hay gọi chùm ruột núi, chùm ruột rừng, bơng ngót, cam tú, ngưu cam tú, du cam tú, mắc kham Cây có tên khoa học Phyllanthus emblica Đây gỗ nhỏ bụi, cao 3-8(-10) m, vỏ mỏng, màu nâu nhạt, nâu màu xám, nhẵn Thân thường cong queo, phân cành nhiều, cành nhỏ mềm, cành già màu xám nhạt, mang nhánh nhỏ, có lơng Cành mang mảnh, màu xanh nhạt Cành mang xếp gần mặt phẳng Phiến hình bầu dục khn, hai đầu tù, kích thước (3-)12-20 x (1-)3,5 - mm, nhẵn; gần không cuống ngắn Lá kèm nhỏ, hình tam giác, màu đỏ nâu Hoa đơn tính gốc Hình 1.1 Mẫu lá, tiêu me rừng Hoa nhỏ mọc thành xim co nách phía cành, gồm nhiều hoa đực 1-2 hoa Hoa đực có cuống ngắn; đài gồm mảnh màu hồng xanh nhạt, hình bầu dục Hoa gần khơng cuống; đài có thuỳ tương tự hoa đực Quả hình cầu, kích thước 13-25 x 20-30 mm, mọng nước, màu vàng xanh; khô thành nang, tự mở Hạt dạng cạnh, màu hồng nhạt hay nâu nhạt [1, 2, 4, 5] Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa Học Trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp 1.1.2 Phân bố sinh thái Cây mọc phổ biến khắp nơi Việt Nam, tỉnh miền núi trung du phía bắc [1, 2, 4, 5] Me rừng lồi có vùng phân bố rộng nhiều nước châu Á, từ Ấn Độ đến Myanmar, Nepal, Thái Lan, Malaysia, Lào, Campuchia, miền nam Trung Quốc Hiện me rừng đưa vào trồng Nhật Bản, Hoa Kỳ Australia 1.1.3 Công dụng Nhiều phận loài Me rừng (P emblica L.) có hoạt tính kháng khuẩn, kháng oxy hóa, chống suy giảm miễn dịch, kháng độc bảo vệ tế bào gan kim loại màu gây [1, 2, 4, 5],… Trong y học dân gian, dùng chữa phù thũng, viêm da, mẩn ngứa Hạt dùng chữa hen, viêm cuống phổi thiểu mật Rễ dùng để chữa huyết áp cao, đau thượng vị, viêm ruột lao hạch bạch huyết [5], Quả thường dùng ăn tươi, làm ô mai, nước hoa quả, giải khát, hầm thịt, làm thuốc nhuộm răng, nước gội đầu để kích thích mọc tóc Quả dùng làm thuốc chữa bệnh thiếu vitaminC (bệnh Scorbut), viêm đau gan, vàng da, rối loạn tiết mật, viêm đau dày, kiết lỵ, tiêu chảy, nhuận tràng, kích thích tiêu hóa, lợi tiểu, đái đường, giải nhiệt, xuất huyết, cầm máu, thiếu máu, giảm huyết áp, đau nhức đầu, đau nhức mắt, giảm sốt, choáng váng, ho, viêm phế quản, viêm sưng phổi,… Hạt dùng chữa hen suyễn, viêm phế quản, thiểu mật,… Hoa dùng làm thuốc nhuận tràng, giải nhiệt làm thuốc xổ Lá me dùng làm thuốc giải nhiệt, chữa phù thũng số bệnh da Vỏ thân dùng làm thuốc chữa tiêu chảy, lỵ amip, cầm máu Rễ dùng để chữa trị bệnh cao huyết áp, đau thượng vị, viêm ruột, lao hạch bạch huyết,… Cộng đồng dân tộc miền núi Việt Nam nước Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa Học Trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Trung Quốc, Thái Lan, Malaysia, Ấn Độ,… thường sử dụng phận Me, đặc biệt để ăn làm thuốc rộng rãi [1, 2, 4, 5] 1.1.4 Thành phần hóa học Quả me rừng có vị chua, nguồn nguyên liệu giàu vitamin C Trong chứa trigalloyglucose, ellagic