Đang tải... (xem toàn văn)
Thư viên cDNA cDNA là DNA bổ sung được phiên mã từ mRNA bằng enzyme phiên mã ngược. cDNA ko chứa intron, chỉ gồm exon so với DNA trong hệ gen. Thư viện cDNA là tập hơp các dòng cDNA từ mRNA của các mô cụ thể. Xây dựng thư viện: gồm 5 bước B1: tinh sạch mRNA từ RNA tổng số của một bộ phận cơ thể sinh vật. B2: Tổng số sợi cDNA thứ nhất từ khuôn mẫu mRNA từ enzyme phiên mã ngược B3: gây biến tính bằng cách đun sôi thể lai mRNAcDNA để phá hủy mRNA bằng RWASE H của E.coli. Tổng hợp sợi cDNA thứ hai từ khuôn mẫu sợi cDNA thứ nhất nhờ enzyme DNA polymerase với primer là vòng cặp tóc của nó để thu được phân tử cDNA sợi đôi. B4: cắt vòng cặp tóc bằng enzyme nuclease S1 và enzyme Klenow sửa chữa hai đầu của sợi đôi cDNA để tạo ra đầu bằng. B5: Gắn các đoạn nối (linker) vào hai đầu của cDNA của sợi đôi trước khi tạo dòng và trong vector thích hợp để xây dựng cDNA. Hoạt động: từ một tế bào của một loài chứa hệ gen mang nhiều đoạn gen quy định nhiều tính trạng ròi được phân cắt thành nhiều đoạn DNA nhỏ hơn mà mooic đoạn mang mỗi tính trạng tương ứng. Ưu điểm: dễ thao tác Có thể tổng hợp protein mong muốn với số lượng lớn. Ứng dụng: Phát hiện gen mới. Giải thíchnghiên cứu chức năng gen. Nghiên cứu cách cắt ghép khác của RNA. Tạo các sản phẩm sinh học thương phẩm.
Thư viên cDNA cDNA DNA bổ sung phiên mã từ mRNA enzyme phiên mã ngược cDNA ko chứa intron, gồm exon so với DNA hệ gen Thư viện cDNA tập hơp dòng cDNA từ mRNA mô cụ thể Xây dựng thư viện: gồm bước B1: tinh mRNA từ RNA tổng số phận thể sinh vật B2: Tổng số sợi cDNA thứ từ khuôn mẫu mRNA từ enzyme phiên mã ngược B3: gây biến tính cách đun sôi thể lai mRNA-cDNA để phá hủy mRNA RWASE H E.coli Tổng hợp sợi cDNA thứ hai từ khuôn mẫu sợi cDNA thứ nhờ enzyme DNA polymerase với primer vòng cặp tóc để thu phân tử cDNA sợi đơi B4: cắt vòng cặp tóc enzyme nuclease S1 enzyme Klenow sửa chữa hai đầu sợi đôi cDNA để tạo đầu B5: Gắn đoạn nối (linker) vào hai đầu cDNA sợi đôi trước tạo dòng vector thích hợp để xây dựng cDNA Hoạt động: từ tế bào loài chứa hệ gen mang nhiều đoạn gen quy định nhiều tính trạng ròi phân cắt thành nhiều đoạn DNA nhỏ mà mooic đoạn mang tính trạng tương ứng Ưu điểm: - dễ thao tác - Có thể tổng hợp protein mong muốn với số lượng lớn Ứng dụng: - Phát gen - Giải thích/nghiên cứu chức gen - Nghiên cứu cách cắt ghép khác RNA - Tạo sản phẩm sinh học thương phẩm