acid, corilagin, terchebin, phylleblin, phyllemblic acid emblicol Các nghiên cứu gần cho biết vitamin C acid gallic có đặc tính kháng oxy hóa, kháng nấm, kháng khuẩn Hoạt tính ức chế q trình oxy hóa tác dụng tannin, emblicanin A, emblicanin B, punigluconin pedunculagin me rừng [5] Phyllemblin coi hoạt chất có tác dụng tương tự adrenalin, gây giảm đau, an thần, đặc biệt với hệ thần kinh trung ương [5],… Những acid hữu me rừng như: acid aspartic, ellagic, gallic, myristic, ascorbic, alanine, glycine, histidine, methionine, niacin, tyrosine với số hợp chất tannin coi có tác dụng phòng chống số dạng ung thư kìm hãm phát triển virut HIV [5],… Lá nguồn nguyên liệu giàu flavonoid, tannin sterol Từ tách chiết hoạt chất ellagic acid, amlaic acid, kaempferol-3glucoside, kaempferol, lupeol, α-amyrin acetat, phytosterol C29 βsitosterol, poriferasterol, β-sitosterol-3-O-D-glucopyranosid [5], Vỏ chứa β-sitoserol,(+)-leucodelphinidin (3,75%), lupeol (2,25%) tannin Thành phần chủ yếu tannin gồm phyllembin, gallotannin 1,2,3-trigalloyglucose, ellagitannin terchebin, corilagin, chebulagic acid, chebulinic acid Hạt chứa khoảng 16% dầu béo, chủ yếu linoleic acid (44%), oleic acid (28,4%), linolenic acid, stearic acid, palmatic myristic acid [5] Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa Học Trường Đại Học Sư Phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Dưới ví dụ cấu trúc số hợp chất từ me rừng: OH O OH OH O OH OH Keamferol Quercetin OH OH OH OH O OH O OH O OH O O OH OH OH O O O O OH O OH O OH OH O O O OH OH Astragalin OH OH Emblicanin A OH OH OH OH OH O OH O O OH O O O OH O O OH OH O OH O OH O O O O O O O OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH OH Emblicanin B OH Corilagin Hình 1.2 Cấu trúc số hợp chất từ me rừng Chu Kim Ngân K35C – Khoa Hóa Học 1.2 Giới thiệu lớp chất flavonoit [10-14] Flavonoit nhóm hợp chất phân bố rộng rãi tự nhiên Cho đến có 4000 Flavonoit tìm thấy từ thực vật Ban đầu chúng phát với vai trò sắc tố thực vật vào mùa thu loài hoa, dần chuyển sang màu vàng, da cam, đỏ Các Flavonoit tìm thấy rau, quả, hạch, hạt, cỏ, gia vị, thân cây, loại hoa chè rượu vang đỏ Flavonoit có mặt hầu hết phận lá, hoa, quả, phấn, rễ,… cư trú thành tế bào Nó tham gia vào tạo thành màu sắc đặc biệt hoa (tạo cho hoa màu sắc rực rỡ để quyến rũ loại côn trùng giúp cho thụ phấn cây) Các flavonoit lớp chất phổ biến có thực vật Chúng hợp chất có cấu tạo gồm vòng benzen A, B nối với dị vòng C với khung cacbon C6-C3-C6 Việc phân loại flavonoit dựa khác nhóm C3 (các glicosit có màu vàng nhạt màu ngà; antoxianin antoxianiđrin màu đỏ, xanh, tía dạng khơng màu; isoflavon, catecin leucoantoxianiđrin chất tan nước thường nằm không bào) 2' A 1' 10 O O 4' B 3' OH RO 6' 5' C O Hình 1.3 Khung Hình 1.4 Khung flavan flavon OR O O OH RO RO OH OH O O Hình 1.5 Khung Hình 1.6 Khung flavonol Flavanonol-3 Flavon (Hình 1.4) flavonol (Hình 1.5) phổ biến tự nhiên Công thức cấu tạo chúng khác vị trí cacbon số Trong thực vật, flavon flavonol thường không tồn dạng tự mà thường dạng glycozit Bên cạnh hợp chất có dạng khung flavan, flavon, flavonol có hợp chất thuộc dạng Flavanonol-3 (Hình 1.6) số hợp chất thuộc khung Chalcon (Hình 1.7), khung auron (Hình 1.8) OH OR RO O RO O A C OR CH B O Hình 1.7 Khung Hình 1.8 Khung hợp hợp chất chalcon chất Auron 1.3 Các phương pháp chiết mẫu thực vật Sau tiến hành thu hái làm khơ mẫu, tuỳ thuộc vào đối tượng chất có mẫu khác (chất phân cực, chất không phân cực, chất có độ phân cực trung bình, ) mà ta chọn dung môi hệ dung môi khác 1.3.1 Chọn dung mơi chiết Thường chất chuyển hố thứ cấp có độ phân cực khác Tuy nhiên thành phần tan nước quan tâm Dung mơi dùng q trình chiết cần phải lựa chọn cẩn thận Điều kiện dung mơi phải hồ tan chất chuyển hoá thứ cấp nghiên cứu, dễ dàng loại bỏ, có tính trơ (khơng phản ứng với chất nghiên cứu), không độc, không dễ bốc cháy Dung mơi lẫn tạp chất ảnh hưởng đến hiệu chất lượng trình chiết cần phải chưng cất để thu dạng trước sử dụng Thường có số chất dẻo lẫn dung môi diankyl phtalat, tri-n-butyl-axetylcitrar tributylphosphat Những chất lẫn với dung mơi trình sản xuất khâu bảo quản thùng chứa nút đậy nhựa Methanol chloroform thường chứa dioctylphtalat [di-(2- etylhexyl)phtalat bis-2-etylhexyl-phtalat] Chất làm sai lệch kết phân lập q trình nghiên cứu hố thực vật, thể hoạt tính thử nghiệm sinh học làm bẩn dịch chiết Chloroform, metylen clorit methanol dung môi thường lựa chọn trình chiết sơ phần như: lá, thân, rễ, củ, quả, hoa, Những tạp chất chloroform CH2Cl2, CH2ClBr phản ứng với vài hợp chất ancaloit tạo muối bậc sản phẩm khác Tương tự vậy, có mặt lượng nhỏ axit clohiđric (HCl) gây phân huỷ, khử nước hay đồng phân hoá với hợp chất khác Chloroform gây tổn thương cho gan thận nên làm việc với chất cần thao tác khéo léo, cẩn thận nơi thoáng phải đeo mặt nạ phòng độc Metylen clorit độc dễ bay chloroform Methanol etanol 80% dung môi phân cực hiđrocacbon clo Người ta cho dung môi thuộc nhóm rượu thấm tốt lên màng tế bào nên q trình chiết với dung mơi thu lượng lớn thành phần tế bào Trái lại, khả phân cực chloroform thấp hơn, rửa giải chất nằm ngồi tế bào Các ancol hoà tan phần lớn chất chuyển hoá phân cực với hợp chất phân cực trung bình thấp Vì chiết ancol chất bị hồ tan đồng thời Thơng thường dung mơi cồn nước có đặc tính tốt cho q trình chiết sơ Tuy nhiên có vài sản phẩm tạo thành dùng methanol suốt trình chiết Thí dụ trechlonolide A thu từ Trechonaetes aciniata chuyển thành trechonolide B trình phân huỷ 1-hydroxytropacocain xảy erythroxylum novogranatense chiết methanol nóng Người ta thường sử dụng nước để thu dịch chiết thơ từ mà thay vào dùng dung dịch nước methanol Đietyl ete dùng cho trình chiết thực vật dễ bay hơi, bốc cháy độc, đồng thời có xu hướng tạo thành peroxit dễ nổ, peroxit dietyl ete dễ gây phản ứng oxi hố với hợp chất khơng có khả tạo cholesterol carotenoit Tiếp đến axeton tạo thành axetonit 1,2-cis-diol có mặt mơi trường axit Q trình chiết điều kiện axit bazơ thường dùng với trình phân tách đặc trưng, có xử lý dịch chiết axit - bazơ tạo thành sản phẩm mong muốn Sự hiểu biết đặc tính chất chuyển hoá thứ cấp chiết quan trọng để từ lựa chọn dung mơi thích hợp cho q trình chiết tránh phân huỷ chất dung mơi q trình tạo thành chất mong muốn Sau chiết dung môi cất máy cất quay nhiệt độ khơng q 30 - 400C, với vài hố chất chịu nhiệt thực nhiệt độ cao 3.2 Hằng số vật lý kiện phô hợp chất 3.2.1 Hợp chất (PU1) Các thông số vật lý hợp chất PU1, số liệu sau: Tinh thể màu vàng Phổ ESI-MS m/z: 303,1 [M+H]+, 325,0 [M+Na]+ 300,9 [M-H]Công thức phân tử C15H10O7 (M = 302) H-NMR (600 MHz, CD3OD)  (ppm): 6,26 (d, J = 2,0 Hz, H-6); 6,52 (d, J = 2,0 Hz, H-8); 7,83 (d, J = 2,0 Hz, H-2’); 6,99 (d, J = 8,5 Hz, H-5’); 7,70 (dd, J = 2,0, 8,5 Hz, H-6’) 3.2.2 Hợp chất (PUW1) Các thông số vật lý hợp chất PUW1 sau: chất rắn màu vàng Phổ ESI-MS m/z: 291 [M+H]+, 289 [M-H]- Công thức phân tử C15H14O6, M = 290 Các số liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H-NMR, HSQC, HMBC trình bày bảng 13 C-NMR CHƯƠNG THẢO LUẬN KẾT QUA 4.1 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất (PU1) Hợp chất PU1 thu dạng tinh thể màu vàng hợp chất flavonoit Trên phổ 1H-NMR (Hình 4.1) xuất hai tín hiệu doublet đặc trưng cho hai proton vòng A  6,26 (d, J = 2,0 Hz, H-6) 6,52 (d, J = 2,0 Hz, H-8), ba tín hiệu điển hình cho vòng B 1,3,4 với tương tác spin hệ ABX  7,83 (d, J = 2,0 Hz, H-2’); 6,99 (d, J = 8,5 Hz, H-5’); 7,70 (dd, J = 2,0; 8,5 Hz, H-6’) Những kiện cho thấy quercetin với công thức phân tử C15H10O7 Kết phổ khối lượng ESI-MS xuất pic ion m/z 303,1 [M+H]+, 325,0 [M+Na]+ 300,9 [M-H]- hồn tồn tương ứng phù hợp với cơng thức phân tử C15H10O7 (M = 302) Kết so sánh kiện phổ PU1 với quercetin tài liệu [8] hoàn toàn phù hợp cho thấy hợp chất quercetin Hình 4.1a Phơ 1H-NMR PU1 Hình 4.1b Phơ 1H-NMR PU1 Hình 4.2 Phơ khối lượng ESI-MS PU1 Bảng 4.1 Kết phô NMR hợp chất PU1 C H c [ H , J (Hz) , J (Hz) 6 ( ( ’ ( ’ ( a7 b c * ’ dđo d Acetone, 500 MHz, đo DMSO, Số liệu phổ quercetin [8] 4' 6' HO O 3' 1' OH OH 10 OH OH O Hình 4.3 Cấu trúc hóa học PU1 4.2 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất (PUW1) Phổ 1H-NMR (Hình 4.4) PUW1 xuất proton H 7,65 (1H, dd, 8,0; 2,0); 6,89 (1H,d, 8,0) 7,69 (1H, d, 2,0) với số tương tác J = 8,0 Hz 2,0 Hz dự đốn có mặt vòng thơm với nhóm gắn vào vị trí octo, para Các vị trí lại proton vị trí meta, para Dự kiến vòng thơm có dạng sau: X X X Từ số liệu phổ 1H-NMR PUW1 quan sát thấy hai tín hiệu doulet H 6,23 6,42 ppm với số tương tác nhỏ (J = 2,0 Hz) chứng tỏ hai proton có mặt vòng thơm vị trí meta X X X X Ngồi ra, phổ 1H-NMR PUW1 quan sát tín hiệu phân tử đường với giá trị H khoảng từ 3,29 đến 5,13 ppm, điểm dễ nhận dạng proton anome phân tử đường thứ H 5,13 (1H, d, J = 7,5 Hz) phân tử đường thứ proton H 4,54 (1H, d, J = Hz) Trên phổ H-NMR quan sát tín hiệu nhóm metyl H 1,14 (3H, d, J = 6,5 Hz) Hình 4.4 Phơ 1H-NMR hợp chất PUW1 Phổ 13C-NMR (Hình 4.5) hợp chất PUW1 quan sát 27 tín hiệu cacbon, có tín hiệu đặc trưng cacbon anome phân tử đường với C 104,72 102,42 ppm, cacbon khác phân tử đường C 75,73; 78,21; 71,42 ; 77,24 68,57 ppm; phân tử đường thứ hai C 72,11; 72,26; 73,95 69,71 ppm Các tín hiệu khác cho thấy tồn vòng thơm vị trí octo, vị trí para vòng thơm vị trí octo, vị trí para Hình 4.5 Phơ 13C-NMR hợp chất PUW1 Các tín hiệu hai tín hiệu cacbon có tín hiệu cao thể đối xứng C 130,87 115,09 ppm Tín hiệu cacbon C 179,43 ppm cho thấy nhóm cacbonyl C=O, tín hiệu C 158,54; 135,63; 159,35; 166,10; 135,63 ppm, cho phép dự đoán cacbon có gắn nằm cạnh nhóm có chứa oxy Kết hợp số liệu phổ 13 C-NMR dự đốn phân mảnh hợp chất PUW1 sau: X X X X X X X O X X X X O Trên phổ HSQC (Hình 4.6) cho thấy tương tác trực tiếp proton cacbon Quan sát phổ HSQC cho thấy tương tác cặp proton cacbon tương ứng sau: C 104,72 H 5,13 (1H, d, J = 7,5 Hz); 102,42 H 4,54 (1H, d, J = 1,0 Hz); C 99,98 H 6,23 (1H, d, J = 2,0 Hz); C 94,89 H 6,43 (1H, d, J = 2,0 Hz); C 130,87 H 8,04 (2H, d, J = 9,0 Hz); C 115,09 H 6,88 (2H, d, J = 9,0 Hz); cặp tương tác phân tử đường C 74,20 H 3,17*; 77,48 3,08* 69,88 3,08* ; 76,40 3,20*; 60,83 H 3,32*; 3,56 dd (5,0; 12,0) Hình 4.6 Phơ HSQC hợp chất PUW1 Số liệu phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) 13 C-NMR (125MHz, CDCl3) trình bày Bảng 4.2 Bảng 4.2 Số liệu phô cộng hưởng từ nhân hợp chất PUW1 b 21 31 41 51 6 9 71 91 11 00 11 ' 21 ' 31 ' 41 ' 51 ' 61 ' 15 13 17 16 96 92 16 96 44 15 10 12 17 16 14 14 16 18 17 26 11 ' ' ' ' ' 15 01 73 55 73 84 73 12 73 73 - C H δC M B , , , ' , δC 6 63 ' 84 ' 2e 5 1 14 ' 05 73 ' 26 73 ' 25 73 ' 33 63 ' 94 11 ' a7δC 71 rutin''[9], b Đo CD3OD, c125 MHz, d500 MHz, etín hiệu bị che lấp Trên phổ ESI-MS hợp chất PUW1 xuất pic ion giả phân tử m/z 611 [M+H]+, kết hợp với số liệu NMR cho thấy hợp chất PUW1 có cơng thức phân tử C27H30O16, M = 610 Sử dụng số liệu phổ HMBC để liên kết đơn vị cấu trúc dự kiến phổ NMR ESI-MS, kết bảng 4.2 hình 4.7 Hình 4.7 Phơ HMBC PUW1 Kết hợp với tài liệu công bố [9], hợp chất PUW1 xác định Quercetin 3-rutinoside gọi Rutin, cấu trúc sau: OH 3' 2' HO 4' 5' O OH 1' 6' OH 10 O HO OH OH O O O O Me HO HO OH Hình 4.8 Cấu trúc số tương tác HMBC PUW1 KẾT LUẬN Bằng phương pháp sắc ký kết hợp, hợp chất flavonoit phân lập từ dịch chiết Etylaxetate Phyllanthus emblica Các hợp chất là: Quercetin (PU1) Quercetin 3-rutinoside (PUW1) 4' 6' HO O 3' 1' OH OH 10 OH OH O Quercetin (PU1) OH 3' 2' HO 4' 5' O OH 1' 6' 10 OH OH O HO O OH O O O Me HO HO Quercetin 3-rutinoside (PUW1) OH Cấu trúc hợp chất xác định nhờ vào phương pháp phổ đại phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR, HSQC HMBC) phổ khối lượng phun mù điện tử (ESI) 13 C-NMR, TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Đỗ Huy Bích cộng (2004), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, trang 260-261, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật [2] Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt nam, Nhà xuất Y học [3] Nguyễn Hữu Đĩnh, Trần Thị Đà (1999), Ứng dụng số phương pháp phổ nghiên cứu cấu trúc phân tử, Nxb Giáo dục, Hà Nội [4] Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt nam, Nhà xuất trẻ [5] GS TS Lã Đình Mỡi (chủ biên)(2009), TS.Trần Minh Hợi, TS.Dương Đức Huyến, TS.Trần Huy Thái, TS.Ninh Khắc Bản, Tài nguyên thực vật Việt Nam Những chứa hợp chất có hoạt tính sinh học, tập II, trang 232-236, Nhà xuất Khoa học tự nhiên công nghệ [6] Trần Đình Sơn, Vũ Thị Kim Ngọc, Nguyễn Thị Hồng Điệp, Phan Thanh Hải (2008), Phổ cộng hưởng từ hạt nhân, Quyển I, Nxb Y học Hà Nội [7] Trần Đình Sơn, Vũ Thị Kim Ngọc, Nguyễn Thị Hồng Điệp, Phan Thanh Hải (2008), Phổ cộng hưởng từ hạt nhân, Quyển II, Nxb Y học Hà Nội Tài liệu Tiếng Anh [8] Chen Chang Shen, Yuan Shiun Chang, Li Kang Ho, 1993, Nuclear magnetic resonance studies of 5,7-dihydroxyflavonoids, Phytochemistry, 34(3), 843-845 [9] Tong S, Yan J, Chen G, Lou J., 2009 May-Jun, Purification of rutin and nicotiflorin from the flowers of Edgeworthia chrysantha Lindl, by high-speed counter-current chromatography J Chromatogr Sci.47(5), 341-4 [10] Hayerman A.E., Butler I.G., 1994, Assay of condensed tanin or flavonoid oligomers and related flavonoid in plant, Meth, Enz, 234, pp 249 [11] Ternai B., Markham K.R., 1976, C13-NMR of flavonoids-1-Flavones and flavonols, Tetrehedron 32, pp 565 [12] Mabry F.J., Markman R.B., Thomas M.B., 1976, The syrematic indentification of flavonoids, springer Verlag-Berlin-Heidelberg-New york [13] Harborn J.B., 1994, The flavonoids advance in research since 1986, Chaprman & Hall [14] Agrawal P.K., 1989, Carbon-13 NMR of flavonoids, Elsevier Science Pub B.V ... luận tốt nghiệp là: Nghiên cứu phân lập thành phần flavonoit từ Me rừng Khóa luận tập trung nghiên cứu thành phần flavonoit từ Me rừng bao gồm nội dung là: Thu mẫu Me rừng (Phyllanthus emblica),... tạo dịch chiết phân đoạn Do thời gian thực nghiệm có hạn, nội dung nghiên cứu khóa luận dừng lại phân lập phần dịch chiết EtOAc, phân đoạn khác tiến hành đơn vị nghiên cứu Từ phần cặn chiết... 1.1 Giới thiệu chung Me rừng 1.1.1 Thực vật học me rừng Cây Me rừng (Hình 1.1) hay gọi chùm ruột núi, chùm ruột rừng, bơng ngót, cam tú, ngưu cam tú, du cam tú, mắc kham Cây có tên khoa học Phyllanthus